專利名稱：一種養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留的測定方法，具體是對牛、 羊、豬、雞、魚或蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境的土壤或水體中喹諾酮類藥物殘留量的測定方法。

發(fā)明內(nèi)容
目前在家畜、水產(chǎn)，特別是牛、羊、豬、雞、魚或蝦養(yǎng)殖過程中，存在不規(guī)范使用甚至大量濫用喹諾酮類藥物的情況，因動物的排泄物等原因，喹諾酮類藥物不可避免地在相應(yīng)的養(yǎng)殖環(huán)境和屠宰環(huán)境的土壤或水體中存在藥物殘留。喹諾酮類藥物在環(huán)境中的殘留首先會破壞生態(tài)環(huán)境，其次在環(huán)境中殘留后，經(jīng)與微生物作用后，環(huán)境中易產(chǎn)生耐藥菌株，從而加速了動物自身對喹諾酮類藥物的耐藥性，進而又影響喹諾酮類藥物的用量，形成惡性循環(huán)。為確保環(huán)境水和土壤的安全性，需針對水和土壤進行喹諾酮類藥物殘留的檢測，但目前喹諾酮類藥物殘留主要都是針對動物源性食品本身的肌肉組織等作為檢測對象，尚沒有適合水體或土壤中藥物殘留的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可有效地檢測牛、羊、豬、雞、魚和蝦養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留量的分析檢測方法，本方法對樣品的前處理過程快速簡便，檢測結(jié)果可靠靈敏。本發(fā)明方法包括以下步驟(1) 土壤樣本避光靜置30min后加入甲醇-水溶液，混勻，離心，移取上清液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，渦旋混勻，加水定容得樣品提取液，或水樣與等體積的PBS混合后加水定容，得樣品提取液；將樣品提取液加入到免疫親和柱(IAC)，自然流出；依次用 PBS、超純水洗滌IAC柱；甲醇洗脫，流出的洗脫液用氮氣吹干，再用甲酸-水溶液復(fù)溶，最后過0. 22 μ m微孔濾膜；(2)用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(3)將測得的色譜峰與已知喹諾酮類藥物的標(biāo)準色譜峰對照，準定喹諾酮類藥物的具體品種及殘留量。所述的免疫親和柱預(yù)先用15mL PBS平衡處理，流速為lml/min。本發(fā)明用免疫親和柱對水或土壤樣品進行前處理，再以高效液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用的方法測定養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物的殘留量。樣品前處理過程快速簡便，處理后的樣品檢測結(jié)果可靠靈敏。
具體實施例方式(1)標(biāo)準溶液的配制喹諾酮類藥物標(biāo)準品用體積濃度為30%的甲醇溶液配制成濃度為lmg/mL的標(biāo)準儲備溶液，4°c保存；再用甲醇溶液逐級稀釋成濃度梯度為1 μ g/mL的系列標(biāo)準工作溶液。(2)樣品前處理
A. 土壤樣本的提取準確稱取2g 土壤樣本，避光靜置30min后，加入SmL甲醇-水(4 l，v/v)提取溶液，渦旋lmin，振蕩20min，3500rpm下離心，移取上清液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液， 渦旋混勻，用水稀釋至40mL，得樣品提取液。B.水樣本的提取準確量取IOOmL自來水，避光靜置30min后，取IOmL水樣與等體積的PBS混合。C.過IAC柱預(yù)處理IAC 柱平衡:15mL PBSr1^iI, lml/min ；上樣樣品提取液加入到IAC柱，在重力作用下流出；洗滌20mL PBS、30mL超純水洗滌IAC柱；洗脫4mL甲醇洗脫，自然重力下流出，氮氣吹干，使用500 μ L甲酸-水溶液復(fù)溶， 過0. 22um微孔濾膜。(3)液相_質(zhì)譜/質(zhì)譜測定經(jīng)前處理的樣品提取液，進液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀(HPLC-MS/MS)測定HPLC-MS/MS儀器參數(shù)與測定條件如下A.儀器參數(shù)與測定條件如下表
權(quán)利要求
1.一種養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留的測定方法，其特征是包括以下步驟(1)土壤樣本避光靜置30min后加入甲醇-水溶液，混勻，離心，移取上清液，重復(fù)提取一次，合并兩次上清液，渦旋混勻，加水定容得樣品提取液，或水樣與等體積的PBS混合后加水定容，得樣品提取液；將樣品提取液加入到免疫親和柱，自然流出；依次用PBS、超純水洗滌免疫親和柱，甲醇洗脫，流出的洗脫液用氮氣吹干，再用甲酸-水溶液復(fù)溶，最后過 0.22 um微孔濾膜；(2)用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；(3)將測得的色譜峰與已知喹諾酮類藥物的標(biāo)準色譜峰對照，準定喹諾酮類藥物的具體品種及殘留量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的所述的養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留的測定方法，，其特征是免疫親和柱預(yù)先用15mL PBS平衡處理，流速為lml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種一種養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中喹諾酮類藥物殘留的測定方法，從牛、羊、豬、雞、魚或蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境采集水體或土壤的樣本，通過免疫親和柱處理，過0.22μm有機微孔濾膜，用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進行分析測試，測得樣品的色譜峰；將測得的色譜峰與各已知喹諾酮類藥物的標(biāo)準色譜峰對照，準定所檢出藥物的具體品種。本方法用于養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中的水體或土壤的樣中喹諾酮類藥物殘留的測定，樣品的前處理過程快速簡便，處理后的樣品檢測結(jié)果可靠靈敏。
文檔編號G01N30/02GK102507787SQ20111036374
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者丁濤, 張睿, 蔣原, 薛峰 申請人:江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心