專利名稱：一種多表位tk1抗體的制備及其在評(píng)估腫瘤患者治療效果中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗體及其應(yīng)用，具體講涉及一種高特異性、高靈敏度多表位TKl 抗體的制備及其在腫瘤患者治療效果的評(píng)估中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥是人類的死亡殺手，盡管有許多影像檢測(cè)方法和治療手段，例如化學(xué)治療，內(nèi)分泌治療，放射治療和手術(shù)等，雖然已經(jīng)有了很大的進(jìn)步，但遠(yuǎn)遠(yuǎn)不可能達(dá)到完美的程度， 伴有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的可能。
癌癥是一種細(xì)胞異常增殖的慢性疾病。癌細(xì)胞異常和失控的增殖是由于正常細(xì)胞中與增殖相關(guān)的基因發(fā)生了某種或多種突變所引起，因而準(zhǔn)確了解腫瘤細(xì)胞增殖變化規(guī)律是評(píng)價(jià)和分析腫瘤發(fā)展方向，判斷治療效果和制定患者個(gè)體化治療方案的重要參數(shù)，但是準(zhǔn)確檢測(cè)和動(dòng)態(tài)分析腫瘤患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的增殖動(dòng)力卻是當(dāng)前腫瘤治療階段亟待解決的難題。腫瘤的治療手段主要是通過手術(shù)切除/殺傷治療/抑制治療等方法控制腫瘤組織的浸潤和轉(zhuǎn)移，例如手術(shù)治療、放射線治療、化學(xué)藥物治療、內(nèi)分泌治療等方法都有清除/ 殺傷/干預(yù)腫瘤細(xì)胞的作用，但達(dá)不到完美的程度，需要與癌癥中細(xì)胞的增殖度來聯(lián)合評(píng)估治療效果，如DNA流式細(xì)胞分析，因設(shè)備昂貴，技術(shù)操作要求高，不能動(dòng)態(tài)分析等缺陷不能實(shí)現(xiàn)臨床普及應(yīng)用。臨床上缺乏一種能直接檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖狀況，并能與手術(shù)切除/ 殺傷治療/抑制治療等方法同步評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖的直接指標(biāo)和方法?，F(xiàn)階段應(yīng)用影像， 超聲和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)和評(píng)估的方法均存在分析滯后和間接判斷的問題。
對(duì)于現(xiàn)有許多腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行回顧研究，例如CEA，CA15-3，CA199和AFP等一系列標(biāo)志物，由于這類標(biāo)志物不能直接反應(yīng)腫瘤細(xì)胞的增殖，雖然可以監(jiān)視治療效果，但它們通常是不可能用單獨(dú)一種腫瘤標(biāo)志物的水平來檢測(cè)和診斷癌癥，不能準(zhǔn)確評(píng)價(jià)腫瘤治療過程中腫瘤細(xì)胞增殖變化的狀態(tài)。
二十世紀(jì)五十年代末，研究者發(fā)現(xiàn)胸苷激酶(TK，ATP thymidine 5' -phosphotransferase, EC. 2. 7. 1. 21，簡稱TK)，一種嘧啶補(bǔ)救途徑的酶，催化胸苷磷酸化為胸苷酸。人細(xì)胞中TK以兩種同功酶的形式出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶(簡稱TKl)和線粒體胸苷激酶(簡稱TD)。胸苷激酶1 (簡稱TKl，也稱為細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶)是與細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)的細(xì)胞周期類標(biāo)志物，隨后的大量基礎(chǔ)研究和實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤學(xué)證明了 TKl表達(dá)是與細(xì)胞生長狀態(tài)緊密聯(lián)系的，因此TKl可以作為一種好的細(xì)胞增殖標(biāo)志物來檢測(cè)增殖細(xì)胞的增殖活性，因此將適用惡性腫瘤的增殖度檢測(cè)。
