專利名稱：一種陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種陰道炎的聯(lián)合檢測試劑盒，特別用于輔助診斷女性三種陰道疾病細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎。
背景技術(shù)：
細(xì)菌性陰道病(Bacterial Vaginosis,BV)過去稱為非特異性細(xì)菌性陰道病。1955 年Gardner和Dukes首先從非特異性細(xì)菌性陰道病患者中分離出陰道嗜血桿菌，因而稱此病為陰道嗜血桿菌性細(xì)菌性陰道病。到80年代人們發(fā)現(xiàn)此菌和其它嗜血桿菌不同，定名為陰道加特納菌，改稱此病為加特納菌性細(xì)菌性陰道病。1983年在斯德哥爾摩國際會議上選定了最為簡明的名稱-細(xì)菌性陰道病，理由是其病原體不僅是陰道加特納菌，而且還有其它厭氧菌；另外此病炎癥不明顯，陰道分泌物中白細(xì)胞稀少，稱為陰道病比細(xì)菌性陰道病更為恰當(dāng)。細(xì)菌性陰道病是育齡婦女最常見的陰道感染性疾病，在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群(產(chǎn)過氧化氫的乳酸桿菌)數(shù)量減少，而由多種致病性厭氧菌感染(主要是陰道加德納菌)引起的無明顯黏膜炎癥的一種疾病。本病常見，國內(nèi)最早關(guān)于此病的調(diào)查為1990 年，全國性病防治研究中心在南京地區(qū)發(fā)現(xiàn)其患病率在成年健康婦女中為18. 92%。細(xì)菌性陰道病是由于病原微生物(包括淋病雙球菌、霉菌、滴蟲等微生物)感染而引起的細(xì)菌性陰道病癥。細(xì)菌性陰道病根據(jù)年齡和感染源的不同，可分為老年性細(xì)菌性陰道病、滴蟲性細(xì)菌性陰道病、霉菌性細(xì)菌性陰道病、淋病性細(xì)菌性陰道病、阿米巴性細(xì)菌性陰道病、陰道嗜血桿菌性細(xì)菌性陰道病、嬰幼兒細(xì)菌性陰道病、氣腫性細(xì)菌性陰道病和非特異性細(xì)菌性陰道病。1983年Amsel等經(jīng)過多年的研究及臨床觀察，提出四項綜合臨床指標(biāo)作為診斷BV 的依據(jù)，即①用精密試紙測定陰道PH值，陰道分泌物pH值> 4. 5 ；②胺試驗陽性，用棉拭子取陰道分泌物，加1滴KOH聞有無魚腥樣氣味，若有為陽性；③查見線索細(xì)胞，線索細(xì)胞為陰道脫落上皮細(xì)胞表面黏附許多小桿菌，邊緣不清；④革蘭染色鏡檢找到大量陰道加特納菌(CV)，而乳酸桿菌少(1 5個/HP)，甚至缺乏。具備以上4項指標(biāo)中至少3項，其中線索細(xì)胞陽性為必備條件，即可確診BV。該方法被認(rèn)為是診斷BV的“金標(biāo)準(zhǔn)”，習(xí)慣上稱為 Amsel 法。Amsel法4項指標(biāo)中除鏡檢發(fā)現(xiàn)線索細(xì)胞外，其他標(biāo)準(zhǔn)影響因素較多，如精液中堿性物質(zhì)的刺激可使胺試驗呈陽性，胺試驗對診斷與否均可導(dǎo)致上生殖道及圍產(chǎn)期并發(fā)癥。因此Amsel診斷標(biāo)準(zhǔn)不易掌握，易受人為因素影響，而采用細(xì)菌培養(yǎng)，結(jié)果繁瑣，費時， 不利于患者及時診治，限制了推廣應(yīng)用。因此國內(nèi)外許多廠商推出了商品試劑盒來測定陰道分泌物酶活性，如BVBlue和安圖公司的白細(xì)胞酯酶和唾液酸苷酶聯(lián)合檢測(申請?zhí)?200610056827. X)但大多廠家都采用單項或兩性酶活性測定，如唾液酸苷酶+白細(xì)胞酯酶、 唾液酸苷酶+三甲胺測定、唾液酸苷酶+過氧化氫等?？紤]到商業(yè)成本問題，這些產(chǎn)品大都以單項的形式出售，用戶使用不便，且分析成本高，不便普及使用。由于BV經(jīng)常為多種致病性厭氧菌感染，同時測定一兩種酶的活性不足以判定BV感染的具體情況，有時甚至造成錯
