專利名稱：苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種快速檢測(cè)微量鎮(zhèn)靜類藥物的器具，特別是涉及一種快速檢測(cè)微量苯巴比妥的試紙條。技術(shù)背景
現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)為人類提供了豐富的肉、禽、奶、蛋等營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高的各種食品，改善了人類的飲食結(jié)構(gòu)，提高了人類的物質(zhì)生活和健康水平，為延長(zhǎng)人類的壽命作出了貢獻(xiàn)。與此同時(shí)，現(xiàn)代科學(xué)研究證明，養(yǎng)殖業(yè)中大量使用飼料添加劑，以及防病治病需要，大量使用抗生素、激素及其它合成藥物，在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、降低動(dòng)物發(fā)病率與死亡率、提高飼料利用率的同時(shí)，也造成了動(dòng)物性食品中藥物殘留和激素殘留。另外由于科學(xué)知識(shí)的缺乏和經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，在養(yǎng)殖業(yè)中非法使用違禁藥物、濫用抗菌藥和飼料添加劑、不遵守休藥期、配伍禁忌等有關(guān)規(guī)定的現(xiàn)象普遍存在，在我國(guó)情況亦為嚴(yán)重。濫用藥物的直接后果是導(dǎo)致藥物在動(dòng)物性食品中的殘留增加，并通過食物鏈的傳遞進(jìn)入人體，對(duì)人類的生命健康構(gòu)成威脅和危害。如癌癥發(fā)病率增加，人類生育畸形比例增加，人體抗藥性增強(qiáng)，青少年性早熟和某些食物中毒等現(xiàn)象，往往與動(dòng)物性食品中藥物、激素殘留增加密切相關(guān)。苯巴比妥(Phenobarbital，簡(jiǎn)稱PB)又名魯米那，也叫迦地那，具有鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥、抗癲癇等藥效作用，臨床上主要用于治療焦慮、失眠、癲癇發(fā)作、運(yùn)動(dòng)障礙、高膽紅素血癥等疾病。PB具有很強(qiáng)的毒副作用，過量服用可抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，造成急性死亡；長(zhǎng)期服用可導(dǎo)致眩暈困倦、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、剝落性皮炎、肺功能不全、肝腎損害等副作用。另外還具有致畸作用，可引起胎兒腭裂和兔唇，影響智力發(fā)育。由于PB具有鎮(zhèn)靜、催眠等特殊的生物學(xué)功能，常被非法用于飼料添加劑，在肉豬飼料添加劑生產(chǎn)中應(yīng)用更為嚴(yán)重，其藥物殘留嚴(yán)重危害著人們的身體健康和生命安全。因此各國(guó)政府都嚴(yán)禁PB用作飼料添加劑。2002年我國(guó)農(nóng)業(yè)部、衛(wèi)生部、國(guó)家藥品監(jiān)督管理局根據(jù)《飼料和飼料添加劑管理?xiàng)l例》、《獸藥管理?xiàng)l例》、《藥品管理法》的規(guī)定，聯(lián)合發(fā)布公告，公布了《禁止在飼料和動(dòng)物飲用水中使用的藥物品種目錄》(農(nóng)業(yè)部公告第1 7 6號(hào))，苯巴比妥名列其中，要求對(duì)飼料生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)、使用和動(dòng)物飲用水中非法使用違禁藥物的違法行為嚴(yán)厲打擊。但目前尚未建立國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，PB用作飼料添加劑的現(xiàn)象仍然存在，PB殘留中毒事件時(shí)有發(fā)生，動(dòng)物性食品中PB殘留對(duì)人體的危害愈來愈引起人們的重視。目前用于精神類藥品的監(jiān)測(cè)方法主要是理化檢測(cè)法，包括高效液相色普法 (HPLC),氣-質(zhì)聯(lián)用法(GC/MS)，液-質(zhì)聯(lián)用法(LC/MS)等，這些方法檢測(cè)苯巴比妥靈敏度高，特異性強(qiáng)，但是樣品需經(jīng)一系列復(fù)雜的處理凈化，繁瑣費(fèi)時(shí)，從樣品預(yù)處理到得出檢測(cè)結(jié)果至少需要2天時(shí)間；同時(shí)這種檢測(cè)方法需要大型專門儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員操作，無法進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，時(shí)效性差，難以推廣。