對(duì)血清胸苷激酶1值(STKl)進(jìn)行分析，重要的是，體內(nèi)正常細(xì)胞增殖不會(huì)導(dǎo)致血清胸苷激酶1水平的增加，因?yàn)檎５募?xì)胞分裂是按照細(xì)胞凋亡調(diào)控規(guī)律進(jìn)行的，細(xì)胞內(nèi)胸苷激酶1在細(xì)胞分裂之前已經(jīng)被降解，但腫瘤細(xì)胞是逃逸了細(xì)胞凋亡的調(diào)控規(guī)律，導(dǎo)致細(xì)胞異常分裂增殖，腫瘤細(xì)胞(包括S和G2期的細(xì)胞)中的胸苷激酶1被釋放至體液。因此，在細(xì)胞過度增生的情況下，STKl水平與腫瘤細(xì)胞增殖速度相關(guān)，并與腫瘤疾病的輕重程度和治療效果有關(guān)，可用于患者的治療監(jiān)視。由于在總的STK中，STKl高于95%，TK2低于 5%，一種STK的活性檢測(cè)同樣用于血清學(xué)，作為一優(yōu)選的腫瘤細(xì)胞增殖標(biāo)志物，與STKl增強(qiáng)發(fā)光免疫點(diǎn)印跡法檢測(cè)相比現(xiàn)用非同位素STK的活性檢測(cè)程序，還是比較繁瑣和耗時(shí)。
采用人TKl抗體檢測(cè)STKl濃度水平更能真實(shí)代表體內(nèi)是否存在異常增殖的細(xì)胞， 因此，在近10多年里，按照抗體制備原理，一種TKl抗體已經(jīng)試用于臨床實(shí)踐中。多個(gè)團(tuán)隊(duì)制備了不同的抗TKl抗體用于腫瘤疾病的鑒定和監(jiān)控，但靈敏度需要提高，也并不適用于常規(guī)人群體檢篩查。
在這基礎(chǔ)上，我們于2002年進(jìn)一步篩選研究，選擇了暴露在TKl蛋白質(zhì)的表面的抗原決定簇C端部分的這一關(guān)鍵免疫序列31肽(195-22 制備了抗人TKl-IgY抗體(中國發(fā)明專利號(hào)W0204100760A1，國際專利號(hào)W 0 204100760A1. 25/11-2004)。采用人TKl的 C端31肽制備抗人TKl-IgY抗體及利用其制備的血清免疫學(xué)和組織免疫學(xué)的腫瘤檢測(cè)試劑盒，這抗體將同時(shí)檢測(cè)有活性的TKl蛋白和非活性的TKl蛋白，也能檢測(cè)TKl蛋白質(zhì)與其他的分子形成的復(fù)合物。盡管這血清試劑盒-增強(qiáng)發(fā)光免疫點(diǎn)印跡法檢測(cè)系統(tǒng)試用于體檢篩查中，檢測(cè)范圍在0. 3-2pM之間，但檢測(cè)范圍在0. I-IpM時(shí)，誤差有時(shí)會(huì)大于30%，采用人群常規(guī)體檢STKl和癌癥患者STKl進(jìn)行ROC值分析，ROC值曲線下面積為0. 96，特異性為 0.991，最大似然法比例(+)為56. 04，證明抗體的特異性很好，可以用于人群體檢篩查，但靈敏度在0. 51 %，需進(jìn)一步制備檢測(cè)靈敏度高、特異性和穩(wěn)定性好的抗體來完善檢測(cè)系統(tǒng)， 以便更好的提高在0. I-IpM范圍內(nèi)的檢測(cè)精度，為腫瘤患者的治療效果監(jiān)視提供更為真實(shí)的動(dòng)力學(xué)分析數(shù)據(jù)，評(píng)估治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
