專利名稱：一種羅丹明b快速檢測卡及其檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種羅丹明B快速檢測卡及其檢測方法，是一種檢測羅丹明B的檢測器具，屬于食品中違法添加非食用物質(zhì)檢測技術領域。
背景技術：
羅丹明B又稱若丹明B、玫瑰紅、花粉紅等，英文名稱為Iihodamine B，是一種人工合成的工業(yè)染料，主要用于紡織品、皮革制品、木制品、有色玻璃等的染色，與蘇丹紅一樣對人體具有致癌作用，2008年被列入第一批食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)黑名單，但由于羅丹明B具有價格低廉、色澤紅艷、穩(wěn)定性強等特點，常被不法商販用作替代食品添加劑的著色劑，嚴重危害人們的飲食安全。目前，我國沒有檢驗食品中羅丹明B的國家標準及行業(yè)標準，也沒有快速檢測與鑒定方法。為了滿足對污染物殘留監(jiān)控的需要，以及食品出口企業(yè)對外貿(mào)易的需要，亟需建立食品中羅丹明B的檢測方法。目前，檢測食品中違法添加的羅丹明B的主要方法有高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用等進行定性和定量的分析。這些方法對實驗儀器設備要求高，操作繁瑣，對操作人員的專業(yè)知識要求高，費時費力。因此建立一種準確可靠又快速方便的檢測食品中違法添加的羅丹明B的分析方法是非常必要的。本發(fā)明擬發(fā)明一種基于小分子物質(zhì)羅丹明B偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學檢測方法，采取免疫學競爭法的原理，結(jié)合膠體金或乳膠顆粒標記技術和免疫層析法設計的一種快速檢測試劑，可快速特異地檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B。根據(jù)檢測卡樣品檢測線和質(zhì)控線的有無顯色來判定果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B含量。反應是利用羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測方法，具有特異性強的優(yōu)點，可避免其它檢測方法的假陽性導致的誤檢問題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設備，既可以在實驗室進行，也可在超市、家庭、車間等實地進行測定。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準確，靈敏度高，準確率大。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能檢測羅丹明B的檢測器具，直接應用免疫學的方法檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中羅丹明B的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測的操作繁瑣等缺點，建立基于免疫學特異性的檢測方法。本發(fā)明的技術方案一種羅丹明B快速檢測卡，其為在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4 ；測試條2是由支承背板 5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜或乳膠顆粒膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9， 另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7 ；膠體金膜為含抗羅丹明B抗體的膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明B抗體的乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含羅丹明 B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。采用上述羅丹明B快速檢測卡，檢測樣品為果醬、飲料、辣椒油、臘魚或臘肉等，處理方法如下
取樣品lg，加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷，震搖lOmin，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷重復提取一次，合并2次提取液，混勻，移取提取液于氮氣吹干儀上吹干，用0. OlM的PBS緩沖液重溶，用于檢測。當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量未超標。當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量超標。當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的優(yōu)點是能檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中含有的羅丹明B，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。
圖1羅丹明B快速檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、 檢測窗孔，4、加樣孔。圖2測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶，11、 質(zhì)控帶。圖3羅丹明B快速檢測卡的檢測試條結(jié)構示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜， 7、膠體金膜或乳膠顆粒膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實施例方式本發(fā)明結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下 實施例1
一種羅丹明B快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼1的結(jié)構及測試條2的設置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚 5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。測試條2是多層結(jié)構的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試條2是多層結(jié)構底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測帶10，含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 —端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7，膠體金膜或乳膠顆粒膜7是含抗羅丹明B單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標記物的玻璃纖維膜。膠體金膜或乳膠顆粒膜7厚 0. 5-0. 8mm,長 5mm，寬 4mm。樣品墊 8 厚 0. 5-0. 8mm,長 20mm，寬 4mm。吸水膜 9 厚 0. 5-0. 8mm, 長16-20mm，寬4mm。膠體金膜或乳膠顆粒膜7、樣品墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜搭接長度為l-2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本發(fā)明羅丹明B檢測卡用于果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B的檢測。實施例2
樣品的處理方法如下
取樣品lg，加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷，震搖lOmin，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷重復提取一次，合并2次提取液，混勻，移取提取液于氮氣吹干儀上吹干，用0. OlM的PBS緩沖液重溶，待用。使用羅丹明B快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中滴注入羅丹明B快速檢測卡的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜或乳膠顆粒膜7所含的抗羅丹明B單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標記物一起向硝酸纖維素膜 6擴散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測卡的主要反應是免疫學的抗原和抗體反應，在硝酸纖維素膜上遷移的
膠體金或乳膠顆粒標記的抗體，在測試帶上分別與含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢羅丹明B存在，當樣品加入后即與抗體發(fā)生反應，而不會與檢測帶所含的羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應，從而不顯色。 主要反應的結(jié)果有以下3種情況
1、當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中羅丹明B含量未超標。2、當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，說明被檢測樣品中羅丹明B含量超標。3、當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明檢測試條已失效。
權利要求
1.一種羅丹明B快速檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4)；測試條(2)是由支承背板(5) 上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、 和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜 (7)；膠體金膜為含抗羅丹明B抗體的膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明B抗體的乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11)，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
2.用權利要求1所述的羅丹明B快速檢測卡的檢測方法，其特征是應用免疫學的方法直接檢測樣品中羅丹明B的含量，檢測樣品為果醬、飲料、辣椒油、臘魚或臘肉，處理方法如下取樣品lg，加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷，震搖lOmin，靜置或過濾分離出上層清液，殘渣加入IOmL含體積分數(shù)20%丙酮的正己烷重復提取一次，合并2次提取液，混勻，移取提取液于氮氣吹干儀上吹干，用0. OlM的PBS緩沖液重溶，用于檢測；當檢測帶(10)和質(zhì)控帶(11)同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量未超標；當檢測帶(10)不顯示顏色，只有質(zhì)控帶(11)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中羅丹明B含量超標；當檢測帶(10)和質(zhì)控帶(11)均不顯色，則表明測試條已失效。
全文摘要
一種羅丹明B快速檢測卡及其檢測方法，屬于食品中違法添加的非食用物質(zhì)檢測技術領域。本發(fā)明羅丹明B快速檢測卡外殼內(nèi)有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜或乳膠顆粒膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗羅丹明B抗體的膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗羅丹明B抗體的乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測帶，一條為含羅丹明B蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明優(yōu)點是應用免疫學的方法直接檢測果醬、飲料、辣椒油、臘魚、臘肉等樣品中的羅丹明B含量。本發(fā)明羅丹明B快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準確。
文檔編號G01N33/558GK102323405SQ20111014005
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權日2011年5月27日
發(fā)明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司