專利名稱：一種檢測心肌肌鈣蛋白i的方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，以及運(yùn)用該方法制備的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
目前急性心肌梗死(AMI)檢測的主要生化標(biāo)志物有肌酸磷酸激酶同工酶 (CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)和心肌肌鈣蛋白I (cTnl)等。CK-MB、 LDH廣泛分布于體內(nèi)，因此特異性較低，許多疾病都可導(dǎo)致它們的升高，且在血液中維持時間較短；cTnT與骨骼肌肌鈣蛋白T(sTnT)同源性很高，容易發(fā)生交叉反應(yīng)。而cTnl具有特異性高、出現(xiàn)時間早、敏感性高和在血液中持續(xù)時間長等優(yōu)點(diǎn)，可作為AMI早期診斷指標(biāo)， 已經(jīng)被證實(shí)為心肌損傷最特異、最敏感的血清標(biāo)志物之一。目前影響cTnl測定精確度的因素有以下幾方面(l)cTnl的存在形式不同cTnl 抗體識別游離形式cTnl和復(fù)合物形式cTnl的能力不同；0)cTnI的磷酸化cTnI的第22 位和第23位絲氨酸殘基可以在蛋白激酶A作用下發(fā)生磷酸化，形成四種磷酸化形式(未磷酸化態(tài)，22Ser磷酸化態(tài)，23Ser磷酸化態(tài)，22、23Ser均磷酸化態(tài))共同存在于細(xì)胞中，磷酸化改變了 cTnl分子的構(gòu)象，影響某些cTnl抗體的識別能力；( cTnl的氧化CTnI的第80 位和第97位胱氨酸殘基會發(fā)生氧化，從而影響某些cTnl抗體的識別能力；(4) cTnl的易水解性cTnI易受蛋白水解酶作用，且不同部分受影響的程度有差別，中心區(qū)域(第33位至 110位氨基酸)穩(wěn)定性較高，N端和C端易被降解，產(chǎn)生包含不同抗原表位的cTnl蛋白酶解片段，不同cTnl抗體對不同降解表位的結(jié)合能力不同；( 干擾物質(zhì)類風(fēng)濕性因子(RF)、 嗜異性抗體會造成假陽性結(jié)果，自身抗體、膽紅素和血紅蛋白會造成假陰性結(jié)果；(6)抗凝劑乙二胺四乙酸(EDTA)是Ca2+螯合劑，可使cTnl-cTnC復(fù)合物解離，從而影響某些抗體的結(jié)合；肝素帶負(fù)電荷，易與帶正電荷(Pl為9. 87)的cTnl結(jié)合形成復(fù)合物，從而影響某些抗體的結(jié)合。高精確度cTnl檢測要求所選用的抗體需滿足下列條件(1)針對的抗原表位位于穩(wěn)定的中間區(qū)域，不受水解影響；( 特異性高，和快骨骼肌型肌鈣蛋白、慢骨骼肌型肌鈣蛋白不發(fā)生交叉反應(yīng)，即所針對的抗原表位應(yīng)針對無同源性區(qū)域；C3)受cTnl的存在形式、 磷酸化、氧化的影響較?。?4)受經(jīng)常出現(xiàn)的血液和血漿成分干擾較小。目前商業(yè)化的試劑盒大都采用夾心免疫法，通常使用2 3個單克隆抗體，組合形式為1 2個捕獲抗體加1個檢測抗體或者1個捕獲抗體加1 2個檢測抗體。但是這樣的組合不可能做到對已知cTnl測定影響因素不敏感，也無法滿足高精確度cTnl檢測抗體的條件，因此試劑盒無法達(dá)到高精確度要求?，F(xiàn)有的cTnl檢測方法主要有酶聯(lián)免疫法(ELISA)，化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)熒光分析法。ELISA方法測定周期長；化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)熒光分析法價格昂貴，需有專門儀器和專業(yè)人員操作，只適用于中心實(shí)驗(yàn)室使用，檢測結(jié)果到達(dá)醫(yī)生手中的時間較長，不能滿足臨床快速檢測需要，也不適合于中小醫(yī)院尤其是沒有中心實(shí)驗(yàn)室的鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)院。而膠乳增強(qiáng)免疫比濁法操作簡單，適用于絕大多數(shù)醫(yī)院的自動生化分析儀使用，特別是對急診能實(shí)現(xiàn)快速定量檢測，其基本原理是將抗體包被在膠乳顆粒上，與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成聚集顆粒，在一定波長下，通過測定聚集物所產(chǎn)生的濁度，即可測出標(biāo)本中被檢物的含量。而cTnl抗體包被到膠乳顆粒上，一般可以采用物理吸附法和化學(xué)偶聯(lián)法，物理吸附法穩(wěn)定性較化學(xué)偶聯(lián)法要差，易受到類風(fēng)濕性因子(RF)和嗜異性抗體的干擾，導(dǎo)致檢測結(jié)果假陽性或假性升高。目前采用的化學(xué)偶聯(lián)法多為隨機(jī)偶聯(lián)法，該法將導(dǎo)致抗體結(jié)合力的損失，增加了抗體用量和生產(chǎn)成本。