在采用人宮頸癌細(xì)胞的TKl上C端31肽(195-225)作為抗原的基礎(chǔ)上，經(jīng)多年實(shí)踐，篩選出了暴露在TKl蛋白表面的多點(diǎn)位特別抗原決定族，包括N端部分的關(guān)鍵性免疫多肽序列23肽，C端20肽和C端部分的關(guān)鍵免疫序列觀肽，應(yīng)用上述關(guān)鍵免疫序列做特別抗原，采用母雞免疫最終純化并組合制備了抗人TKl-IgY抗體。與現(xiàn)有的國際商用抗TKl-IgG 抗體相比，所制備的抗體具有純度高(> 99% )、產(chǎn)量高、高靈敏度、高特異性且無非特異性免疫交叉反應(yīng)，并可于+4-8度冰箱保存一年以上且活性穩(wěn)定，便于商業(yè)運(yùn)輸、保存和操作等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的抗人TKl多表位抗體和TKl檢測(cè)系統(tǒng)，能真實(shí)的反映細(xì)胞的增殖度，治療前后的TKl的高低變化與腫瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)度，因而能在早于影像學(xué)檢測(cè)的情況下，對(duì)治療中的腫瘤患者的治療效果進(jìn)行評(píng)估，醫(yī)生將有可能使用不同的治療方案或制定更有效的治療方案，增加治療的成功機(jī)率，延長患者的生存和生活質(zhì)量，同樣可避免沒有成效和不必要的治療。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案包括
1、設(shè)計(jì)和篩選抗原
選擇暴露的蛋白表面上N、C端的肽段。
2、制備抗體
利用上述關(guān)鍵免疫序列與KLH交聯(lián)組成23肽-KLH，20肽-KLH，28肽-KLH的抗原分別去免疫母雞制得。而利用母雞免疫的優(yōu)點(diǎn)在于(1)雞的IgY和人的IgG之間存在分子遺傳差異性；( 雞的TKl和人的TKl有種族差異性；C3)與傳統(tǒng)的兔免疫制備的多克隆抗體比較，IgY具有內(nèi)源分子均一性(只產(chǎn)生一種類型的抗體分子，即IgY) A4) IgY抗體不激活人補(bǔ)體系統(tǒng)，從而部分地阻斷人血清中非特異抗原結(jié)合位點(diǎn)的激活；(5)類風(fēng)濕因子 (RF)不與IgY抗體反應(yīng)。這種RF是許多免疫測(cè)定中非特異反應(yīng)的主要來源，因?yàn)镽F與哺乳動(dòng)物抗體IgG的Fc部分反應(yīng)，可導(dǎo)致病人和健康人血清的假陽性；(6)現(xiàn)在大多數(shù)乳腺癌患者，需要輔助治療，許多患者接受化療，例如赫賽仃、靶向治療藥、單克隆抗體，以后也還需抗激素治療，特別是抗體治療情況下，TKl-IgY抗體顯示出比單抗體檢測(cè)更具有優(yōu)勢(shì)。
3、純化抗體
利用所述N端23肽，C端20肽，C端28肽序列分別與KLH交聯(lián)，分別免疫母雞，提取卵黃液體，采用水萃取制備抗體溶液，分別用本發(fā)明中的抗原決定簇制備的親和層析柱來純化抗體。
所述純化包括下述步驟
第一步，初篩出免疫母雞生產(chǎn)出的抗體是否具有高特異性和高靈敏度，即對(duì)每個(gè)免疫母雞的卵黃液體進(jìn)行分離，采用水萃取后得到抗體粗品，經(jīng)親和層析純化得到初篩的高特異性和高靈敏度的抗人TKl抗體。根據(jù)免疫抗原的類型對(duì)親和柱進(jìn)行選擇，混合后的粗品液是來源于23肽-KLH，20肽-KLH，28肽-KLH的抗原免疫的抗TKl-IgY抗體，親和柱制備必須為N端23肽，C端20肽和C端28肽的親和柱。
第二步，制備組合免疫抗原的親和柱，對(duì)初篩出的3種抗體進(jìn)行組合的配比測(cè)試， 其特征在于組合抗原親和柱配比選擇。制備親和柱要求按照所選擇的3種抗體的混合比例，計(jì)算出相對(duì)應(yīng)的抗原決定簇，即23肽，20肽和觀肽量的百分比。經(jīng)親和柱層析純化測(cè)試后，選擇最佳的配比組合方案。
