專利名稱：尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種電化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域的裝置及其制備方法，具體是一種用于尿樣中血清素 及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池及制備方法。
背景技術(shù)：
血清素即5-羥色胺，存在于肥大細(xì)胞、血小板和腸粘膜的嗜銀細(xì)胞中。研究表明闌尾發(fā)生炎癥導(dǎo)致肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺、5-羥色胺等炎癥介質(zhì)，血液中血清素的濃度增加。血清素在單胺氧化酶的作用下在體內(nèi)迅速代謝生成5-羥吲哚乙酸，從尿液中排除。因此尿樣中5-羥色胺及其代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸含量的測(cè)定對(duì)闌尾炎的診斷有一定參考價(jià)值。目前已經(jīng)有多種檢測(cè)技術(shù)用于5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸的測(cè)定，如光度法，熒光法，化學(xué)發(fā)光法，極譜法，伏安法和毛細(xì)管電泳等。雖然上述方法已經(jīng)用于生物和藥物樣品中5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸的檢測(cè)，但是很多方法存在著預(yù)處理復(fù)雜、成本高、靈敏度低以及不能在同一生物樣品上同時(shí)測(cè)定這些化合物的缺點(diǎn)而影響了這些方法的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，提供一種用于尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池及其制備方法，通過簡(jiǎn)單步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物濃度的檢測(cè)。本發(fā)明提供一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，包括工作電極、參比電極和輔助電極，其中工作電極、參比電極、輔助電極的輸入端與液相色譜的輸出端相連接，工作電極、參比電極、輔助電極的輸出端與電化學(xué)系統(tǒng)的輸入端相連接，電化學(xué)系統(tǒng)的輸出端與計(jì)算機(jī)信號(hào)采集端相連接，其特征在于，所述的工作電極包括貴金屬粒子層、聚溴酚藍(lán)層和電極基體，其中貴金屬粒子沉積在聚溴酚藍(lán)膜上，聚溴酚藍(lán)沉積在電極基體上。所述的工作電極中貴金屬粒子層的厚度為40 200納米，聚溴酚藍(lán)膜的厚度為30 500納米。所述的電極基體為玻碳材質(zhì)的電極基體。所述的液相色譜采用Luna 5 μ m C18反相色譜柱。本發(fā)明提供一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，包括以下步驟第一步聚溴酚藍(lán)修飾電極的制備首先將玻碳電極進(jìn)行拋光處理后在二次蒸餾水中超聲清洗；然后清洗后的玻碳電極放入磷酸鹽溶液中進(jìn)行循環(huán)掃描處理；再將循環(huán)掃描后的玻碳電極放入溶質(zhì)為溴酚藍(lán)的磷酸鹽溶液中，再次進(jìn)行循環(huán)掃描處理；將經(jīng)過二次循環(huán)掃描處理后的玻碳電極取出后用二次蒸餾水清洗，制得聚溴酚藍(lán)修飾電極；第二步貴金屬粒子加載首先將聚溴酚藍(lán)修飾電極置于含可溶行貴金屬鹽溶液中，進(jìn)行循環(huán)掃描處理后取出經(jīng)過掃描的聚溴酚藍(lán)修飾電極，用無水乙醇和二次蒸餾水依次輪流沖洗若干次，得到貴金屬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極作為工作電極； 第三步依次將參比電極、工作電極和輔助電極與液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)相連，其中參比電極為Ag/AgCl電極；輔助電極為不銹鋼制成的電極，制成用于尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池。在第一步中所述的循環(huán)掃描處理是指將工作電極、參比電極和輔助電極分別與電化學(xué)系統(tǒng)相連，以一定的掃描速率在設(shè)定的電壓范圍中進(jìn)行循環(huán)電位掃描。第一步中所述的磷酸鹽溶液中溴酚藍(lán)的濃度為I. OX 10_5mol/L O. 5mol/L。第一步中所述的磷酸鹽緩沖溶液是指磷酸根濃度為O. 2mol/L的磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉溶液。