另外免疫學(xué)檢測(cè)方法主要是酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)，以競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)反應(yīng)為檢測(cè)原理，反應(yīng)顯色后用酶標(biāo)儀測(cè)OD值，OD值越低表示被檢樣品中苯巴比妥含量越高。檢測(cè)過程約2 4小時(shí)，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，降低了檢測(cè)費(fèi)用， 既可定性又可定量檢測(cè)，但是出現(xiàn)假陽性或假陰性的概率較大。由于ELISA是一種敏感性很強(qiáng)的檢測(cè)方法，不同的操作者往往會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果，所以該方法常常造成人為的誤檢和漏檢。目前苯巴比妥免疫學(xué)檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)尚屬空白，急待研究解決。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的研制出特異、靈敏、快速、簡(jiǎn)便的快速檢測(cè)微量苯巴比妥的試紙條。本發(fā)明的技術(shù)方案是
該試紙條底層為支撐層，中間層為吸附層，保護(hù)層固定在吸附層上，吸附層從測(cè)試端依次為測(cè)試端吸附纖維層、吸附金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，其中在纖維素膜層上有用偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液印制的直線式檢測(cè)印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG，或羊抗兔IgG抗體溶液印制的直線式對(duì)照印跡；
測(cè)試端吸附纖維層用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、或聚酯膜；金標(biāo)抗體纖維層用吸附苯巴比妥的金標(biāo)抗體玻璃纖維棉，苯巴比妥金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的苯巴比妥單克隆抗體或多克隆抗體，偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液為苯巴比妥與載體蛋白偶聯(lián)的復(fù)合物溶液；纖維素膜層用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜；
偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白為牛血清白蛋白(BSA)，或雞卵清白蛋白(0VA)，或?yàn)槌卓籽{(lán)蛋白(KLH)，在纖維素膜層上設(shè)有直線式檢測(cè)印跡和直線式對(duì)照印跡，兩印跡平行排列組合為“ I I ”；
在測(cè)試端吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護(hù)膜，在測(cè)試端纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測(cè)試端纖維層一側(cè)約0. 5cm處；
吸水材料層用吸水濾紙，支撐層即不吸水薄片層，用不吸水的韌性材料；不吸水的韌性材料用硬質(zhì)塑膠條，或不吸水的硬紙條?？焖贆z測(cè)微量苯巴比妥的試紙條具有以下優(yōu)點(diǎn)
⑴特異性強(qiáng)，靈敏度高。本發(fā)明試紙條以膠體金標(biāo)記高親和力的單克隆抗體為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無共價(jià)鍵形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金標(biāo)記對(duì)單克隆抗體的特異性及親和力影響很小，且具有較高的標(biāo)記率。因此，快速檢測(cè)試紙條具有較強(qiáng)的特異性和較高的靈敏度，可檢測(cè)到1 IOppb的微量苯巴比妥。本發(fā)明在保障食品安全，保護(hù)消費(fèi)者健康方面具有極其重要的意義。⑵簡(jiǎn)便、快速。使用本發(fā)明試紙條，無需其它任何試劑和儀器，可現(xiàn)場(chǎng)操作。只要將試紙條插入被檢樣品10 20秒鐘，5分鐘內(nèi)即可判定檢測(cè)結(jié)果。⑶結(jié)果顯示形象、直觀、準(zhǔn)確。本發(fā)明試紙條以顯示棕紅色“ I ”和“ I I ”印跡作為檢測(cè)結(jié)果陽性和陰性標(biāo)記，即在纖維素膜上顯示一條棕紅色“ I ”印跡為陽性，表示被檢樣品中含有苯巴比妥；顯示兩條棕紅色“ I I ”印跡為陰性，表示被檢樣品中不含苯巴比妥。結(jié)果判定形象、直觀、準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單明了，不易出現(xiàn)假陽性和假陰性等人為誤判。⑷節(jié)省費(fèi)用。