4、多位點(diǎn)抗體組合制備抗人TKl-IgY抗體，除另有說明外，本申請(qǐng)中的百分比為質(zhì)量百分比。
配比范圍23肽免疫的單一抗體占30% 50%，20肽免疫的單一抗體占25% 40%, 28肽免疫的單一抗體占20% 30%。
5、鑒定抗人TKl-IgY抗體的靈敏度和特異性
1)確認(rèn)制備抗體是否僅與人的TKl有特異性反應(yīng)，第一步采用TKl陽性和陰性細(xì)胞株，西部印染法來鑒定抗體的特異性利用淋巴瘤陽性株CEM TKl+和陰性株CEM ΤΚΓ來鑒定。經(jīng)天然膠電泳后進(jìn)行TKl抗體西部免疫印染，CEM TKl陽性株有一條明顯的TKl電泳帶，CEM TKl陰性株沒有顯現(xiàn)任何帶。確認(rèn)抗體的是僅與TKl酶有免疫反應(yīng)，是特異性抗體。
2)確認(rèn)制備抗體是否僅與腫瘤患者的血清TKl有特異性反應(yīng)，第二步采用選擇已確認(rèn)為健康無疾病者的血清和腫瘤患者陽性值的血清標(biāo)本，用增強(qiáng)發(fā)光免疫點(diǎn)印跡方法檢測(cè)，腫瘤患者陽性值的血清標(biāo)本應(yīng)顯示不同程度的陽性值，健康者應(yīng)該低于檢測(cè)閾值2pM 或不顯示免疫反應(yīng)。確認(rèn)了抗體與健康無疾病人的血清無免疫交叉反應(yīng)，是特異性抗體，并比較腫瘤患者血清中STKl的強(qiáng)度反應(yīng)，對(duì)初篩出的不同抗體進(jìn)行鑒定，篩選出靈敏度高和特異性好的抗體。
3)確認(rèn)制備抗體是否僅與腫瘤患者血清中TKl有特異性反應(yīng)，從幻步中篩選出靈敏度高和特異性好的抗體，采用初診但未治療腫瘤患者的血清和健康無疾病者的血清標(biāo)本點(diǎn)樣，進(jìn)行天然膠電泳后，再用抗TKl抗體西部免疫印染，腫瘤患者的血清標(biāo)本顯示一條明顯的TKl電泳帶，健康無疾病者的血清標(biāo)本沒有顯現(xiàn)任何帶。確認(rèn)抗體的是僅與腫瘤患者的血清TKl酶有免疫反應(yīng)，是特異性抗體。
本發(fā)明是利用上述組合抗體在十萬級(jí)的潔凈環(huán)境下，將抗體進(jìn)行分裝，組裝TKl 免疫檢測(cè)試劑盒，并與化學(xué)發(fā)光分析儀結(jié)合，通過反應(yīng)治療前后的TKl的高低變化，因而能在早于影像學(xué)檢測(cè)的情況下，對(duì)治療中的腫瘤患者的治療效果進(jìn)行評(píng)估，
臨床腫瘤治療患者，檢測(cè)患者個(gè)體治療前后的STKl水平，需要有多次的定期檢測(cè)，取治療前的樣品和定期治療后的樣品進(jìn)行分析，如是手術(shù)患者，則取治療后1，3或者6 個(gè)月到治療后1年的樣品進(jìn)行分析；如化療患者，可取治療后2-3天，一個(gè)星期，一個(gè)療程和多個(gè)療程進(jìn)行比較分析。醫(yī)生將可能使用不同的治療方案或改變治療方案以增加治療的成功機(jī)率。癌癥患者的治療效果評(píng)估是按照治療前后的兩者的STKl水平做比較，例如治療前的STKl與1和3個(gè)月的STKl比較，如果STKl的水平降低，第3個(gè)月的STKl降低到正常人水平，評(píng)估為治療有效反之，治療前的STKl與1和3個(gè)月的STKl比較，如果STKl的水平?jīng)]有降低或在升高，如果第2次的STKl水平與治療前STKl水平比例，超過2pM或不下降， 評(píng)估為治療效果不佳。這檢測(cè)癌癥患者STK水平，需要與與同年齡和同性別范圍的健康正常人的TKl水平比較。采用這方法對(duì)患者進(jìn)行定期檢測(cè)，可以監(jiān)控在整個(gè)治療的1-5年中， 以至十年中。因此，這發(fā)明給予醫(yī)生治療患者的早期信息。醫(yī)生將有可能使用不同治療方案，或改變治療方案，增加治療成功的機(jī)率，延長患者的生存和生活質(zhì)量。采用這方法評(píng)估患者的STKl的水平，同樣可能避免沒有成效的治療和不需要的治療。
和現(xiàn)有技術(shù)比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下
