專利名稱：一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體積排阻檢測領(lǐng)域，更具體地，涉及一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
美洛西林鈉是一種半合成青霉素類抗生素，對大腸桿菌、腸桿菌屬、變形桿菌等革蘭陽性菌有較強(qiáng)的抗菌作用。美洛西林是一種經(jīng)腸道外給藥的酰脲青霉素衍生物，大劑量時(shí)有殺菌作用。美洛西林鈉的抗菌譜基本上與氨芐青霉素和羧芐青霉素的抗菌譜相同。但在美洛西林鈉中還有一些高分子過敏性雜質(zhì)。因此，在該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中需要控制高分子雜質(zhì)的總量。目前，2010版《中國藥典》對于美洛西林鈉中的聚合物雜質(zhì)的檢測采用中低壓液相色譜檢測法，并采用Sephadex G_10為固定相。采用傳統(tǒng)的玻璃凝膠色譜柱(SephadexG-10)分離美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)時(shí)，柱效比較低，一般的柱效僅為40(Γ1000 ;同時(shí)，該類色譜柱在實(shí)際使用過程中操作繁瑣、分離時(shí)間長、分離度差，給雜質(zhì)的準(zhǔn)確定性及定量測試帶來諸多不便。因此，有必要提供一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，其能夠?qū)γ缆逦髁肘c中的聚合物雜質(zhì)作出快速定性定量檢測。為實(shí)現(xiàn)上述目的， 本發(fā)明提供了一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，所述檢測方法采用高效液相色譜體積排阻色譜法，其包括
將美洛西林鈉樣品溶解得到樣品溶液；以及
采用以球狀蛋白用親水硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為
O.5-2. OmL/min，柱溫為20_35°C，采用紫外檢測器對樣品溶液進(jìn)行液相色譜檢測。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述紫外檢測器的檢測波長范圍為230nm-254nm。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述紫外檢測器的檢測波長為254nm。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述色譜柱固定相的粒度為5微米，孔徑為100 A，所述色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm，柱內(nèi)長度為300mm。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述緩沖溶液的pH值范圍為7. (Γ8. O。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述檢測方法還包括將美洛西林鈉樣品溶解于水中，對所述樣品溶液以孔徑為O. 45um或O. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述球狀蛋白用親水硅膠的分子量使用范圍為1000-10000。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)完全分離的時(shí)間小于或等于11分鐘。
作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述檢測方法的分離度大于或等于4. 5，拖尾因子小于或等于1.5。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，其操作簡單，分離時(shí)間縮短，分離度高，能快速對美洛西林鈉中的聚合物雜質(zhì)準(zhǔn)確快速定性定量分析。


附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，與本發(fā)明的各實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中
圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)的色譜 圖2為圖1所示的色譜圖中的檢測數(shù)據(jù) 圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)的色譜 圖4為圖3所示的色譜圖中的檢測數(shù)據(jù) 圖5為本發(fā)明實(shí)施例3中美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)的色譜 圖6為圖5所示的色譜圖中的檢測數(shù)據(jù) 圖7為本發(fā)明實(shí)施例4中美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)的色譜 圖8為圖7所示的色譜圖中的檢測數(shù)據(jù) 圖9為本發(fā)明與現(xiàn)行2010版《中國藥典》檢測方法的對比結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，與本發(fā)明的各實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。發(fā)明首先介紹了術(shù)語定義和說明，然后介紹了一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的高效液相體積排阻檢測方法的相關(guān)實(shí)施例。1.說明書和權(quán)利要求中所用術(shù)語的定義和說明