使用快速檢測(cè)試紙條，無需另配儀器設(shè)備和其它試劑，隨時(shí)隨地進(jìn)行檢測(cè)，費(fèi)用低廉，節(jié)省大量貴重儀器及設(shè)備費(fèi)用。ω適用范圍廣，便于推廣應(yīng)用?？焖贆z測(cè)試紙條操作簡(jiǎn)便，能滿足不同層次人員需要，包括專業(yè)化驗(yàn)、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生檢疫、質(zhì)量監(jiān)測(cè)、畜產(chǎn)品加工、養(yǎng)殖戶以及消費(fèi)者個(gè)人等， 具有廣闊的市場(chǎng)前景和明顯的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。


圖1為苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條俯視結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施例方式
要制成快速檢測(cè)微量苯巴比妥試紙條，首先要制備偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白和苯巴比妥金標(biāo)抗體，從而制備檢測(cè)印跡和金標(biāo)抗體纖維。其次需制備羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔 IgG)抗體，用于制備對(duì)照印跡。( 1)苯巴比妥與載體蛋白偶聯(lián)
采用重氮化法或戊二醛法，將苯巴比妥與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián)制備人工結(jié)合抗原。第一步硝化反應(yīng)引入硝基，取lmmole PB，加入5mmole HN0jP5mmole 混酸溶液，55°C密閉條件下反應(yīng)lh，加入4倍ddw，5000rpm離心5min，取沉淀物干燥備用，產(chǎn)物為對(duì)硝基苯巴比妥(pNPB)；
第二步還原反應(yīng)引入氨基，取lmmole pNPB溶解于IOml lmol/L HCl中，加入Si粉 3mmole，65°C密閉條件下反應(yīng)40min，用ddw洗滌三次，5000rpm離心5min，沉淀物溶解于 IOml 二甲基甲酰胺(DMF)，再加入IOOml ddw，5000rpm離心lOmin，取沉淀物干燥備用，產(chǎn)物為對(duì)氨基苯巴比妥(PAPB)；
第三步重氮化反應(yīng)偶聯(lián)，取50mg pAPB溶于Iml lmol/L NaOH溶液中，加入IOOmg NaNO2,冰浴條件下用lmol/L HCl調(diào)pH為1，密閉，避光，4°C攪拌反應(yīng)他。然后加入預(yù)冷的 20mg BSA或OVA或KLH 0. 01mol/L的PBS溶液，4°C攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)液用葡聚糖凝膠 Sephadex G-25過柱純化，制得人工結(jié)合抗原BSA-pAPB或OVA-pAPB或KLH-pAPB，凍干，一 20°C保存?zhèn)溆谩?2)抗苯巴比妥單克隆抗體或多克隆抗體的制備
單抗制備以 IOOPg/只的苯巴比妥載體蛋白偶聯(lián)物免疫8周齡BALB/c小鼠 3 4次，每次免疫間隔時(shí)間3 5周，最后一次超強(qiáng)免疫后3 4天，將免疫小鼠眶下竇采血，分離陽性血清；拉頸致死，用75%酒精浸泡小鼠5 IOmin消毒體表，無菌取其脾臟，將脾臟剪碎并研磨，經(jīng)120目尼龍紗布過濾，IOOOrpm離心lOmin，收集脾細(xì)胞。將IX IO8的脾細(xì)胞與NSO骨髓瘤細(xì)胞按10:1的比例混合，IOOOrpm離心IOmin棄上清，細(xì)胞沉淀物于37°C 水浴中緩緩加入0. 7 1. Oml的50%PEG4000作用lmin，然后緩緩加入無血清1640培養(yǎng)基 15ml,以終止PEG的作用，37°C水浴5 10 min, IOOOrpm離心IOmin棄上清，將細(xì)胞沉淀物重懸于HAT選擇培養(yǎng)基中，并加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔(100μ1 200μ1/孔)，置于37°C 5%C02 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)10 14天，用間接ELISA法進(jìn)行陽性孔篩選，選擇強(qiáng)陽性、抑制率高、 細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛的孔進(jìn)行3次有限稀釋克隆化，而后擴(kuò)大培養(yǎng)，建立雜交瘤細(xì)胞株。所制備的雜交瘤細(xì)胞染色體數(shù)目為96 102條，平均98. 6條，其分泌的單克隆抗體可特異地與苯巴比妥反應(yīng)，親和力常數(shù)達(dá)到101° 1012，輕鏈亞型為κ或λ，重鏈亞型為IgG1UgG2aUgG2b, 針對(duì)苯巴比妥特異抗原決定簇的單克隆抗體，用于制備金標(biāo)抗體玻璃纖維棉。