(1)本發(fā)明所制備的抗體具有純度高(> 99% )、產(chǎn)量高、高特異性無非特異性免疫交叉反應(yīng)且檢測(cè)精度在可達(dá)到0. IpM0受試者工作曲線，ROC曲線下面積值=0. 96 (ρ < 0.0001)，最大似然法比例⑴明顯升高為236. 49，特異性高達(dá)0.997，靈敏度高達(dá) 0. 737。
(2)TKl多表位抗體和TKl檢測(cè)系統(tǒng)，能真實(shí)的反映細(xì)胞的增殖度，治療前后的 STKl的高低變化與腫瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)度有關(guān)，因而能在早于影像學(xué)檢測(cè)的情況下，對(duì)治療中的腫瘤患者的治療效果進(jìn)行評(píng)估。
(3)穩(wěn)定性好，可于+4-8度冰箱保存一年以上且活性穩(wěn)定，更便于商業(yè)運(yùn)輸和保存并能降低試劑的潛在成本。


圖1 :ABmart抗體分析測(cè)試TKl蛋白圖譜。
圖2 (a) TKl抗體試劑盒點(diǎn)樣結(jié)果圖
(b) STKl點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)分析軟件測(cè)試TKl抗體試劑盒點(diǎn)樣數(shù)據(jù)
(C)STKl點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)分析軟件測(cè)試TKl抗體試劑盒點(diǎn)樣數(shù)據(jù)曲線圖
圖3 (a)為CEM TKl+和CEM ΤΚΓ的西部印染結(jié)果。
(b)為鑒定治療前淋巴癌患者，治療前/后的頭頸癌患者，健康人血清的西部印染結(jié)果。
圖4 =CEM TK1+、CEM TK1_、宮頸內(nèi)膜癌和結(jié)腸癌的TKl抗體染色結(jié)果
圖5 生物素-TKl-IgY抗體O步法)與三步法的比較圖
圖6 華瑞同康的抗TKl-IgY抗體與市售商用抗TKl-mAb抗體的實(shí)驗(yàn)比較圖
圖7 前列腺患者治療前和治療3-6個(gè)月的STKl水平的變化圖
具體實(shí)施例方式本發(fā)明將通過以下實(shí)施例作進(jìn)一步的描述
具體實(shí)施例方式
用以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述
實(shí)施例1 選擇特異性多表位抗原
如圖1所示，用軟件預(yù)測(cè)TKl無信號(hào)肽，無跨膜結(jié)構(gòu)。圖示單鏈TKl蛋白234氨基酸分布，指出氨基酸的親疏水性氨基酸分布較均勻。圖譜提供了可選方案1)從抗原性角度考慮，在藍(lán)色曲線峰值高的地方選擇的多肽較好；幻按照親水性氨基酸的分布，選擇親水區(qū)域；幻選擇負(fù)值所示疏水性較強(qiáng)的芳香族氨基酸。
實(shí)例2 選擇高靈敏度、高特異性多位點(diǎn)組合抗人TKl-IgY抗體的抗原
選擇制備高靈敏度、高特異性多位點(diǎn)組合抗人TKl-IgY抗體的抗原的選擇由于人宮頸癌TKl的部分序列有與其它蛋白具有相同的表位，得到的抗體可能與其它非特異性蛋白有交叉反應(yīng)，純化困難，按照已公布公知的TKl序列(蛋白質(zhì)文庫)，選擇暴露在蛋白質(zhì)表面的特別肽，按照用軟件預(yù)測(cè)得到的多肽的特異性程度大于85%的多肽片段列于下表， 篩選的TKl特異性強(qiáng)的抗原片段，設(shè)計(jì)了 TKlN端23肽，C端20肽和C端觀肽作為半抗原。
權(quán)利要求
1.一種高特異性、高靈敏度的抗人TKl抗體，其特征在于所述抗體選擇的TKl蛋白包括TK1蛋白質(zhì)，具有酶活性/非活性的單體、2或4聚體TKl蛋白質(zhì)，或TKl蛋白質(zhì)與其他分子形成的蛋白復(fù)合物或抑制物。
