專利名稱:定量檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域的方法,具體是涉及一種定量檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法。
背景技術(shù):
玉米赤霉烯酮毒素(karalenone,ZEN)是鐮刀菌在一定濕度和溫度條件下繁殖所產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物。玉米赤霉烯酮毒素可存在于玉米、小麥、大麥、高粱、黑麥等谷物, 也可存在于食用含^N飼料的動(dòng)物組織中,包括牛奶、雞蛋等。玉米赤霉烯酮毒素與自發(fā)性乳腺癌,輸卵管和子宮水腫、增生,精細(xì)胞畸變、凋亡等疾病有關(guān)。玉米赤霉烯酮毒素具有分布廣泛、殘留時(shí)間長(zhǎng)、難處理、和其他毒素一起有增強(qiáng)毒性的現(xiàn)象。加入WTO之后,農(nóng)產(chǎn)品及相關(guān)食品的國(guó)際貿(mào)易量日益增加,隨之對(duì)進(jìn)出口產(chǎn)品的生物安全性的要求也越來(lái)越高,為了保證這類產(chǎn)品的順利上市和食用者的健康,出入境檢疫、海關(guān)、生產(chǎn)企業(yè)、監(jiān)督部門等部門迫切需要一種快速簡(jiǎn)便的玉米赤霉烯酮毒素檢測(cè)方法。
膠體金標(biāo)記技術(shù)是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)的一種免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、單寧酸/檸檬酸鈉和檸檬酸三鈉等作用下,聚合成特定大小的金顆粒,由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱為膠體金。 膠體金標(biāo)記,實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。吸附機(jī)理是膠體金顆粒表面的負(fù)電荷,與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)因靜電作用而形成牢固結(jié)合。這種球型的膠體金顆粒具有高電子密度,能夠?qū)Χ喾N生物高分子物質(zhì)如葡萄球菌、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、BSA(牛血清白蛋白)等非共價(jià)結(jié)合,形成可見(jiàn)的紫紅色,使其成為免疫反應(yīng)的優(yōu)良標(biāo)記物,因此廣泛應(yīng)用于各種物質(zhì)的檢測(cè)。
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)由于液相中的抗原(或抗體)需經(jīng)擴(kuò)散才能與固相上的抗原或抗體反應(yīng),需較長(zhǎng)時(shí)間,各個(gè)步驟需徹底地洗滌,并且需要特定的酶和底物顯色,因此耗時(shí)長(zhǎng),程序繁瑣;高效液相色譜法因其對(duì)檢測(cè)樣品、儀器及操作人員的要求,不利于基層常規(guī)檢測(cè)使用。膠體金免疫層析法能克服上述方法的不足,膠體金免疫層析定量試驗(yàn)法利用抗原抗體反應(yīng)原理,膠體金標(biāo)記示蹤物與固定在膜上的抗原或抗體形成復(fù)合物被截留而顯色,不需要特定的酶和底物顯色,也不需要抗原抗體之間的較長(zhǎng)時(shí)間的物理吸附,而根據(jù)顯色深淺判定陰陽(yáng)性結(jié)果并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出具體濃度,安全有效,簡(jiǎn)單方便。
膠體金免疫層析試驗(yàn)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的膠體金標(biāo)記。 固定在NC膜上的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,膠體金標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又有示蹤的功能。在測(cè)定時(shí),受檢樣品(測(cè)定其中的抗體或抗原)通過(guò)毛細(xì)作用向前移行與金標(biāo)墊上的抗原或抗體起反應(yīng)。繼續(xù)向前移行,與固定在T線(檢測(cè)線)抗原或抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物被截留而顯色,約為一條寬為Imm的棕紅色條帶,多余的金標(biāo)抗體繼續(xù)向前移動(dòng),與固定在C線(質(zhì)控線)的二抗結(jié)合被截留而顯色,約為一條寬為Imm 的棕紅色條帶。此時(shí)T線形成金標(biāo)復(fù)合物與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,故可根據(jù) T線呈現(xiàn)的顏色深淺進(jìn)行定量分析。
