專利名稱：用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑及尿碘檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用檢測(cè)試劑及檢測(cè)方法，特別是一種用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑及尿碘檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
尿碘水平是評(píng)價(jià)人群碘攝入狀況的重要指標(biāo)，已被國(guó)內(nèi)外廣泛采用。當(dāng)前，碘缺乏和碘過(guò)量已成為人們同等關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。尿碘檢測(cè)已成為指導(dǎo)人群科學(xué)補(bǔ)碘的重要依據(jù)。尿碘檢測(cè)是一項(xiàng)復(fù)雜的超微量分析技術(shù)。目前，能夠較準(zhǔn)確測(cè)定尿碘且被國(guó)內(nèi)外采用的方法有如下三種(1).等離子色譜質(zhì)譜法(ICP-MS)，以下簡(jiǎn)稱方法(1)。該方法使用等離子色譜儀， 在近10000°C的高溫下將尿樣中的碘離子氣化。根據(jù)離子的荷質(zhì)比不同，通過(guò)離子色譜檢測(cè)器檢測(cè)碘的含量。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心及歐洲部分國(guó)家采用此方法。此方法準(zhǔn)確度高， 但儀器昂貴，約160萬(wàn)元人民幣/臺(tái)，不適合發(fā)展中國(guó)家廣泛采用。(2).砷鈰催化分光光度法，以下簡(jiǎn)稱方法O)。該方法根據(jù)碘催化砷鈰氧化還原反應(yīng)的原理，使用分光光度計(jì)動(dòng)態(tài)測(cè)定試液中剩余的高價(jià)態(tài)鈰的含量來(lái)間接測(cè)定碘。我國(guó)及世界上大多數(shù)國(guó)家采用此方法，是我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(WS/T 107-2006)。但該方法消解過(guò)程需要使用恒溫消解儀，反應(yīng)過(guò)程需要使用超級(jí)恒溫水浴箱，測(cè)定過(guò)程需要使用分光光度計(jì)，且操作時(shí)為了使每個(gè)樣品的反應(yīng)時(shí)間一致，需要準(zhǔn)確間隔30秒加一次試劑，測(cè)定時(shí)也同樣需要準(zhǔn)確間隔30秒用分光光度計(jì)測(cè)定一次，若錯(cuò)漏一次，則前功盡棄。因此，步驟繁瑣，人為負(fù)擔(dān)重，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)60份尿樣需時(shí)4-5小時(shí)，試劑用量大，特別是劇毒化學(xué)品砷的用量大(是本發(fā)明砷的用量的20倍)，對(duì)人體會(huì)造成傷害。(3).砷鈰催化計(jì)時(shí)測(cè)定法，以下簡(jiǎn)稱方法(3)。該方法是本發(fā)明人劉列鈞的已授權(quán)發(fā)明專利(專利號(hào)01133682. X)。該方法通過(guò)在常溫下使用強(qiáng)氧化劑消解尿樣，根據(jù)碘催化砷鈰氧化還原反應(yīng)的原理，使用指示劑指示反應(yīng)終點(diǎn)，用秒表記取反應(yīng)時(shí)間，根據(jù)反應(yīng)時(shí)間來(lái)計(jì)算尿碘含量。該方法對(duì)于醫(yī)院(特別是大型醫(yī)院)開(kāi)展尿碘檢測(cè)項(xiàng)目，因操作步驟全是手工操作，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，且需用肉眼判斷反應(yīng)終點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性不強(qiáng)，故大多數(shù)醫(yī)院還不愿接受。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能簡(jiǎn)捷快速準(zhǔn)確檢測(cè)出尿中碘含量的用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑及尿碘檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的由以下技術(shù)方案來(lái)完成本發(fā)明所用的檢測(cè)試劑盛裝于試劑盒內(nèi)，其試劑由以下主要試劑成分組成(1)消解液-過(guò)硫酸銨溶液，濃度范圍為0. 3-2. 0mol/Lo(2)試劑Rl-亞砷酸或三氧化二砷溶液，其中砷濃度范圍為0. 01-0. lmol/L。
(3)試劑硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液，其中鈰濃度范圍為0. 001-0. lmol/L。(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液，碘含量為0-500 μ g/ L0所述主要試劑成分及含量的優(yōu)選值為(1) ·消解液-過(guò)硫酸銨溶液{c [ (NH4) 2S208] = 1. 3mol/L}；(2) ·試劑 R1-亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3) ·試劑 R2-硫酸鈰銨溶液[c (Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4).系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300，400μβ/
