專利名稱：一種基于酶促氨基水解反應的三聚氰胺比色檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及檢測領域，具體地涉及一種基于酶促氨基水解反應的三聚氰胺比色檢測方法。
背景技術：
三聚氰胺(Melamine)，結構如式I化合物所示，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物，化學式為C3H6N6，俗稱密胺、蛋白精。
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1-feN N' Nl-t三聚氰胺是一種重要的化工原料，用于制造塑料。但是它具有毒性，不允許用作食品添加劑。當三聚氰胺被長期反復攝入后，會造成嚴重的腎臟和膀胱的損傷，有時候這種損傷是致命的。但是由于三聚氰胺價格低廉，高氮含量，導致它被非法的加入到食品和飼料中來虛假的提高蛋白質含量，比如嬰兒奶粉，牛奶，以及其他食品中。隨著國家對食品安全問題的關注和近年來中國奶業(yè)的三聚氰胺丑聞發(fā)生，三聚氰胺問題成為影響乳和乳制品安全的重要因素之一。目前，國內發(fā)布了國家標準GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》，該標準包括了三種檢測方法高效液相色譜法、液相色譜-質譜/質譜法和氣相色譜-質譜聯(lián)用法。雖然這些國家標準所介紹的方法適用于對不同對象和樣品濃度的檢測，但測試時都需要昂貴的實驗室設備和專業(yè)技術人員對樣品進行繁瑣處理和分析，并且以上方法每臺儀器一次只能測量一個樣品，難以進行大量樣品的高通量檢測。因為價格和通量的問題，以上方法只能對有限的樣品進行比較精確的測量。此外，本領域尚缺乏高通量的、檢測低濃度或極低濃度三聚氰胺的、且操作簡便的檢測方法。因此，本領域迫切需要研發(fā)一種樣品處理、測試過程簡單易操作，測試結果分析簡易，且能滿足高通量測試需求的三聚氰胺的檢測方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是一種三聚氰胺的檢測方法，該方法具有樣品處理、測試過程簡單易操作，測試結果分析簡易且能滿足高通量測試需求的特點。本發(fā)明的另一目的是提供一種適合檢測低濃度或極低濃度三聚氰胺的、且操作簡便的檢測方法。本發(fā)明提供了一種定量檢測待測樣品中三聚氰胺的方法，包括步驟(I)將液態(tài)的含三聚氰胺的樣品上樣于陽離子柱，并用含氨水的醇溶液為洗脫液進行洗脫，得到含三聚氰胺的洗脫液；(2)去除含氨水的醇溶液，得到經濃縮的三聚氰胺；(3)將濃縮的三聚氰胺溶解在惰性溶劑中，在氨基水解酶的催化下反應，得到含式II化合物和氨的溶液；
權利要求
1.一種定量檢測待測樣品中三聚氰胺的方法，其特征在于，包括步驟 (1)將液態(tài)的含三聚氰胺的樣品上樣于陽離子柱，并用含氨水的醇溶液為洗脫液進行洗脫，得到含三聚氰胺的洗脫液； (2)去除含氨水的醇溶液，得到經濃縮的三聚氰胺； (3)將濃縮的三聚氰胺溶解在惰性溶劑中，在氨基水解酶的催化下反應，得到含式II化合物和氨的溶液；
2.如權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述反應時間為5-40min。
3.如權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(4)中，包括步驟將測定的氨摩爾濃度或摩爾數(shù)按I:I比例換算為酶解反應之前的三聚氰胺的摩爾濃度或摩爾數(shù)。
4.如權利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(4)中，通過比色法測得的吸光度與標準品或標準曲線比較，從而換算得到樣品中三聚氰胺的含量或濃度。
5.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述含氨水的醇溶液包括含氨水的甲醇溶液、含氨水的乙醇溶液、或其組合。
6.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述含氨水的醇溶液中氨水與醇的體積比例為I : 100-1 5，并且氨水的氨濃度為15wt%至飽和濃度。
7.如權利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，通過氮氣吹干或者烘干去除含氨水的醇溶液。
8.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(I)中液態(tài)的含三聚氰胺的樣品是經酸化處理的。
9.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述待測樣品為飲料、食物、飼料、土壤、水源、或其組合。
10.如權利要求I所述的方法，其特征在于，所述待測樣品中，三聚氰胺的濃度為O.001-100ppm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于酶促氨基水解反應的三聚氰胺比色檢測方法。具體地，本發(fā)明提供了一種定量檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括步驟樣品純化、酶解反應、顯色反應、和繪制標準曲線等。該方法測試過程簡單、快速、易操作，不需要復雜的專用設備及專業(yè)的技術人員，測試結果直觀清楚，可直接進行目測判斷，也可精確定量，重復性高，不易受雜質干擾，還可有效富集低含量樣品中的三聚氰胺，且符合高通量測試的條件，滿足了國內一般消費者對三聚氰胺簡便檢測的需求。
文檔編號G01N21/78GK102954959SQ201110251219
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月29日 優(yōu)先權日2011年8月29日
發(fā)明者周佳海, 黃維雪, 張志民 申請人:中國科學院上海有機化學研究所