多抗制備用苯巴比妥載體蛋白偶聯(lián)物免疫新西蘭白兔，免疫劑量為200μβ 500μδ /次，背部皮下分4 6點(diǎn)注射。首免，用無菌PBS溶解苯巴比妥載體蛋白偶聯(lián)物，與等量FCA混合，充分乳化；加強(qiáng)免疫，用無菌PBS溶解苯巴比妥載體蛋白偶聯(lián)物，與等量FIA 混合，充分乳化，首免后2 3周進(jìn)行，連續(xù)免疫4 5次，每次間隔2 3周，最后一次免疫后10 15天，以ELISA法測(cè)其定效價(jià)達(dá)到IO5以上時(shí)，采血并分離收集高免血清。以飽和硫酸銨鹽析法提取IgG抗體，即取1份高免血清加2份PBS (ρΗ7. 2)混勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，再以適量PBS (pH7. 2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度33%，置4°C冰箱2h，4°C、2500rpm離心15min，棄上清，以適量PBS (pH7. 2)溶解沉淀，置4°C冰箱內(nèi)用PBS (pH7. 2)透析48 72h，中間換液數(shù)次，4°C、12000rpm離心15min，收集上清，得純化的抗苯巴比妥多克隆抗體，一 20°C凍存， 用于制備金標(biāo)抗體玻璃纖維棉。(3)苯巴比妥金標(biāo)抗體和金標(biāo)抗體玻璃纖維棉的制備
采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金溶液，即在沸騰的200ml 0. 01 0. 02%氯金酸溶液中加入新鮮配制的1 %檸檬酸鈉8ml，獲得直徑約15nm的膠體金溶液，用0. lmol/L K2CO3調(diào) pH值至8. 5 9. 5，置2 8°C保存?zhèn)溆谩Ｒ? :2000的標(biāo)記比將待標(biāo)記的苯巴比妥單克隆抗體或多克隆抗體加入PH8. 5 9. 5的金溶膠中，標(biāo)記IOmin后，加入20 %的PEG10000至終濃度為0. 05%,4°C>1500 3000rpm離心20min，除去未結(jié)合的膠體金顆粒，4°C、15000rpm 離心lh，棄上清，獲初步純化的金標(biāo)抗體蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S - 400柱層析進(jìn)行分離純化，獲得苯巴比妥膠體金標(biāo)記抗體。將1 :100 1 :500稀釋的膠體金標(biāo)記抗體吸附于精制玻璃纖維棉中，4°C低溫真空干燥，制備苯巴比妥金標(biāo)抗體玻璃纖維棉。(4)羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體的制備
以飽和硫酸銨提取苯巴比妥陰性小鼠血清IgG(或陰性兔血清IgG)，即取1份小鼠血清 (或兔血清)加2份PBS (pH7. 2)混勻，加等體積飽和硫酸銨溶液混勻，置4°C冰箱12h，4°C、 2500rpm離心15min，棄上清，再以適量PBS (pH7. 2)溶解沉淀，加飽和硫酸銨溶液至終濃度 33%，置41冰箱》1，41、2500印111離心15min，棄上清，以適量PBS(pH7. 2)溶解沉淀，置4°C 冰箱內(nèi)用PBS (ρΗ7· 2)透析48h，中間換液3次，4°C、12000rpm離心15min，收集上清，以紫外分光光度計(jì)測(cè)定其蛋白濃度，以 lOOPg/kg體重的小鼠血清(或兔血清)IgG經(jīng)皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3 4次，末次注射10天后，以ELISA測(cè)定其血清效價(jià)達(dá)到1 2000以上時(shí)，心臟或動(dòng)脈采血，分離收集高免血清，以飽和硫酸銨提取羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體(方法與提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，用于苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條對(duì)照印跡的制備。(5)苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)反應(yīng)原理
當(dāng)苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條測(cè)試端插入待測(cè)樣品溶液后，待測(cè)溶液通過虹吸作用帶動(dòng)待測(cè)苯巴比妥及金標(biāo)抗體玻璃纖維棉中的金標(biāo)抗體一起向硝酸纖維素膜擴(kuò)散，并最終滲入手柄端吸水濾紙。在擴(kuò)散過程中，待測(cè)苯巴比妥可與金標(biāo)抗體相結(jié)合，進(jìn)而封閉金標(biāo)抗體上苯巴比妥的抗原結(jié)合點(diǎn)，阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白的檢測(cè)印跡結(jié)合，不能顯示檢測(cè)印跡，而羊或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體則可與金標(biāo)抗體結(jié)合，形成棕紅色對(duì)照印