4判和誤判。BV的敏感度最低，其結(jié)果判斷易受主觀因素影響，陰道灌洗、用藥等可影響陰道 PH值，陰道pH升高對診斷BV敏感性高，但特異性低，約91 %的BV患者pH > 5. 0。同時約 50% BV患者無臨床癥狀，而BV患者存在臨床癥狀念珠菌通常是一種腐敗物寄生菌，可生活在正常人體的皮膚、粘膜、消化道或其他臟器中，經(jīng)常在陰道中存在而無癥狀。白帶增多的非孕婦女中，約有10%、孕婦中約有30% 在陰道內(nèi)有此菌寄生，當(dāng)陰道糖原增加、酸度升高時，或在機體抵抗力降低的情況下，便可成為致病的原因，長期應(yīng)用廣譜抗生素和腎上腺皮質(zhì)激素，可使霉菌感染大為增加。因為上述兩種藥物可導(dǎo)致機體內(nèi)菌群失調(diào)，改變了陰道內(nèi)微生物之間的相互制約關(guān)系，抗感染的能力下降。此外，維生素缺乏(復(fù)合維生素B)、嚴(yán)重的傳染性疾病，和其他消耗性疾病均可成為白色念珠菌繁殖的有利條件。妊娠期陰道上皮細(xì)胞糖原含量增加，陰道酸性增強，加之孕婦的腎糖閾降低，常有營養(yǎng)性糖尿，小便中糖含量升高而促進白色念珠菌的生長繁殖。念珠菌感染最常見的癥狀是白帶多，外陰及陰道灼熱瘙癢，外因性排尿困難，外陰地圖樣紅斑。典型的白帶呈凝乳狀或為片塊狀，陰道粘膜高度紅腫，可見白色鵝口瘡樣斑塊附著，易剝離，其下為受損粘膜的糜爛基底，或形成淺潰瘍，嚴(yán)重者可遺留瘀斑。但白帶并不都具有上述典型特征，從水樣直至凝乳樣白帶均可出現(xiàn)，如有的完全是一些稀薄清澈的漿液性滲出液，其中常含有白色片狀物。妊娠期霉菌性陰道炎的瘙癢癥狀尤為嚴(yán)重，甚至坐臥不寧，痛苦異常，也可有尿頻、尿痛及性交痛等癥狀。另外，尚有10%左右的婦女及30%孕婦雖為念珠菌攜帶者，卻無任何臨床表現(xiàn)。念珠菌性陰道炎通常靠目檢陰道排泄物或是陰道分泌物鏡檢和念珠菌培養(yǎng)來確診。目檢主觀性大，容易造成誤診，鏡檢和念珠菌培養(yǎng)過程太繁瑣。滴蟲陰道炎(trichomonasvaginitis)是常見的陰道炎，由陰道毛滴蟲所引起。臨床上以白帶增多、質(zhì)稀有泡沫、穢臭，陰道瘙癢為主要表現(xiàn)。發(fā)病是由于感染的陰道毛滴蟲消耗了陰道內(nèi)的糖原，破壞了陰道的自凈防御機能，繼發(fā)細(xì)菌感染所致。滴蟲呈梨形，后端尖，約為多核白細(xì)胞的引起滴蟲性陰道炎的滴蟲2 3倍大小。蟲體頂端有鞭毛4根，體部有波動膜，后端有軸柱凸出?；畹牡蜗x透明無色，呈水滴狀，諸鞭毛隨波動膜的波動而擺動， 滴蟲的生活史簡單，只有滋養(yǎng)體而無包囊期，滋養(yǎng)體生活力較強，能在3 5°C生存2日；在 46°C時生存20 60分鐘；在半干燥環(huán)境中約生存10小時；在普通肥皂水中也能生存45 120分鐘。在pH5以下或7. 5以上的環(huán)境中則不生長，滴蟲陰道炎患者的陰道pH值一般為 5. 1 5. 4。隱藏在腺體及陰道皺襞中的滴蟲于月經(jīng)前后，常得以繁殖，引起炎癥的發(fā)作。它能消耗或吞噬陰道上皮細(xì)胞內(nèi)的糖原，阻礙乳酸生成。滴蟲不僅寄生于陰道，還常侵入尿道或尿道旁腺，甚至膀胱、腎盂以及男性的包皮褶、尿道或前列腺中。滴蟲性陰道炎是感染了陰道毛滴蟲后引起的一種陰道炎癥。是最常見的陰道炎癥之一。白帶增多及外陰瘙癢滴蟲陰道炎的主要癥狀是稀薄的泡沫狀白帶增多及外陰瘙癢，若有其他細(xì)菌混合感染則排出物呈膿性，可有臭味，瘙癢部位主要為陰道口及外陰，間或有灼熱、疼痛、性交痛等。若尿道口有感染，可有尿頻、尿痛，有時可見血尿。檢查時可見陰道粘膜充血，嚴(yán)重者有散在的出血斑點，后穹窿有多量白帶，呈灰黃色、黃白色稀薄液體或為黃綠色膿性分泌物，常呈泡沫狀。帶蟲者陰道粘膜可無異常發(fā)現(xiàn)。少數(shù)患者陰道內(nèi)有滴蟲存在而無炎癥反應(yīng)，稱為帶蟲者。有人認(rèn)為滴蟲單獨存在時不能引起炎癥，因其消耗陰道上皮細(xì)胞內(nèi)糖原，改變了陰道酸堿度，破壞了防御機制，促進繼發(fā)性的細(xì)菌感染，故常在月經(jīng)期前后、妊娠期或產(chǎn)后等陰道PH改變時，引起炎癥發(fā)作。滴蟲性陰道炎的診斷較易，若能在陰道分泌物中找到滴蟲即可確診，目前主要的診斷方法有滴蟲病懸滴法，滴蟲病涂色染色法，滴蟲病培養(yǎng)法，免疫學(xué)方法如熒光抗體檢查法，ELISA法，膠乳凝集法等。這些方法中懸滴法是檢查陰道毛滴蟲最簡單方法，但要制作涂片，仍是比較繁瑣的方法。目前沒有同時對上述三種陰道炎進行同時檢測的產(chǎn)品，每種病菌要單獨檢測，多采用鏡檢，鏡檢結(jié)果受到人為主觀因素影響大，并且對操作人員的技術(shù)水平要求高，另外檢測時間長，程序煩瑣，不方便。