專利名稱：一種鄰苯二甲酸酯快速檢測卡及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鄰苯 二甲酸酯快速檢測卡及其檢測方法，是一種檢測鄰苯二甲酸酯的檢測器具，屬于鄰苯二甲酸酯檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鄰苯二甲酸酯(又稱酞酸酯，縮寫PAE)是鄰苯二甲酸形成的酯的統(tǒng)稱。包括鄰苯二甲酸二辛酯、鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)等。當被用作塑料增塑劑時，一般指的是鄰苯二甲酸與4 15個碳的醇形成的酯。鄰苯二甲酸酯是一類能起到軟化作用的化學品。它被普遍應用于玩具、食品包裝、 乙烯地板、壁紙、清潔劑、指甲油、噴霧劑、洗發(fā)水和沐浴液等數(shù)百種產(chǎn)品中。由于鄰苯二甲酸酯與塑料基質(zhì)之間沒有形成共價鍵，而是以范德華力和氫鍵連接，彼此保持各自獨立的化學性質(zhì)，因而在接觸到包裝食品中所含的水、油脂時，便會溶出。日前，在臺灣又出現(xiàn)在食品添加物中加入鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)事件。研究表明，鄰苯二甲酸酯可干擾內(nèi)分泌，使男性精子數(shù)量減少、運動能力低下、形態(tài)異常，嚴重的還會導致死精癥和睪丸癌，是造成男性生殖問題的“罪魁禍首”。鄰苯二甲酸酯是一類全球性有毒難降解有機污染物，美國國家環(huán)保局和中國環(huán)境監(jiān)測總站均列其為優(yōu)先控制污染物。歐盟第2005/84/EC號指令要求所有玩具或兒童護理用品的塑料所含的DEHP、DBP、及BBP濃度超過0. 1%的不得在歐盟市場出售。目前，檢測塑料制品或食品中鄰苯二甲酸酯的主要方法有高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用等進行定性和定量的分析。這些方法對實驗儀器設備要求高，操作繁瑣，對操作人員的專業(yè)知識要求高，費時費力。因此建立一種準確可靠又快速方便的檢測食品中鄰苯二甲酸酯的分析方法是非常必要的。本發(fā)明擬發(fā)明一種基于小分子物質(zhì)鄰苯二甲酸酯偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學檢測方法，采取免疫學競爭法的原理，結(jié)合膠體金或乳膠顆粒標記技術(shù)和免疫層析法設計的一種快速檢測試劑，可快速特異地檢測塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品中的鄰苯二甲酸酯。根據(jù)檢測卡樣品檢測線和質(zhì)控線的有無顯色來判定塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品中的鄰苯二甲酸酯含量。反應是利用鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測方法，具有特異性強的優(yōu)點，可避免其它檢測方法的假陽性導致的誤檢問題。同時檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設備，適合現(xiàn)場操作。由于樣本量需要少、簡便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準確，靈敏度高，準確率大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種能檢測鄰苯二甲酸酯的檢測器具，直接應用免疫學的方法檢測塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品中鄰苯二甲酸酯的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測的操作繁瑣等缺點，建立基于免疫學特異性的檢測方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案一種鄰苯二甲酸酯快速檢測卡，其為在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼表面有檢測窗孔3和加樣孔4 ；測試條2是由支承背板5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜或乳膠顆粒膜7、硝酸纖維素膜6、 和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜 9，另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7 ；膠體金膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶 11，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。 采用上述鄰苯二甲酸酯快速檢測卡，檢測樣品為塑料玩具、塑料包裝、飲料、果汁等，處理方法如下
A、塑料制品塑料玩具、塑料包裝樣品，將塑料樣品粉碎，準確稱取2g浸泡于5mL的樣品稀釋液中，300W微波處理0. 5-2min，使樣品中的鄰苯二甲酸酯溶于稀釋液中，然后取溶液檢測。B、液體飲料運動飲料、果汁樣品，直接用樣品稀釋液按1:1稀釋后待檢。樣品稀釋液pH7.4,0. 01mol/L 的PBST溶液，內(nèi)含0. 15mol/L NaCl、質(zhì)量濃度0. 5% 吐溫-20。當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量未超標。當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量超標。當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的優(yōu)點是能檢測塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品中含有的鄰苯二甲酸酯，易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結(jié)果準確。


圖1鄰苯二甲酸酯快速檢測卡外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。圖2測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶，11、 質(zhì)控帶。圖3鄰苯二甲酸酯快速檢測卡的檢測試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、膠體金膜或乳膠顆粒膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實施例方式本發(fā)明結(jié)合具體實施例參見附圖進一步說明如下 實施例1