在詳細(xì)介紹下述實(shí)施例詳情前，先定義或闡述一些術(shù)語。術(shù)語“柱效”是指用于定量表示色譜柱的分離效率，其用“理論塔板數(shù)”來衡量。術(shù)語“Plates”是指理論塔板數(shù),理論塔板數(shù)(theoretical plate number),N色譜的柱效參數(shù)之一，用于定量表示色譜柱的分離效率(簡稱柱效)。N取決于固定相的種類、性質(zhì)(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動(dòng)相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。N值越大，說明色譜柱的性能越好，所用的流動(dòng)相越適合該樣品的檢測。微孔濾膜依用途不同分為水相膜和有機(jī)相膜，主要作用是除去樣品中的不溶性雜質(zhì)，防止雜質(zhì)顆粒堵塞儀器管路。進(jìn)樣濃度和進(jìn)樣量反應(yīng)了所使用色譜柱和方法的靈敏度，進(jìn)樣濃度和進(jìn)樣量越低說明色譜柱和使用方法的靈敏度越高。術(shù)語“分離度”是指相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R越大，表明相鄰兩組分分離越好。一般說當(dāng)R< I時(shí)，兩峰有部分重疊；當(dāng)R=1. O時(shí)，分離度可達(dá)98%;當(dāng)R=L 5時(shí)，分離度可達(dá)99. 7%。通常用R=L 5作為相鄰兩組分已完全分離的標(biāo)志。2010版《中國藥典》將分離度達(dá)到1. 5的分離情況稱為基線分離，1.5稱為完全分離。
術(shù)語“高效液相色譜法”是指以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。術(shù)語“RT”是指保留時(shí)間，它是指被分離樣品組分從進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)該組分濃度極大值的時(shí)間，也既從進(jìn)樣開化寺到出現(xiàn)某組分色譜峰的定點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間，稱為此組分的保留時(shí)間，用RT表示，常以分鐘(min)為時(shí)間單位。術(shù)語“Tailing”是指拖尾因子，拖尾因子是通過計(jì)算5%峰高處峰寬與峰頂點(diǎn)至前沿的距離比來評價(jià)峰形的參數(shù)，目的是為了保證色譜分離效果和測量精度，常用T來表示。T越接近1，說明峰的對稱性越好。實(shí)施例說明中，符號(hào)g=克，mL=毫升，mol=摩爾，°C =攝氏度，mmol=毫摩爾，um=微米(I米=1 X IO6微米),nm=納米(I米=1 X IO9納米),A=埃(I米=1 X IO10A), uL=微升(I升=IX IO6微升)。本發(fā)明提供了一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，其包括將美洛西林鈉樣品溶解得到樣品溶液；所述樣品溶液的濃度為5-10mg/mL，對所述樣品溶液以孔徑為O. 45um或O. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾。以及采用以球狀蛋白用親水硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，所述緩沖溶液的PH值范圍為7. (Γ8. 0，流動(dòng)相流速為O. 5-2. OmL/min,柱溫為20-35°C，采用紫外檢測器對樣品溶液進(jìn)行液相色譜檢測。其中，所述紫外檢測器的檢測波長范圍為230nm-254nm。其中，所述色譜柱固定相的粒度為5微米，孔徑為100 A，所述色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm,柱內(nèi)長度為300mm。 根據(jù)上述檢測方法能對美洛西林鈉中的聚合物雜質(zhì)進(jìn)行快速定性檢測。以下以多個(gè)實(shí)施例對本發(fā)明的測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法進(jìn)行說明。

實(shí)施例1
