專利名稱：膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白檢測(cè)試紙及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白(Vg)檢測(cè)試紙及其制備方法。
背景技術(shù)：
稻縱卷葉螟(Cnaphalocrocis medinalis Guenee)是廣泛分布于亞洲和東非的重要遷飛性害蟲，在我國(guó)幾乎所有所有水稻產(chǎn)區(qū)該害蟲均有分布，但在發(fā)生程度上存在明顯的地域差別，主要危害區(qū)在泰沂山至秦嶺一線以南地區(qū)。稻縱卷葉螟成蟲具有遠(yuǎn)距離遷飛習(xí)性，在我國(guó)每年有5次北遷和3次南遷過程。大規(guī)模遷飛使稻縱卷葉螟的危害具有突發(fā)性，預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)難度極大，往往猝不及防造成慘重?fù)p失，因此，對(duì)其準(zhǔn)確、及時(shí)、精確地測(cè)報(bào)十分重要。對(duì)于稻縱卷葉螟的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)，很大程度上依賴以往經(jīng)驗(yàn)、田間趕蛾和燈誘成蟲等方法。將雌蛾解剖、鏡檢卵巢發(fā)育級(jí)別，根據(jù)雌蛾卵巢發(fā)育進(jìn)度，可以分析蟲源性質(zhì)(遷入型、居留型、遷出型)及確定防治適期。研究發(fā)現(xiàn)，稻縱卷葉螟遷飛時(shí)，遷入型、居留型和遷出型在卵巢發(fā)育上存在明顯差異，遷入期雌蟲三級(jí)以上卵巢比例可以達(dá)到80%以上，很少存在一、二級(jí)卵巢；居留期雌蟲卵巢分布比較平均，一、二級(jí)卵巢比例可以達(dá)到30% -40%, 高級(jí)別卵巢比例在50%左右；而遷出期雌蟲卵巢則基本都處在一、二級(jí)，可以達(dá)到80%以上，高級(jí)別卵巢很少出現(xiàn)。然而，解剖卵巢在實(shí)際操作中存在工作量大、準(zhǔn)確度低、人為因素明顯、需要專業(yè)設(shè)備等缺陷，阻礙了稻縱卷葉螟測(cè)報(bào)的準(zhǔn)確率，還需開發(fā)方便、快速、特異性強(qiáng)的測(cè)報(bào)方法?，F(xiàn)在用于檢測(cè)的試紙有《一種間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)微量氧化低密度脂蛋白膠體金試紙條》(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00710202084. 7)，基本支持片7中間置層析顯色膜4，層析顯色膜右邊搭接吸水墊1，左邊依次搭接金標(biāo)抗體墊5、樣品吸收墊6，層析顯色膜的顯色區(qū)上設(shè)立質(zhì)控帶2、檢測(cè)帶3，檢測(cè)帶包被有作抗原用氧化低密度脂蛋白，質(zhì)控帶包被有第二種動(dòng)物抗鼠的IgG?！赌z體金層析法半定量檢測(cè)2，4-D的試紙條及其制備方法》(中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?200710105596. 1)，PVC板中間置硝酸纖維素包被膜7，硝酸纖維素包被膜右邊搭接吸水濾紙8，左邊依次搭接金標(biāo)抗體區(qū)塊3、樣品吸收區(qū)1，硝酸纖維素包被膜的顯色區(qū)上設(shè)立質(zhì)控線和T測(cè)試區(qū)，T測(cè)試區(qū)有四條顯色線。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的旨在提供一種操作簡(jiǎn)單、快速靈敏、使用方便，檢測(cè)效果好的膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白檢測(cè)試紙及其制備方法。本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)方式為，膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白檢測(cè)試紙，在PVC 塑料底板的中間置有硝酸纖維素包被膜，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊，右邊搭接吸水墊，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆
4抗體Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠IgGAb3，金標(biāo)墊包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體。膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白(Vg)檢測(cè)試紙的制備方法，具體步驟是1)制備單克隆抗體Abla.表達(dá)抗原蛋白用pED8a+表達(dá)載體表達(dá)卵黃原蛋白部分核心片段b.純化抗原蛋白用鎳離子柱親和層析目的蛋白c.免疫和制備取已用純化抗原蛋白免疫的小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜交融合，制備雜交瘤細(xì)胞，挑選陽(yáng)性高的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆，制備單克隆雜交瘤細(xì)胞，持續(xù)培養(yǎng)20代，篩選并最終建立可穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，采用接種雜交瘤細(xì)胞至小鼠腹腔的方法制備腹水，再?gòu)母顾刑崛慰寺】贵wAb 1。