專利名稱：桑白皮藥材或桑白皮提取物的總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法及其質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥材的質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種對桑白皮藥材或桑白皮提取物中總生物堿類成分的指紋圖譜構(gòu)建方法及檢測方法。
背景技術(shù)：
桑白皮為桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，歷代本草均有收載。桑白皮性甘、寒，歸肺經(jīng)，具有瀉肺平喘、利水消腫功能，主治肺熱喘咳、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫。桑白皮的主要化學(xué)成分包括黃酮類化合物、哌啶型生物堿類化合物(以I-脫氧野尻霉素為代表)、香豆素類化合物、多糖類化合物等。桑白皮提取物由桑白皮藥材為原料制備而成首先將桑白皮藥材切制或粉碎，用水提取，提取次數(shù)為I 3次，優(yōu)選提取3次，提取溫度為室溫至煮沸，優(yōu)選煮沸提取，溶劑量為藥材重量的10 30倍重量份，優(yōu)選20 30倍，獲得桑白皮藥材水提取液；然后提取液濃縮后離心，上清液過強酸型陽離子交換樹脂，樹脂可選擇001*4、001*7、D61、DOOlcc等型號，優(yōu)選001*7(732型)，上柱流出液棄之，收集O. I IN的氨水洗脫液,優(yōu)選用O. 5N的氨水洗脫,洗脫液濃縮后，最終獲得桑白皮提取物，或經(jīng)過噴霧干燥、減壓或常壓干燥得到桑白皮提取物。桑白皮藥材及其提取物在民間常用于消炎、利尿、解熱、鎮(zhèn)咳、祛痰等。桑白皮所表現(xiàn)出來的多種功效吸引著眾多學(xué)者的目光，人們對其中的哌啶型生物堿類化合物開始了大量而深入的研究。20世紀70年代，日本學(xué)者Yoshiaki首次從桑白皮中分離得到一種生物堿Moranoline (I-脫氧野尻霉素，1-deoxynojirimycin, DNJ),研究證實它能在小腸競爭性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，可用于治療糖尿病、肥胖癥、病毒感染等疾病。隨后，國內(nèi)外學(xué)者又從桑白皮中分離出多種生物堿，并確定了其分子結(jié)構(gòu)。研究人員將這些生物堿類化合物作用于糖尿病小鼠模型并充分證明，上述多種生物堿類化合物的降糖效果非常明顯。在對上述生物堿類活性成分的分離和提取過程中，人們發(fā)現(xiàn)由于DNJ及其他衍生物結(jié)構(gòu)中含有較多羥基，屬氮雜糖類，結(jié)構(gòu)中沒有苯環(huán)、雙鍵、羰基等發(fā)色基團，在可見光區(qū)和紫外光區(qū)都沒有吸收，故很難用HPLC-UV法直接測定其含量。目前國內(nèi)外文獻報道多采用熒光試劑芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)與DNJ發(fā)生柱前衍生化反應(yīng)后，用HPLC-FLU法進行測定。FMOC-Cl是一種氨基酸衍生化試劑，主要用于伯胺和仲胺的衍生化，生成的衍生物具有穩(wěn)定的熒光強度。DNJ分子中因為具有仲胺結(jié)構(gòu)，所以可用FMOC-Cl進行柱前衍生化，生成的衍生物采用HPLC-FLU法進行測定。采用此方法對桑白皮藥材或桑白皮提取物進行檢測，雖然可以有效地檢測出DNJ的含量，但是僅能檢測出這一單一成分，無法全面反映并控制桑白皮藥材以及桑白皮提取物中總生物堿類活性成分的含量。楊文宇等在題為《桑樹總生物堿分析方法與提取方法的探討》一文中，公開了一種從桑葉、桑椹、桑白皮和桑枝中提取總生物堿的方法。該方法利用氯-鄰聯(lián)甲苯胺試劑作為顯色劑，利用薄層色譜分析以及分光光度法檢測總生物堿。這種方法雖然比較簡便，對儀器的要求不高，但其分辨率較差，總生物堿中所含成分及含量均無法檢測出來，并不適合對桑白皮藥材以及桑白皮提取物進行精確的質(zhì)量檢測。由此可見，為提高桑白皮藥材以及桑白皮提取物現(xiàn)有質(zhì)量標準，亟待建立一種檢測精確度較高、可鑒別總生物堿類多種活性成分的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決桑白皮藥材或桑白皮提取物現(xiàn)有質(zhì)量檢測過程中僅能檢測出單一成分，無法全面反映桑白皮總生物堿類活性成分含量的問題，本發(fā)明提供了一種桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明提供的桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法包括以下步驟(a)制備桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液以O(shè). 