專利名稱：用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑套組。
背景技術(shù)：
在亞洲及歐洲國(guó)家中，石斑魚(yú)是魚(yú)類中重要的品種，其可產(chǎn)生高經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而，因幼體會(huì)遭受病毒的傷害，使幼體的繁殖比例相當(dāng)?shù)?。有多種病毒會(huì)攻擊石斑魚(yú)，如神經(jīng)壞死病毒NNV (nervous necrosis virus)、虹彩病毒(irido virus)和感染性膜臟壞死病毒(infection pancreatic necrosis virus)。而神經(jīng)壞死病毒對(duì)于石斑魚(yú)幼體會(huì)造成傷害，并且導(dǎo)致死亡率高于90%以上。神經(jīng)壞死病毒NNV是一種核酸病毒，屬于野田病毒中的β -野田病毒(beranodavirus)的一種。神經(jīng)壞死病毒的大小約為25-30納米,其包含兩種核糖核酸(RNA) =RNAl及RNA2，其中RNAl可表現(xiàn)蛋白質(zhì)A，而RNA2可表現(xiàn)蛋白質(zhì)α，形成NNV的帽結(jié)構(gòu)。常見(jiàn)用于定量檢測(cè)NNV的步驟是包含從石斑魚(yú)組織中萃取出NNV的微顆粒，并進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄為DNA，最后利用實(shí)時(shí)定量聚合酶連鎖反應(yīng)，亦是實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)。雖然上述的方法在檢測(cè)NNV可表現(xiàn)出高靈敏度及專一性，但因在操作流程中需小心處理，所以僅可適用于在實(shí)驗(yàn)室中的熟練該技術(shù)的人員操作，此缺點(diǎn)嚴(yán)重地阻礙了檢測(cè)NNV方法的普及性，并且在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，NNV的大范圍檢驗(yàn)很難由實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)完成。近年來(lái)，有許多研究團(tuán)隊(duì)使用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)，如三明治免疫分析技術(shù)，而上述技術(shù)常因檢測(cè)時(shí)的操作復(fù)雜度，無(wú)法將該技術(shù)普遍地推廣。因此，具有容易操作的優(yōu)點(diǎn)、高信賴性、高靈敏度和專一性的替代技術(shù)是近年來(lái)逐漸發(fā)展的重點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑套組。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為一種用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，包括多個(gè)磁性納米粒子,分布于水溶液中，其中這些多個(gè)磁性納米粒子中的磁性納米粒子的構(gòu)造為磁性核、界面活性劑層，所述界面活性劑層披覆于所述磁性核上，以及多個(gè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒抗體，所述多個(gè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒抗體結(jié)合于所述界面活性劑層上。本發(fā)明所述的磁性納米粒子，其材料選自于四氧化三鐵(Fe3O4)、三氧化二鐵(Fe2O3)、鐵猛酸(MnFe2O4)、鐵酸鈷(CoFe2O4)及鐵酸鎳(NiFe2O4)所組成的群組。在較佳的實(shí)施例中,所述磁性納米粒子的磁性核的材料為四氧化三鐵(Fe3O4)。本發(fā)明所述的界面活性劑是指能使目標(biāo)溶液表面張力顯著下降的物質(zhì)，以及降低兩種液體之間表面張力的物質(zhì)，一般的界面活性劑為具有親水與疏水基團(tuán)的有機(jī)兩性物質(zhì)，可溶于有機(jī)溶液和水溶液。在本發(fā)明中，所使用的界面活性劑材料包含但不限于有機(jī)酸、蛋白質(zhì)Α、蛋白質(zhì)G、葡聚糖(Dextran)或微脂粒。優(yōu)選地，所述界面活性劑的材料為葡聚糖。本發(fā)明中，所述的水產(chǎn)動(dòng)物病毒包含神經(jīng)壞死病毒、虹彩病毒和感染性胰臟壞死病毒。優(yōu)選地，所述水產(chǎn)動(dòng)物病毒是神經(jīng)壞死病毒。此外，本發(fā)明所使用的水產(chǎn)動(dòng)物指石斑魚(yú)。本發(fā)明另提供一種檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的方法，包括提供本發(fā)明所述的檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的試劑，并萃取水產(chǎn)動(dòng)物內(nèi)的病毒，進(jìn)一步將試劑與萃取物混合，量測(cè)免疫磁減量訊號(hào)，并藉由下述邏輯函數(shù)定量該病毒的濃度。