用純化的抗原蛋白免疫新西蘭大白兔，免疫8次后，頸動(dòng)脈采血，制備多克隆抗體 Ab2。2)制備膠體金顆粒標(biāo)記抗體①先采用檸檬酸三鈉還原法制取膠體金顆粒取0. 01% HAuCl4水溶液100ml，加熱至沸騰，迅速加入1. 25ml的檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)煮沸，反應(yīng)5min，靜置冷卻，制得直徑為40nm的膠體金顆粒。②確定膠體金的最佳標(biāo)記pH 取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金的pH值，然后在每種不同pH值的膠體金中分別加入1. Omg/ml的單克隆抗體AbllOO. OyL，用封口膜封閉試管口，靜置15min,4°C 2000r/min離心lOmin，取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在可見光范圍400-600nm內(nèi)進(jìn)描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值，以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的膠體金PH值為最佳標(biāo)記pH值。③確定膠體金的最佳單抗標(biāo)記量取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用 0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金至最適pH值，分別加入不同體積的1. 0mg/ml的單克隆抗體 Abl,充分混勻，靜置5min后每管分別加入10 %的氯化鈉1. 0ml,搖勻，靜止IOmin后于 40C 2000r/min離心lOmin，取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在400-600nm可見光范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值，以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)用量為最小保護(hù)劑量，再加20%為穩(wěn)定膠體金的抗體蛋白實(shí)際用量。④膠體金顆粒標(biāo)記抗體于50. Oml的小燒杯中加入20. Oml的膠體金，調(diào)pH至最佳標(biāo)記PH值，在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入一定量稀釋好的lmg/ml的單克隆抗體，攪拌30min ； 加入10% BSA至終濃度為1%，繼續(xù)攪拌30min ；4°C放置池后，將上述膠體金標(biāo)記物分裝于7. OmL的離心管中，以2，000r/min離心15min,吸出上清液，棄沉淀；以8，700r/min離心 45min，棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；再次以10，000r/min離心30min，棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；以10，000r/min離心30min，棄去上清液，沉淀用1. Oml標(biāo)記洗滌液重懸，得膠體金顆粒標(biāo)記抗體，在4°C下放置。標(biāo)記洗滌液是用下述方法配制的，0. 002mol/L含0. 聚乙二醇20000及0. 05% 疊氮鈉，PH 9. 0的硼酸緩沖液，0. 22 μ m膜濾過，在4°C下放置。3)試紙條的構(gòu)建在PVC塑料底板的中間置有硝酸纖維素包被膜，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊，右邊搭接吸水墊，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，金標(biāo)結(jié)合墊包被
5膠體金顆粒標(biāo)記抗體，檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆抗體Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠IgG Ab3。使用本發(fā)明的檢測(cè)試紙時(shí)，向樣品墊滴加樣品后，樣品向前泳動(dòng)至金標(biāo)墊時(shí)，固態(tài)化的膠體金顆粒標(biāo)記抗體迅速溶解釋放，一起向前泳動(dòng)至檢測(cè)線，若樣品中含有Vg，金標(biāo)單抗與Vg的復(fù)合物與檢測(cè)線上的(AM)形成金標(biāo)單抗(Abl)-Vg-(AM)復(fù)合物而被截獲，在檢測(cè)線形成紅色條帶，部分金標(biāo)單抗穿過檢測(cè)線被包被于質(zhì)控線的羊抗鼠IgG截獲，形成紅色條帶，即判為陽(yáng)性反應(yīng)；反之，若樣品中不含有Vg，不會(huì)形成免疫復(fù)合物，不在檢測(cè)線形成紅色條帶，部分金標(biāo)單抗穿過檢測(cè)線被包被于質(zhì)控線的羊抗鼠IgG截獲，在質(zhì)控線形成紅色條帶，判為陰性反應(yīng)。如檢測(cè)線和質(zhì)控線都不顯色，則試紙條失效。采用本發(fā)明方便快捷，可在5-lOmin內(nèi)半定量檢測(cè)遷飛性昆蟲樣品中的卵黃原蛋白(Vg)含量，以確定遷飛性昆蟲的蟲源性質(zhì)，適用于科研單位和基層植保部門對(duì)于遷飛性昆蟲的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)。攜帶方便，操作簡(jiǎn)單檢測(cè)準(zhǔn)確率高，特異性強(qiáng)。