02mol/L的鹽酸溶液或水作為溶劑，將桑白皮藥材的粉末配制成桑白皮藥材溶液；或者以水作為溶劑，將桑白皮提取物的粉末配制成桑白皮提取物溶液；(b)利用高效液相色譜法測得桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜，操作步驟包括分別將硼酸鹽緩沖液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液，水浴下反應(yīng)預(yù)定時間；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液，過濾后取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀；所采用的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，并以乙腈為流動相A，0. 1%醋酸為流動相B進行梯度洗脫；梯度洗脫的程序為0 50分鐘，流動相A體積比由30%上升到35%，流動相B體積比由70%下降到65% ;50 60分鐘，流動相A體積比保持為35%，流動相B體積比保持為65% ；60 61分鐘，流動相A體積比由35%上升到100%，流動相·B體積比由65%下降到0% ;61 70分鐘，流動相A體積比保持為100%，流動相B體積比保持為0% ；70 71分鐘，流動相A體積比由100%下降到30%，流動相B體積比由0%上升到70% ;熒光檢測器激發(fā)波長為254nm，發(fā)射波長為309nm，柱溫在20_40°C的范圍內(nèi)，經(jīng)過上述色譜分離過程，從而測得桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜。進一步地，該構(gòu)建方法還包括參照物溶液的制備，可將I-脫氧野尻霉素鹽酸鹽加入水中制備而成；制得的參照物溶液與桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液同時注入到高效液相色譜儀。進一步地，該構(gòu)建方法中桑白皮藥材溶液的制備包括將過50目篩的桑白皮藥材粉末O. 2g，置于250ml容量瓶中，加O. 02mol/L鹽酸溶液200_240ml，超聲處理，放冷，再加
O.02mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻。進一步地，該構(gòu)建方法中桑白皮提取物溶液的制備包括將桑白皮提取物粉末
O.05g，置于IOOml容器中，加入50ml水，稱定重量，超聲處理；放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻；從容器中精密吸取O. 5ml加入容量瓶中，用水稀釋至10ml，搖勻得到桑白皮提取物溶液。進一步地，通過該構(gòu)建方法得到的桑白皮藥材總生物堿類成分的對照指紋圖譜具有11個特征指紋峰。各個特征指紋峰的保留時間為1號峰為O. 537±0. 038min,
2號峰為 I. 000±0· OOOmin, 3 號峰為 I. 400±0· OlOmin, 4 號峰為 I. 429±0. 004min，5 號峰為 I. 470±0· 017min，6 號峰為 I. 906±0· 016min，7 號峰為 2· 028±0· 013min，8 號峰為 2. 203±0. 022,9 號峰為 2. 314±0. 034min, 10 號峰為 3. 633±0. 019min, 11 號峰為
3.735±0. 022min。進一步地，通過該構(gòu)建方法得到的桑白皮提取物總生物堿類成分的對照指紋圖譜具有13個特征指紋峰。各個特征指紋峰的保留時間為1號峰為O. 530±0.029min，2號峰即 S 峰為 I. 000±0· OOOmin, 3 號峰為 I. 401 ±0. 009min，4 號峰為 I. 428±0. 005min，5號峰為 I. 471±0· 019min，6 號峰為 I. 517±0· 017min，7 號峰為 I. 908±0· 019min，8 號峰為 2. 027±0· 014min，9 號峰為 2. 206±0. 031min, 10 號峰為 2. 312±0· 038min, 11 號峰為
2.583±0. 038min, 12 號峰為 3. 625±0. 036min, 13 號峰為 3. 730±0. 033min。本發(fā)明的另一目的在于提供一種桑白皮藥材或桑白皮提取物的質(zhì)量檢測方法，包 括以下步驟按照上述構(gòu)建方法中的步驟(a)制備待測桑白皮藥材溶液或待測桑白皮提取物溶液；然后按照上述構(gòu)建方法中的步驟(b)測得待測桑白皮藥材指紋圖譜或待測桑白皮提取物指紋圖譜；以及將待測桑白皮藥材指紋圖譜與上述桑白皮藥材總生物堿類成分的對照指紋圖譜進行比較；或者將待測桑白皮提取物指紋圖譜與上述桑白皮提取物總生物堿成分的對照指紋圖譜進行比較。根據(jù)本發(fā)明所提供的桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，得到了可全面反映桑白皮中藥材中總生物堿類活性成分的對照指紋圖譜。這不但較為全面地反映了總生物堿類活性成分的含量情況，提高了桑白皮藥材以及桑白皮提取物的質(zhì)量控制標準，而且本發(fā)明指紋圖譜構(gòu)建方法具有穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性好的優(yōu)點。通過與該對照指紋圖譜的比較，可準確地判斷出市場上現(xiàn)有桑白皮中藥材的質(zhì)量。