L0運(yùn)用本發(fā)明的檢測(cè)試劑進(jìn)行尿碘檢測(cè)的方法，其主要步驟為1.選用上述檢測(cè)試劑；2.消解；準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各50-500 μ 1于試管中，各加100-1000 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100-110°c消解1小時(shí)；將消解完畢的樣品冷卻至室溫；3.設(shè)置生化分析儀測(cè)定參數(shù)，3. 1波長(zhǎng)單波長(zhǎng)，在400_600nm范圍內(nèi)選定一種波長(zhǎng)；3. 2樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品5-200 μ L，試劑R1 10-300 μ L， 試劑& 10-250 μ L，在各自的用量范圍內(nèi)選定一種用量；3. 3反應(yīng)溫度在30_40°C范圍內(nèi)選定一種溫度；3. 4分析方法終點(diǎn)法或速率法；3. 4. 1 一點(diǎn)終點(diǎn)法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，測(cè)定加入試劑&后反應(yīng)3-20min范圍內(nèi)選定的時(shí)間點(diǎn)的光密度值；3. 4. 2兩點(diǎn)速率法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測(cè)定加入試劑民后在3-15min 范圍內(nèi)選定的時(shí)間段的光密度值變化率；3. 5校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對(duì)數(shù)模式(l0git-l0g4p)或樣條函數(shù) (spline)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線；3. 6反應(yīng)方向負(fù)反應(yīng)；4.測(cè)定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑R1、試劑&分別放置于生化分析儀相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，按步驟“3”所述設(shè)置的生化分析儀測(cè)定參數(shù)，啟動(dòng)儀器進(jìn)行自動(dòng)測(cè)定。所述檢測(cè)方法中的樣品、試劑用量及生化分析儀測(cè)定參數(shù)的優(yōu)選值為(1)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300 μ 1于試管中，各加600 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中于100°c消解1小時(shí)；(2)設(shè)置生化分析儀測(cè)定參數(shù)，(2. 1)波長(zhǎng):405nm ；(2. 2)樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25 μ L，試劑R1 120 μ L，試齊[J& 36μ L ；
(2. 3)反應(yīng)溫度:37°C ；(2. 4)分析方法兩點(diǎn)速率法，加入試劑R1反應(yīng)Ο-aiiin，連續(xù)測(cè)定加入試劑&后 3min時(shí)間段內(nèi)的光密度值的變化率；(2. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對(duì)數(shù)模式(l0git-l0g4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明的原理使用過(guò)硫酸銨消解尿樣，分解尿樣中干擾碘測(cè)定的物質(zhì)，利用碘催化砷鈰反應(yīng)的原理，碘含量越高反應(yīng)速度越快，試液中剩余的黃色鈰G+)離子越少。使用生化分析儀在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間后測(cè)定試液中剩余的鈰G+)的光密度值(一點(diǎn)終點(diǎn)法)或在規(guī)定的時(shí)間段連續(xù)監(jiān)測(cè)試液的光密度值的變化(兩點(diǎn)速率法)，根據(jù)光密度值或光密度值變化率與碘含量成定量關(guān)系，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算尿碘濃度。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的消解尿樣使用控溫烤箱，樣品消化后再不需要任何中間步驟，直接使用生化分析儀自動(dòng)測(cè)定，人工操作只有加樣消化一步，其余操作步驟全由儀器完成(包括給出測(cè)定結(jié)果)。本發(fā)明與背景技術(shù)中的方法( 相比，使用的儀器和操作步驟完全不同，本發(fā)明的自動(dòng)化程度高，人為誤差小，試劑用量少，檢測(cè)時(shí)間短，60份樣品僅需1小時(shí)10分鐘。 其創(chuàng)新點(diǎn)在于通過(guò)調(diào)整主要反應(yīng)試劑砷鈰的比例，加之輔助試劑的作用，使碘的催化反應(yīng)速度按照生化分析儀固有的反應(yīng)曲線方程進(jìn)行，創(chuàng)建了砷鈰催化反應(yīng)與生化分析儀測(cè)定程序的良好接口，實(shí)現(xiàn)了利用生化分析儀能自動(dòng)快速檢測(cè)尿碘的目的。本發(fā)明與背景技術(shù)中的方法C3)相比，除使用的化學(xué)反應(yīng)原理相同外，其他各方面都不相同或類似。