首先稱取美洛西林鈉樣品適量，用水完全溶解，制得濃度為10mg/L的待檢測樣品溶液。對該樣品溶液以孔徑為O. 45um的微孔濾膜進(jìn)行過濾并備用。采用SEPAX公司型號(hào)為SRT-C的體積排阻色譜填充劑填充的液相色譜柱，該填充劑的粒度為5微米，孔徑為100 A0該色譜柱的直徑為7. 8mm，長度為300mm。采用的色譜條件為以50mmol的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，pH值為8. O ;流速
O.5mL/min ;紫外檢測器的檢測波長為254nm ;進(jìn)樣量為20uL ;進(jìn)樣濃度為10mg/mL ;柱溫為
20。。。按照上述色譜條件，進(jìn)行高效液相色譜檢測，檢測結(jié)果如圖1與圖2所示。結(jié)合圖1和圖2，我們發(fā)現(xiàn)美洛西林鈉中含有三種雜質(zhì)，其在8. 493分鐘、8. 702分鐘與8. 911分鐘的峰值濃度達(dá)到最大。同時(shí)美洛西林鈉在10. 225分鐘時(shí)候的峰值濃度達(dá)到最大，且在11分鐘的時(shí)候，美洛西林鈉的濃度趨向零。這說明此時(shí)目標(biāo)成分美洛西林鈉已被完全分離出來。該檢測結(jié)果顯示該美洛西林鈉樣品中聚合物雜質(zhì)的總量為3.61% (按面積百分比計(jì)算)，雜質(zhì)與主峰的分離度為6. 03，按美洛西林鈉計(jì)算理論塔板數(shù)為20239，美洛西林鈉的拖尾因子為1. 00。實(shí)施例2
首先稱取美洛西林鈉樣品適量，用水完全溶解，制得濃度為10mg/L的待檢測樣品溶液。對該樣品溶液以孔徑為O. 45um的微孔濾膜進(jìn)行過濾并備用。采用SEPAX公司型號(hào)為SRT-C的體積排阻色譜填充劑填充的液相色譜柱，該填充劑的粒度為5微米，孔徑為100 A0該色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm，柱內(nèi)長度為300mm。采用的色譜條件為以25mmol的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，pH值為7. O ;流速1.OmL/min ;紫外線檢測波長230nm ;進(jìn)樣量10uL ;進(jìn)樣濃度為10mg/mL ;柱溫為25°C。按照上述色譜條件，進(jìn)行高效液相色譜檢測，檢測結(jié)果如圖3和圖4所示。結(jié)合圖3和圖4，我們發(fā)現(xiàn)美洛西林鈉中含有兩種雜質(zhì)，其在8. 533分鐘與8. 918分鐘的峰值濃度達(dá)到最大。同時(shí)美洛西林鈉在10. 14分鐘時(shí)候的峰值濃度達(dá)到最大，且在11分鐘的時(shí)候，美洛西林鈉的濃度趨向零。這說明此時(shí)目標(biāo)成分美洛西林鈉已被完全分離出來。該檢測結(jié)果顯示該美洛西林鈉原料樣品中聚合物雜質(zhì)的總量為2. 89% (按面積百分比計(jì)算)，雜質(zhì)與主峰的分離度為4. 84，按美洛西林鈉計(jì)算理論塔板數(shù)為12926，美洛西林鈉的拖尾因子為1.10。實(shí)施例3
首先稱取美洛西林鈉樣品適量，用水完全溶解，制得濃度為5mg/L的待檢測樣品溶液。對該樣品溶液以孔徑為O. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾并備用。采用SEPAX公司型號(hào)為SRT-C的體積排阻色譜填充劑填充的液相色譜柱，該填充劑的粒度為5微米，孔徑為100 A0該色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm，柱內(nèi)長度為300mm。采用的色譜條件為以50mmol的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，pH值為7. O ;流速
1.OmL/min ;紫外線檢測波長254nm ;進(jìn)樣量20uL ;進(jìn)樣濃度為5mg/mL ;柱溫為30°C。按照上述色譜條件，進(jìn)行高效液相色譜檢測，檢測結(jié)果如圖5與圖6所示。結(jié)合圖5和圖6，我們發(fā)現(xiàn)美洛西林鈉樣品中含有兩種雜質(zhì)，其在8. 533分鐘與8. 924分鐘的峰值濃度達(dá)到最大。同時(shí)美洛西林鈉在10. 170分鐘時(shí)候的峰值濃度達(dá)到最大，且在11分鐘的時(shí)候，美洛西林鈉的濃度趨向零。這說明此時(shí)目標(biāo)成分美洛西林鈉已被完全分離出來。該檢測結(jié)果顯示該美洛西林鈉樣品中聚合物雜質(zhì)的總量為2.64% (按面積百分比計(jì)算)，雜質(zhì)與主峰的分離度為5. 28，按美洛西林鈉計(jì)算理論塔板數(shù)為15735。美洛西林鈉的拖尾因子為1. 12。實(shí)施例4
首先稱取美洛西林鈉樣品適量，用水完全溶解，制得濃度為5mg/L的待檢測樣品溶液。對該樣品溶液以孔徑為O. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾備用。采用SEPAX公司型號(hào)為SRT-C的體積排阻色譜填充劑填充的液相色譜柱，該填充劑的粒度為5微米，孔徑為100 A0該色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm，柱內(nèi)長度為300mm。采用的色譜條件為以40mmol的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，pH值為7. O ;流速
