專利名稱：用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慢性阻塞性肺病(COPD)是一種以持續(xù)阻塞來自肺部的氣流為特征的肺部疾病。 該疾病是一種阻礙正常呼吸且診斷不足威脅生命的肺病，是無法完全可逆的。其主要的臨床表現(xiàn)為，咳嗽，咳痰以及呼吸困難。隨著病程的進(jìn)展，可發(fā)展到走平路時(shí)亦感到氣急。部分患者有喘息癥狀。此外尚有乏力、納差和體重減輕等全身癥狀。急性發(fā)作期并發(fā)呼吸衰竭或由心衰竭可出現(xiàn)相應(yīng)癥狀。由于其患病人數(shù)多，死亡率高，社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，已成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。慢性阻塞性肺病目前居全球死亡原因的第4位，據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，至2020年慢性阻塞性肺病將位居世界疾病經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)第5位。在我國，慢性阻塞性肺病同樣是嚴(yán)重危害人民身體健康的重要慢性呼吸系統(tǒng)疾病，因此，探索具有診斷價(jià)值的新型簡易生物標(biāo)記物不僅有益于慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)患者的早期診斷和早期干預(yù)，還會(huì)帶來巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。慢性阻塞性肺病的發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。目前普遍認(rèn)為慢性阻塞性肺病以氣道、肺實(shí)質(zhì)和肺血管的慢性炎癥為特征。隨著病情進(jìn)展，可導(dǎo)致全身炎癥，出現(xiàn)循環(huán)血液中細(xì)胞因子濃度異常增高等。目前診斷慢性阻塞性肺病急性加重的主要是依據(jù)癥狀體征以及肺部影像學(xué)的改變。因此，用于診斷慢性阻塞性肺病特別是慢性阻塞性肺病加重期、評價(jià)療效的特征性生物標(biāo)記物一直在開發(fā)探索中，以期監(jiān)測慢性阻塞性肺病病程進(jìn)展。近年來，隨著人們對慢性阻塞性肺病的重新認(rèn)識和不斷重視，如何更加準(zhǔn)確地診斷慢性阻塞性肺病以及急性加重期，以及如何優(yōu)化現(xiàn)有預(yù)測指標(biāo)指導(dǎo)該疾病的治療等問題顯得尤為緊迫。因此， 從多角度探索和開發(fā)對該疾病具有早期診斷價(jià)值的生物標(biāo)記物擁有十分廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，包括細(xì)胞因子及其酶標(biāo)抗體，其特征在于，所述的細(xì)胞因子為白介素9(IL-9)、白介素 18結(jié)合蛋白A(IL-18BPa)、C-C序列配體^(CCI^8)、人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK)、 β細(xì)胞素(BTC)、單核細(xì)胞趨化蛋白-3(MCP-3)、單核細(xì)胞趨化蛋白-4(MCP-4)、進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白(LIGHT)、巨噬細(xì)胞源趨化因子(MDC)、人骨髓抑制因子1 (MPIF-1)、 人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP-a)、骨橋蛋白(OPN)和人胸腺表達(dá)趨化因子(TECK)。所述的白介素9為單克隆鼠IgG2B抗體，白介素18結(jié)合蛋白A為單克隆鼠IgGl 抗體，C-C序列配體觀為單克隆鼠IgGl抗體，人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子為單克隆鼠抗體 IgG2抗體，β細(xì)胞素(BTC)為單克隆鼠IgG1抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-3為單克隆鼠IgGl 抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-4為單克隆鼠IgGl抗體，進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白為單克隆鼠IgGl抗體，巨噬細(xì)胞源趨化因子為單克隆鼠IgG2B抗體，人淋巴組織趨化性細(xì)胞因子為單克隆鼠IgG抗體，人巨噬細(xì)胞源趨化因子為單克隆鼠IgGl抗體，人骨髓抑制因子1為單克隆鼠IgG2B抗體，人巨噬細(xì)胞刺激蛋白為單克隆鼠IgGl抗體，骨橋蛋白為單克隆鼠Ig2A 抗體，人胸腺表達(dá)趨化因子為單克隆鼠IgGl抗體。所述的白介素9的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，白介素18的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，C-C序列配體觀的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗鼠IgG抗體，β細(xì)胞素的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-3的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-4的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白為多克隆羊抗人IgG抗體，巨噬細(xì)胞源趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆雞抗人IgY抗體，人淋巴組織趨化性細(xì)胞因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，巨噬細(xì)胞源趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人骨髓抑制因子1的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人巨噬細(xì)胞刺激蛋白的酶標(biāo)抗體為多克隆鼠抗人IgG2B抗體，骨橋蛋白的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG 抗體，人胸腺表達(dá)趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體。優(yōu)選地，所述的用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒還可以包括pH值為9. 6的碳酸鹽緩沖液，pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，血清蛋白稀釋液，終止液，四甲基聯(lián)苯胺底物溶液，正常人血清和陽性對照血清。本發(fā)明通過收集7例慢性阻塞性肺病急性加重期患者血漿、5例慢性阻塞性肺病穩(wěn)定期患者血漿，以及5例正常人血漿。