專利名稱：同時(shí)檢測(cè)花生殼中5,7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種能夠同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法。
背景技術(shù)：
花生(Peanut)來(lái)源于豆科一年生草本植物花生(Arachis hypogaea L.)的干燥莢果，花生殼(Peanut hull)是其莢果的外殼。我國(guó)花生殼資源豐富，價(jià)格低廉，在醫(yī)藥、工業(yè)、農(nóng)業(yè)、保健食品領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景?；ㄉ鷼ぴ诿耖g是中草藥，可治療哮喘、痰多、高血壓等?；ㄉ鷼ぶ幸阅鞠菟貫榇淼狞S酮類(lèi)成分具有降血壓、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、抗氧化、鎮(zhèn)咳、祛痰平喘、抗菌抗炎、增強(qiáng)免疫和抗腫瘤等多種藥理活性。研究表明，花生殼中所含的黃酮類(lèi)化合物與其生理活性密切相關(guān)。5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素是花生殼中的主要功能成分，文獻(xiàn)報(bào)道中只有測(cè)定花生殼中5，7-二羥基色原酮和圣草酚以及單獨(dú)測(cè)定木犀草素的方法，而采用高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是一種方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的能同時(shí)檢測(cè)5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，并可作為該三種成分的鑒別、含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法。本發(fā)明的一種能夠同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法包括下述的步驟
(1)對(duì)照溶液的制備分別稱取5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素三種對(duì)照品加入甲醇溶解，作為對(duì)照溶液備用；
(2)樣品溶液的制備將花生殼去雜、清洗、干燥后粉碎至其細(xì)度為40 80目得樣品粉末，取樣品粉末，加入水或有機(jī)溶劑超聲提取，所述水或有機(jī)溶劑的體積與樣品粉末重量比為10 40 :1，提取后離心，上清液用0. 45 μ m的有機(jī)膜過(guò)濾，濾液即為待測(cè)樣品溶液；
(3)測(cè)定分別將對(duì)照溶液和待測(cè)樣品溶液注入高效液相色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，體積流量1. OmL/min,柱溫 30°C 40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)254 360nm ；
(4)以不同濃度對(duì)照溶液分別進(jìn)樣繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品溶液中中 5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素三種組分的含量。以上的注入高效液相色譜儀中檢測(cè)步驟中，流動(dòng)相A為0. 2% 0. 4%的酸水溶液， 流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)2M 360nm。流動(dòng)相A中調(diào)節(jié)酸水溶液pH值的酸為甲酸、乙酸或磷酸中的任一種。以甲醇-酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，添加甲酸、乙酸或磷酸中的任一種于超純水中，混勻使成0. 2% 0. 4%的酸水溶液。流動(dòng)相的梯度洗脫過(guò)程中流動(dòng)相變化為0 ;3min 5%流動(dòng)相B等度，3 5min 5% 30%流動(dòng)相B線性梯度，5 30min 30% 50%流動(dòng)相B線性梯度，30 40min 50% 60%流動(dòng)相B線性梯度。其中樣品溶液的制備步驟中所述的有機(jī)溶劑為水、乙醇、甲醇、丙酮中的至少一種。
本發(fā)明的方法所解決的技術(shù)難題是，由于待測(cè)的三種成分中，5，7-二羥基色原酮的最佳測(cè)量波長(zhǎng)為256和^4nm，圣草酚為^8nm，木犀草素為253和350nm，因此在同一個(gè)波長(zhǎng)下很難同時(shí)檢測(cè)到這三種物質(zhì)，本發(fā)明找到了一個(gè)最合適的波長(zhǎng)檢測(cè)范圍及最佳的檢測(cè)波長(zhǎng)，在本發(fā)明的波長(zhǎng)范圍內(nèi)及本發(fā)明所給定的檢測(cè)波長(zhǎng)下，以上的這三種物質(zhì)均能較準(zhǔn)確的檢測(cè)出來(lái)。本發(fā)明所解決另外一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是，采用等度洗脫很難把這三種成分及樣品中的其它雜質(zhì)組分徹底洗脫分開(kāi)，采用本發(fā)明的梯度洗脫，使得這三種物質(zhì)能快速分離開(kāi)，并得到準(zhǔn)確測(cè)定。本發(fā)明最突出的特點(diǎn)在于，選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)，通過(guò)流動(dòng)相梯度洗脫，可通過(guò)高效液相色譜對(duì)復(fù)雜樣品的組分進(jìn)行有效分離，一次同時(shí)測(cè)定5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的含量及相關(guān)物質(zhì)。本發(fā)明的有益效果是，能快速準(zhǔn)確的同時(shí)對(duì)5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素這三種成分進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定時(shí)間不超過(guò)40min，比分別單獨(dú)的對(duì)這三種成分進(jìn)行檢測(cè)大大的節(jié)省了時(shí)間，提高了檢測(cè)效率；而且本發(fā)明的方法精密度高，穩(wěn)定性好，樣品中其他成分及輔料不影響測(cè)定，高、中、低濃度的回收率均較好，重現(xiàn)性好，方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定可靠，實(shí)用性強(qiáng)，非常適合產(chǎn)品質(zhì)量的控制。


圖1為本發(fā)明同時(shí)檢測(cè)5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法的檢測(cè)圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作更進(jìn)一步的說(shuō)明，以便本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員了解本發(fā)明。對(duì)照溶液的制備稱取5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素三種對(duì)照品各 2. 4mg,2. ^ig和3. 8mg于25ml容量瓶中，加100%色譜甲醇溶解，定容至刻度線，作為對(duì)照溶液備用；