附圖為試紙條結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式本申請(qǐng)人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，稻縱卷葉螟成蟲卵巢發(fā)育與卵黃發(fā)生密切相關(guān)，卵黃(主要是卵黃原蛋白)在卵巢管內(nèi)的不斷沉積促進(jìn)卵巢的發(fā)育和成熟，因此可通過卵黃原蛋白的沉積來(lái)判斷卵巢的發(fā)育進(jìn)度。基于這種思路，本申請(qǐng)人通過制備稻縱卷葉螟卵黃原蛋白的抗體，開發(fā)便攜式膠體金試紙條，來(lái)檢測(cè)卵巢中卵黃原蛋白的含量情況，快速判斷稻縱卷葉螟的卵巢發(fā)育進(jìn)度，確定蟲源性質(zhì)，為稻縱卷葉螟的準(zhǔn)確測(cè)報(bào)提供新方法。本發(fā)明的檢測(cè)試紙條是在PVC塑料底板1的中間置有硝酸纖維素包被膜3，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊4、樣品墊5，右邊搭接吸水墊2，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆抗體Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠 IgG Ab3。膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白(Vg)檢測(cè)試紙的制備方法，具體步驟是1)制備單克隆抗體Abla.表達(dá)抗原蛋白用pET28a(+)表達(dá)載體表達(dá)卵黃原蛋白部分核心片段b.純化抗原蛋白用鎳離子柱親和層析目的蛋白c.免疫和制備取已用純化抗原蛋白免疫的小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜交融合，制備雜交瘤細(xì)胞，挑選陽(yáng)性高的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆，制備單克隆雜交瘤細(xì)胞，持續(xù)培養(yǎng)20代，篩選并最終建立可穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，采用接種雜交瘤細(xì)胞至小鼠腹腔的方法制備腹水，再?gòu)母顾刑崛慰寺】贵wAb 1。用純化的抗原蛋白免疫新西蘭大白兔，免疫8次后，頸動(dòng)脈采血，制備多克隆抗體 Ab2。2)制備膠體金顆粒標(biāo)記抗體①先采用檸檬酸三鈉還原法制取膠體金顆粒取0. 01% HAuCl4水溶液100ml，加熱至沸騰，迅速加入1. 25ml的檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)煮沸，溶液顏色逐漸出現(xiàn)灰色， 然后顏色越來(lái)越深，由藍(lán)色變成黑色，再加熱出現(xiàn)酒紅色，整個(gè)反應(yīng)過程為5min左右。靜置冷卻，即制得直徑約為40nm的膠體金顆粒。②確定膠體金的最佳標(biāo)記pH 取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金的pH值，然后在每種不同pH值的膠體金中分別加入1. Omg/ml的單克隆抗體(Abl) 100.0 μ L，用封口膜封閉試管口，靜置15min，4°C 2000r/min離心lOmin，取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在可見光范圍400-600nm內(nèi)進(jìn)行掃描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值，以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的膠體金PH值為最佳標(biāo)記pH 值。③確定膠體金的最佳單抗標(biāo)記量取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用 0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金至最適pH值，分別加入不同體積的1. Omg/ml的單克隆抗體 (Abl)，充分混勻。靜置5min后每管分別加入10%的氯化鈉1.0ml，搖勻，靜止IOmin后于4°C 2000r/min離心lOmin。取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在可見光范圍內(nèi) (400-600nm)進(jìn)行掃描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值。以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)用量為最小保護(hù)劑量，再加20%為穩(wěn)定膠體金的抗體蛋白實(shí)際用量。