針對目前的現(xiàn)狀，需要尋找一種新的cTnl檢測方法，該方法應(yīng)該具有操作簡單、 適用范圍廣、精確度高和生產(chǎn)成本低等特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單、適用范圍廣、精確度高、抗干擾能力強(qiáng)及生產(chǎn)成本低的檢測心肌肌鈣蛋白I的方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法將抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒進(jìn)行偶聯(lián)， 然后與檢測標(biāo)本中相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)形成聚集顆粒，在400 700nm波長下測定反應(yīng)物產(chǎn)生的濁度，即可得出檢測標(biāo)本中cTnl的含量。此方法的反應(yīng)原理是膠乳增強(qiáng)免疫比濁法，基本反應(yīng)過程為將抗體包被在膠乳顆粒上，與相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成聚集顆粒，在一定波長下，通過測定聚集物所產(chǎn)生的濁度，即可測出標(biāo)本中被檢物的含量。在本發(fā)明中，檢測標(biāo)本中的cTnl與結(jié)合在膠乳顆粒表面的抗人cTnl抗體結(jié)合，產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，使膠乳顆粒形成聚集，在400 700nm 波長處測定吸光度，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線可求出cTnl的含量。所述抗體組合物由至少3種抗體組成，每種抗體的量由與其結(jié)合的具體抗原的量決定?？贵w的選擇原則為抗體為cTnl特異、而不與快骨骼肌型肌鈣蛋白I和慢骨骼肌型肌鈣蛋白I發(fā)生交叉反應(yīng)，即所述抗體是cTnl特異性的，不會和快骨骼肌型肌鈣蛋白I、慢骨骼肌型肌鈣蛋白I發(fā)生免疫反應(yīng)。抗體組合物的選擇原則為抗體組合物中若其中一種抗體對檢測標(biāo)本中某個影響cTnl精確測定的因素敏感(該因素會影響“一種抗體”與cTnl 的結(jié)合)，則至少有另一種抗體對該影響cTnl精確測定的因素不敏感(該因素不會對“另一種抗體”與cTnl的結(jié)合構(gòu)成干擾)，即如果選擇了一種對檢測標(biāo)本中某個影響因素比較敏感的抗體，那么選擇的其他抗體中至少要有一種抗體對該影響因素不敏感，抗體經(jīng)組合后，能夠形成較強(qiáng)的反應(yīng)性。檢測標(biāo)本中影響cTnl精確測定的因素包括cTnl的存在形式、 cTnl的磷酸化、cTnl的氧化、cTnl的易水解性、抗凝劑(具體影響狀況如背景技術(shù)中所述) 對抗體結(jié)合的影響。抗凝劑如乙二胺四乙酸、肝素(具體影響狀況如背景技術(shù)中所述)。所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體，即由抗體組成的抗體組合物可以是單克隆抗體組合物、多克隆抗體組合物、或者單克隆抗體和多克隆抗體的組合物。作為優(yōu)選，所述抗體組合物為MlS18M8單克隆抗體、19C741 49單克隆抗體、56083 93單克隆抗體、MF419(l li36單克隆抗體按1 :1:1: 1的比例進(jìn)行組合，或MlS18M8單克隆抗體、19C741 49單克隆抗體、8E1086 9(1單克隆抗體、458169 m單克隆抗體按1 :1:1:1 的比例進(jìn)行組合。
作為優(yōu)選，所述聚苯乙烯膠乳顆粒的平均粒徑為0. 05 0. 5 μ m。所述偶聯(lián)為定向化學(xué)偶聯(lián)，使得抗體組合物以特定取向連接到聚苯乙烯膠乳顆粒上，包括以下步驟(1)聚苯乙烯膠乳顆粒的激活在聚苯乙烯膠乳顆粒(帶有羧基)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺(EDAC)，EDAC與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為0. 5 5 100，反應(yīng)0. 5 Ih后加入己二酸二酰胼，己二酸二酰胼與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為50 250 100，繼續(xù)反應(yīng)0.5 lh，得到激活的聚苯乙烯膠乳顆粒；(2)抗體組合物的氧化用高碘酸鈉將抗體組合物非結(jié)合活性區(qū)域Fc端的羧基氧化成醛基，高碘酸鈉與抗體組合物的重量比為1 15 10；(3)抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒的偶聯(lián)將步驟(1)激活的聚苯乙烯膠乳顆粒與步驟( 氧化的抗體組合物混合，抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為2 22 100，反應(yīng)1 池后，加入葡萄糖，葡萄糖與激活的聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為 (25 50) 100，繼續(xù)反應(yīng)2 4h，得到偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒。本發(fā)明還提供運(yùn)用上述檢測心肌肌鈣蛋白I的方法制備的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，該試劑盒包括試劑1、試劑2，其中試劑1為緩沖液，試劑2由偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒、緩沖液組成，偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒與緩沖液的重量體積比為 0. 05 0. 35%。作為優(yōu)選，所述緩沖液為PBS緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、 醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES)緩沖液、氯化銨緩沖液中的一種或幾種。所述試劑盒中試劑1所用的緩沖液與試劑2所用的緩沖液只要為上面的緩沖液中的一種任意搭配均可。該心肌肌鈣蛋白I試劑盒除包括試劑1和試劑2外，還可以包括校準(zhǔn)品，所述校準(zhǔn)品采用cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物作為配制材料。目前各種試劑盒采用的校準(zhǔn)品材料都各不相同，既有cTnl的單體形式，又有cTnC-Tnl、cTnC-cTnT-cTnl復(fù)合物形式，研究結(jié)果表明， 采用cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物作為校準(zhǔn)品，由于其分子穩(wěn)定性好又能被多數(shù)抗體識別，可大大縮小各試劑盒之間檢測結(jié)果差異。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果1、本發(fā)明所采用的檢測方法具有操作簡單、適用范圍廣、精確度高及生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)；2、本發(fā)明檢測方法中采用至少3種以上抗體的組合物，盡可能地滿足了高精度 cTnl檢測抗體所需條件，均衡了抗體對各種測定影響因素的敏感性，可以最小化陰性或陽性干擾，增加了測定方法的精確度；3、本發(fā)明采用定向偶聯(lián)法將cTnl抗體包被到膠乳顆粒上，抗體偶聯(lián)部位為Fc片段，使抗原結(jié)合位點(diǎn)指向流動相，因此不會發(fā)生抗體結(jié)合力損失的情況，保持了抗體的活力，大大減少了抗體的用量，降低了生產(chǎn)成本。除此之外，該方法得到的致敏膠乳顆粒穩(wěn)定性較好，抗體不會從膠乳顆粒上脫落，而且由于化學(xué)偶聯(lián)過程中，F(xiàn)c片段發(fā)生了結(jié)構(gòu)上的改變，因此減少了類風(fēng)濕性因子(RF)和嗜異性抗體的干擾，大大提升了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信性；4、本發(fā)明試劑盒中采用結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、能被多數(shù)抗體識別的cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物作為校準(zhǔn)品配制材料，進(jìn)一步提高了試劑的檢測性能。


圖1所示的是本發(fā)明試劑盒與對照試劑盒的蛋白酶降解敏感性比較圖；圖2所示的是本發(fā)明試劑盒與對照試劑盒的肝素敏感性比較圖；圖3所示的是本發(fā)明試劑盒與對照試劑盒的磷酸化敏感性比較圖。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅局限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1 cTnl抗體組合物的選擇本實(shí)施例選用兩種抗體組合物作為本發(fā)明試劑盒的制備，進(jìn)行試驗(yàn)，這兩種抗體組合物分別為僅1818 28、1亂74卜49、56083 93、1^419(1 1964個單克隆抗體(購自HyTest)按 1:1:1: 1的比例進(jìn)行組合，及M1818 28、19C741 49、8E10 ; 9(1、458169 1784個單克隆抗體(購自HyTest)按1 :1:1: 1的比例進(jìn)行組合。當(dāng)然，除了以上組合的抗體組合物外，也可以為符合要求的其他組合的抗體組合物。實(shí)施例2 cTnl檢測試劑盒的制備本實(shí)施例的主要原材料如下1.抗體本發(fā)明試劑盒1僅1&8 現(xiàn)、1叱741 49、56083 93、1^419(1 1!36(比例為1 1 1 1)本發(fā)明試劑盒2:M1818 w、19C741 49、8E10TO 9(1、458169 1784 (比例為 1 1 1 1)對照試劑盒僅1818 28、1亂741 49(比例為1 1)2.膠乳本發(fā)明僅示例性地采用直徑為150 250nm的帶羧基基團(tuán)的聚苯乙烯膠乳顆粒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)施例的主要試劑配制如下試劑Rl 含 1. 2% PEG6000(聚乙二醇 6000)、0. 15M(mol/L) NaCl 的甘氨酸緩沖液。 該試劑為無色透明溶液。試劑R2 用抗人cTnl抗體組合物偶聯(lián)聚苯乙烯膠乳顆粒。該試劑為乳白色溶液。具體步驟如下1.取Iml (100mg/ml)聚苯乙烯膠乳顆粒，用0. 1M、pH5. O的MES溶液(2-嗎啉乙
