專利名稱：一種酸性橙Ⅱ快速檢測(cè)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種酸性橙II快速檢測(cè)卡，是一種檢測(cè)酸性橙II的檢測(cè)器具，屬于食品中違法添加非食用物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
酸性橙II是一種偶氮類酸性工業(yè)染料，又名酸性金黃II、金橙II或酸性艷橙GR，俗名金黃粉。溶于水，乙醇。主要用于蠶絲、羊毛的染色，也可染皮革、紙張、錦綸，能印花，還可用作指示劑。撥染性、勻染性好，染色牢度較差，適用于色澤鮮艷度高的絨線染色。染色時(shí)遇銅離子趨向紅暗，遇鐵離子色澤淺暗。偶氮類染料本身無任何直接的致癌作用，但是在體內(nèi)還原分解，可形成芳香胺化合物，芳香胺在體內(nèi)經(jīng)過代謝活動(dòng)后與靶細(xì)胞作用可能使DNA發(fā)生變化，成為人體病變的誘發(fā)因素，對(duì)人體和動(dòng)物有潛在的致癌性和致突變性。由于其致癌性和致突變性，世界上很多國家對(duì)酸性橙II的使用實(shí)施了嚴(yán)格的規(guī)定。在我國，酸性橙II禁止被用作食品添加劑。酸性橙II屬非食用色素，食品中不允許加入。但是由于酸性橙II色澤鮮艷，著色穩(wěn)定、價(jià)廉等特點(diǎn)，一些不法商販為了牟取暴利將其用于食品生產(chǎn)和加工，我國市售和出口海外的蜜餞、豆制品、鹵制品、辣椒面、紅殼瓜子等均被檢出過含有酸性橙II等類似合成非食用色素，嚴(yán)重危害了消費(fèi)者身體健康，并且常常導(dǎo)致出口食品被迫就地銷毀。所以酸性橙II 檢測(cè)方法的開發(fā)刻不容緩。目前，檢測(cè)食品中違法添加的酸性橙II的主要方法有高效液相色譜法及液質(zhì)聯(lián)用等進(jìn)行定性和定量的分析。這些方法對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備要求高，操作繁瑣，對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)要求高，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。因此建立一種準(zhǔn)確可靠又快速方便的檢測(cè)食品中違法添加的酸性橙II的分析方法是非常必要的。本實(shí)用新型擬發(fā)明一種基于小分子物質(zhì)酸性橙II偶聯(lián)蛋白質(zhì)后而具有抗原性的免疫學(xué)檢測(cè)方法，采取免疫學(xué)競(jìng)爭(zhēng)法的原理，結(jié)合膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計(jì)的一種快速檢測(cè)試劑，可快速特異地檢測(cè)商制熟食、辣椒面、飲料等樣品中的酸性橙 II。根據(jù)檢測(cè)卡樣品檢測(cè)線和質(zhì)控線的有無顯色來判定鹵制熟食、辣椒面、飲料等樣品中的酸性橙II含量。反應(yīng)是利用酸性橙II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物抗原性而建立的一種檢測(cè)方法，具有特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可避免其它檢測(cè)方法的假陽性導(dǎo)致的誤檢問題。同時(shí)檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單快速， 無需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，也可在超市、家庭、車間等實(shí)地進(jìn)行測(cè)定。由于樣本量需要少、簡(jiǎn)便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，準(zhǔn)確率大。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供一種能檢測(cè)酸性橙II的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方法檢測(cè)鹵制熟食、辣椒面、飲料等樣品中酸性橙II的含量，克服現(xiàn)有色譜法檢測(cè)的操作繁瑣等缺點(diǎn)，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測(cè)方法。本實(shí)用新型的技術(shù)方案一種酸性橙II快速檢測(cè)卡，其為在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4 ；測(cè)試條2是由支承背板5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜或乳膠顆粒膜7、硝酸纖維素膜6、 和吸水膜9所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜 9，另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7 ；膠體金膜為含抗酸性橙II抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗酸性橙II抗體乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含酸性橙 II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶10，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶11，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。采用上述酸性橙II快速檢測(cè)卡，檢測(cè)樣品為鹵制熟食、辣椒面或飲料等，處理方法如下飲料樣品將購買的飲料如橙汁樣品用pH為8.0，含0.05%吐溫-20，濃度為 0. lmol/L的磷酸鹽緩沖液(PBST)按1 1稀釋，得到待測(cè)樣品。鹵制熟食、辣椒面樣品稱取5g樣品，研磨粉碎，加入上述pH8. 0、PBST溶液10mL， 振搖30min，膜過濾后用于測(cè)定。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示被檢測(cè)樣品中酸性橙II含量未超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽性，表示被檢測(cè)樣品中酸性橙II含量超標(biāo)。當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測(cè)試條已失效。本實(shí)用新型的有益效果本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是能檢測(cè)鹵制熟食、辣椒面、飲料等樣品中含有的酸性橙II，易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，使用方便，檢測(cè)快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。