跡帶“ I ”，即一條棕紅色帶“ I ”印跡為陽性表示。反之樣品溶液中無苯巴比妥則不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白的檢測(cè)印跡結(jié)合，顯示棕紅色檢測(cè)印跡帶“ I ”，同樣羊抗或兔抗小鼠IgG (或羊抗兔IgG)抗體也與金標(biāo)抗體結(jié)合，顯示棕紅色對(duì)照印跡帶“ I ”，形成兩條棕紅色帶“ I I ”為陰性表示。如果纖維素膜上沒有棕紅色帶顯示， 則表明試紙條已失效。實(shí)施例一、參見圖1和圖2。圖中1為支撐層，用硬質(zhì)塑膠條制成，2為測(cè)試端吸附纖維層，用玻璃纖維棉制成，3為苯巴比妥金標(biāo)抗體纖維層，根據(jù)上述具體實(shí)施方式
(3)所述的制備方法，制備吸附有抗苯巴比妥單克隆抗體金標(biāo)抗體玻璃纖維棉，4為纖維素膜層，本實(shí)施例采用硝酸纖維素膜，5為手柄端的吸水材料層，用吸水濾紙制成，將編號(hào)2、3、4、5 各層從左至右粘貼固定在塑膠薄片條1上，彼此之間交界處纖維互相交叉滲透。在纖維素膜層4上，6為隱形檢測(cè)印跡帶，偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白溶液為牛血清白蛋白(BSA)，在纖維素膜上印跡制成檢測(cè)“ I ”，7為隱形對(duì)照印跡帶，用羊抗小鼠IgG抗體溶液在纖維素膜上印跡制成“ I ”，兩條印跡帶平行排列形成組合印跡帶“ I I”。8 — 1為覆蓋在纖維層2和金標(biāo)抗體纖維層3上面的樣品端白色保護(hù)膜，8 — 2為覆蓋在吸水材料層5上面的手柄端其它顏色保護(hù)膜(如黃色)，9為測(cè)試樣品標(biāo)記線，即在纖維層2與金標(biāo)抗體纖維層3交界處，對(duì)應(yīng)的白色保護(hù)膜偏向纖維層2 —側(cè)約0. 5cm處印制的標(biāo)記線，在標(biāo)記線右側(cè)保護(hù)膜上印有箭頭及max字樣。待測(cè)樣品溶液的制備及檢測(cè)操作步驟
檢測(cè)樣品制備檢測(cè)肉樣，可將樣品剪碎、磨細(xì)，以生理鹽水稀釋制成 1 :2 1 :10 待測(cè)樣品懸液；檢測(cè)奶樣，可直接用生理鹽水將奶樣稀釋制成1 :2 1 :5待測(cè)樣品
懸液；檢測(cè)血樣，則提取血清并用生理鹽水將其稀釋制成1 :2 1 :10待測(cè)樣品；檢測(cè)尿樣， 可直接取尿液作為待測(cè)樣品。操作方法將苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條樣品端插入待測(cè)樣品中，插入深度不超過標(biāo)記線，約10 20秒鐘取出檢測(cè)試紙條，水平放置，在5 10分鐘觀察判定檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果判定(a)陽性如果在纖維素膜上顯示有一條棕紅色印跡帶“ I ”，表示檢測(cè)結(jié)果為陽性，說明在待測(cè)樣品中含有苯巴比妥；(b)陰性如果在纖維素膜上顯示有兩條棕紅色印跡帶“I I”，表示檢測(cè)結(jié)果為陰性，說明在待測(cè)樣品中不含苯巴比妥；(C)失效如果在纖維素膜上沒有棕紅色帶顯示，則表明試紙條已失效。實(shí)施例二、苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于支撐層1用不吸水的硬紙條制成，測(cè)試端吸附纖維層2用尼龍膜，苯巴比妥金標(biāo)抗體纖維層3 吸附有抗苯巴比妥多克隆抗體，纖維素膜層4采用純纖維素膜，隱形對(duì)照印跡帶7用羊抗兔 IgG抗體溶液在纖維素膜上制備而成。其它包括檢測(cè)樣品制備、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不重述。實(shí)施例三、苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于測(cè)試端吸附纖維層2用聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，纖維素膜層4采用羧化纖維素膜，隱形檢測(cè)印跡帶6中偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白溶液為雞卵清白蛋白(OVA)，隱形對(duì)照印跡帶7用兔抗小鼠IgG抗體溶液在纖維素膜上制備而成。
其它包括檢測(cè)樣品制備、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不重述。實(shí)施例四、苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條結(jié)構(gòu)和實(shí)施例一基本相同，不同之處在于測(cè)試端吸附纖維層2用聚酯膜，隱形檢測(cè)印跡帶6中偶聯(lián)苯巴比妥載體蛋白溶液為為匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)。其它包括檢測(cè)樣品制備、操作方法和結(jié)果判定等均同實(shí)施例一，不重述。