imi%) - a^b + B, …、
I — Γ其中，A為噪音強(qiáng)度，B為飽和值參數(shù)，是神經(jīng)壞死病毒濃度，Φ。是隨著變化的參數(shù)，Y是密合參數(shù)。 本發(fā)明還提供一種萃取組織內(nèi)病毒的方法，其步驟為(I)取出水產(chǎn)動(dòng)物的腦組織；(2)在含有水產(chǎn)動(dòng)物腦組織的容器中加入萃取溶液；(3)將含有組織的容器放在冰上，并磨碎該組織；(4)取出容器中的上清液進(jìn)行檢測(cè)萃取效率。


圖1-1為從石斑魚(yú)幼體萃取神經(jīng)壞死病毒顆粒的流程圖。圖1-2為從石斑魚(yú)幼體萃取虹彩病毒顆粒的流程圖。圖2-1為神經(jīng)壞死病毒濃度與萃取效率之間的關(guān)系示意圖。圖2-2為虹彩病毒濃度與萃取效率之間的關(guān)系示意圖。圖3-1為表面接有神經(jīng)壞死病毒抗體(Anti-NNV)的磁性納米粒子與附有FITC的二級(jí)抗體的示意圖。圖3-2為表面接有虹彩病毒抗體(Anti-GIV)的磁性納米粒子與附有FITC的二級(jí)抗體的示意圖。圖4為圖3所示表面接有神經(jīng)壞死病毒抗體(Anti-NNV)的磁性納米粒子與附有FITC的二級(jí)抗體在熒光顯微鏡下觀察到受磁鐵吸引的一種移動(dòng)行為。圖5為圖3所示表面接有神經(jīng)壞死病毒抗體(Anti-NNV)的磁性納米粒子與附有FITC的二級(jí)抗體在熒光顯微鏡下觀察到受磁鐵吸引的另一種移動(dòng)行為。圖6-1為接有神經(jīng)壞死病毒抗體的磁性粒子的粒徑分布圖。圖6-2為接有虹彩病毒抗體的磁性粒子的粒徑分布圖。圖7為磁性試劑的交流磁化率的虛數(shù)部分(Imaginary Part)作為適用的磁場(chǎng)頻率函數(shù)圖。圖8為含有虹彩病毒抗體磁性試劑的穩(wěn)定度測(cè)試。圖9為免疫磁減量對(duì)神經(jīng)壞死病毒濃度訊號(hào)的影響關(guān)系圖。圖10為在實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)的測(cè)試方式中，神經(jīng)壞死病毒濃度與交叉點(diǎn)的關(guān)系曲線圖。圖11為免疫磁減量(MR)與實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)檢測(cè)神經(jīng)壞死病毒濃度的有效性的關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式為更好的說(shuō)明本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。實(shí)施例1-1萃取石斑魚(yú)幼體中的神經(jīng)壞死病毒所有神經(jīng)壞死病毒NNV幾乎存在于石斑魚(yú)的腦組織中，本發(fā)明實(shí)施例將取出的O. 5克腦組織放入微量離心管，并加入200 μ I的萃取液(MagQu Co. ,Ltd.)至微量離心管，為了保持組織的新鮮度，將微量離心管放置在冰上并將組織磨碎，磨碎后3分鐘，移開(kāi)在冰上的微量離心管5分鐘，取出在微量離心管中含組織的液體的上部溶液，做免疫磁減量檢測(cè)并量測(cè)NNV的濃度。

圖1-1是不同石斑魚(yú)腦組織的萃取過(guò)程的流程圖，其中圖1-1 (a)直接從石斑魚(yú)腦組織萃取神經(jīng)壞死病毒的RNA,所萃取的RNA被轉(zhuǎn)錄為DNA,并藉由實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)檢測(cè)DNA的濃度，即為小亂 。根據(jù)萃取的結(jié)構(gòu)，選擇700TCID5Q/ml至4X 107TCID5(l/ml的神經(jīng)壞死病毒濃度作為檢測(cè)萃取NNV的濃度范圍。所述的TCID5tl是指半數(shù)組織培養(yǎng)感染量。