關(guān)于玉米赤霉烯酮毒素的檢測(cè)國(guó)內(nèi)外已建立了多種方法。目前檢測(cè)ZEN的方法主要為高效液相色譜法(HPLC),氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MQ,液譜和質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)。 然而,這些方法需要對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行嚴(yán)格的預(yù)處理,還需要高效液相色譜儀等貴重儀器,同時(shí)要求有專業(yè)的操作人員,不利于現(xiàn)場(chǎng)常規(guī)檢測(cè)使用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種快速定量檢測(cè)玉米赤霉烯酮毒素的方法。本發(fā)明檢測(cè)對(duì)象單一且針對(duì)性強(qiáng),準(zhǔn)確率高,檢測(cè)速度快,所需時(shí)間短,只需20 分鐘,不需經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)人員就可使用本發(fā)明方法來(lái)檢測(cè),滿足糧食儲(chǔ)存銷售機(jī)構(gòu)、出入境、海關(guān)等檢驗(yàn)部門快速、正確地判斷ZEN含量的要求,并且便于基層推廣和運(yùn)用。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,該方法包括如下步驟
步驟一,將^N半抗原分別與BSA和OVA偶聯(lián),得到偶聯(lián)物^N-BSA和^N-OVA ;
步驟二,用^N-OVA作為免疫原,采用常規(guī)方法制備抗^N的單克隆抗體;
步驟三,制備膠體金,用該膠體金標(biāo)記抗^N的單克隆抗體,將標(biāo)記后的單克隆抗體噴涂到金標(biāo)墊上;
步驟四,在硝酸纖維素膜上進(jìn)行觀N-BSA、兔抗鼠抗體的噴涂,之后將所述噴涂后的硝酸纖維素膜放入牛血清白蛋白溶液中封閉;
步驟五,將所述金標(biāo)墊、所述噴涂后的硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊組裝成試紙條,干燥;
步驟六,根據(jù)已知不同濃度^NS準(zhǔn)品的顯色值,繪制^N濃度與顯色值的標(biāo)準(zhǔn)曲線.一入 ,
步驟七,取待測(cè)樣品用甲醇提取,離心,取上清,并用稀釋液稀釋,根據(jù)該待測(cè)樣品的甲醇提取液的顯色值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到該待測(cè)樣品提取液中的ZEN濃度。
優(yōu)選地,所述步驟三中,所述膠體金的顆粒直徑為25nm。
優(yōu)選地,所述步驟三中,所述膠體金的制備包括如下步驟將IOOml的0.01% HAuCl4溶液加熱至沸騰,之后加入Iml的1 %檸檬酸三鈉溶液,煮沸7 lOmin,最后加三蒸水至100ml,制備得到25nm的膠體金溶液,所述百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量體積百分?jǐn)?shù)。
優(yōu)選地,所述步驟三中,所述抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體在被標(biāo)記之前經(jīng)過(guò)透析除鹽處理。
優(yōu)選地,所述步驟三中,所述標(biāo)記包括如下步驟在攪拌的條件下,向膠體金溶液中加入抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體,使其終濃度達(dá)到3. 6 μ g/mL,室溫下孵育15min,用 0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH為6. 5,然后加入10% BSA至BSA的終濃度為0. 1%, IOOOOrpm離心20min,棄上清,再用含1 % BSA的2mM pH為8. 0的硼酸鹽緩沖液洗滌,共洗滌3次,最后加入含4%蔗糖、6%海藻糖、BSA和疊氮鈉分別為和0. 05%的2mM pH為 7. 4的硼酸鹽緩沖液中,即完成標(biāo)記,所述百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量體積百分?jǐn)?shù)。
優(yōu)選地,所述步驟五中,所述干燥為37°C烘箱干燥。
優(yōu)選地,所述步驟七中,所述甲醇為80 %的甲醇,所述百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)。
優(yōu)選地,所述步驟七中,所述離心為2500g離心15分鐘。