本發(fā)明主要是針對(duì)醫(yī)院開(kāi)展尿碘檢測(cè)項(xiàng)目而研制的，原因是生化分析儀是醫(yī)院常規(guī)使用的儀器，用于臨床其他多種生化指標(biāo)的檢測(cè)，普及程度高。本發(fā)明使用生化分析儀來(lái)檢測(cè)尿碘，拓展了該儀器的檢測(cè)項(xiàng)目，特別適合已備有生化分析儀的醫(yī)療單位使用，滿足了臨床檢測(cè)要求快速出結(jié)果和檢測(cè)自動(dòng)化的需求，具有廣泛的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但實(shí)施例不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。1.試劑組成，(1)消解液過(guò)硫酸銨溶液{c [(NH4)2S2O8] = 1. 3mol/L}；(2)試劑 R1 亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3)試劑 & 硫酸鈰銨溶液[C(Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300,400 μ g/L。2.消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300 μ 1于試管中，各加600 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100°c消解1小時(shí)；消解時(shí)電熱干燥箱頂部的通風(fēng)口應(yīng)敞開(kāi)，不開(kāi)鼓風(fēng)機(jī)；將消解完畢的樣品冷卻至室溫；3.使用日立7180型全自動(dòng)生化分析儀，設(shè)置如下測(cè)定參數(shù)，(1)波長(zhǎng):405nm ；(2)樣品、試劑量經(jīng)消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25 μ L，試劑R1 120 μ L，試齊[J& 36μ L ；(3)反應(yīng)溫度37°C ；(4)分析方法兩點(diǎn)速率法，加入試劑R1反應(yīng)2min，連續(xù)測(cè)定加入試劑&后^iin 時(shí)間段內(nèi)(設(shè)置的起點(diǎn)和終點(diǎn)分別為第7點(diǎn)和第20點(diǎn))的光密度值變化率；(5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對(duì)數(shù)模式(logit-log4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.測(cè)定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑R1、試劑&分別放置于日立7180型全自動(dòng)生化分析儀的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，啟動(dòng)儀器進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定的樣品是3份國(guó)家一級(jí)尿碘標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(已知碘含量的凍干尿樣)和1份使用國(guó)家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法(背景方法 2)定值的內(nèi)質(zhì)控尿樣，樣品來(lái)自中國(guó)疾病預(yù)防控制中心國(guó)家碘缺乏病參照實(shí)驗(yàn)室(北京)， 分別是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09108j (簡(jiǎn)稱“j”，碘含量68士9 μ g/L)、GBW09109f (簡(jiǎn)稱“f ”，碘含量 138 士 10 μ g/L)、GBW091101 (簡(jiǎn)稱“ 1”，碘含量206 士 10 μ g/L)和內(nèi)質(zhì)控樣(簡(jiǎn)稱“內(nèi)”，碘含量170士 10μ g/L)。本發(fā)明方法的測(cè)定結(jié)果表明，樣品的測(cè)定值均在給定值的不確定度范圍內(nèi)，且與給定值之間的相對(duì)誤差[(測(cè)定值-給定值)/給定值χ 100%]的絕對(duì)值遠(yuǎn)小于 10%，符合分析方法對(duì)準(zhǔn)確度的要求，說(shuō)明本方法是一個(gè)準(zhǔn)確的檢測(cè)尿碘的方法。見(jiàn)表1。表1生化分析儀測(cè)定的系列碘標(biāo)準(zhǔn)、樣品的光密度值變化率(-Δ A/t)及碘含量 (μ g/L)
權(quán)利要求
1.一種用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑，其特征在于檢測(cè)試劑盛裝于試劑盒內(nèi)，其試劑由以下主要試劑成分組成(1)消解液-過(guò)硫酸銨溶液，濃度范圍為0.3-2. Omol/L ；(2)試劑R1-亞砷酸或三氧化二砷溶液，其中砷濃度范圍為0.01-0. lmol/L ；(3)試劑&-硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液，其中鈰濃度范圍為0.001-0. lmol/L ；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液，碘含量為0-500μ g/L。