圖1-1 (b)為萃取腦組織的神經(jīng)壞死病毒顆粒，經(jīng)由上述萃取流程，在上部溶液中含NNV顆粒通過(guò)實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)檢測(cè)并表示為(tfflV,part。經(jīng)上述方式所萃取的NNV濃度，可經(jīng)由ΦΝΝν,_/ΦΝΝν,κΜ的比例獲得萃取效率值。如附圖2-1所示，700TCID50/ml至4X107TCID50/ml的神經(jīng)壞死病毒濃度中，本發(fā)明萃取神經(jīng)壞死病毒的效率超過(guò)80%。實(shí)施例1-2萃取石斑魚(yú)幼體中的虹彩病毒(GIV)本發(fā)明另一具體實(shí)施例系萃取石斑魚(yú)幼體中的虹彩病毒(Irido Virus ；GIV)。將取出的O. I克前腎組織放入微量離心管，并加入200 μ I的萃取液(MagQuCo. ,Ltd.)至微量離心管，為了保持組織的新鮮度，將微量離心管放置在冰上并將組織磨碎，磨碎后3分鐘，移開(kāi)在冰上的微量離心管5分鐘，取出在微量離心管中含組織的液體的上部溶液，做免疫磁減量檢測(cè)并量測(cè)GIV的濃度。圖1-2是不同石斑魚(yú)組織的萃取過(guò)程的流程圖，其中圖l_2(a)直接從石斑魚(yú)前腎組織萃取虹彩病毒的RNA,所萃取的RNA被轉(zhuǎn)錄為DNA,并藉由實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)檢測(cè)DNA的濃度，即為Φ , 。根據(jù)萃取的結(jié)構(gòu)，選擇700TCID5Q/ml至4X107TCID5Q/ml的虹彩病毒濃度作為檢測(cè)萃取GIV的濃度范圍。所述的TCID5tl是指半數(shù)組織培養(yǎng)感染量。圖l-2(b)為萃取前腎組織的虹彩病毒顆粒，在上部溶液中含GIV顆粒通過(guò)實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)檢測(cè)并表示為cKIV,part。經(jīng)上述方式所萃取的GIV濃度，可經(jīng)由ΦΗν,_/ΦΗν,km的比例獲得萃取效率值。如附圖2-2所示，700TCID5Q/ml至4X 107TCID5(l/ml的虹彩病毒中，本發(fā)明萃取虹彩病毒的效率超過(guò)80 %。實(shí)施例2試劑合成2-1合成具有神經(jīng)壞死病毒抗體之納米磁性粒子混合化學(xué)計(jì)量比率為I : 2的硫酸亞鐵七水(FeSO4 · 7H20)與氯化鐵六水(FeCl3 · 6H20)的鐵溶液與等量的水性葡聚糖混合，其作為四氧化三鐵粒子的界面活性劑并分散在水中。該混合物加熱至70-90°C，并以強(qiáng)堿溶液滴定形成黑色的四氧化三鐵粒子，團(tuán)聚體和多余的葡聚糖則以離心的方式移除，并以凝膠過(guò)濾層析方式獲得高濃度均相的磁流體。該試劑可通過(guò)pH為7. 4的磷酸鹽緩沖液稀釋高濃度磁流體而獲得適合的磁性濃度。

為了使抗體結(jié)合至磁性納米粒子外層的葡聚糖上，以神經(jīng)壞死病毒抗體為例，神經(jīng)壞死病毒抗體加入過(guò)碘酸鈉NaIO4溶液至磁性溶液中，使葡聚糖氧化并得到醛基(-CH0)，之后，葡聚糖可通過(guò)-CH = N-的鏈接與神經(jīng)壞死病毒抗體反應(yīng)。因此，神經(jīng)壞死病毒抗體共價(jià)連接到葡聚糖上。通過(guò)磁性分離，未接合的神經(jīng)壞死病毒抗體可從溶液中分離。為確定磁性納米粒子表面接合上神經(jīng)壞死病毒抗體，如附圖3-1所示，本實(shí)施例使用一端藉由FITC(異硫氰酸熒光素)熒光的二級(jí)抗體與神經(jīng)壞死病毒試劑混合。實(shí)驗(yàn)中，加入過(guò)量的FITC 二級(jí)抗體與披覆有神經(jīng)壞死病毒抗體的磁性粒子混合。充分混合后，再藉由磁性分離技術(shù)，將混合液中的磁性粒子分離出，而未與磁性粒子表面的神經(jīng)壞死病毒抗體接合的FITC 二級(jí)抗體，因不具有磁性，則會(huì)留在原混合液中。因此，本實(shí)施例將混合液放在熒光顯微鏡下觀察，首先會(huì)看到綠色(灰色)亮點(diǎn)，如圖4中箭頭所指之處。此亮點(diǎn)是FITC所發(fā)出的光亮。為了再次確認(rèn)二級(jí)抗體鍵結(jié)至磁性納米粒子上，在混合液旁擺上磁鐵。此時(shí)溶液中的磁性粒子會(huì)受到磁鐵的吸弓I而移動(dòng)，通過(guò)磁性納米粒子的移動(dòng)，若附有FITC的二級(jí)抗體與披覆有神經(jīng)壞死病毒抗體的磁性粒子結(jié)合，則亮點(diǎn)也會(huì)移動(dòng)。本實(shí)施例中，將磁鐵放于圖4的右下方，而圖5的亮點(diǎn)應(yīng)朝向右下方移動(dòng)。