專利名稱：一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及借助于測定材料的化學(xué)或物理性質(zhì)來測試或分析材料，具體涉及柱色譜法來測試或分析材料。
背景技術(shù)：
動(dòng)物藥飲片或礦物藥飲片是經(jīng)過加工炮制后的可直接用于中醫(yī)臨床的中藥，動(dòng)物藥或礦物藥配方顆粒是將單味動(dòng)物藥或礦物藥根據(jù)一定制備工藝制備的制劑。很多動(dòng)物藥飲片或礦物藥飲片中存在鈣和磷，如，醋龜甲、鹿角霜、鐘乳石?，F(xiàn)代研究表明，鈣和磷是構(gòu)成骨骼、牙齒的重要成分，維護(hù)神經(jīng)與肌肉正?；顒?dòng)，促進(jìn)身體內(nèi)各種酶的活動(dòng)。它既是身體的構(gòu)造者，又是身體的調(diào)節(jié)者，對(duì)人體生命活動(dòng)有十分重要的作用。如果機(jī)體缺乏這些元素，將會(huì)引起一系列疾病，例兒童佝僂病、成年人軟骨病、中老年人骨質(zhì)疏松等。由于動(dòng)物藥或礦物藥的質(zhì)量受來源、產(chǎn)地等的影響較大，因此，應(yīng)選擇合適的方法，以控制其質(zhì)量，對(duì)建立飲片及其制劑的質(zhì)量控制方法有重要意義。
在動(dòng)物藥及礦物藥中，鈣和磷的主要存在形式為碳酸鈣、氧化鈣或磷酸鈣等。在現(xiàn)有技術(shù)中，對(duì)于鈣的測定多采用EDTA-鈣黃綠素法和原子發(fā)射光譜法；磷的測定多采用磷鉬藍(lán)光度法和等離子發(fā)射光譜法。但是，EDTA-鈣黃綠素法，磷鉬藍(lán)光度法步驟繁瑣，且準(zhǔn)確性不高，原子發(fā)射光譜法前處理步驟多，排除干擾困難?，F(xiàn)有的技術(shù)多采用分別測定鈣和磷的含量，控制動(dòng)物藥飲片和礦物藥飲片的質(zhì)量，工作周期較長。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種使用同一色譜條件同時(shí)定量檢測動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案是
一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法，該方法包括以下步驟
(1)配制待檢動(dòng)物或礦物中藥的進(jìn)樣液取動(dòng)物或礦物中藥的灰粉，加入濃度為 lmol/L鹽酸溶液溶解配制成含藥物0. 200 0. 300mg/ml待檢進(jìn)樣液；
配制標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液將無水氯化鈣(CaCl2)與磷酸(H3PO4)混合后用濃度為 0. 01mol/L鹽酸溶液稀釋，得到氯化鈣濃度為0. 100 0. 300mg/ml和磷酸濃度為0. 027 0. 081mg/ml的一系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液；
將待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液和每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液分別按以下方法進(jìn)行高效液相色譜檢測
按進(jìn)樣量為10μ 1，對(duì)規(guī)格為250mmX4. 6mm i. d.，5 μ m的液相色譜柱Prevail C18進(jìn)樣，控制柱溫度為15 40°C，接著用由體積配比為A相95 100%和B相0 5% 組成的流動(dòng)相以0. 3 0. 8ml/min的流速進(jìn)行洗脫，同時(shí)采用蒸發(fā)光散射檢測洗脫液，控制蒸發(fā)光散射檢器的漂移管溫度為110°C 120°C，氮?dú)饬魉贋?. 0 3. 5L/min，獲得待檢動(dòng)物或礦物中藥的高效液相色譜圖和一系列標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜(2)將待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液的高效相液相圖譜與所得每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效相液圖譜比較，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效相液圖譜中保留時(shí)間相同的相應(yīng)成分的特征峰即是與該成分相同物質(zhì)的特征峰；根據(jù)峰面積以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷的含量；
上述步驟中，所述的流動(dòng)相的A相是濃度為0.7%的三氟乙酸溶液、濃度為的三氯乙酸溶液或濃度為2%的甲酸溶液；所述的流動(dòng)相的B相是甲醇或乙腈。
本發(fā)明所述的測定方法，其中所述的動(dòng)物或礦物中藥是各種動(dòng)物或礦物藥材加工炮制后的飲片，如，醋鱉甲、醋龜甲、鹿角霜、生龍骨、牡蠣、石決明、煅瓦楞子、珍珠母、海蛤殼、紫貝齒等，或者是所述飲片制成的配方顆粒。
本發(fā)明所述的測定方法，其中所述的動(dòng)物或礦物中藥的灰粉采用以下方法制備 先精密稱取樣品粉末，置800°C馬弗爐中灰化他，取灰分即得。本發(fā)明所述的測定方法，其中所述的配制待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液的步驟還包括加入所述的鹽酸溶液稀釋后的過濾步驟。
本發(fā)明所述的測定方法，其中，所述的流動(dòng)相的體積配比最好是A相98%，B相 2% ；所述的流動(dòng)相A相的pH值為1 2，最好是pH值為1 ；所述的流動(dòng)相B相最好是乙腈； 所述的流動(dòng)相的流速最好是0. 5ml/min。
本發(fā)明所述的測定方法，其中，所述的液相色譜柱的溫度最好控制為25°C，所述的蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度最好是115°C，所述的氮?dú)饬髁孔詈檬?. 5L/min。
本發(fā)明所述的測定方法，其中所述的根據(jù)應(yīng)峰面積以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的方法，具體計(jì)算過程如下
(1)分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效液相色譜圖中氯化鈣和磷酸的峰面積，然后分別取自然對(duì)數(shù)并進(jìn)行線性回歸得到y(tǒng) = ax+b的線性方程，其中，y為進(jìn)樣濃度的自然對(duì)數(shù)， X為峰面積的自然對(duì)數(shù)，a和b為常數(shù)；