利用定量細(xì)胞因子芯片技術(shù)，該技術(shù)采用免疫學(xué)原理，通過抗體包被抗原，檢測得到血漿內(nèi)40種細(xì)胞因子，同時(shí)以穩(wěn)定期慢性阻塞性肺病患者及正常人血清中蛋白表達(dá)水平作為衡量標(biāo)準(zhǔn)，篩選慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清中上調(diào)或下調(diào)的細(xì)胞因子(P<0. 05)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到每種細(xì)胞因子的濃度。應(yīng)用 SPSS 18. 0軟件，計(jì)算得到每種細(xì)胞因子在每組人群中的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，對所得每組數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，即分別比較慢性阻塞性肺病急性加重期組與穩(wěn)定期慢性阻塞性肺病組和正常組的數(shù)據(jù)，認(rèn)為P<0. 05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。最終確定慢性阻塞性肺病急性加重期患者血清蛋白譜中有13種細(xì)胞因子表達(dá)與慢性阻塞性肺病患者及正常人比較存在差異，包括4種細(xì)胞因子上調(diào)和9種細(xì)胞因子下調(diào)的聯(lián)合表達(dá)改變(表1)。用實(shí)驗(yàn)組數(shù)值與正常組數(shù)值的比值作為最終結(jié)果的表現(xiàn)形式。表1多種細(xì)胞因子在COPD急性加重期患者、COPD患者及正常人血清中的表達(dá)變化
權(quán)利要求
1.一種用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，包括細(xì)胞因子及其酶標(biāo)抗體， 其特征在于，所述的細(xì)胞因子為白介素9、白介素18結(jié)合蛋白A、c-c序列配體觀、人皮膚T 細(xì)胞虜獲趨化因子、β細(xì)胞素、單核細(xì)胞趨化蛋白-3、單核細(xì)胞趨化蛋白-4、進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白、巨噬細(xì)胞源趨化因子、人骨髓抑制因子1、人巨噬細(xì)胞刺激蛋白、骨橋蛋白和人胸腺表達(dá)趨化因子。
2.如權(quán)利要求1所述的用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，其特征在于， 所述的白介素9為單克隆鼠IgG2B抗體，白介素18結(jié)合蛋白A為單克隆鼠IgGl抗體，C-C 序列配體觀為單克隆鼠IgGl抗體，人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子為單克隆鼠抗體IgG2抗體， β細(xì)胞素為單克隆鼠IgG1抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-3為單克隆鼠IgGl抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-4為單克隆鼠IgGl抗體，進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白為單克隆鼠IgGl抗體， 巨噬細(xì)胞源趨化因子為單克隆鼠IgG2B抗體，人淋巴組織趨化性細(xì)胞因子為單克隆鼠IgG抗體，人巨噬細(xì)胞源趨化因子為單克隆鼠IgGl抗體，人骨髓抑制因子1為單克隆鼠化6皿抗體，人巨噬細(xì)胞刺激蛋白為單克隆鼠IgGl抗體，骨橋蛋白為單克隆鼠Ig2A抗體，人胸腺表達(dá)趨化因子為單克隆鼠IgGl抗體。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，其特征在于，所述的白介素9的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，白介素18的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，C-C序列配體觀的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗鼠IgG抗體，β細(xì)胞素的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG 抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-3的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，單核細(xì)胞趨化蛋白-4的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白為多克隆羊抗人IgG 抗體，巨噬細(xì)胞源趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆雞抗人IgY抗體，人淋巴組織趨化性細(xì)胞因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，巨噬細(xì)胞源趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人骨髓抑制因子1的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人巨噬細(xì)胞刺激蛋白的酶標(biāo)抗體為多克隆鼠抗人IgG2B抗體，骨橋蛋白的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體，人胸腺表達(dá)趨化因子的酶標(biāo)抗體為多克隆羊抗人IgG抗體。
4.如權(quán)利要求1所述的用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，其特征在于， 所述的用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒還可以包括PH值為9. 6的碳酸鹽緩沖液，PH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，血清蛋白稀釋液，終止液，四甲基聯(lián)苯胺底物溶液，正常人血清和陽性對照血清。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于診斷慢性阻塞性肺病急性加重期的試劑盒，包括細(xì)胞因子及其酶標(biāo)抗體，其特征在于，所述的細(xì)胞因子為白介素9、白介素18結(jié)合蛋白A、C-C序列配體28、人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子、β細(xì)胞素、單核細(xì)胞趨化蛋白-3、單核細(xì)胞趨化蛋白-4、進(jìn)入T細(xì)胞的類淋巴毒素誘導(dǎo)蛋白、巨噬細(xì)胞源趨化因子、人骨髓抑制因子1、人巨噬細(xì)胞刺激蛋白、骨橋蛋白和人胸腺表達(dá)趨化因子。本發(fā)明首次提出上述細(xì)胞因子可成為慢性阻塞性肺病急性加重期診斷的主要指標(biāo)。
文檔編號G01N33/68GK102253220SQ20111015027
公開日2011年11月23日 申請日期2011年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月7日
發(fā)明者王向東, 白春學(xué), 陳弘 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院