此預(yù)測(cè)在圖5中被觀察到，這證實(shí)磁性粒子上，確實(shí)已接上神經(jīng)壞死病毒抗體(Anti-NNV)。藉由動(dòng)態(tài)激光散射法(dynamic laser scattering)分析具有神經(jīng)壞死病毒抗體的磁性納米粒子的粒徑分布,而測(cè)量神經(jīng)壞死病毒試劑的磁濃度為O. lemu/g(l. 2mg-Fe/ml)。如圖6-1所示，粒子的平均流體動(dòng)力粒徑為55nm，此粒徑是根據(jù)布朗式磁松弛，時(shí)間常數(shù)4在55·!的粒子分散在20-25°C的水中，通過(guò)方程式(1)，估計(jì)為65. 79μ S，其中η是在20-25°C中水的黏度，V是粒子平均流體動(dòng)力體積，Kb是Boltzmann常數(shù)，T是蘭氏溫度單位。經(jīng)由上述的估計(jì)，此意味著在交流磁場(chǎng)下的頻率為I/τΒ(= 15.2kHz)。實(shí)際上，分散于水中的粒子的虛部交流磁化率相當(dāng)于粒子的交流磁性能量的吸附作用。因此在共鳴頻率可達(dá)到最大吸附作用，并使交流磁化率的虛部達(dá)到最大值。因此本實(shí)施例藉由磁導(dǎo)率計(jì)測(cè)量神經(jīng)壞死病毒試劑的交流磁化率的頻率相關(guān)虛部。如圖7的實(shí)驗(yàn)頻率范圍中，顯示標(biāo)準(zhǔn)化交流磁化率的最大值虛部，且顯著表現(xiàn)出隨著適合的交流磁場(chǎng)頻率增加，神經(jīng)壞死病毒試劑的虛部(Imaginary part) Im[ x ac]NOT也隨之增加，并且達(dá)到最大值約15kHz,此實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合公式(I)的推論。τΒ = 3 nV/KBT.................公式(I)2-2合成具有虹彩病毒抗體之納米磁性粒子本發(fā)明另一實(shí)施例系利用上述合成磁性納米粒子的方式將虹彩病毒抗體加入過(guò)碘酸鈉NaIO4溶液至磁性溶液中，使葡聚糖氧化并得到醛基(-CH0)，之后，葡聚糖可通過(guò)-CH = N-的鏈接與虹彩病毒抗體反應(yīng)。因此，虹彩病毒抗體共價(jià)連接到葡聚糖上。通過(guò)磁性分離，未接合的虹彩病毒抗體可從溶液中分離。為確定磁性納米粒子表面接合上虹彩病毒抗體，如附圖3-2所示，本實(shí)施例使用一端藉由FITC(異硫氰酸熒光素)熒光的二級(jí)抗體與虹彩病毒試劑混合。實(shí)驗(yàn)中，加入過(guò)量的FITC 二級(jí)抗體與披覆有虹彩病毒抗體的磁性粒子混合。充分混合后，再藉由磁性分離技術(shù)，將混合液中的磁性粒子分離出，而未與磁性粒子表面的虹彩病毒抗體接合的FITC 二級(jí)抗體，因不具有磁性，則會(huì)留在原混合液中。如上述，虹彩病毒抗體與磁性納米粒子外層的葡聚糖共價(jià)連接后，并藉由上述動(dòng)態(tài)激光散射法(dynamic laser scattering)分析具有虹彩病毒抗體的磁性納米粒子的粒徑分布，測(cè)量虹彩病毒試劑的磁濃度為O. lemu/g(l. 2mg-Fe/ml)。如圖6_2所示，粒子的平均流體動(dòng)力粒徑為52. 6nm。另，本發(fā)明為確定所合成的試劑的保存時(shí)間，因此將該試劑存放在4°C，其穩(wěn)定度至少可達(dá)到13周，如附圖8。實(shí)施例3神經(jīng)壞死病毒濃度與免疫磁減量訊號(hào)建立本實(shí)施例將40 μ I與60 μ I的樣品溶液混合在玻璃管中，使用磁性免疫分析儀(XacPro-E, MagQu)量測(cè)未結(jié)合成神經(jīng)壞死病毒-神經(jīng)壞死病毒抗體-葡聚糖-納米磁性粒子前的X aCj0交流信號(hào)，之后，該混合物維持在室溫下以形成神經(jīng)壞死病毒-神經(jīng)壞死病毒抗體-葡聚糖-納米磁性粒子，量測(cè)并紀(jì)錄其交流信號(hào)X a。, 4，通過(guò)量測(cè)出的X ac,0及X ac, φ，可用下列的公式(2)計(jì)算出IMR訊號(hào)IMR(%) = (xac,0-xac,Φ)/χ3ε,οΧ100%.......公式(2)對(duì)每一個(gè)給定濃度的樣品溶液，其時(shí)間依賴的X ac交流信號(hào)皆檢測(cè)三重復(fù)。圖9顯示神經(jīng)壞死病毒濃度ΦΝΝν與MR訊號(hào)的關(guān)系曲線，當(dāng)神經(jīng)壞死病毒濃度ΦΝΝν從5TCID5(i/ml改變至107TCID50/ml, IMR訊號(hào)則從O. 84%增加至3. 04% .上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)，可由下列邏輯函數(shù)(3)推算MR(% )與神經(jīng)壞死病毒濃度