優(yōu)選地,所述步驟七中,所述稀釋液為含10%甲醇的0. 05M pH為7. 4的PBST,所述百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有如下的有益效果待測(cè)樣品若有ZEN毒素,由于毛細(xì)效應(yīng)向前層析移動(dòng),樣品液中的ZEN與金標(biāo)單克隆抗體形成的復(fù)合物,競(jìng)爭(zhēng)了檢測(cè)線上抗原與金標(biāo)單克隆抗體結(jié)合的機(jī)會(huì),所以膠體金不能或僅少量能被檢測(cè)線上的抗原截流而沉積故而以檢測(cè)線顯色強(qiáng)度來(lái)判定ZEN含量,并可精確定量,由此判定谷物、食品、動(dòng)物產(chǎn)品等檢測(cè)樣品中^NW含量。本發(fā)明檢測(cè)對(duì)象單一且針對(duì)性強(qiáng),準(zhǔn)確率高。檢測(cè)速度快,所需時(shí)間短,只需20分鐘、不需經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)人員就可使用本發(fā)明方法來(lái)檢測(cè),滿足糧食儲(chǔ)存銷售機(jī)構(gòu)、出入境、海關(guān)等檢驗(yàn)部門快速、正確地判斷ZEN毒素含量的要求,并且便于基層推廣和運(yùn)用。
圖1為本發(fā)明實(shí)施例試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖2為本發(fā)明實(shí)施例試紙條的結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施,給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程,但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。
下面實(shí)施例中,未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法,通常按照常規(guī)條件,或按照制造廠商所建議的條件。本發(fā)明中,BSA為牛血清白蛋白;OVA為卵清白蛋白;ZEN為玉米赤霉烯酮; ZEN-BSA和ZEN-OVA分別表示^N與BSA、OVA的偶聯(lián)物,PBST代表在PBS中加入Twen-20 配置而成的緩沖液,這些技術(shù)術(shù)語(yǔ)都是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
實(shí)施例
1、抗原的制備
(1)玉米赤霉烯酮包被抗原的制備
取0. 33ml (3mg/ml) ZEN,混合于1. 2ml吡啶中,加入^ig 0-羧甲基羥胺,室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24h ;將溶液真空干燥后,加入蒸餾水,并使其溶解,調(diào)整pH至8. 0 ;未反應(yīng)的ZEN 用苯抽提除去(3ml苯,共抽提3次),除去苯相,保留水相。水相調(diào)pH至3. 0,用乙酸乙酯抽提(IOml乙酸乙酯,共抽提4次),抽出酯相,棄水相。酯相用無(wú)水硫酸鈉濾過(guò)后吹干。吹干后的結(jié)晶物溶于0. 5ml堿性氧化鋁處理過(guò)的二氧六環(huán)中;稱取20mgBSA溶于0. 7ml 0. 05mol/ L (pH7. 2)的PBS中;之后,將兩溶液于4°C下緩慢混合,得溶液a ;取Img NHS和^ig DCC溶于0. 2ml 二氧六環(huán)中得溶液b,并緩慢將溶液b滴加到溶液a中,進(jìn)而得到溶液C。將溶液 c室溫下攪拌反應(yīng)16h,調(diào)pH至6. 0,通風(fēng)櫥中吹干,緩慢滴加DCC溶液(^igDCC溶于0. 2ml 二氧六環(huán)中而得),室溫下攪拌反應(yīng)48h,最后用PBS透析2 3d,-20°C保存,得^N-BSA完全抗原。
(2)玉米赤霉烯酮免疫抗原的制備
玉米赤霉烯酮免疫抗原的制備方法基本同玉米赤霉烯酮包被抗原的制備方法,所不同的地方在于將BSA替換為0VA,制備得到^N-OVA完全抗原。
2、抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體的制備
將^N-OVA完全抗原溶解于PBS中,測(cè)定完全抗原中載體蛋白的濃度。將抗原與等量的弗氏完全佐劑充分乳化,皮下注射免疫6周齡Balb/C小鼠,每只0. Iml ;二免兩周后, 改用弗氏不完全佐劑,用同樣的方法和劑量,進(jìn)行免疫;三免,操作同二免。免疫5天后眼底靜脈采血測(cè)效價(jià),效價(jià)達(dá)到1 10000以上時(shí)加強(qiáng)免疫腹腔注射不加佐劑的抗原0.1ml, 三天后處死小鼠,取其脾臟,與骨髓瘤細(xì)胞融合。用間接ELISA方法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞。 通過(guò)小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞來(lái)大量制備小鼠腹水,腹水經(jīng)過(guò)過(guò)濾、離心初步純化后,采用辛酸法和親和層析法純化腹水,得玉米赤霉烯酮單克隆抗體的制備。
3、膠體金的制備
先將IOOml的0. 001% (ff/V) HAuCl4溶液加熱至沸騰,迅速加入Iml的1 % (W/V) 檸檬酸三鈉水溶液,開(kāi)始有些藍(lán)色,然后淺藍(lán)、藍(lán)色,再加熱出現(xiàn)紅色,煮沸7 IOmin出現(xiàn)透明的酒紅色,最后加三蒸水至100ml,就這樣制備了 25nm的膠體金溶液。然后用電鏡鏡檢,確保制備的金顆粒盡量使其大小一致,均勻,顆粒直徑在25nm左右。
