專利名稱：用于檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于體外臨床診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體的涉及一種用于檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，可用于檢測血漿、血清中的轉(zhuǎn)氨酶。
背景技術(shù)：
丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase, ALT)又稱為谷丙轉(zhuǎn)氨酶，主要存在于肝細胞血漿內(nèi)，細胞內(nèi)濃度高于血清濃度1000-3000倍，只要有1%肝組織發(fā)生破壞， 就可以使血清中濃度升高一倍，被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標。檢測血液中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶對急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV攜帶者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的診斷和分析有重要意義。目前丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶普遍采用各種生化分析儀器檢測，這些儀器都需要使用各種液體試劑，這對某些使用場合帶來不便。一是液體試劑保持時間不能過長已經(jīng)大量試劑可能造成浪費；二是液體試劑不便于運輸。臨床急診生化指標所使用的干化學產(chǎn)品基本上是國外公司的產(chǎn)品，大概有三種類型的產(chǎn)品。第一類是以強生公司為代表的多層膜干片的干化學技術(shù)，利用感光膠片的涂層技術(shù)將擴散層、反射層、試劑層等試劑涂在透明支撐層上，從支撐層的反面測定光密度的變化。第二類是日本京都公司的干化學技術(shù)，其組成為一塑料支撐層，一端為反應(yīng)區(qū)包括樣品層和試劑層，試劑層為某種織物作為試劑載體。加樣和測試同時在上部進行。第三類為羅氏公司的干化學產(chǎn)品，將試劑層涂在多絲的纖維或者織物上，全血通過玻璃纖維橫向過濾后與上試劑層接觸反應(yīng)，通過上部覆蓋一透明的支撐層上涂有試劑層和反射層，最上部覆蓋一層合成纖維網(wǎng)布作為加樣層。以強生公司為代表的多層膜干片生產(chǎn)工藝復雜，對材料設(shè)備要求高；以日本京都公司為代表的干片有某些缺陷，如在加樣端容易產(chǎn)生一定的氣泡、 過量液體等，加樣和測定在同一測樣品可能造成干擾。國內(nèi)有公司申請了干化學專利，上?？迫A生物工程公司申請的專利 200720072185. 2和200710044719. 5，無錫申瑞生物制品有限公司的專利200610161430. 7， 其中描述了丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的測定的干化學試紙條，在這些專利中應(yīng)用的方法是將配好的檢測液直接浸泡在濾紙或者纖維膜上，然后粘合在塑料基材上進行測試，這種方法是將濾紙或者纖維素膜在檢測試劑中浸泡，吸附于濾紙或者纖維素膜中的試劑的量無法確定， 重復性不能充分保證，缺乏準確性和精密性；此外，該法采用色原顯色在610nm-650nm檢測，而檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的國際標準采用速率法，在340nm處監(jiān)測NADH的氧化速率，反應(yīng)原理如下所示。
權(quán)利要求
1.用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，包括一下支撐層(5)，所述下支撐層(5)的一端開設(shè)有測試孔(6)，其特征在于還包一多層膜，所述多層膜包括依次由下往上迭合的透光層(1)、試劑層(2)、輔助層(3)和擴散層(4)，所述多層膜的透光層(1)的一面粘合固定于所述下支撐層(5)的測試孔(6)處。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述擴散層(4)之上設(shè)置一上支撐層(7)，所述上支撐層(7)上開設(shè)有一加樣孔(8)， 所述加樣孔(8)位于所述上支撐層(7)與所述擴散層(4)結(jié)合的位置。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述上支撐層(7)與所述下支撐層(5)之間的孔隙處設(shè)置有一中間支撐層(9)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述透光層(1)為在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度為 20-300 μm0
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述試劑層(2)內(nèi)包含水溶性高分子材料及緩沖液、乳酸脫氫酶和NADH。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述擴散層(4)是一層均勻的各向均性的多孔膜，由聚合物粘合劑及白色反光材料構(gòu)成，濕膜厚度為100-300 μ m。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，其特征在于所述擴散層(4)中包含有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的底物，L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述擴散層(4)的干膜厚度為100-200 μ m。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的用于生化分析的多層膜干片，其特征在于所述的輔助層(3)由親水性高分子材料制備而成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干化學試劑片，包括一下支撐層，所述下支撐層的一端開設(shè)有測試孔，其還包一多層膜，所述多層膜包括依次由下往上迭合的透光層、試劑層、輔助層和擴散層，所述多層膜的透光層的一面粘合固定于所述下支撐層的測試孔處。本發(fā)明的用于檢查丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的多層膜干片能夠快速準確的檢測血清、血漿中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，同時還能提高干片的保存時間。
文檔編號G01N33/52GK102323399SQ20111027387
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者唐玉國, 孫海旋, 王弼陡, 王心醉, 白鵬利, 程文播 申請人:蘇州生物醫(yī)學工程技術(shù)研究所