4* NNV 系。
=,十 i 、 ..........公式⑶
I — I-1
Φ.其中，Α、Β、Φ。及Y是該函數(shù)的參數(shù)。將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)套入邏輯函數(shù)中，可得到A =O. 64、B = 3. 47、小。=26684及Y = O. 31，并以實(shí)線繪于圖8。在邏輯函數(shù)(3)中，當(dāng)小麗趨近于O時(shí)，IMR訊號(hào)趨近于A值，此結(jié)果表示A值是NNV濃度依賴MR訊號(hào)的噪音強(qiáng)度。此外當(dāng)高于Φ。時(shí)，訊號(hào)趨近于B值，此顯示當(dāng)神經(jīng)壞死病毒為高濃度時(shí)，對(duì)于MR訊號(hào)，B值為高端值(high-end value)。依據(jù)上述，將濃度定義為檢測(cè)樣品的標(biāo)準(zhǔn)，在低濃度的神經(jīng)壞死病毒中，藉由MR訊號(hào)的三重復(fù)標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)，顯示出MR訊號(hào)高于噪音強(qiáng)度A值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示出，當(dāng)神經(jīng)壞死病毒為低濃度時(shí)，MR訊號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差為O. 021 %。因此，通過(guò)邏輯函數(shù)(3)，當(dāng)IMR訊號(hào)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)為O. 903%時(shí)，此時(shí)神經(jīng)壞死病毒濃度為17. 2TCID50/mL·實(shí)施例4使用實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)檢測(cè)神經(jīng)壞死病毒濃度取出100納克的RNA定量具有神經(jīng)壞死病毒的RNA濃度，其是使用核酸復(fù)制同步定量序列檢測(cè)系統(tǒng)(ABI Prism 7000 sequence detector, Applied Biosystems)檢測(cè)。執(zhí)行實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)的放大作用是使用High Capacity cDNA Archive kit (AppliedBiosystems)和其專一11"生引物,如序列表SEQ ID NO. I。在實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)的過(guò)程中，藉由Power SYBR Green PCR MasterMix試劑以熒光實(shí)時(shí)檢測(cè)核酸量，并且利用神經(jīng)壞死病毒的正義和反義引物，如序列表SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3進(jìn)行行實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)。其反應(yīng)條件，以95°C反應(yīng)3秒將DNA模板雙鏈打開(kāi)，再以60°C反應(yīng)30秒進(jìn)行引物的黏合及延伸作用，進(jìn)行45個(gè)循環(huán)反應(yīng),最后藉由SDS軟件(版本1.7 !Applied Biosystems)分析實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)訊號(hào)。本實(shí)施例準(zhǔn)備濃度為IO2至108TCID5(l/ml的多種神經(jīng)壞死病毒樣品，并使用實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)方式檢測(cè)，以熒光強(qiáng)度與放大循環(huán)作用的實(shí)驗(yàn)關(guān)聯(lián)性測(cè)定每一個(gè)神經(jīng)壞死病毒濃度樣品的交叉點(diǎn)(crossing point)，如圖10顯示神經(jīng)壞死病毒濃度對(duì)于交叉點(diǎn)的曲線圖，并得到CP = -1.481μΦ_+39.4的線性方程式，并且做為計(jì)算神經(jīng)壞死病毒濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)施例5免疫磁減量與實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)分析方式的比較為了確認(rèn)IMR檢測(cè)神經(jīng)壞死病毒濃度的分析方式能取代實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)，本實(shí)施例利用IMR與實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)同時(shí)測(cè)試15個(gè)樣品，對(duì)于每個(gè)樣品，有兩個(gè)神經(jīng)壞死病毒濃度的數(shù)值，一是使用IMR偵測(cè)的數(shù)值為，另一使用實(shí)時(shí)聚合酶連鎖反應(yīng)偵測(cè)的數(shù)值為Φ_\ ,ΡΟ 。圖11顯不出Φ_\ ,ΙΜΕ與Φ_, POi之間的聞度相關(guān)性，其相關(guān)系數(shù)為·O. 99，因此證實(shí)利用MR偵測(cè)神經(jīng)壞死病毒濃度是具有可信度。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行修改或等同替換，這些修改或等同替換也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于，包含 溶液；及 多個(gè)磁性納米粒子，所述多個(gè)磁性納米粒子分布于所述溶液中，所述多個(gè)磁性納米粒子中的各磁性納米粒子包含 磁性核； 界面活性劑層，所述界面活性劑層披覆于所述磁性核上 '及 多個(gè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒抗體，所述多個(gè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒抗體結(jié)合于所述界面活性劑層上。
2.如權(quán)利要求I所述的用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述溶液包含水。
3.如權(quán)利要求I所述的用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述磁性納米粒子的材料選自由四氧化三鐵、三氧化二鐵、鐵酸錳、鐵酸鈷及鐵酸鎳所組成的群組。
4.如權(quán)利要求I所述的用于檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述磁性納米粒子的磁性核材料為四氧化三鐵。
5.如權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述界面活性劑層的界面活性劑包含有機(jī)酸、蛋白質(zhì)A、蛋白質(zhì)G、葡聚糖或微脂粒。
6.如權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述界面活性劑層的界面活性劑為葡聚糖。
7.如權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于所述水產(chǎn)動(dòng)物病毒包含神經(jīng)壞死病毒、虹彩病毒和感染性胰臟壞死病毒。
8.如權(quán)利要求I所述的水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，其特征在于，所述水產(chǎn)動(dòng)物病毒為神經(jīng)壞死病毒。
全文摘要
本發(fā)明提供一種檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病毒的檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑可透過(guò)磁性免疫分析儀檢測(cè)帶有水產(chǎn)動(dòng)物病毒抗體的磁性納米粒子的免疫磁減量(Immunomagnetic Reduction，IMR)訊號(hào)，并通過(guò)邏輯函數(shù)計(jì)算出水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的病毒濃度，進(jìn)一步確認(rèn)水產(chǎn)動(dòng)物感染病毒。
文檔編號(hào)G01N33/569GK102879564SQ20111025798
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2011年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月14日
發(fā)明者楊謝樂(lè) 申請(qǐng)人:磁量生技股份有限公司