2.如權(quán)利要求1所述的用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑，其特征在于所述主要試劑成分及含量的優(yōu)選值為(1)消解液-過(guò)硫酸銨溶液{c[(NH4)2S2OJ = I- 3mol/L}；(2)試劑R1-亞砷酸溶液[c (H3AsO3) = 0. 037mol/L]；(3)試劑硫酸鈰銨溶液[C(Ce4+) = 0. 0076mol/L]；(4)系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘酸鉀溶液，碘含量分別為0，50，100，200，300,400μ g/L。
3.一種用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)方法的主要步驟為(1)選用上述檢測(cè)試劑；(2)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各20-500 μ 1于試管中，各加100-1000 μ 1消解液，置于電熱干燥箱中100-110°C消解1小時(shí)；將消解完畢的樣品取出，冷卻至室溫；(3)設(shè)置生化分析儀測(cè)定參數(shù)，(3. 1)波長(zhǎng)單波長(zhǎng)，在400-600nm范圍內(nèi)選定一種波長(zhǎng)；(3. 2)樣品、試劑量取消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品5-200 μ L，試劑Ii1 10-300 μ L， 試劑& 10-250 μ L，在各自的用量范圍內(nèi)選定一種用量； (3. 3)反應(yīng)溫度在30-40°C范圍內(nèi)選定一種溫度； (3. 4)分析方法終點(diǎn)法或速率法；(3. 4. 1) 一點(diǎn)終點(diǎn)法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，測(cè)定加入試劑&后反應(yīng)3-20min范圍內(nèi)選定的時(shí)間點(diǎn)的光密度值；(3. 4. 2)兩點(diǎn)速率法加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測(cè)定加入試劑&后在3-15min范圍內(nèi)選定的時(shí)間段內(nèi)的光密度值變化率；(3. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對(duì)數(shù)模式(l0git-l0g4p)或樣條函數(shù) (spline)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3.6)反應(yīng)方向負(fù)反應(yīng)；(4)測(cè)定，將消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品、試劑隊(duì)、試劑&分別放置于生化分析儀相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)位、樣品位和試劑位中，按步驟C3)所述設(shè)置的生化分析儀測(cè)定參數(shù)，啟動(dòng)儀器進(jìn)行測(cè)定。
4.如權(quán)利要求3所述的用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的檢測(cè)方法，其特征在于所述檢測(cè)方法中的樣品、試劑用量及生化分析儀測(cè)定參數(shù)的優(yōu)選值為(1)消解，準(zhǔn)確吸取系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、尿樣各300μ 1于試管中，各加600μ 1消解液，置于電熱干燥箱中于100°C消解1小時(shí)；(2)設(shè)置生化分析儀測(cè)定參數(shù)， (2. 1)波長(zhǎng):405nm ；(2.2)樣品、試劑量消解后的系列碘標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品各25yL，試劑R1 120yL，試劑& 36μ L ；(2. 3)反應(yīng)溫度37°C ；(2. 4)分析方法兩點(diǎn)速率法，加入試劑R1反應(yīng)0-2min，連續(xù)測(cè)定加入試劑&后^iin 時(shí)間段內(nèi)的光密度值的變化率；(2. 5)校準(zhǔn)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法，使用儀器上的對(duì)數(shù)模式(l0git-l0g4p)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于生化分析儀定量檢測(cè)尿碘的試劑及尿碘檢測(cè)方法。該試劑由以下主要試劑成分組成消解液-過(guò)硫酸銨溶液；試劑R1-亞砷酸或三氧化二砷溶液；試劑R2-硫酸鈰銨或硫酸鈰溶液；碘標(biāo)準(zhǔn)溶液-碘化鉀(鈉)或碘酸鉀(鈉)溶液。該檢測(cè)方法的主要步驟為選用上述檢測(cè)試劑；消解尿樣；設(shè)置生化分析儀參數(shù)；用生化分析儀測(cè)定。本發(fā)明的檢測(cè)方法自動(dòng)化程度高，人為誤差小，試劑用量少，檢測(cè)時(shí)間短。使用生化分析儀來(lái)檢測(cè)尿碘，拓展了該儀器的檢測(cè)項(xiàng)目，特別適合已備有生化分析儀的醫(yī)療單位使用，滿足了臨床檢測(cè)要求快速出結(jié)果和檢測(cè)自動(dòng)化的需求。
文檔編號(hào)G01N33/52GK102495203SQ201110354278
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月10日
發(fā)明者劉列鈞 申請(qǐng)人:武漢眾生生化技術(shù)有限公司