專利名稱：一種多表位tk1抗體的制備及其在人群體檢篩查中早期腫瘤檢測和風(fēng)險預(yù)警中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗體及其應(yīng)用，具體講涉及一種高特異性、高靈敏度多表位TKl 抗體的制備及其在人群體檢篩查中早期腫瘤檢測和風(fēng)險預(yù)警中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥是人類的死亡殺手，盡管有許多影像檢測方法和治療手段，例如化學(xué)治療、 內(nèi)分泌治療、放射治療和手術(shù)等，雖然已經(jīng)有了很大的進步，但遠遠不可能達到完美的程度，伴有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可能。因此，早期的發(fā)現(xiàn)，特別是早于癌前病變期的發(fā)現(xiàn)和早期的治療是給予患者康復(fù)的最佳福音。癌癥是一種細胞異常增殖的慢性疾病。癌細胞異常和失控的增殖是由于正常細胞中與增殖相關(guān)的基因發(fā)生了某種或多種突變所引起的，雖然基因表達異常，但尚未癌變，因此被稱為癌前狀態(tài)或癌前疾病。癌前疾病是指患這些疾病的人比其他人得癌癥的機會要大大的增加，因而也被稱為癌前疾病或癌前狀態(tài)。而按照細胞病理學(xué)概念，一類具有細胞不典型性和分化異常的增生性病變，稱為癌前病變。細胞癌變過程是分階段發(fā)展和逐漸演變的。 從致癌因子攻擊正常組織細胞到產(chǎn)生癌癥，一般需要10年以上甚至更長的時間，進展速度與病程長短主要取決于腫瘤類型和個體差別。癌前疾病發(fā)展成癌癥疾病的這個漫長的過程中，也分為輕，中，重等不同階段。重度癌前病變是惡性腫瘤發(fā)生前的最后一個、也是最危險的時期。顯然，防治癌前病變是預(yù)防腫瘤和腫瘤治愈最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，為全世界所關(guān)注。然而，癌前病變發(fā)生的時間和部位都具有不確定性，而且病變尚處于細胞水平，無殊癥狀和體征，現(xiàn)行的檢測手段難以及時檢查發(fā)現(xiàn)。而現(xiàn)有體檢中使用的常規(guī)血液檢驗(血液中的有形成分即紅細胞、白細胞及血小板這三個系統(tǒng)的質(zhì)和量進行檢測與分析)和尿液檢測，可提供血清或尿液蛋白質(zhì)或酶等異常指標(biāo)和相關(guān)疾病的信息；現(xiàn)有的常規(guī)物理學(xué)影像檢測方法(B-超，X-光)，可觀察到組織器官中的息肉或息肉增大，囊腫或可疑腫瘤的相關(guān)信息，但這些方法尚不能知道被檢者組織器官中顯示的息肉，囊腫或腫塊的腫瘤細胞的異常增殖情況，很難評估是否有可能進程為惡性腫瘤。特別指出的是，但到目前為止，很少有可信的腫瘤生長相關(guān)標(biāo)志物應(yīng)用于體檢篩查。2008年，美國信諾保健公司將現(xiàn)用腫瘤標(biāo)志物(Tumor Markers)如何用于癌癥的診斷和監(jiān)督進行匯編，提出公認(rèn)的準(zhǔn)則和實踐指南，對于腫瘤相關(guān)的血清標(biāo)志物，進行了評估。 對于現(xiàn)有許多腫瘤標(biāo)志物進行回顧研究，例如CEA，CA15-3, CA199和AFP等一系列標(biāo)志物， 由于這類標(biāo)志物不與腫瘤細胞的增殖直接相關(guān)，它們通常是不可能用單獨一種腫瘤標(biāo)志物的水平來檢測和診斷癌癥疾病，這類型標(biāo)志物升高，可能預(yù)示有癌癥，但它們的存在并不能診斷是癌癥，這些標(biāo)志物檢測是需要結(jié)合其他診斷方式(例如活檢、放射/成像)才能確認(rèn)為癌癥。