第三步中所述的液相色譜使用的流動(dòng)相為含有5% 50%甲醇和O. 2mol/L的PH5. O 7. O的磷酸鹽緩沖溶液，該流動(dòng)相的流速為I. OmL/min。 本發(fā)明通過以下步驟進(jìn)行檢測(cè)首先打開液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)，使得不同已知濃度的5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸樣本隨磷酸鹽緩沖溶液經(jīng)Luna 5ym C18反相色譜柱，依次流過參比電極、工作電極和輔助電極的表面；然后利用CHI832型電化學(xué)系統(tǒng)記錄下不同樣本產(chǎn)生的電流信號(hào)，根據(jù)不同樣本下的已知5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度及對(duì)應(yīng)實(shí)測(cè)的響應(yīng)電流的電流值作為縱橫坐標(biāo)進(jìn)行擬合，對(duì)薄層檢測(cè)池進(jìn)行樣本學(xué)習(xí)；再將處理過的尿樣20 μ L置于制備好測(cè)試環(huán)境中，測(cè)得響應(yīng)電流的電流值，根據(jù)經(jīng)過樣本學(xué)習(xí)得到的5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度一相應(yīng)電流的線性關(guān)系圖讀出該電流值對(duì)應(yīng)的尿樣中所含的5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度。本發(fā)明所述方法能夠以簡(jiǎn)單步驟實(shí)現(xiàn)5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度的檢測(cè)，檢測(cè)線性范圍可達(dá)到為I. 0Χ1(Γ9 I. 0Xl(T5mol/L，檢測(cè)分辨率為I. O X l(Tlclmol/L。


圖I為本發(fā)明應(yīng)用工作原理圖。圖2為工作電極示意圖。
具體實(shí)施例實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例I一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，包括工作電極、參比電極和輔助電極，其中工作電極、參比電極、輔助電極的輸入端與液相色譜的輸出端相連接，工作電極、參比電極、輔助電極的輸出端與電化學(xué)系統(tǒng)的輸入端相連接，電化學(xué)系統(tǒng)的輸出端與計(jì)算機(jī)信號(hào)采集端相連接；所述的工作電極包括貴金屬粒子層、聚溴酚藍(lán)層和電極基體，其中貴金屬粒子沉積在聚溴酚藍(lán)膜上，聚溴酚藍(lán)沉積在電極基體上。將預(yù)處理好的玻碳電極放入pH = 7. O的磷酸緩沖溶液中，以20mV/s的掃描速率在-O. 2V +2. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理IOmin。
然后將電極放入含有O. 5mol/L溴酚藍(lán)的pH = 7. O的磷酸鹽緩沖溶液中，以20mV/s的掃描速率在O. OV +1. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理6圈，得到聚溴酚藍(lán)修飾電極；將聚溴酚藍(lán)修飾電極置于含I. OX 10_3mol/L的K2PtCl6和O. lmol/L的KCl溶液中，以O(shè). lV/s的掃描速率在-O. 4V +0. 3V的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理12圈，得到鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極，其中聚溴酚藍(lán)層和鉬粒子層依次由內(nèi)而外包覆于玻碳電極外部，鉬粒子層的厚度為50 70nm，聚溴酚藍(lán)層的厚度為70 90nm ；以鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極為工作電極，Ag//AgCl電極作為參比電極，不銹鋼為輔助電極，依次將參比電極、工作電極和輔助電極與液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)相連，通過Luna5y m C18反相色譜柱進(jìn)行分離，其中的流動(dòng)相為含有10%甲醇和O. 2mol/L的PH6. O的磷酸鹽緩沖溶液中，流速為I. OmL/min ；然后在加載+0. 