目前市場上的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測試劑盒只是用于檢測細(xì)菌性陰道病與微生態(tài)評價，無法聯(lián)合檢測念珠菌陰道炎和滴蟲性陰道炎，還不是真正意義上的陰道炎聯(lián)合檢測產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可同時評估受檢者陰道微生態(tài)環(huán)境、清潔度和細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎致病菌狀況的細(xì)菌性陰道炎聯(lián)合測定試劑盒。為實現(xiàn)該目的，采用如下技術(shù)方案提供一種陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括反應(yīng)裝置、稀釋液和顯色液，所述反應(yīng)裝置為含有六個反應(yīng)盲孔的孔式盒狀反應(yīng)裝置，盲孔內(nèi)分別放入過氧化氫濃度檢測試劑墊，白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊，唾液酸苷酶檢測試劑墊，脯氨酸氨基肽酶檢測試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊，PH檢測裝置，所述稀釋液為生理鹽水與MES緩沖液混合而成的溶液，所述顯色液為固紫B溶液。優(yōu)選的，所述稀釋液為由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/ L0優(yōu)選的，所述顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。優(yōu)選的，所述過氧化氫檢測試劑墊為墊載體在過氧化氫檢測試劑中經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的過氧化氫檢測試劑包括以下組分色原0. 2-0. Sg/ L ；顯色劑0. 02-1. 5g/ml ；過氧化物酶100-500KU/L ；所述色原為N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺鈉鹽中的一種；所述顯色劑為四氨基安替吡啉或1，3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物。優(yōu)選的，所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊為將墊載體在白細(xì)胞酯酶檢測試劑中浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑包括以下組分酶底物A 0. 3-5. 8g/L ；糖30-60g/L ；所述的酶底物A為5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽，所述糖為蔗糖或
海藻糖。優(yōu)選的，所述的唾液酸苷酶檢測試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測試劑中浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述唾液酸苷酶活性檢測試劑包括以下組分酶底物B 0. 2-5g/L ；糖30-60g/L ；顯色液0. -1%的固紫B鹽溶液；所述的酶底物B為 5-溴-4氯-3吲哚-N乙酰- α -唾液酸苷、硝基苯-N-乙酰- α -唾液酸苷、萘酚_Ν_乙酰-α -唾液酸苷或5-溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鹽的一種；所述糖為蔗糖或海藻糖。
優(yōu)選的，所述脯氨酸氨肽酶檢測試劑墊為將墊載體在脯氨酸氨肽酶檢測試劑經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述脯氨酸氨肽酶活性檢測試劑4由下列物質(zhì)組成酶底物C :8-45g/L ；緩沖液50mmol/L ；N-甘氨酸-甘氨酸10_20g/L ；所述的酶底物C 為L-脯氨酸-對硝基苯胺或L-脯氨酸-α -萘胺；所述緩沖液為Tris-HCL緩沖液或磷酸緩沖液。