二十世紀(jì)五十年代末，研究者發(fā)現(xiàn)胸苷激酶(TK，ATP thymidine5' -phosphotransferase, EC. 2. 7. 1· 21，簡稱 TK)，一種嘧啶補救途徑的酶，催化胸苷磷酸化為胸苷酸。人細胞中TK以兩種同功酶的形式出現(xiàn)細胞質(zhì)胸苷激酶(簡稱 TKl)和線粒體胸苷激酶(簡稱TK2)。胸苷激酶1 (簡稱TK1，也稱為細胞質(zhì)胸苷激酶)是與細胞周期調(diào)控密切相關(guān)的細胞周期類標(biāo)志物，隨后的大量基礎(chǔ)研究和實驗?zāi)[瘤學(xué)證明了 TKl表達是與細胞生長狀態(tài)緊密聯(lián)系的，因此TKl可以作為一種好的細胞增殖標(biāo)記物來檢測增殖細胞的增殖活性，因此將適用惡性腫瘤的增殖度檢測。對血清胸苷激酶1值(STKl)進行分析，重要的是，體內(nèi)正常細胞增殖不會導(dǎo)致血清胸苷激酶1水平的增加，因為正常的細胞分裂是按照細胞凋亡調(diào)控規(guī)律進行的，細胞內(nèi)胸苷激酶1在細胞分裂之前已經(jīng)被降解，但腫瘤細胞逃逸了細胞凋亡規(guī)律的調(diào)控，導(dǎo)致細胞異常分裂增殖，腫瘤細胞(包括S和G2期的細胞)中的胸苷激酶1被釋放至體液。因此， 在細胞過度增生的情況下，STKl水平與腫瘤細胞增殖速度相關(guān)，并與疾病的輕重程度有關(guān)。 由于在總的血清TK中，TKl高于95%，TK2低于5%，因此STKl的活性檢測同樣適用于血清學(xué)，作為一優(yōu)選的腫瘤細胞增殖標(biāo)記物。采用人TKl抗體檢測血清TKl濃度水平更能真實代表集體內(nèi)是否存在異常增殖的細胞，因此，在近10多年里，按照抗體制備原理，一種TKl抗體已經(jīng)試用于臨床實踐中。多個團隊制備了不同的TKl抗體用于腫瘤疾病的鑒定和監(jiān)控，但不適用于常規(guī)人群體檢篩查。在這基礎(chǔ)上，我們于2002年進一步篩選研究，選擇了暴露在TKl蛋白質(zhì)表面的抗原決定簇C端部分的這一關(guān)鍵免疫序列-31肽(195-225)制備了抗人TKl-IgY抗體(中國發(fā)明專利號 W0204 100760Α1，國際專利號 W 0 204100760Α1. 25/11-2004)。采用人 TKlC 端 31肽制備的抗人TKl-IgY抗體及利用其制備的血清免疫學(xué)和組織免疫學(xué)腫瘤檢測試劑盒， 這抗體將同時檢測有活性的TKl蛋白和非活性的TKl蛋白，也能檢測TKl蛋白質(zhì)與其他的分子形成的復(fù)合物。盡管這血清試劑盒-增強發(fā)光免疫點印跡法檢測系統(tǒng)試用于體檢篩查中，檢測范圍在0. 3-2ρΜ之間，但在0. I-IpM時，誤差有時會大于30%，采用人群常規(guī)體檢血清TKl和癌癥患者血清TKl進行ROC值分析，ROC值曲線下面積為0. 96，特異性為0. 991， 最大似然法比例(+)為56. 04，證明抗體的特異性很好，可以用于人群體檢篩查，但靈敏度在0. 51 %，需進一步制備檢測靈敏度高、特異性和穩(wěn)定性好的抗體來完善檢測系統(tǒng)，以便更好的提高在0. I-IpM范圍內(nèi)的檢測精確度。

發(fā)明內(nèi)容