一種鄰苯二甲酸酯快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測帶10，含鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 —端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7，膠體金膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜。膠體金膜或乳膠顆粒膜7厚0. 5-0. 8mm,長5mm，寬4mm。樣品墊8厚 0. 5-0. 8謹，長20謹，寬4謹。吸水膜9厚0. 5-0. 8謹，長16_20謹，寬4謹。膠體金膜或乳膠顆粒膜7、樣品墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜搭接長度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙， 樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本發(fā)明鄰苯二甲酸酯檢測卡用于檢測塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品中的鄰苯二甲酸酯的檢測。實施例2 樣品的處理方法如下
A、塑料制品塑料玩具、塑料包裝樣品，將塑料樣品粉碎，準確稱取2g浸泡于5mL的樣品稀釋液中，300W微波處理0. 5-2min，使樣品中的鄰苯二甲酸酯溶于稀釋液中，然后取溶液檢測。B、液體飲料運動飲料、果汁樣品，直接用樣品稀釋液按1:1稀釋后待檢。樣品稀釋液:pH7.4、0· 01mol/L 的 PBST 溶液，內(nèi)含 0. 15mol/L NaCl,0. 5% 吐溫—20 ο使用鄰苯二甲酸酯快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中滴注入鄰苯二甲酸酯快速檢測卡的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜或乳膠顆粒膜7所含的抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標記物一起向硝酸纖維素膜6擴散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測卡的主要反應是免疫學的抗原和抗體反應，在硝酸纖維素膜上遷移的
膠體金或乳膠顆粒標記的抗體，在測試帶上分別與含鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢鄰苯二甲酸酯存在， 當樣品加入后即與抗體發(fā)生反應，而不會與檢測帶所含的鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應，從而不顯色。主要反應的結(jié)果有以下3種情況
1、當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量未超標。2、當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，說明被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量超標。3、當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明檢測試條已失效。
權(quán)利要求
1.一種鄰苯二甲酸酯快速檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1) 中設置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4);測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜(7);膠體金膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是含鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11 )，測試條置入檢測卡外殼內(nèi)，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
2.用權(quán)利要求1所述的鄰苯二甲酸酯快速檢測卡的檢測方法，其特征是應用免疫學的方法直接檢測樣品中鄰苯二甲酸酯的含量，檢測樣品為塑料玩具、塑料包裝或飲料、果汁， 處理方法如下A、塑料玩具、塑料包裝樣品將塑料樣品粉碎，準確稱取2g浸泡于5mL的樣品稀釋液中，300W微波處理0. 5-2min，使樣品中的鄰苯二甲酸酯溶于稀釋液中，然后取溶液檢測；B、飲料、果汁樣品直接用樣品稀釋液按1:1稀釋后待檢；樣品稀釋液:ρΗ7. 4、0· 01mol/L 的 PBST 溶液，內(nèi)含 0. 15mol/L NaCl,0. 5% 吐溫-20 ； 當檢測帶10和質(zhì)控帶11同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陰性，表示被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量未超標；當檢測帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中鄰苯二甲酸酯含量超標；當檢測帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。
全文摘要
一種鄰苯二甲酸酯快速檢測卡及其檢測方法，屬于鄰苯二甲酸酯檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明鄰苯二甲酸酯快速檢測卡外殼內(nèi)有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜或乳膠顆粒膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗鄰苯二甲酸酯單克隆抗體乳膠顆粒標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測帶，一條為含鄰苯二甲酸酯蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明優(yōu)點是應用免疫學的方法直接檢測塑料玩具、塑料包裝、飲料等樣品的鄰苯二甲酸酯含量。本發(fā)明鄰苯二甲酸酯快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準確。
文檔編號G01N33/532GK102323407SQ20111015518
公開日2012年1月18日 申請日期2011年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月10日
發(fā)明者吳文曄, 周堅, 熊曉芳 申請人:無錫安迪生物工程有限公司