優(yōu)選的，所述乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊為將墊載體在乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑中經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的乙酰氨基葡萄糖苷酶測定試劑包括以下組分酶底物D :2-10g/L ；終止液5-9g/L ；所述的酶底物D為對硝基苯乙酰氨基葡萄糖或間甲氧基硝基乙烯基-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖苷；所述終止液為質(zhì)量百分濃度為0. 07% -0. 12%的四硼酸鈉溶液。優(yōu)選的，所述墊載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾垺?yōu)選的，所述ρΗ檢測裝置為ρΗ試紙。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明所提供的陰道炎六聯(lián)檢測試劑盒通過六個干式化學(xué)反應(yīng)盲孔的反應(yīng)結(jié)果聯(lián)合判斷生殖道內(nèi)的情況。不僅能檢出細(xì)菌性陰道病，反映陰道內(nèi)清潔度還能區(qū)分白色念珠菌和滴蟲感染。這是目前市場上的檢測試劑盒所無法做到的。因此通過聯(lián)合檢測，可以檢測由絕大多數(shù)BV病原菌，白色念珠菌和滴蟲引起的陰道炎，極大程度上避免了單純檢測一種酶活性導(dǎo)致的BV漏檢，提高了檢測的可靠性和準(zhǔn)確度。同時也進一步區(qū)分細(xì)菌性陰道病和白色念珠菌和滴蟲感染引起的陰道炎，為臨床診斷提供有益參考。本發(fā)明診斷陰道炎具有較高的敏感性和特異性，與傳統(tǒng)的Amsel診斷法和臨床鏡檢相比較具有較高的符合率。且本發(fā)明對陰道分泌物的檢測具有操作簡便、可重復(fù)、客觀、快速和價廉，以及不需要特殊儀器等特點，可為臨床檢驗帶來許多便利。它可對可疑似的陰道感染進行確診、在無癥狀個體中發(fā)現(xiàn)感染、調(diào)查對常規(guī)治療產(chǎn)生耐藥的病例、幫助臨床選擇治療方案、判斷愈合后以及開展陰道感染的患病率調(diào)查等。
具體實施例方式細(xì)菌性陰道病主要是患者陰道內(nèi)乳酸桿菌減少而其它致病細(xì)菌大量繁殖，致使陰道內(nèi)過氧化氫濃度減少，PH值升高；另一方面致病菌(加德納菌、各種厭氧菌及人體支原體等)產(chǎn)生大量唾液酸苷酶(細(xì)菌性陰道病致病菌的標(biāo)志性產(chǎn)物)，較正常人高出100-1000 倍。當(dāng)患者陰道內(nèi)發(fā)生炎癥反應(yīng)時，多核白細(xì)胞在炎性病灶聚集而大量釋放白細(xì)胞酯酶。 與脯氨酸氨基肽酶相關(guān)在陰道環(huán)境中包括加德納菌和動彎桿菌，可以說是BV相關(guān)病原體所分泌的特異性標(biāo)志物，細(xì)菌性陰道病聯(lián)合檢測試劑盒就是通過檢測陰道分泌物中過氧化氫、唾液酸苷酶、白細(xì)胞酯酶脯氨酸氨基肽酶，乙酰氨基葡萄糖苷酶及PH值等指標(biāo)聯(lián)合初篩細(xì)菌性陰道病，作為細(xì)菌性陰道病感染的輔助診斷。下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的描述。實例1本發(fā)明聯(lián)合檢測試劑盒的制備在六聯(lián)檢測試劑卡的六個孔內(nèi)分別裝有孔徑4. 5mm的whatman玻璃微纖維濾紙 CF2做墊載體的過氧化氫濃度檢測試劑墊，白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊，唾液酸苷酶檢測試劑墊，脯氨酸氨基肽酶檢測試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊，PH檢測試紙。過氧化氫試劑墊的制作將上述墊載體在下述浸泡液(過氧化氫濃度檢測試劑)中浸泡，所述浸泡液包含2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸(TBHBA)O. 6g/L、過氧化物酶150KU/ L、四氨基安替吡啉G-AAP)0. 8g/L，浸泡之后進行干燥處理。