在采用人宮頸癌細胞的TKl單體上C端31肽(195-225)作為抗原的基礎(chǔ)上，經(jīng)多年實踐，篩選出了暴露在TKl蛋白表面的多點位特別抗原決定族，包括N端部分的關(guān)鍵性免疫多肽序列23肽，C端20肽和C端部分的關(guān)鍵免疫序列觀肽，應(yīng)用上述關(guān)鍵免疫序列做特別抗原，采用母雞免疫最終純化并組合制備了抗人TKl-IgY抗體。與現(xiàn)有的國際商用抗人TKl-IgG抗體相比，所制備的抗體具有純度高(> 99% )、產(chǎn)量高、高靈敏度、高特異性且無非特異性免疫交叉反應(yīng)，并可于+4-8度冰箱保存一年以上且活性穩(wěn)定，便于商業(yè)運輸、 保存和操作等優(yōu)點。本發(fā)明的抗人TKl多表位抗體和TKl檢測系統(tǒng)，能真實的反映細胞的增殖度，因而能在早于影像學(xué)檢測的情況下，在體檢人群中預(yù)警早期潛在的異常細胞增殖， 警示被檢者可能進程為惡性腫瘤的風(fēng)險。本發(fā)明提供的技術(shù)方案包括1、設(shè)計和篩選抗原
4
選擇暴露的蛋白表面上N、C端的肽段。2、制備抗體利用上述關(guān)鍵免疫序列與KLH交聯(lián)組成23肽-KLH，20肽-KLH，28肽-KLH的抗原分別去免疫母雞制得。而利用母雞免疫的優(yōu)點在于(1)雞的IgY和人的IgG之間存在分子遺傳差異性；( 雞的TKl和人的TKl有種族差異性；C3)與傳統(tǒng)的兔免疫制備的多克隆抗體比較，IgY具有內(nèi)源分子均一性(只產(chǎn)生一種類型的抗體分子，即IgY) A4) IgY抗體不激活人補體系統(tǒng)，從而部分地阻斷人血清中非特異抗原結(jié)合位點的激活；(5)類風(fēng)濕因子 (RF)不與IgY抗體反應(yīng)。這種RF是許多免疫測定中非特異反應(yīng)的主要來源，因為RF與哺乳動物抗體IgG的Fc部分反應(yīng)，可導(dǎo)致病人和健康人血清的假陽性；(6)現(xiàn)在大多數(shù)乳腺癌患者，需要輔助治療，許多患者接受化療，例如赫賽仃、靶向治療藥、單克隆抗體，以后也還需抗激素治療，特別是抗體治療情況下，TKl-IgY抗體顯示出比單抗體檢測更具有優(yōu)勢。3、純化抗體利用所述N端23肽，C端20肽，C端28肽序列分別與KLH交聯(lián)，分別免疫母雞，提取卵黃液體，采用水萃取制備抗體溶液，分別用本發(fā)明中的抗原決定簇制備的親和層析柱來純化抗體。所述純化包括下述步驟第一步，初篩出免疫母雞生產(chǎn)出的抗體是否具有高特異性和高靈敏度，即對每個免疫母雞的卵黃液體進行分離，采用水萃取后得到抗體粗品，經(jīng)親和層析純化得到初篩的高特異性和高靈敏度的抗人TKl抗體。根據(jù)免疫抗原的類型對親和柱進行選擇，混合后的粗品液是來源于23肽-KLH，20肽-KLH，28肽-KLH的抗原免疫的抗TKl-IgY抗體，親和柱制備必須為N端23肽，C端20肽和C端28肽的親和柱。第二步，制備組合免疫抗原的親和柱，對初篩出的3種抗體進行組合的配比測試， 其特征在于組合抗原親和柱配比選擇。制備親和柱要求按照所選擇的3種抗體的混合比例，計算出相對應(yīng)的抗原決定簇，即23肽，20肽和觀肽量的百分比。經(jīng)親和柱層析純化測試后，選擇最佳的配比組合方案。4、多位點抗體組合制備抗人TKl-IgY抗體，除另有說明外，本申請中的百分比為質(zhì)量百分比。配比范圍23肽免疫的單一抗體占25% 45%，20肽免疫的單一抗體占20% 40%, 28肽免疫的單一抗體占20% 55%。5、鑒定抗人TKl-IgY抗體的靈敏度和特異性1)確認(rèn)制備抗體是否僅與人的TKl有特異性反應(yīng)，第一步采用TKl陽性和陰性細胞株，西部印染法來鑒定抗體的特異性利用淋巴瘤陽性株CEM TKl+和陰性株CEM ΤΚΓ來鑒定。經(jīng)天然膠電泳后進行TKl抗體西部免疫印染，CEM TKl陽性株有一條明顯的TKl電泳帶，CEM TKl陰性株沒有顯現(xiàn)任何帶。確認(rèn)抗體的是僅與TKl酶有免疫反應(yīng)，是特異性抗體。