2.OmL/min ;紫外線檢測波長254nm ;進(jìn)樣量80uL ;進(jìn)樣濃度為5mg/mL ;柱溫為35°C。按照上述色譜條件，進(jìn)行高效液相色譜檢測，檢測結(jié)果如圖7與圖8所示。結(jié)合圖7和圖8，我們發(fā)現(xiàn)美洛西林鈉中含有三種雜質(zhì)，其在8. 53分鐘、8. 91分鐘和9. 20分鐘時(shí)候的峰值濃度達(dá)到最大。同時(shí)美洛西林鈉在10. 199分鐘時(shí)候的峰值濃度達(dá)到最大，且在11分鐘的時(shí)候，美洛西林鈉的濃度趨向零。這說明此時(shí)目標(biāo)成分美洛西林鈉已被完全分離出來。該檢測結(jié)果顯示該美洛西林鈉樣品中聚合物雜質(zhì)的總量為2. 85% (按面積百分比計(jì)算)，雜質(zhì)與主峰的分離度為5. 30，按美洛西林鈉計(jì)算理論塔板數(shù)為20747。美洛西林鈉的拖尾因子為1.05。如圖9所示，我們可以看出，本發(fā)明公開的一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法相對于2010版《中國藥典》所公開的檢測方法的技術(shù)方案而言，進(jìn)樣量變小，分離度提高，拖尾因子降低。說明該檢測方法操作簡單，分離時(shí)間短，分離度高，能快速對美洛西林鈉中的聚合物雜質(zhì)準(zhǔn)確快速定性分析與測量。應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實(shí)施方式的具體說明，它們并非用以限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施方式或變更均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，所述檢測方法采用高效液相色譜體積排阻色譜法，其特征在于，包括 將美洛西林鈉樣品溶解得到樣品溶液；以及 采用以球狀蛋白用親水硅膠為固定相，以磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為O.5-2. OmL/min，柱溫為20_35°C，采用紫外檢測器對樣品溶液進(jìn)行液相色譜檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述紫外檢測器的檢測波長范圍為230nm-254nmo
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于所述紫外檢測器的檢測波長為254nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述固定相的粒度為5微米，孔徑為ΙΟΟΑ，所述色譜柱的柱內(nèi)直徑為7. 8mm，柱內(nèi)長度為300mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述緩沖溶液的PH值范圍為7. 0 8· O。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括將美洛西林鈉樣品溶解于水中，對所述樣品溶液以孔徑為O. 45um或O. 22um的微孔濾膜進(jìn)行過濾。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述球狀蛋白用親水硅膠的分子量使用范圍為1000-10000。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于美洛西林鈉與其中的聚合物雜質(zhì)完全分離的時(shí)間小于或等于11分鐘。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述檢測方法的分離度大于或等于4.5，拖尾因子小于或等于1. 5。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種測定美洛西林鈉中聚合物雜質(zhì)的檢測方法，檢測方法采用高效液相色譜體積排阻法，色譜條件為，色譜柱以球狀蛋白用親水硅膠為固定相；流動(dòng)相50mmol的磷酸鹽緩沖溶液；流速0.5~2.0mL/min；檢測波長230~254nm；柱溫室溫；進(jìn)樣量10~80uL；色譜柱固定相的粒度為5微米，孔徑為100 ；所述色譜柱的柱內(nèi)直徑為7.8mm，柱長度為300mm。該檢測方法能對美洛西林鈉中的聚合物雜質(zhì)進(jìn)行快速定性定量檢測，同時(shí)簡化操作步驟，提高檢測精度，縮短了檢測時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103063751SQ20111032006
公開日2013年4月24日 申請日期2011年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月20日
發(fā)明者龔立冬, 崔愛艷, 李彧娜 申請人:蘇州賽分科技有限公司