6V電位下，根據(jù)不同樣本下的已知5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度及利用CHI832型電化學(xué)系統(tǒng)對(duì)應(yīng)實(shí)測(cè)的響應(yīng)電流的電流值作為縱橫坐標(biāo)進(jìn)行擬合，對(duì) 薄層檢測(cè)池進(jìn)行樣本學(xué)習(xí)；實(shí)施例2一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池及制備方法，將預(yù)處理好的玻碳電極放入pH = 5. O的磷酸鹽緩沖溶液中，以15mV/s的掃描速率在-O. 2V +1. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理15min ；然后將電極放入含有I. OX 10_3mol/L溴酚藍(lán)的pH = 5. O的磷酸鹽緩沖溶液中，以15mV/s的掃描速率在O. OV +1. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理10圈，得到聚溴酚藍(lán)修飾電極；將聚溴酚藍(lán)修飾電極置于含2· 5X 10_3mol/L的K2PtCl6和O. lmol/L的KCl溶液中，以O(shè). lV/s的掃描速率在-O. 4V +0. 3V的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理16圈，得到鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極，其中聚溴酚藍(lán)層和鉬粒子層依次由內(nèi)而外包覆于玻碳電極外部，鉬粒子層的厚度為80 lOOnm，聚溴酚藍(lán)層的厚度為50 70nm ；以鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極為工作電極，Ag-AgCl電極作為參比電極，不銹鋼為輔助電極，依次將參比電極、工作電極和輔助電極與液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)相連，通過Luna5 μ m C18反相色譜柱進(jìn)行分離，其中的流動(dòng)相為含有10%甲醇和0. 2mol/L的pH5. O的磷酸鹽緩沖溶液中，流速為I. OmL/min ；然后在加載+0. 6V電位下，根據(jù)不同樣本下的已知5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃度及對(duì)應(yīng)利用CHI832型電化學(xué)系統(tǒng)實(shí)測(cè)的響應(yīng)電流的電流值作為縱橫坐標(biāo)進(jìn)行擬合，對(duì)薄層檢測(cè)池進(jìn)行樣本學(xué)習(xí)；實(shí)施例3一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池及制備方法，將預(yù)處理好的玻碳電極放入pH = 7. O的磷酸鹽緩沖溶液中，以20mV/s的掃描速率在_0. 2V +2. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理50min ；然后將電極放入含有I. OX 10_5mol/L溴酚藍(lán)的pH = 7. O的磷酸鹽緩沖溶液中，以20mV/s的掃描速率在0. OV +1. OV的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理30圈，得到聚溴酚藍(lán)修飾電極；
將聚溴酚藍(lán)修飾電極置于含4· 5X 10_3mol/L的K2PtCl6和O. lmol/L的KCl溶液中，以O(shè). lV/s的掃描速率在-O. 4V +0. 3V的電位范圍內(nèi)進(jìn)行循環(huán)掃描處理18圈，得到鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極，其中聚溴酚藍(lán)層和鉬粒子層依次由內(nèi)而外包覆于玻碳電極外部，鉬粒子層的厚度為100 120nm，聚溴酚藍(lán)層的厚度為110 130nm ；以鉬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極為工作電極，Ag-AgCl電極作為參比電極，不銹鋼為輔助電極，依次將參比電極、工作電極和輔助電極與液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)相連，通過Luna5 μ m C18反相色譜柱進(jìn)行分離，其中的流動(dòng)相為含有30%甲醇和O. 2mol/L的pH7. O的磷酸鹽緩沖溶液中，流速為I. OmL/min ；然后在加載+0. 6V電位下，根據(jù)不同樣本下的已知5-羥色胺和5-羥吲哚乙酸濃 度濃度及對(duì)應(yīng)利用CHI832型電化學(xué)系統(tǒng)實(shí)測(cè)的響應(yīng)電流的電流值作為縱橫坐標(biāo)進(jìn)行擬合,對(duì)薄層檢測(cè)池進(jìn)行樣本學(xué)習(xí)；
權(quán)利要求