4、單克隆抗體的標(biāo)記
待標(biāo)記的抗體蛋白用0. 005mol/L的氯化鈉溶液透析48小時(shí)除鹽,然后用制備好的25nm的膠體金來(lái)標(biāo)記多克隆抗體蛋白。具體步驟為①向攪拌中的膠體金溶液里迅速加入抗體蛋白使其終濃度達(dá)到3. 6 μ g/mL,室溫下孵育15min ;②用0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)金溶液的PH為6. 5,然后加入10% (ff/V)BSA至終濃度0. 來(lái)穩(wěn)定膠體金溶液,反應(yīng)5min ; ③IOOOOrpm離心20min,棄上清,再用含1 % (ff/V) BSA的2mM pH為8. 0的硼酸鹽緩沖液洗滌,共洗滌3次;④最后加入含4% (W/V)蔗糖、6% (W/V)海藻糖、BSA和疊氮鈉分別為 (W/V)和0.05% (W/V)的2mM硼酸鹽緩沖液(pH 7.4)中,4°C儲(chǔ)存?zhèn)溆谩R陨喜僮髦袘?yīng)注意,一切溶液中不應(yīng)含雜質(zhì)微粒,可用高速離心或微孔濾膜預(yù)處理。
5、膠體金試紙條的組裝
將標(biāo)記好的單克隆抗體蛋白噴涂到金標(biāo)墊上,噴涂^N-BSA偶聯(lián)抗原到硝酸纖維素膜上的T線,噴涂兔抗鼠的單克隆抗體到硝酸纖維素膜上的C線,之后將硝酸纖維素膜放入牛血清白蛋白溶液中封閉。將金標(biāo)墊、噴涂后的硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊組裝成試紙條,37°C烘箱干燥。試紙條的組裝順序如圖1所示,試紙條的組成由下到上依次包括塑料底襯1、硝酸纖維素膜2、金標(biāo)墊3、樣品墊4、吸水墊5,其中塑料底襯1的作用是提供組裝平臺(tái),硝酸纖維素膜2上具有以兔抗鼠單克隆抗體噴涂的C線,以^N-BSA噴涂的T線,金標(biāo)墊3上加有金標(biāo)抗體,樣品墊4提供了待測(cè)樣品加入的位置。
6、膠體金試紙條的使用及結(jié)果判定
取ZEN標(biāo)準(zhǔn)品,分別稀釋為l、2、4、8、16、32ng/ml溶液,并同時(shí)配制空白溶液,取 250 μ 1滴入試紙條樣品槽中;取0. 75g待檢樣品用:3ml 80%甲醇(甲醇水=80 20) 提取,2500g離心15min,取上清,并用稀釋液稀釋2. 4倍,取250 μ 1滴入試紙條樣品槽中, 20min后將顯色完成的標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品的試紙條放入讀條儀中,讀取C、T線的顯色值,并記錄;利用Excel軟件繪制^N標(biāo)準(zhǔn)品濃度與顯色值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測(cè)樣品顯色值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,得到ZEN濃度結(jié)果;將此結(jié)果X稀釋因子0X2.4),即為樣品中所含ZEN濃度(μ g/kg)ο
把待檢樣品滴入試紙條的樣本槽中,由于毛細(xì)效應(yīng),液體的層析方向向上,對(duì)于層析的結(jié)果見(jiàn)圖2,其中a為樣品中 N含量超過(guò)32ng/ml時(shí)的結(jié)果示意圖;bl_b4分別為^N 濃度分別為l、4、8、32ng/ml時(shí)的結(jié)果示意圖。
鑒定方法具體為
若在C線上出現(xiàn)紅色條帶,則判定試紙條測(cè)試結(jié)果有效;
若在T線和C線上均出現(xiàn)棕紅色條帶,將T線顯色值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中;
若T線顯色值等于或大于空白溶液的值,則樣品中不含或含有少于lng/ml的 ZEN ;
若T線顯色值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),則樣品中含有的ZEN濃度可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出;
若T線顯色值為0,則待測(cè)樣品中ZEN含量超出32ng/ml。
可以看出,本實(shí)施例的方法可直接定量檢測(cè)樣品中的^N,不需要專業(yè)培訓(xùn),操作方便、快速,20分鐘即可獲得結(jié)果,本發(fā)明滿足糧食儲(chǔ)存銷售機(jī)構(gòu)、出入境、海關(guān)等檢驗(yàn)部門快速、正確地判斷^N含量的要求,并且便于基層推廣和運(yùn)用。