白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液(白細(xì)胞酯酶檢測試劑) 中浸泡，所述浸泡液包含5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽0. 5g/L、蔗糖30-60g/L，浸泡之后進行干燥處理。唾液酸苷酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液(唾液酸苷酶檢測試劑) 中浸泡，所述浸泡液包含5-溴-4氯-3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鹽3g/L、蔗糖30g/L，浸泡之后進行干燥處理。脯氨酸氨肽酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液(脯氨酸氨肽酶檢測試劑)中浸泡，所述浸泡液包含L-脯氨酸-對硝基苯胺或L-脯氨酸-α -萘胺12g/L、磷酸緩沖液50mmol/L、N-甘氨酸甘氨酸15g/L，浸泡之后進行干燥處理。乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊的制作將墊載體在間甲氧基硝基乙烯基-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖苷和四硼酸鈉的混合溶液中浸泡之后進行干燥處理所得。所述混合溶液中對硝基苯乙酰氨基葡萄糖的濃度為5g/L，所述混合溶液中四硼酸鈉的質(zhì)量百分濃度為0. 07% -0. 12%。市場購得pH檢測試紙。稀釋液配制由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L。顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。應(yīng)用實例2:在六聯(lián)檢測試劑卡的六個孔內(nèi)分別裝有孔徑4. 5mm的whatman玻璃微纖維濾紙 CF2做墊載體的過氧化氫濃度試劑墊，白細(xì)胞酯酶測定試劑墊，唾液酸苷酶測定試劑墊，脯氨酸氨基肽酶測定試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊。過氧化氫試劑墊的制作將上述墊載體在下述浸泡液中浸泡；所述浸泡液包含(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)O. 7g/L、過氧化物酶150KU/L、13-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物(MBTH)O. 5g/L，浸泡之后進行干燥處理。白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液包含 5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽0. 45g/L、蔗糖340g/L，浸泡之后進行干燥處理。唾液酸苷酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液包含硝基苯-N-乙酰- α -唾液酸苷3g/L、蔗糖30-60g/L，浸泡之后進行干燥處理。脯氨酸氨肽酶檢測試劑墊的制作將墊載體在下述浸泡液中浸泡，所述浸泡液包含L-脯氨酸-對硝基苯胺或L-脯氨酸-α -萘胺10g/L、Tris-HCL緩沖液50mmol/L、N-甘氨酸-甘氨酸15g/L，浸泡之后進行干燥處理。乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊的制作將墊載體在對硝基苯乙酰氨基葡萄糖和四硼酸鈉的混合溶液中浸泡之后進行干燥處理所得。所述混合溶液中對硝基苯乙酰氨基葡萄糖的濃度為3g/L，所述混合溶液中四硼酸鈉的質(zhì)量百分濃度為0. 07% -0. 12%。市場購得pH檢測試紙。稀釋液配制由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為0.9%，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L。
顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。實施例3用使用本發(fā)明的試劑盒進行細(xì)菌性陰道病聯(lián)合測定的步驟如下(1)用棉簽從陰道后穹窿取分泌物后加入500 μ 1稀釋液稀釋分泌物；(2)在分別裝有過氧化氫濃度試劑墊，白細(xì)胞酯酶測定試劑墊，唾液酸苷酶測定試劑墊，脯氨酸氨基肽酶測定試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊，PH試紙的盲孔中每孔滴加一滴稀釋的陰道液，每滴約35μ 1 ；(3)再在裝有唾液酸苷酶活性試劑墊的孔中加入顯色液1滴；(4)將干化學(xué)反應(yīng)裝置在室溫靜置30分鐘或放在37°C水浴箱中靜置15分鐘；(5)判讀結(jié)果根據(jù)試劑盒提供的比色卡進行判讀結(jié)果過氧化氫指標(biāo)正常顯紅色或紫色，不正常無色或微紅色為陽性；唾液酸苷酶指標(biāo)正常不顯色，顯紅色或紫色為陽性；白細(xì)胞酯酶指標(biāo)正常不顯色，顯藍(lán)色或綠色為陽性；脯氨酸氨基肽指標(biāo)正常不顯色，顯黃色為陽性；乙酰氨基葡萄糖苷酶指標(biāo)正常不顯色，顯黃色為陽性；pH值檢測pH值墊上指示劑底物在不同酸堿值，顯示對應(yīng)顏色變化。過氧化氫陰性表明乳酸桿菌多，陽性則指示陰道環(huán)境處于病理或亞健康狀態(tài)。白細(xì)胞酯酶陽性表明白細(xì)胞> 15/HP，有陰道炎。單一的唾液酸苷酶或脯氨酸氨基肽酶陽性表明有細(xì)菌性陰道病。若二者同時陽性，則根據(jù)乙酰氨基葡萄糖苷酶判斷結(jié)果。脯氨酸氨基肽酶活性和乙酰氨基葡萄糖苷酶乙酰氨基葡萄糖苷酶陽性，同時PH ^ 4. 8，表示滴蟲感染；若同時PH < 4. 6，則表明念珠菌感染。脯氨酸氨基肽酶厭氧菌和真菌產(chǎn)生，也是白色念珠菌特異性酶。乙酰氨基葡萄糖苷酶為白色念珠菌、熱帶念珠菌的特異性酶，可以通過檢測這兩種酶來指示念珠菌感染。乙酰氨基葡萄糖苷酶念珠菌和滴蟲均產(chǎn)生。但念珠菌白帶pH彡4. 6，而滴蟲白帶pH彡4. 8，通過結(jié)合pH值可將二者區(qū)分開。以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及內(nèi)所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，包括反應(yīng)裝置、稀釋液和顯色液，所述反應(yīng)裝置為含有六個反應(yīng)盲孔的孔式盒狀反應(yīng)裝置，盲孔內(nèi)分別放入過氧化氫濃度檢測試劑墊，白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊，唾液酸苷酶檢測試劑墊，脯氨酸氨基肽酶檢測試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊，PH檢測裝置，所述稀釋液為生理鹽水與MES緩沖液混合而成的溶液，所述顯色液為固紫B溶液。
2.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述稀釋液為由生理鹽水和MES緩沖液組成的pH = 6. 5的溶液，所述生理鹽水在稀釋液中的質(zhì)量百分濃度為 0. 9 %，所述MES緩沖液在稀釋液中的濃度為2mmol/L。
3.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述顯色液為質(zhì)量百分濃度0. 1-0. 5%的固紫B溶液。
4.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述過氧化氫檢測試劑墊為墊載體在過氧化氫檢測試劑中經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的過氧化氫檢測試劑包括以下組分色原0. 2-0. 8g/L ；顯色劑0. 02-1. 5g/ml ；過氧化物酶 100-500KU/L ；所述色原為N-乙基-N- (3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、3，5- 二氯-2-羥基苯磺酸鈉、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)_3，5- 二甲氧基苯胺鈉鹽中的一種；所述顯色劑為四氨基安替吡啉或1，3_甲基-2-苯并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物。