構(gòu)成本申請的一部分的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，本發(fā)明的示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當限定。在附圖中圖I是桑白皮藥材對照指紋圖譜；圖2是桑白皮提取物對照指紋圖譜；圖3是空白指紋圖譜，是指不加入任何桑白皮藥材、提取物溶液或參照物，只加入各種試劑而得到的高效液相色譜；圖4是批號為Y100513HB的桑白皮藥材的指紋圖譜；圖5是編號為S20100720(由批號為Y110225HN的桑白皮藥材制備而成)的桑白皮提取物的指紋圖譜；圖6是批號為Y101229HB桑白皮藥材的指紋圖譜；圖7是編號為S20100805(由批號為Y100826HN的桑白皮藥材制備而成)桑白皮提取物的指紋圖譜。
具體實施例方式需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互組合。下面將參考附圖并結(jié)合實施例來詳細說明本發(fā)明。本發(fā)明的目的在于提供一種桑白皮藥材或桑白皮提取物總生物堿類活性成分的指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明利用高效液相色譜法，對20批桑白皮藥材及桑白皮提取物進行了研究，建立此總生物堿類活性成分的指紋圖譜構(gòu)建方法。本發(fā)明在熒光法的基礎(chǔ)上選擇合適的流動相以及梯度洗脫參數(shù)，對桑白皮中的總生物堿成分進行指紋圖譜的檢查，具有較強的針對性。本發(fā)明提供的構(gòu)建方法包括以下步驟(a)桑白皮藥材溶液的制備以O(shè). 02mol/L的鹽酸溶液或水為溶劑，將桑白皮藥材的粉末配制成桑白皮藥材溶液，優(yōu)選采用O. 02mol/L的鹽酸溶液作為溶劑，因為生物堿成分普遍呈弱堿性，用稀鹽酸提取過程中的成鹽效應(yīng)可確保生物堿成分最大的提取率。當然，本發(fā)明的目的是將桑白皮藥材制備成可用于高效液相色譜分離的溶液，所以在此宗旨下，本發(fā)明采用的溶劑并不僅限于O. 02mol/L的鹽酸溶液或水。溶液濃度可根據(jù)所采用的色譜柱負載量、流動相流速及極性等因素來確定，通常來說，其濃度可以控制在O. 8g/L-l. Og/L的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的具體實施方式
中，先將桑白皮藥材粉末過三號篩(50目左右)，以確 保粉末顆粒大小比較均勻，有利于溶液的形成；然后精密稱取粉末O. 2g，并置于250ml容量瓶中，加O. 02mol/L鹽酸溶液適量，并以功率250W、頻率28KHZ超聲處理45分鐘；自然放冷后，加O. 02mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，靜置，得到桑白皮藥材溶液。這里所采用的過篩、超聲處理等方式，其目的都在于加大桑白皮藥材粉末的溶解度，以形成均勻溶液，避免堵塞色譜柱。本領(lǐng)域技術(shù)人員完全可以采取其他等同方式來替代上述過篩和超聲處理步驟。對于桑白皮提取物溶液，則可直接通過將桑白皮提取物的粉末加入水中而制得。溶液濃度可根據(jù)所采用的色譜柱負載量、流動相流速及極性等因素來確定，通常來說，其濃度可以控制在O. 05g/L-0. lg/L的范圍內(nèi)。在本發(fā)明所采用的具體實施方式
中，先精密稱取桑白皮提取物O. 05g，置于IOOml具塞錐形瓶中，精密加入50ml水，稱定重量，以功率250W，頻率33KHZ超聲處理30分鐘；然后自然放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻；精密吸取O. 5ml，用水稀釋至10ml，搖勻，得到桑白皮提取物溶液。(b)利用高效液相色譜法測得桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜，具體操作步驟如下分別將硼酸鹽緩沖液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液，得到；在本發(fā)明的具體實施方式