磺酸緩沖液)洗滌3次，超聲分散；2.加入0. 2ml用0. 1M、pH5. O的MES溶液新鮮配制的EDAC (10mg/ml)混合完全， 室溫混和15min ；3.加入0. 8ml用0. 1M、pH5. O的MES溶液新鮮配制的己二酸二酰胼(83mg/ml)， 4 °C反應(yīng)過夜；4.用0. 1Μ、ρΗ5. O的MES溶液洗滌2次，0. 1Μ、ρΗ7. 5的磷酸鹽溶液洗滌1次，超聲
分散備用；5.取1. 5ml抗體組合物(3. 9mg/ml)溶液，加入0. 2ml用0. 1Μ、ρΗ7. 5的磷酸鹽溶液配制的高碘酸鈉溶液(10mg/ml)，室溫混合15min ；6.將步驟5中氧化好的抗體組合物加入到步驟4中已激活的聚苯乙烯膠乳溶液中，4°C反應(yīng)過夜；7.加入0. 22ml 10% BSA(小牛血清白蛋白)溶液，4°C混合4h ；8.加入0. 3ml 10%葡萄糖溶液，4°C混合過夜；9.用0. 12M、pH7. 5甘氨酸溶液洗滌3次，加入0. 12M、pH7. 5甘氨酸溶液(含1 % BSA、0. 1% TW-20、0. 2% NaN3的甘氨酸緩沖液)至聚苯乙烯膠乳顆粒終濃度為0. 15%。cTnl校準(zhǔn)品在磷酸鹽緩沖溶液中加入不同含量的cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物，除菌過濾，所述的cTnl校準(zhǔn)品中cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物含量控制在O 10ug/L之間，這些校準(zhǔn)品均為無色透明液體。實(shí)施例3 cTnl的測定檢測工具日立7060型自動生化分析儀。分析方法兩點(diǎn)終點(diǎn)法；波長:600nm ；樣品量25ul ；Rl :200ul ；R2 :50ul ；校準(zhǔn)方式多點(diǎn)校準(zhǔn)；反應(yīng)方向向上；測定溫度37°C ；樣品與Rl混勻后，于第Imin讀取吸光度 A1 ；于5min時加入R2，于細(xì)化時讀取吸光度A2。反應(yīng)吸光度的計(jì)算為A2與Al的校準(zhǔn)差值。計(jì)算方法采用多點(diǎn)校準(zhǔn)，多參數(shù)曲線方程(如logit/log)擬合，以ΔΑ可求得肌鈣蛋白含量。實(shí)施例4不同影響因素的敏感性分析1、蛋白酶降解敏感性分析將內(nèi)源性組織蛋白酶的混合物和cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物一起孵育120h，本發(fā)明試劑盒(包括本發(fā)明試劑盒1、本發(fā)明試劑盒2、和對照試劑盒同時檢測孵育前和孵育后 cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物濃度，其中孵育前復(fù)合物濃度為10ug/L。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，和對照試劑盒相比，本發(fā)明試劑盒大大提高了檢測結(jié)果的穩(wěn)定性(見圖1)。2、肝素敏感性分析本發(fā)明試劑盒(包括本發(fā)明試劑盒1、本發(fā)明試劑盒2、和對照試劑盒同時檢測不含肝素和含10IU/ml肝素的樣本，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對照試劑盒對含有肝素的樣本敏感性很高，和不含肝素的樣本相比，其反應(yīng)性有所降低，而本發(fā)明試劑盒在測定不含肝素或含有肝素樣本時，反應(yīng)性變化不大，即對肝素敏感性不高(見圖2)。3、磷酸化敏感性分析本發(fā)明試劑盒(包括本發(fā)明試劑盒1、本發(fā)明試劑盒2、和對照試劑盒同時檢測未發(fā)生磷酸化和被人為磷酸化的cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對照試劑盒對磷酸化敏感性很高，而本發(fā)明試劑盒對磷酸化基本不敏感(見圖3)。實(shí)施例所用的原料，除另有說明外，均為市售工業(yè)品。本發(fā)明的上述實(shí)施例是對本發(fā)明的說明而不能用于限制本發(fā)明，與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于將抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒進(jìn)行偶聯(lián)，然后與檢測標(biāo)本中相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)形成聚集顆粒，在400 700nm波長下測定反應(yīng)物產(chǎn)生的濁度，即可得出檢測標(biāo)本中cTnl的含量；所述抗體組合物由至少3種抗體組成，所述抗體為cTnl特異、而不與快骨骼肌型肌鈣蛋白I和慢骨骼肌型肌鈣蛋白I發(fā)生交叉反應(yīng)，且所述抗體組合物中若其中一種抗體對檢測標(biāo)本中某個影響cTnl精確測定的因素敏感，則至少有另一種抗體對該影響cTnl精確測定的因素不敏感，檢測標(biāo)本中影響 