1.一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，包括工作電極、參比電極和輔助電極，其中工作電極、參比電極、輔助電極的輸入端與液相色譜的輸出端相連接，工作電極、參比電極、輔助電極的輸出端與電化學(xué)系統(tǒng)的輸入端相連接，電化學(xué)系統(tǒng)的輸出端與計(jì)算機(jī)信號(hào)采集端相連接，其特征在于，所述的工作電極包括貴金屬粒子層、聚溴酚藍(lán)層和電極基體，其中貴金屬粒子沉積在聚溴酚藍(lán)膜上，聚溴酚藍(lán)沉積在電極基體上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，其特征在于，所述的工作電極中貴金屬粒子層的厚度為40 200納米，聚溴酚藍(lán)膜的厚度為30 500納米。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，其特征在于，所述的電極基體為玻碳材質(zhì)的電極基體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，其特征在于，所述的液相色譜采用Luna 5 μ m C18反相色譜柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 第一步聚溴酚藍(lán)修飾電極的制備首先將玻碳電極進(jìn)行拋光處理后在二次蒸餾水中超聲清洗；然后清洗后的玻碳電極放入磷酸鹽溶液中進(jìn)行循環(huán)掃描處理；再將循環(huán)掃描后的玻碳電極放入溶質(zhì)為溴酚藍(lán)的磷酸鹽溶液中，再次進(jìn)行循環(huán)掃描處理；將經(jīng)過二次循環(huán)掃描處理后的玻碳電極取出后用二次蒸餾水清洗，制得聚溴酚藍(lán)修飾電極； 第二步貴金屬粒子加載首先將聚溴酚藍(lán)修飾電極置于含可溶行貴金屬鹽溶液中，進(jìn)行循環(huán)掃描處理后取出經(jīng)過掃描的聚溴酚藍(lán)修飾電極，用無水乙醇和二次蒸餾水依次輪流沖洗若干次，得到貴金屬粒子加載后的聚溴酚藍(lán)修飾電極作為工作電極； 第三步依次將參比電極、工作電極和輔助電極與液相色譜及電化學(xué)系統(tǒng)相連，其中參比電極為Ag/AgCl電極；輔助電極為不銹鋼制成的電極，制成用于尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，在第一步中所述的循環(huán)掃描處理是指將工作電極、參比電極和輔助電極分別與電化學(xué)系統(tǒng)相連，以一定的掃描速率在設(shè)定的電壓范圍中進(jìn)行循環(huán)電位掃描。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，第一步中所述的磷酸鹽溶液中溴酚藍(lán)的濃度為I. OX 10_5mol/L O. 5mol/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，第一步中所述的磷酸鹽緩沖溶液是指磷酸根濃度為O. 2mol/L的磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池的制備方法，其特征在于，第三步中所述的液相色譜使用的流動(dòng)相為含有5% 50%甲醇和O. 2mol/L的PH5. O 7. O的磷酸鹽緩沖溶液，該流動(dòng)相的流速為I. OmL/min。
全文摘要
一種尿樣中血清素及代謝產(chǎn)物檢測(cè)的薄層檢測(cè)池，包括工作電極、參比電極和輔助電極，其中工作電極、參比電極、輔助電極的輸入端與液相色譜的輸出端相連接，工作電極、參比電極、輔助電極的輸出端與電化學(xué)系統(tǒng)的輸入端相連接，電化學(xué)系統(tǒng)的輸出端與計(jì)算機(jī)信號(hào)采集端相連接，其特征在于，所述的工作電極包括貴金屬粒子層、聚溴酚藍(lán)層和電極基體，其中貴金屬粒子沉積在聚溴酚藍(lán)膜上，聚溴酚藍(lán)沉積在電極基體上。本發(fā)明制備所得的薄層檢測(cè)池能夠以簡(jiǎn)單步驟實(shí)現(xiàn)尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物濃度的檢測(cè)，檢測(cè)線性范圍可達(dá)到為1.0×10-9～1.0×10-5mol/L，檢測(cè)分辨率為1.0×10-10mol/L。通過簡(jiǎn)單步驟實(shí)現(xiàn)對(duì)尿樣中血清素及其代謝產(chǎn)物濃度的檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N27/28GK102901759SQ20111021041
公開日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者王丹, 張鵬, 王瑾, 何丹農(nóng) 申請(qǐng)人:上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司