圖1酸性橙II快速檢測(cè)卡外殼及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測(cè)試條，3、 檢測(cè)窗孔，4、加樣孔。圖2測(cè)試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測(cè)帶，11、 質(zhì)控帶。圖3酸性橙II快速檢測(cè)卡的檢測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜， 7、膠體金膜或乳膠顆粒膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型結(jié)合具體實(shí)施例參見附圖進(jìn)一步說明如下實(shí)施例1一種酸性橙II快速檢測(cè)卡，它是在檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測(cè)試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測(cè)卡外殼1為長(zhǎng)條扁平薄殼狀外殼，長(zhǎng)70mm，寬20mm， 厚5mm，薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測(cè)卡外殼1殼蓋上有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4。測(cè)試條2放置在檢測(cè)卡外殼1的殼座內(nèi)。[0022]測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長(zhǎng)約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測(cè)試條 2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長(zhǎng)60mm，寬4mm ；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長(zhǎng)20_25mm，寬4mm。硝酸纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測(cè)帶10，含酸性橙II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物；另一條是質(zhì)控帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5 一端部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部， 兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜7，膠體金膜為含抗酸性橙II抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗酸性橙II抗體乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜。膠體金膜或乳膠顆粒膜7厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)5mm，寬4mm。樣品墊8厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)20mm，寬4mm。 吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長(zhǎng)16_20mm，寬4mm。膠體金膜或乳膠顆粒膜7、樣品墊8及吸水膜 9與硝酸纖維素膜搭接長(zhǎng)度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。本實(shí)用新型酸性橙II檢測(cè)卡用于檢測(cè)鹵制熟食、辣椒面、飲料等樣品中的酸性橙 II的檢測(cè)。實(shí)施例2樣品的處理方法如下飲料樣品將購買的飲料如橙汁樣品用pH為8. 0，含0. 05%吐溫-20，濃度為 0. lmol/L的磷酸鹽緩沖液(PBST)按1 1稀釋，得到待測(cè)樣品。鹵制熟食、辣椒面樣品稱取5g樣品，研磨粉碎，加入上述pH8. 0、PBST溶液10mL， 振搖30min，膜過濾后用于測(cè)定。使用酸性橙II快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，先將待檢測(cè)的樣品液從加樣孔4中滴注入酸性橙II快速檢測(cè)卡的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測(cè)的樣品液及膠體金膜或乳膠顆粒膜7所含的抗酸性橙II單克隆抗體膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金或乳膠顆粒標(biāo)記的抗體，在測(cè)試帶上分別與含酸性橙II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。若樣品中有待檢酸性橙II存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)與檢測(cè)帶所含的酸性橙II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況1、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測(cè)結(jié)果為陰性，說明被檢測(cè)樣品中酸性橙II含量未超標(biāo)。2、當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陽性，說明被檢測(cè)樣品中酸性橙II含量超標(biāo)。3、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明檢測(cè)試條已失效。
權(quán)利要求1. 一種酸性橙II快速檢測(cè)卡，其特征在于在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2)，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣孔(4);測(cè)試條(2)是由支承背板(5) 上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜或乳膠顆粒膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、 和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜或乳膠顆粒膜 (7)；硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含酸性橙II蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11)，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。
專利摘要一種酸性橙Ⅱ快速檢測(cè)卡，屬于食品中違法添加的非食用物質(zhì)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本酸性橙Ⅱ快速檢測(cè)卡外殼內(nèi)有測(cè)試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜或乳膠顆粒膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗酸性橙Ⅱ抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，或乳膠顆粒膜為含抗酸性橙Ⅱ抗體乳膠顆粒標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測(cè)帶，一條為含酸性橙Ⅱ蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實(shí)用新型優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)鹵制熟食、辣椒面、飲料等樣品的酸性橙Ⅱ含量。本酸性橙Ⅱ快速檢測(cè)卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/558GK202066858SQ20112017569
公開日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2011年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月30日
發(fā)明者吳文曄, 周堅(jiān), 熊曉芳 申請(qǐng)人:無錫安迪生物工程有限公司