中，所采用的硼酸鹽緩沖液濃度為O. 4mol/L, pH值為8. 5，芴甲氧酰氯乙腈溶液的濃度為5mmol/L。因為上述溶液的加入是現(xiàn)有DNJ檢測方法中的常規(guī)手段，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員完全可以根據(jù)桑白皮的活性成分含量及色譜分離條件，選擇合適的濃度及加入量，本發(fā)明采用的硼酸鹽緩沖液和芴甲氧酰氯乙腈溶液濃度和加入量并不局限于本發(fā)明的具體實施方式
。隨后，在水浴下反應(yīng)預(yù)定時間，水浴溫度可以是30°C，水浴時間為10-15分鐘，優(yōu)選為10分鐘；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液，過濾后取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀；在本發(fā)明的具體實施方式
中，所采用的甘氨酸溶液為O. lmol/L，加入的體積為100 μ 1，采用的醋酸濃度為O. 1%，加入量為9. 5ml。本發(fā)明所提供的構(gòu)建方法的一個重要優(yōu)勢在于，通過本發(fā)明采用的色譜條件，所得指紋圖譜的精密度、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性都非常好，此色譜條件未在其他文件中見到相關(guān)報道。本發(fā)明的色譜條件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，并以乙腈為流動相A，O. I %醋酸為流動相B進行梯度洗脫；梯度洗脫的程序為0 50分鐘，流動相A體積比由30%上升到35%，流動相B體積比由70%下降到65% ;50 60分鐘，流動相A體積比保持為35%，流動相B體積比保持為65% ；60 61分鐘，流動相A體積比由35%線性上升到100%，流動相B體積比由65%線性下降到0% ;61 70分鐘，流動相A體積比保持為100%，流動相B體積比保持為0% ；70 71分鐘，流動相A體積比由100%線性下降到30%，流動相B體積比由0%線性上升到70% ;熒光檢測器激發(fā)波長為254nm，發(fā)射波長為309nm，柱溫在30-40°C的范圍內(nèi)，流速為O. 8-1. 0ml/L。通過色譜條件得到的指紋圖譜，較為全面地反映了總生物堿類活性成分的含量情況，各活性成分之間的分離度較高。通過對20批桑白皮藥材的指紋圖譜構(gòu)建，經(jīng)過比較分析，確定了桑白皮藥材總生物堿類成分的對照指紋圖譜具有11個共有指紋峰，相對保留時間分別為1號峰為 O. 537±0· 038，2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，3 號峰為 I. 400±0· 010，4 號峰為I. 429±0. 004,5 號峰為 I. 470±0. 017,6 號峰為 I. 906±0. 016,7 號峰為 2. 028±0. 013，8 號峰為 2. 203±0. 022,9 號峰為 2. 314±0. 034，10 號峰為 3. 633±0. 019，11 號峰為
3.735±0. 022。11個共有指紋峰的優(yōu)選相對保留時間分別為1號峰為O. 537，2號峰即S峰為
I.000，3號峰為I. 400，4號峰為I. 429，5號峰為I. 470，6號峰為I. 906，7號峰為2. 028，8號峰為2. 203，9號峰為2. 314，10號峰為3. 633，11號峰為3.735。這些共有峰構(gòu)成了桑白皮藥材總生物堿類活性成分的指紋特征，可作為桑白皮藥材總生物堿類活性成分的對照指紋圖譜。通過對20批桑白皮提取物的指紋圖譜構(gòu)建，經(jīng)過比較分析，確定了桑白皮提取物總生物堿類成分的對照指紋圖譜具有13個共有指紋峰，相對保留時間分別為1號峰為 O. 530±0. 029，2 號峰即 S 峰為 I. 000±0· 000，3 號峰為 I. 401 ±0. 009，4 號峰為
1.428±0. 005,5 號峰為 I. 471±0· 019,6 號峰為 I. 517±0· 017,7 號峰為 I. 908±0· 019，8 號峰為 2. 027±0· 014,9 號峰為 2. 206±0· 031，10 號峰為 2. 312±0· 038，11 號峰為
2.583±0. 038，12 號峰為 3. 625±0. 036，13 號峰為 3. 730±0. 033。13個共有指紋峰的優(yōu)選相對保留時間分別為1號峰為O. 530，2號峰即S峰為