待測(cè)溶液的制備花生殼去雜、清洗、干燥后，用中藥粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，精確稱取花生殼粉末1. 000g，加入30mL甲醇超聲提取40min，過(guò)濾并用色譜甲醇定容至50mL，濾液用 0. 45um有機(jī)膜過(guò)濾，即為待測(cè)樣品溶液(相當(dāng)于花生殼粉20mg/mL)；
測(cè)定方法將不同濃度對(duì)照品溶液、待測(cè)樣品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣量20μ 1 ；流動(dòng)相0. 2%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)，(KBmin 5%流動(dòng)相B等度，3 5min 5% 30%流動(dòng)相B線性梯度，5 30min 30% 50%流動(dòng)相B線性梯度，30 40min 50% 60%流動(dòng)相B 線性梯度，體積流量lmL/min，柱溫35°C ；檢測(cè)波長(zhǎng)^4nm，記錄40min內(nèi)5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的保留時(shí)間和峰面積。 數(shù)據(jù)處理以不同濃度對(duì)照品分別進(jìn)樣繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線以峰面積計(jì)算供試樣品中5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的含量。
權(quán)利要求
1.一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，包括如下步驟(1)對(duì)照溶液的制備稱取5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素三種對(duì)照品分別加入甲醇溶解，作為對(duì)照溶液備用；(2)樣品溶液的制備將花生殼去雜、清洗、干燥后粉碎至其細(xì)度為40 80目得樣品粉末，取樣品粉末，加入水或有機(jī)溶劑超聲提取，所述水或有機(jī)溶劑的體積與樣品粉末重量比為10 40 :1，提取后離心，上清液用0. 45 μ m的有機(jī)膜過(guò)濾，濾液即為待測(cè)樣品溶液；(3)測(cè)定分別將對(duì)照溶液和待測(cè)樣品溶液注入高效液相色譜儀，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，體積流量1. OmL/min,柱溫 30°C 40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)254 360nm ；(4)以不同濃度對(duì)照溶液分別進(jìn)樣繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品溶液中 5，7- 二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素三種組分的含量。
2.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于在所述的注入高效液相色譜儀中檢測(cè)時(shí)，流動(dòng)相A為0. 2% 0. 4%的酸水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)2M 360nm。
3.如權(quán)利要求1或2所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于流動(dòng)相A中調(diào)節(jié)酸水溶液pH值的酸為甲酸、乙酸或磷酸中的任一種。
4.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于所述的以甲醇-酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，添加甲酸、乙酸或磷酸中的任一種于超純水中，混勻使成0. 2% 0. 4%的酸水溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于流動(dòng)相的梯度洗脫過(guò)程中流動(dòng)相變化為O ;3min 5%流動(dòng)相B等度， 3 5min 5% 30%流動(dòng)相B線性梯度，5 30min 30% 50%流動(dòng)相B線性梯度，30 40min 50% 60%流動(dòng)相B線性梯度。
6.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其中樣品溶液的制備步驟中所述的有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、丙酮中的至少一種。
7.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于，所述的檢測(cè)波長(zhǎng)為觀0 300nm。
8.如權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)檢測(cè)花生殼中5，7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法，其特征在于，所述的檢測(cè)波長(zhǎng)為四4 nm。
全文摘要
本發(fā)明屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)花生殼中三種主要活性成分5,7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法。本發(fā)明采用高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇、水梯度洗脫溶劑為流動(dòng)相，以酸調(diào)節(jié)pH值，檢測(cè)三種活性成分，一次進(jìn)樣，各組分色譜峰之間得到良好分離，獲得精確度和重現(xiàn)性良好的檢測(cè)效果。本發(fā)明所采用的檢測(cè)花生殼中三種主要活性成分5,7-二羥基色原酮、圣草酚和木犀草素的方法簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、成本低廉，效率高，是該類(lèi)原料和產(chǎn)品質(zhì)量控制的捷徑。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102253145SQ20111019434
公開(kāi)日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月12日
發(fā)明者劉孝永, 孫欣, 杜方嶺, 王文亮, 祝清俊, 裘紀(jì)瑩, 陳蕾蕾 申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品研究所