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,包括如下步驟步驟一,將^N半抗原分別與BSA和OVA偶聯(lián),得到偶聯(lián)物^N-BSA和^N-OVA ;步驟二,用^N-OVA作為免疫原,采用常規(guī)方法制備抗^N的單克隆抗體;步驟三,制備膠體金,用該膠體金標(biāo)記抗^N的單克隆抗體,將標(biāo)記后的單克隆抗體噴涂到金標(biāo)墊上;步驟四,在硝酸纖維素膜上進(jìn)行觀N-BSA、兔抗鼠抗體的噴涂,之后將所述噴涂后的硝酸纖維素膜放入牛血清白蛋白溶液中封閉;步驟五,將所述金標(biāo)墊、所述噴涂后的硝酸纖維素膜、樣品墊和吸水墊組裝成試紙條, 干燥;步驟六,根據(jù)已知不同濃度^NS準(zhǔn)品的顯色值,繪制^N濃度與顯色值的標(biāo)準(zhǔn)曲線;步驟七,取待測(cè)樣品用甲醇提取,離心,取上清,并用稀釋液稀釋,根據(jù)該待測(cè)樣品的甲醇提取液的顯色值,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到該待測(cè)樣品提取液中的ZEN濃度。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟三中,所述膠體金的顆粒直徑為25nm。
3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟三中,所述膠體金的制備包括如下步驟將IOOml的0. 01% HAuCl4溶液加熱至沸騰,之后加入Iml的檸檬酸三鈉溶液,煮沸7 lOmin,最后加三蒸水至100ml,制備得到25nm的膠體金溶液,所述百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量體積百分?jǐn)?shù)。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟三中,所述抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體在被標(biāo)記之前經(jīng)過(guò)透析除鹽處理。
5.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟三中,所述標(biāo)記包括如下步驟在攪拌的條件下,向膠體金溶液中加入抗玉米赤霉烯酮的單克隆抗體,使其終濃度達(dá)到3. 6 μ g/mL,室溫下孵育15min,用0. lmol/L K2CO3調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH為 6. 5,然后加入10% BSA至BSA的終濃度為0.1%, IOOOOrpm離心20min,棄上清,再用含1 % BSA的2mM pH為8. 0的硼酸鹽緩沖液洗滌,共洗滌3次,最后加入含4%蔗糖、6%海藻糖、 BSA和疊氮鈉分別為1%和0. 05%的2mM pH為7. 4的硼酸鹽緩沖液中,即完成標(biāo)記,所述百分?jǐn)?shù)為質(zhì)量體積百分?jǐn)?shù)。
6.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟五中,所述干燥為37 °C烘箱干燥。
7.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟七中,所述甲醇為80%的甲醇,所述百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)。
8.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟七中,所述離心為2500g離心15分鐘。
9.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,其特征在于,所述步驟七中,所述稀釋液為含10%甲醇的0. 05M PH為7. 4的PBST,所述百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種定量檢測(cè)玉米赤霉烯酮的方法,包括如下步驟1、制備偶聯(lián)物ZEN-BSA和ZEN-OVA;2、制備抗ZEN的單克隆抗體;3、制備膠體金,標(biāo)記抗ZEN的單克隆抗體;將標(biāo)記后的單克隆抗體噴涂到金標(biāo)墊上;4、在硝酸纖維素膜上進(jìn)行點(diǎn)樣;5、組裝成試紙條;6、繪制ZEN濃度與顯色值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測(cè)樣品的顯色值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,得到待測(cè)樣品中ZEN的含量。本發(fā)明檢測(cè)對(duì)象單一且針對(duì)性強(qiáng),準(zhǔn)確率高,檢測(cè)速度快,所需時(shí)間短,不需經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)人員就可使用本發(fā)明方法來(lái)檢測(cè),滿足糧食儲(chǔ)存銷售機(jī)構(gòu)、出入境、海關(guān)等檢驗(yàn)部門快速、正確地判斷玉米赤霉烯酮含量的要求,并且便于基層推廣和運(yùn)用。
文檔編號(hào)G01N33/531GK102520177SQ20111040271
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月7日
發(fā)明者嚴(yán)亞賢, 孫建和, 王元?jiǎng)P 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)