I.000,3號峰為I. 401，4號峰為I. 428,5號峰為I. 471,6號峰為I. 517,7號峰為I. 908,8號峰為2. 027，9號峰為2. 206，10號峰為2. 312，11號峰為2. 583，12號峰為3. 625，13號峰為3. 730。這些共有峰構(gòu)成了桑白皮提取物總生物堿類活性成分的指紋特征，可作為桑白皮提取物總生物堿類活性成分的對照指紋圖譜。在本發(fā)明提供的構(gòu)建方法中，可進一步包括參照物溶液的制備。眾所周知，參照物可用于考察指紋圖譜的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，有助于色譜的辨認。在液相色譜法中，一般選取容易獲取的一個以上主要活性或指標成分作為對照，如無合適的對照物，可酌情考慮選擇適宜的內(nèi)標物作為參照物，也可以選擇指紋圖譜中穩(wěn)定的色譜峰作為參照峰。本發(fā)明提供的構(gòu)建方法中，可以不采用參照峰，直接以2號峰作為參照峰。也可采用I-脫氧野尻霉素鹽酸鹽作為參照物，將其加入水中直接制得參照物溶液；將制得的參照物溶液與桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液同時注入到高效液相色譜儀，在指紋圖譜中將進一步增強2號峰的強度，有利于考察指紋圖譜的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。本發(fā)明的另一目的在于利用通過上述構(gòu)建方法得到的指紋圖譜對桑白皮中藥材或桑白皮提取物進行質(zhì)量控制。首先，按照上述構(gòu)建方法中的步驟(a)制備待測桑白皮藥材溶液或待測桑白皮提取物溶液；然后按照上述構(gòu)建方法中的步驟(b)測得待測桑白皮藥材指紋圖譜或待測桑白皮提取物指紋圖譜；將待測桑白皮藥材指紋圖譜與上述桑白皮藥材總生物堿類成分的對照指紋圖譜進行比較；或者將待測桑白皮提取物指紋圖譜與上述桑白皮提取物總生物堿成分的對照指紋圖譜進行比較。具體比較方法可以國家藥典委員會頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版》計算來計算其相似度。實施例I桑白皮藥材對照指紋圖譜建立(I)桑白皮藥材的來源本發(fā)明實施例所采用的20批桑白皮藥材的產(chǎn)地主要為河南、河北、安徽、廣西、湖南，上述品種經(jīng)過鑒別，符合藥典標準，無明顯生物差異性，具體情況請見表I。表I
權(quán)利要求
1.一種桑白皮藥材或桑白皮提取物的總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括以下步驟 (a)桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液的制備 所述桑白皮藥材溶液的制備以O(shè). 02mol/L的鹽酸溶液或水為溶劑，將所述桑白皮藥材的粉末配制成所述桑白皮藥材溶液； 所述桑白皮提取物溶液的制備以水作為溶劑，將所述桑白皮提取物的粉末配制成所述桑白皮提取物溶液； (b)利用高效液相色譜法測得所述桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或所述桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜，其中，包括 分別將硼酸鹽緩沖液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入所述桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液，水浴下進行反應(yīng)；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑白皮藥材溶液或所述桑白皮提取物溶液，過濾后取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀，其中， 所述高效液相色譜儀中的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，0. I %醋酸為流動相B進行梯度洗脫，熒光檢測器激發(fā)波長為254nm，發(fā)射波長為309nm，柱溫在20-40°C的范圍內(nèi)，所述梯度洗脫的程序如下 O 50分鐘，所述流動相A體積比由30 %上升到35 %，所述流動相B體積比由70 %下降到65% ； 50 60分鐘，所述流動相A體積比保持為35%，所述流動相B體積比保持為65% ； 60 61分鐘，所述流動相A體積比由35 %上升到100 %，所述流動相B體積比由65 %下降到0% ； 61 70分鐘，所述流動相A體積比保持為100%，所述流動相B體積比保持為0% ； 70 71分鐘,所述流動相A體積比由100%下降到30%，所述流動相B體積比由0%上升到70% ； 得到所述桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或所述桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的構(gòu)建方法，其特征在于，進一步包括參照物溶液的制備，所述參照物溶液可通過將I-脫氧野尻霉素鹽酸鹽加入水中制備而成；制得的所述參照物溶液與所述桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液同時注入所述高效液相色譜儀。