2)確認(rèn)制備的抗體是否僅與腫瘤患者的血清TKl有特異性反應(yīng)，第二步采用選擇已確認(rèn)為健康無疾病者的血清和腫瘤患者陽性值的血清標(biāo)本，用增強發(fā)光免疫點印跡方法檢測，腫瘤患者陽性值的血清標(biāo)本應(yīng)顯示不同程度的陽性值，健康者應(yīng)該低于檢測閾值2pM 或不顯示免疫反應(yīng)。確認(rèn)了抗體與健康無疾病者的血清無免疫交叉反應(yīng)，是特異性抗體，并比較腫瘤患者血清中STKl的強度反應(yīng)，對初篩出的不同抗體進行鑒定，篩選出靈敏度高和特異性好的抗體。3)確認(rèn)制備抗體是否僅與腫瘤患者中TKl有特異性反應(yīng)，從2、步中篩選出靈敏度高和特異性好的抗體，采用初診但未治療腫瘤患者的血清和健康無疾病者的血清標(biāo)本點樣，進行天然膠電泳后，再用抗TKl抗體西部免疫印染，腫瘤患者的血清標(biāo)本顯示一條明顯的TKl電泳帶，健康無疾病者的血清標(biāo)本沒有顯現(xiàn)任何帶。確認(rèn)抗體是僅與腫瘤患者的血清TKl酶有免疫反應(yīng)，是特異性抗體。本發(fā)明是利用上述組合抗體在十萬級的潔凈環(huán)境下，將抗體進行分裝，組裝TKl 免疫檢測試劑盒，并與化學(xué)發(fā)光分析儀結(jié)合，應(yīng)用于人群體檢篩查中早期腫瘤檢測和風(fēng)險預(yù)警。該發(fā)明涉及早期預(yù)測，能在早于影像學(xué)檢測癌癥的情況下，用于檢測多種類型的癌前疾病/早期潛伏腫瘤疾病/與腫瘤疾病相關(guān)的慢性疾病與異常細胞增殖，預(yù)警被檢者可能進程為惡性腫瘤的風(fēng)險。STKl檢測進入體檢套餐，篩選STKl升高的風(fēng)險人群，與下列惡性腫瘤進程相關(guān)的疾病聯(lián)合評估體內(nèi)細胞異常增殖情況，包括癌前病癥風(fēng)險人群的定期動態(tài)觀察；例如組織中/重度增生，息肉病變，中/重度潰瘍或糜爛，病毒性肝炎陽性，例如乙肝135/145，難治型貧血疾病等等；定期監(jiān)控相關(guān)疾病可能漸變?yōu)榘┘膊★L(fēng)險進程，例如良性腫瘤，中/重度脂肪肝，超重，與腫瘤疾病相關(guān)的長期慢性炎癥等等；腫瘤康復(fù)患者人群定期監(jiān)控，風(fēng)險預(yù)警；預(yù)警體內(nèi)有無細胞異常增殖3-6個月STKl持續(xù)高水平者，但現(xiàn)無體征疾病.預(yù)警體內(nèi)有細胞異常增殖，需與相關(guān)影像儀，腫瘤標(biāo)志物，血清和尿液指標(biāo)聯(lián)合定期監(jiān)控，觀察細胞異常增殖變化。體檢中心檢測被檢者STKl水平，建立健康者個體STKl的基礎(chǔ)水平，例如無腫瘤疾病健康被檢者，需取初次第1個月內(nèi)的樣品，分析STKl的水平，3個月中，進行3次重復(fù)檢測，將3次的檢測結(jié)果計算出平均值，得出健康者個體STKl的基礎(chǔ)水平，無腫瘤疾病健康被檢者一般在低于ΙρΜ，以后每年的常規(guī)體檢期間，用檢測的STKl值與個體的STKl的基礎(chǔ)水平進行比較?？赡苓M程為癌疾病風(fēng)險的被檢者的預(yù)測是按照個體的TKl的基礎(chǔ)值與以后年檢 TKl值，對兩者的STKl水平比較。例如，現(xiàn)年檢STKl值與個體STKl的基礎(chǔ)比較，如果該個體已確認(rèn)有癌前疾病/良性腫瘤疾病/與腫瘤疾病相關(guān)的慢性疾病，但TKl的水平仍低于風(fēng)險閾值，被檢者評估為細胞異常增殖水平低，進程為癌疾病的風(fēng)險低；如果該個體已確認(rèn)有癌前疾病/良性腫瘤疾病/與腫瘤疾病相關(guān)的慢性疾病，STKl的水平升高1-2倍，超過 2pM，被檢者評估為細胞異常增殖水平升高，預(yù)警進程為癌疾病的風(fēng)險升高。