④制備膠體金顆粒標(biāo)記抗體于50. Oml的小燒杯中加入20. Oml的膠體金，調(diào)pH 至最佳標(biāo)記PH值，在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入一定量稀釋好的Liig/ml的單克隆抗體，攪拌 30min ;加入10%834至終濃度為1(%，繼續(xù)攪拌301^11 ；4°C放置2h后，將上述膠體金標(biāo)記物分裝于7. OmL的離心管中，以2，000r/min離心15min,吸出上清液，棄沉淀；以8，700r/min 離心45min，棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；再次以10，000r/min離心30min，棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；以10，000r/min離心30min，棄去上清液，沉淀用1. Oml 標(biāo)記洗滌液重懸，得膠體金顆粒標(biāo)記抗體，在4°C下放置。標(biāo)記洗滌液是用下述方法配制的，0. 002mol/L含0. 聚乙二醇20000及0. 05% 疊氮鈉，PH 9. 0的硼酸緩沖液，0. 22 μ m膜濾過，在4°C下放置。3)試紙條的構(gòu)建采用雙抗體夾心法構(gòu)建卵黃原蛋白免疫層析快速檢測(cè)試紙條。在PVC塑料底板1 的中間置有硝酸纖維素包被膜3，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊4、樣品墊5， 右邊搭接吸水墊2，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆抗體 Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠IgG Ab3，金標(biāo)結(jié)合墊4包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體。使用本發(fā)明的檢測(cè)試紙時(shí)，向樣品墊滴加樣品后，樣品在毛細(xì)管作用下向前泳動(dòng)， 當(dāng)泳動(dòng)向前泳動(dòng)至金標(biāo)墊時(shí)，固態(tài)化的膠體金顆粒標(biāo)記抗體迅速溶解釋放，一起向前泳動(dòng)至檢測(cè)線(T)，若樣品中含有Vg，膠體金顆粒標(biāo)記抗體與Vg的復(fù)合物與檢測(cè)線上的(Ab2) 形成金標(biāo)單抗(Abl)-Vg-(AM)復(fù)合物而被截獲，在檢測(cè)線形成紅色條帶，部分金標(biāo)單抗穿過檢測(cè)線被包被于質(zhì)控線的羊抗鼠IgG截獲，形成紅色條帶，即判為陽(yáng)性反應(yīng)；反之，若樣品中不含有Vg，不會(huì)形成免疫復(fù)合物，不在檢測(cè)線形成紅色條帶，部分金標(biāo)單抗穿過檢測(cè)線被包被于質(zhì)控線的羊抗鼠IgG截獲，在質(zhì)控線形成紅色條帶，判為陰性反應(yīng)。如檢測(cè)線和質(zhì)控線都不顯色，則試紙條失效。
權(quán)利要求
1.膠體金層析法檢測(cè)遷飛性昆蟲卵黃原蛋白的檢測(cè)試紙，在PVC塑料底板的中間置有硝酸纖維素包被膜，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊，右邊搭接吸水墊，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，其特征在于檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆抗體 Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠IgGAb3，金標(biāo)結(jié)合墊包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體。
2.制備權(quán)利要求1所述的膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白檢測(cè)試紙的方法，其特征在于具體步驟是1)制備單克隆抗體Abla.表達(dá)抗原蛋白用pET28a+表達(dá)載體表達(dá)卵黃原蛋白部分核心片段，b.純化抗原蛋白用鎳離子柱親和層析目的蛋白，c.免疫和制備取已用純化抗原蛋白免疫的小鼠的脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞雜交融合，制備雜交瘤細(xì)胞，挑選陽(yáng)性高的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆，制備單克隆雜交瘤細(xì)胞，持續(xù)培養(yǎng)20代，篩選并最終建立可穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，采用接種雜交瘤細(xì)胞至小鼠腹腔的方法制備腹水，再?gòu)母顾刑崛慰寺】贵wAbl，用純化的抗原蛋白免疫新西蘭大白兔，免疫8次后，頸動(dòng)脈采血，制備多克隆抗體Ab2，2)制備膠體金顆粒標(biāo)記抗體，①先采用檸檬酸三鈉還原法制取膠體金顆粒取0.01% HAuCl4水溶液100ml，加熱至沸騰，迅速加入1. 