5.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊為將墊載體在白細(xì)胞酯酶檢測試劑中浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑包括以下組分酶底物A :0. 3-5. 8g/L ；糖30-60g/L ；所述的酶底物A為5溴-4氯-3吲哚乙酸鹽，所述糖為蔗糖或海藻糖。
6.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述的唾液酸苷酶檢測試劑墊為將墊載體在唾液酸苷酶活性檢測試劑中浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊， 所述唾液酸苷酶活性檢測試劑包括以下組分酶底物B 0. 2-5g/L ；糖30-60g/L ；顯色液 0. 1 % -1 %的固紫B鹽溶液；所述的酶底物B為5-溴-4氯-3吲哚-N乙酰-α -唾液酸苷、 硝基苯-N-乙酰-α -唾液酸苷、萘酚-N-乙酰-α -唾液酸苷或5_溴_4氯_3吲哚基乙酰神經(jīng)氨酸鹽的一種；所述糖為蔗糖或海藻糖。
7.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述脯氨酸氨肽酶檢測試劑墊為將墊載體在脯氨酸氨肽酶檢測試劑經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊， 所述脯氨酸氨肽酶活性檢測試劑由下列物質(zhì)組成酶底物C :8-45g/L ；緩沖液50mmol/ L ；N-甘氨酸-甘氨酸10-20g/L ；所述的酶底物C為L-脯氨酸-對硝基苯胺或L-脯氨酸-α -萘胺；所述緩沖液為Tris-HCL緩沖液或磷酸緩沖液。
8.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊為將墊載體在乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑中經(jīng)浸泡之后進行干燥處理后得到的試劑墊，所述的乙酰氨基葡萄糖苷酶測定試劑包括以下組分酶底物D :2-10g/ L ；終止液5-9g/L ；所述的酶底物D為對硝基苯乙酰氨基葡萄糖或間甲氧基硝基乙烯基-β-D-N-乙酰氨基葡萄糖苷；所述終止液為質(zhì)量百分濃度為0. 07%-0. 12%的四硼酸鈉溶液。
9.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述墊載體為濾紙、玻璃纖維膜或?qū)游黾垺?br> 10.按權(quán)利要求1所述的陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述PH檢測裝置為PH試紙。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種可同時評估受檢者陰道微生態(tài)環(huán)境、清潔度和細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎致病菌狀況的細(xì)菌性陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒。采用如下技術(shù)方案提供一種陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒，包括反應(yīng)裝置、稀釋液和顯色液，所述反應(yīng)裝置為含有六個反應(yīng)盲孔的孔式盒狀反應(yīng)裝置，盲孔內(nèi)分別放入過氧化氫濃度檢測試劑墊，白細(xì)胞酯酶檢測試劑墊，唾液酸苷酶檢測試劑墊，脯氨酸氨基肽酶檢測試劑墊，乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑墊，pH檢測試紙。通過聯(lián)合檢測，可以檢測由絕大多數(shù)BV病原菌，白色念珠菌和滴蟲引起的陰道炎，極大程度上避免了單純檢測一種酶活性導(dǎo)致的BV漏檢，提高了檢測的可靠性和準(zhǔn)確度。
文檔編號G01N21/78GK102253206SQ20111017299
公開日2011年11月23日 申請日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者周曉強, 姚銘鋒, 練惠輝, 胡守旺, 謝佐福, 陽衛(wèi)超, 陳寧 申請人:泰普生物科學(xué)(中國)有限公司