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述桑白皮藥材溶液的制備進一步包括 將過50目篩的所述桑白皮藥材的粉末O. 2g，置于250ml容量瓶中，加O. 02mol/L鹽酸溶液200-240ml，超聲處理，放冷，再加O. 02mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻得到所述桑白皮藥材溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述桑白皮提取物溶液的制備進一步包括 將所述桑白皮提取物的粉末O. 05g，置IOOml容器中，加入50ml水，稱定重量，超聲處理；放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻；從所述容器中精密吸取O. 5ml加入容量瓶中，用水稀釋至IOml，搖勻得到所述桑白皮提取物溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述桑白皮藥材總生物堿類成分的對照指紋圖譜中具有11個特征指紋峰，所述特征指紋峰的保留時間為I 號峰為 O. 537±0· 038min，2 號峰為 I. 000±0· OOOmin, 3 號峰為 I. 400±0· OlOmin,·4 號峰為 I. 429±0. 004min，5 號峰為 I. 470±0. 017min，6 號峰為 I. 906±0. 016min，7 號峰為 2. 028±0. 013min，8 號峰為 2. 203±0. 022,9 號峰為 2. 314±0. 034min, 10 號峰為·3.633±0. 019min, 11 號峰為 3. 735±0. 022min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述桑白皮提取物總生物堿類成分的對照指紋圖譜中具有13個特征指紋峰，所述特征指紋峰的保留時間為 I 號峰為 O. 530±0. 029min，2 號峰為 S 峰，為 I. 000±0. OOOmin，3 號峰為I.401±0· 009min，4 號峰為 I. 428±0· 005min，5 號峰為 I. 471 ±0. 019min，6 號峰為1.517±0· 017min，7 號峰為 I. 908±0· 019min，8 號峰為 2. 027±0· 014min，9 號峰為2.206±0. 031min, 10 號峰為 2. 312±0· 038min, 11 號峰為 2. 583±0. 038min, 12 號峰為3.625±0. 036min, 13 號峰為 3. 730±0. 033min。
7.一種桑白皮藥材或桑白皮提取物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 待測桑白皮藥材或桑白皮提取物溶液的制備按照權(quán)利要求I所述的構(gòu)建方法中的步驟(a)制備所述待測桑白皮藥材溶液或所述待測桑白皮提取物溶液； 所述待測桑白皮藥材或待測桑白皮提取物的指紋圖譜測定按照權(quán)利要求I所述的構(gòu)建方法中的步驟(b)測得所述待測桑白皮藥材指紋圖譜或所述待測桑白皮提取物的指紋圖譜；以及 將所述待測桑白皮藥材指紋圖譜與權(quán)利要求5所述構(gòu)建方法中的所述桑白皮藥材總生物堿類成分對照指紋圖譜進行比較；或者將所述待測桑白皮提取物指紋圖譜與權(quán)利要求6所述構(gòu)建方法中的所述桑白皮提取物總生物堿類成分對照指紋圖譜進行比較。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種桑白皮藥材或桑白皮提取物的總生物堿類成分指紋圖譜的構(gòu)建方法及其質(zhì)量檢測方法。該構(gòu)建方法包括以下步驟(a)制備桑白皮藥材溶液或桑白皮提取物溶液；以及(b)利用高效液相色譜法測得桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜。經(jīng)過上述構(gòu)建方法，測得了桑白皮藥材總生物堿類成分指紋圖譜或桑白皮提取物總生物堿類成分指紋圖譜，全面反映了桑白皮藥材中總生物堿類活性成分。這不但提高了桑白皮藥材以及桑白皮提取物的質(zhì)量控制標準，而且本發(fā)明指紋圖譜的構(gòu)建方法具有穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性好的優(yōu)點。通過與對照指紋圖譜的比較，可準確地判斷出市場上現(xiàn)有桑白皮中藥材的質(zhì)量問題。
文檔編號G01N30/36GK102890125SQ201110204130
公開日2013年1月23日 申請日期2011年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月20日
發(fā)明者段震文, 郭樹仁, 薛嵐 申請人:北京北大維信生物科技有限公司