(2)分別計(jì)算待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液的高相液相圖譜中與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效液相色譜圖中相應(yīng)成分的保留時(shí)間相同的特征峰的峰面積并分別取自然對(duì)數(shù)，然后分別代入步驟(1)所得到的方程y = ax+b中，分別算出待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液中氯化鈣和磷酸的濃度；
(3)根據(jù)無水氯化鈣和磷酸的化學(xué)分子式，利用下述公式(I )分別算出鈣與磷的含量
權(quán)利要求
1.一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法，該方法包括以下步驟組成(1)配制待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液取動(dòng)物或礦物中藥的灰粉，加入濃度為lmol/L 鹽酸溶液溶解配制成含藥物0. 200 0. 300mg/ml待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液；配制標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液將無水氯化鈣與磷酸混合后用濃度為0. 01mol/L鹽酸溶液稀釋， 得到氯化鈣濃度為0. 100 0. 300mg/ml和磷酸濃度為0. 027 0. 081mg/ml的一系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液；將待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液和每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液分別按以下方法進(jìn)行高效液相色譜檢測按進(jìn)樣量為10 μ 1，對(duì)規(guī)格為250mmX 4. 6mm i. d.，5 μ m的液相色譜柱I^revail C18進(jìn)樣，控制柱溫度為15 40°C，接著用由體積配比為A相95 100%和B相0 5%組成的流動(dòng)相以0. 3 0. 8ml/min的流速進(jìn)行洗脫，同時(shí)采用蒸發(fā)光散射檢測洗脫液，控制蒸發(fā)光散射檢器的漂移管溫度為110°C 120°C，氮?dú)饬魉贋?. 0 3. 5L/min，獲得待檢動(dòng)物或礦物中藥的高效液相色譜圖和一系列標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖；(2)將待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液的高效相液相圖譜與所得每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效相液圖譜比較，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效相液圖譜中保留時(shí)間相同的相應(yīng)成分的特征峰即是與該成分相同物質(zhì)的特征峰；根據(jù)峰面積以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷的含量；上述步驟中，所述的流動(dòng)相的A相是濃度為0.7%的三氟乙酸溶液、濃度為的三氯乙酸溶液或濃度為2%的甲酸溶液；所述的流動(dòng)相的B相是甲醇或乙腈。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法，其特征在于，所述的配制待檢樣品進(jìn)樣液的步驟還包括加入所述的鹽酸溶液稀釋后的過濾步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法，其特征在于，所述的動(dòng)物或礦物中藥的灰粉由以下方法制得先精密稱取樣品的粉末，置800°C馬弗爐中灰化他，取灰分即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的測定方法，其特征在于所述的動(dòng)物或礦物中藥為配方顆粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及借助于測定材料的化學(xué)或物理性質(zhì)來測試或分析材料，具體涉及一種測定動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷含量的分析方法，該方法包括以下步驟組成取動(dòng)物或礦物中藥的灰粉，加入濃度為1mol/L鹽酸溶液溶解配制成含藥物0.200～0.300mg/ml待檢進(jìn)樣液；將無水氯化鈣與磷酸混合后用濃度為0.01mol/L鹽酸溶液稀釋，得到氯化鈣濃度為0.100～0.300mg/ml和磷酸濃度為0.027～0.081mg/ml的一系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液；然后將待檢進(jìn)樣液和每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液分別進(jìn)行高效液相色譜檢測，獲得待檢動(dòng)物或礦物中藥高效液相色譜圖和一系列標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖；再將待檢動(dòng)物或礦物中藥進(jìn)樣液的高效相液相圖譜與所得每一標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣液的高效相液圖譜比較確定特征峰；最后根據(jù)峰面積以隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算動(dòng)物或礦物中藥中鈣和磷的含量。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102539601SQ20111044268
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月24日
發(fā)明者劉暉暉, 張輝, 王新雨, 譚曉梅, 譚沛, 陳飛龍 申請(qǐng)人:華潤三九醫(yī)藥股份有限公司, 南方醫(yī)科大學(xué)