采用這方法對被檢者進行定期檢測，可以監(jiān)控個體數(shù)年，以至數(shù)十年，判斷被檢者是否處在癌疾病低風(fēng)險或高風(fēng)險情況。因此，這發(fā)明給予被檢者和體檢中心醫(yī)生的早期信息。如果是STKl升高，預(yù)警被檢者有癌疾病進程的高風(fēng)險；給醫(yī)生將有可能建議相關(guān)的干預(yù)治療方案，給予被檢者遠避風(fēng)險和治愈的最佳機會和現(xiàn)有技術(shù)比，本發(fā)明的優(yōu)點如下(1)本發(fā)明所制備的抗體具有純度高(> 99% )、產(chǎn)量高、高特異性無非特異性免疫交叉反應(yīng)且檢測精度在可達到0. IpM0受試者工作曲線表示R0C曲線下面積值= 0. 96 (ρ < 0. 0001)，最大似然法比例(+)明顯升高為236. 49，特異性高達0. 997，靈敏度高達 0. 737。(2)適用于人群體檢篩查，可按照體檢者不同的個體情況和血清TKl (STKl)水平的變化大于2pM，預(yù)示異常細胞增殖度，給個人和醫(yī)生提供信息，進行合理的保健防范/干預(yù)治療，遠避風(fēng)險，將可能極大提高患者治愈效果。(3)穩(wěn)定性好，可于+4-8度冰箱保存一年以上且活性穩(wěn)定，更便于商業(yè)運輸和保存并能降低試劑的潛在成本。


圖1 :ABmart抗體分析測試TKl蛋白圖譜。圖2 (a) TKl抗體試劑盒點樣結(jié)果圖(b) STKl點印跡實驗分析軟件測試TKl抗體試劑盒點樣數(shù)據(jù)(C)STKl點印跡實驗分析軟件測試TKl抗體試劑盒點樣數(shù)據(jù)曲線3 (a)為CEM TKl+和CEM ΤΚΓ的西部印染結(jié)果。(b)為鑒定治療前淋巴癌患者，治療前/后的頭頸癌患者，健康人血清的西部印染結(jié)果。圖4 =CEM TK1\ CEM ΤΚ1_、宮頸內(nèi)膜癌和結(jié)腸癌的TKl抗體染色結(jié)果圖5 生物素-TKl-IgY抗體O步法)與三步法的比較6 體檢中心提供的血清TKl檢測的ROC圖表圖7 華瑞同康的抗TKl-IgY抗體與市售商用抗TKl-mAb抗體的實驗比較圖
具體實施例方式用以下實施例對本發(fā)明作詳細描述實施例1 選擇特異性多表位抗原如圖1所示，用軟件預(yù)測TKl無信號肽，無跨膜結(jié)構(gòu)。圖示單鏈TKl蛋白234氨基酸分布，指出氨基酸的親疏水性氨基酸分布較均勻。圖譜提供了可選方案1)從抗原性角度考慮，在藍色曲線峰值高的地方選擇的多肽較好；幻按照親水性氨基酸的分布，選擇親水區(qū)域；幻選擇負值所示疏水性較強的芳香族氨基酸。實例2 選擇高靈敏度、高特異性多位點組合抗人TKl-IgY抗體的抗原選擇制備高靈敏度、高特異性多位點組合抗人TKl-IgY抗體的抗原的選擇由于人宮頸癌TKl的部分序列有與其它蛋白具有相同的表位，得到的抗體可能與其它非特異性蛋白有交叉反應(yīng)，純化困難，按照已公布公知的TKl序列(蛋白質(zhì)文庫)，選擇暴露在蛋白質(zhì)表面的特別肽，按照用軟件預(yù)測得到的多肽的特異性程度大于85%的多肽片段列于下表， 篩選的TKl特異性強的抗原片段，設(shè)計了 TKlN端23肽，C端20肽和C端觀肽作為半抗原。
權(quán)利要求
1.一種高特異性、高靈敏度的抗人TKl抗體，其特征在于所述抗體選擇的TKl蛋白包括TK1蛋白質(zhì)，具有酶活性/非活性的單體、2或4聚體TKl蛋白質(zhì)，或TKl蛋白質(zhì)與其他分子形成的蛋白復(fù)合物或抑制物。