權(quán)利要求
1.苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條，底層為支撐層，中間層為吸附層，保護(hù)層固定在吸附層上，其特征是吸附層從測(cè)試端依次為測(cè)試端吸附纖維層、吸附金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，其中在纖維素膜層上有用偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液印制的直線式檢測(cè)印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG，或羊抗兔IgG抗體溶液印制的直線式對(duì)照印跡。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是測(cè)試端吸附纖維層用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜、或聚酯膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是金標(biāo)抗體纖維層用吸附苯巴比妥的金標(biāo)抗體玻璃纖維棉，苯巴比妥金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的苯巴比妥單克隆抗體或多克隆抗體， 偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液為苯巴比妥與載體蛋白偶聯(lián)的復(fù)合物溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是纖維素膜層用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白為牛血清白蛋白(BSA)，或雞卵清白蛋白(0VA)，或?yàn)槌卓籽{(lán)蛋白(KLH)，在纖維素膜層上設(shè)有直線式檢測(cè)印跡和直線式對(duì)照印跡，兩印跡平行排列組合為“ I丨”。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是在測(cè)試端吸附纖維層、金標(biāo)抗體纖維層及吸水材料層上覆蓋有保護(hù)膜，在測(cè)試端纖維層與金標(biāo)抗體纖維層交界處對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線偏向測(cè)試端纖維層一側(cè)約0. 5cm處。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征是吸水材料層用吸水濾紙，支撐層即不吸水薄片層，用不吸水的韌性材料。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試紙條，其特征是不吸水的韌性材料用硬質(zhì)塑膠條，或不吸水的硬紙條。
全文摘要
苯巴比妥快速檢測(cè)試紙條，涉及一種快速檢測(cè)微量鎮(zhèn)靜類藥物的器具，特別是涉及一種快速檢測(cè)微量苯巴比妥的試紙條。它含有底層為支撐層，中間層為吸附層，保護(hù)層固定在吸附層上，吸附層從測(cè)試端依次為測(cè)試端吸附纖維層、吸附金標(biāo)抗體纖維層、纖維素膜層及手柄端的吸水材料層，其中在纖維素膜層上有用偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液印制的直線式檢測(cè)印跡，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗體溶液印制的直線式對(duì)照印跡。苯巴比妥金標(biāo)抗體為膠體金標(biāo)記的苯巴比妥單克隆抗體或多克隆抗體，偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白溶液為苯巴比妥與載體蛋白偶聯(lián)的復(fù)合物溶液。偶聯(lián)苯巴比妥的載體蛋白為牛血清白蛋白(BSA)，或雞卵清白蛋白(OVA)，或?yàn)槌卓籽{(lán)蛋白(KLH)。本發(fā)明的試紙條具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，簡(jiǎn)便，直觀，準(zhǔn)確，適用范圍廣，成本低，易于推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N33/577GK102353786SQ20111025750
公開日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月2日
發(fā)明者張海棠, 王自良, 石洪波 申請(qǐng)人:石洪波