2.一種抗原決定簇，所述決定簇包括人宮頸癌細(xì)胞TKl單體N端23肽、C端20肽和C端觀肽，其氨基酸序列分別如下=N端23肽(3-25) :CINLPTVLPGSPSKTRGQIQVIL ； C 端 20 肽(206-225) CPVPGKPGEAVAARKLFAPQ 禾口 C 端 28 肽(198-225) AGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ。
3.一種利用權(quán)利要求2所述的抗原決定簇制備抗體的方法，其特征在于所述方法包括利用權(quán)力要求2所述的三段多肽免疫序列分別與KLH交聯(lián)，分別免疫母雞，提取卵黃液體， 采用水萃取制備抗體溶液，分別用所述的抗原決定簇制備的親和層析柱純化抗體，初篩出高特異性、高靈敏度的抗體。
4.一種利用權(quán)利要求3所述的方法所得的組合抗體制備的高特異性、高靈敏度的多表位抗人TKl-IgY抗體，其特征在于所述的抗體按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)所述23肽免疫的單一抗體為30 % 50 %，所述20肽免疫的單一抗體為25 % 40 %，觀肽免疫的單一抗體為20 % 30%。
5.一種利用權(quán)利要求3所述的方法所得的組合抗體制備的高特異性、高靈敏度的多表位抗人TKl-IGY抗體，其特征在于所述的抗體按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)所述23肽免疫的單一抗體為45 % 50 %，所述20肽免疫的單一抗體為30 % 35 %，觀肽免疫的單一抗體為25 % 30%。
6.一種用權(quán)利要求3至5中任一權(quán)利要求所述的抗體，其特征在與所述的抗體選擇的 TKl蛋白包括TKl蛋白質(zhì)，具有酶活性/非活性的單體、2或4聚體TKl蛋白質(zhì)，或TKl蛋白質(zhì)與其他分子形成的蛋白復(fù)合物或抑制物。
7.一種對(duì)權(quán)利要求4中所述的配位組合的抗人TKl-IgY抗體的檢測(cè)方法所述檢測(cè)方法包括硝酸纖維素膜點(diǎn)印染/免疫增強(qiáng)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)(ECL)的縮時(shí)檢測(cè)方法、抗體直接標(biāo)記生物素方法。
8.一種利用權(quán)力要求4至5中任一權(quán)利要求所述的組合抗人TKl-IgY抗體與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合用于評(píng)估腫瘤患者的治療效果的試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種人宮頸癌細(xì)胞TK1單體N端23肽、C端20肽和C端28肽組成的抗原決定簇制備的一種高特異性、高靈敏度的配位組合抗人TK1抗體以及其在腫瘤診斷中的應(yīng)用?？乖瓫Q定簇所包含的氨基酸序列為N端23肽(3-25)CINLPTVLPGSPSKTRGQIQVIL、C端20肽(206-225)CPVPGKPGEAVAARKLFAPQ、C端28肽(198-225)AGPDNKENCPVPGKPGEAVAARKLFAPQ。本發(fā)明同時(shí)提供了應(yīng)用該抗原制備抗體的方法，所提供的抗體試劑盒具有靈敏度高，特異性高，成本低廉等特點(diǎn)，通過增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光點(diǎn)印跡檢測(cè)法和免疫組化檢測(cè)及檢測(cè)試劑盒對(duì)治療中的腫瘤患者的治療效果進(jìn)行評(píng)估。
文檔編號(hào)G01N33/574GK102516390SQ20111035397
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月28日
發(fā)明者周際, 斯文·斯庫格, 李勁, 艾倫·何 申請(qǐng)人:周際, 斯文·斯庫格, 李勁, 艾倫·何