2.一種抗原表位，所述決定表位包括人宮頸癌細胞TKl單體N端23肽、C端20肽和C端觀肽，其氨基酸序列分別如下=N端23肽(3-25) :CINLPTVLPGSPSKTRGQIQVIL ； C 端 20 肽(206-225) CPVPGKPGEAVAARKLFAPQ 禾口 C 端 28 肽(198-225) AGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ。
3.一種利用權(quán)利要求2所述的抗原決定簇制備抗體的方法，其特征在于所述方法包括利用權(quán)力要求2所述的三段多肽免疫序列分別與KLH交聯(lián)，分別免疫母雞，提取卵黃液體， 采用水萃取制備抗體溶液，分別用所述的抗原決定簇制備的親和層析柱純化抗體，初篩出高特異性、高靈敏度的抗體。
4.一種利用權(quán)利要求3所述的方法所得的組合抗體制備的高特異性、高靈敏度的多表位抗人TKl-IgY抗體，其特征在于所述的抗體按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計包括所述23肽免疫的單一抗體為25% 45%，所述20肽免疫的單一抗體為20^-40%, 肽免疫的單一抗體為 20% 55%。
5.一種利用權(quán)利要求3所述的方法所得的組合抗體制備的高特異性、高靈敏度的多表位抗人TKl-IgY抗體，其特征在于所述的抗體按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計包括所述23肽免疫的單一抗體為25% 30%，所述20肽免疫的單一抗體為20% 25 %，觀肽免疫的單一抗體為 50% 55%。
6.一種用權(quán)利要求3至5中任一權(quán)利要求所述的抗體，其特征在與所述的抗體選擇的 TKl蛋白包括TK1蛋白質(zhì)，具有酶活性/非活性的單體、2或4聚體TKl蛋白質(zhì)，或TKl蛋白質(zhì)與其他分子形成的蛋白復(fù)合物或抑制物。
7.一種對權(quán)利要求4中所述的配位組合的抗人TKl-IgY抗體的檢測方法所述檢測方法包括硝酸纖維素膜點印染/免疫增強發(fā)光檢測系統(tǒng)(ECL)的縮時檢測方法、抗體直接標(biāo)記生物素方法。
8.一種利用權(quán)力要求4至5中任一權(quán)利要求所述的組合抗人TKl-IgY抗體與化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)結(jié)合用于人群體檢篩查中早期腫瘤檢測和風(fēng)險預(yù)警的試劑盒。
全文摘要
發(fā)明提供了一種人宮頸癌細胞TK1單體N端23肽、C端20肽和C端28肽組成的抗原決定簇制備的一種高特異性、高靈敏度的配位組合抗人TK1抗體以及其檢測診斷系統(tǒng)在腫瘤診斷中的應(yīng)用?？乖瓫Q定簇所包含的氨基酸序列為N端23肽(3-25)CINLPTVLPGSPSKTRGQIQVIL、C端20肽(206-225)CPVPGKPGEAVAARKLFAPQ、C端28肽(198-225)AGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ。本發(fā)明同時提供了應(yīng)用該抗原制備抗體的方法，所提供的抗體試劑盒具有靈敏度高，特異性高，成本低廉等特點通過增強化學(xué)發(fā)光點印跡檢測法和免疫組化檢測及檢測試劑盒能夠在人群體檢篩查中檢測早期腫瘤和進行風(fēng)險預(yù)警。
文檔編號G01N33/573GK102504027SQ20111035397
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月28日
發(fā)明者周際, 斯文·斯庫格, 李勁, 艾倫·何 申請人:周際, 斯文·斯庫格, 李勁, 艾倫·何