25ml的檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)煮沸，反應(yīng)5min，靜置冷卻，制得直徑為40nm的膠體金顆粒，②確定膠體金的最佳標(biāo)記PH取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金的pH值，然后在每種不同pH值的膠體金中分別加入1. Omg/ml的單克隆抗體AbllOO. OyL，用封口膜封閉試管口，靜置15min,4°C 2000r/min離心lOmin，取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在可見光范圍400-600nm內(nèi)進(jìn)行掃描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值，以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的膠體金PH值為最佳標(biāo)記pH值，③確定膠體金的最佳單抗標(biāo)記量，取一系列小試管，分別加入5ml膠體金，用0.Imol/ L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金至最適pH值，分別加入不同體積的1. Omg/ml的單克隆抗體Abl，充分混勻，靜置5min后每管分別加入10%的氯化鈉1.0ml，搖勻，靜止IOmin后于4°C 2000r/min 離心lOmin，取上清液用紫外-可見光分光光度計(jì)在400-600nm可見光范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，獲得膠體金可見光吸收光譜，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)、吸光值，以出現(xiàn)最大吸收峰時(shí)對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)用量為最小保護(hù)劑量，再加20%為穩(wěn)定膠體金的抗體蛋白實(shí)際用量，④膠體金顆粒標(biāo)記抗體，于50.Oml的小燒杯中加入20. Oml的膠體金，調(diào)pH至最佳標(biāo)記PH值，在攪拌的狀態(tài)下緩慢加入一定量稀釋好的lmg/ml的單克隆抗體，攪拌30min ；加入10% BSA至終濃度為1%，繼續(xù)攪拌30min ；4°C放置濁后，將上述膠體金標(biāo)記物分裝于 7. OmL的離心管中，以2，000r/min離心15min,吸出上清液，棄沉淀；以8，700r/min離心 45min,棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；再次以10，000r/min離心30min，棄去上清液，加入標(biāo)記洗滌液至原體積；以10，000r/min離心30min，棄去上清液，沉淀用1. Oml標(biāo)記洗滌液重懸，得膠體金顆粒標(biāo)記抗體，在4°C下放置，標(biāo)記洗滌液是用下述方法配制的，0. 002mol/L含0. 聚乙二醇20000及0. 05%疊氮鈉，PH 9. O的硼酸緩沖液，0. 22 μ m膜濾過，在4°C下放置，3)試紙條的構(gòu)建在PVC塑料底板的中間置有硝酸纖維素包被膜，硝酸纖維素包被膜左邊依次搭接金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊，右邊搭接吸水墊，硝酸纖維素膜有檢測(cè)線和質(zhì)控線，金標(biāo)結(jié)合墊包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體，檢測(cè)線包被作捕獲抗體的多克隆抗體Ab2，質(zhì)控線包被作質(zhì)量控制抗體的羊抗鼠IgG Ab3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種膠體金層析法遷飛性昆蟲卵黃原蛋白檢測(cè)試紙及其制備方法。是在PVC塑料底板置搭接有金標(biāo)結(jié)合墊、樣品墊和吸水墊的硝酸纖維素包被膜，硝酸纖維素包被膜有包被多克隆抗體的檢測(cè)線和包被羊抗鼠的質(zhì)控線，金標(biāo)結(jié)合墊包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體。制備是先制單克隆抗體、多克隆抗體及羊抗鼠，由單克隆抗體制備膠體金顆粒標(biāo)記抗體，然后在PVC塑料底板上順次搭接并粘貼樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素包被膜、吸水墊，硝酸纖維素膜設(shè)檢測(cè)線和質(zhì)控線，檢測(cè)線包被多克隆抗體，質(zhì)控線包被羊抗鼠，金標(biāo)墊包被膠體金顆粒標(biāo)記抗體，即得檢測(cè)試紙。采用本發(fā)明方便快捷，可在5-10min內(nèi)半定量檢測(cè)遷飛性昆蟲樣品中的卵黃原蛋白含量，以確定遷飛性昆蟲的蟲源性質(zhì)。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102419371SQ20111023415
公開日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2011年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日
發(fā)明者林擁軍, 牛長(zhǎng)纓, 翟保平, 顧永征 申請(qǐng)人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)