cTnl精確測定的因素包括cTnl的存在形式、cTnl的磷酸化、cTnl的氧化、cTnl的易水解性、抗凝劑對抗體結(jié)合的影響，抗體經(jīng)組合后有較好的反應(yīng)性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于所述抗凝劑包括乙二胺四乙酸、肝素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于所述抗體組合物為M18w m單克隆抗體、19C741 49單克隆抗體、56083 93單克隆抗體、MF419(1 196單克隆抗體按1 :1:1: 1的比例進(jìn)行組合，或MlS18M8單克隆抗體、19C741 49單克隆抗體、 8E1086 9(1單克隆抗體、458169 178單克隆抗體按1 :1:1: 1的比例進(jìn)行組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于所述聚苯乙烯膠乳顆粒的平均粒徑為0. 05 0. 5 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法，其特征在于所述偶聯(lián)為定向化學(xué)偶聯(lián)，包括以下步驟(1)聚苯乙烯膠乳顆粒的激活在聚苯乙烯膠乳顆粒中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺，乙基二甲基胺丙基碳化二亞胺與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為0.5 5 100，反應(yīng)0. 5 Ih后加入己二酸二酰胼，己二酸二酰胼與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為50 250 100，繼續(xù)反應(yīng)0.5 lh，得到激活的聚苯乙烯膠乳顆粒；(2)抗體組合物的氧化用高碘酸鈉將抗體組合物非結(jié)合活性區(qū)域Fc端的羧基氧化成醛基，高碘酸鈉與抗體組合物的重量比為1 15 10；(3)抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒的偶聯(lián)將步驟(1)激活的聚苯乙烯膠乳顆粒與步驟( 氧化的抗體組合物混合，抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為2 22 100，反應(yīng)1 池后，加入葡萄糖，葡萄糖與激活的聚苯乙烯膠乳顆粒的重量比為 (25 50) 100，繼續(xù)反應(yīng)2 4h，得到偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒。
7.運(yùn)用權(quán)利要求1所述的一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法制備的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，其特征在于包括試劑1、試劑2，其中試劑1為緩沖液，試劑2由偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒、緩沖液組成，偶聯(lián)抗體組合物的聚苯乙烯膠乳顆粒與緩沖液的重量體積比為0. 05 0. ；35%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，其特征在于所述緩沖液為PBS 緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽-碳酸氫鹽緩沖液、2-嗎啉乙磺酸緩沖液、氯化銨緩沖液中的一種或幾種。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒，其特征在于還包括校準(zhǔn)品，所述校準(zhǔn)品采用cTnl-cTnT-cTnC復(fù)合物作為配制材料。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測心肌肌鈣蛋白I的方法及運(yùn)用該方法制備的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑盒。該方法將抗體組合物與聚苯乙烯膠乳顆粒進(jìn)行偶聯(lián)，然后與檢測標(biāo)本中相應(yīng)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)形成聚集顆粒，在400～700nm波長下測定反應(yīng)物產(chǎn)生的濁度，即可得出檢測標(biāo)本中cTnI的含量?？贵w組合物由至少3種抗體組成，抗體為cTnI特異、而不與快骨骼肌型肌鈣蛋白I和慢骨骼肌型肌鈣蛋白I發(fā)生交叉反應(yīng)，且抗體組合物中若其中一種抗體對檢測標(biāo)本中某個影響cTnI精確測定的因素敏感，則至少有另一種抗體對該影響cTnI精確測定的因素不敏感。該方法操作簡單、適用范圍廣、精確度高、抗干擾能力強(qiáng)、生產(chǎn)成本低。
文檔編號G01N33/68GK102539784SQ201110440258
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者夏佳音, 鄒炳德, 鄒繼華 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司