專利名稱：生豬肉檢測法及其檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種檢測非加熱食品中的(生)豬肉的方法及其檢測試劑盒。本發(fā)明更具體地涉及使用通過用豬血清中的免疫球蛋白G對動物免疫獲得的可特異性地識別該免疫球蛋白G的抗體來檢測非加熱食品中的(生)豬肉的免疫層析測定試劑。
背景技術：
EU科學運營委員會在其意見中報告了牛腦海綿狀病(BSE)等牛傳染病對人傳染的危險性，自此，BSE感染牛的肉骨粉在家畜飼料中使用的問題受到重視。另外，對假冒食品的檢查，如被視為地方品牌的假冒品牌牛肉等的假冒食品的檢查，也受到了很大的關注。另ー方面，食物變態(tài)反應患者會因食品中所含的食物變態(tài)反應原而引發(fā)哮喘、皮 炎、胃腸功能障礙、過敏性休克等各種變態(tài)反應癥狀，有時還有造成了非常嚴重的后果的病例。食物變態(tài)反應患者還有增加的傾向，消費者對于食品的安全性的關心也非常高。通常已知的含有食物變態(tài)反應原的代表性食品有谷類(蕎麥、小麥等)、蛋類、肉類(牛、豬、雞等)、魚類(鯖魚、沙丁魚等)、牛乳類、甲殼類(蟹等)、軟體動物類、豆類(花生、大豆等)、果實類(芒果等)、蔬菜類(蒜等)等，這些食物變態(tài)反應誘發(fā)食品中含有谷蛋白、明膠、酪蛋白、卵清蛋白、卵類粘蛋白、溶菌酶、α-乳清蛋白、β_乳球蛋白等食物變態(tài)反應誘發(fā)成分。加工食品中也含有很多食品或食物變態(tài)反應原，目前的現(xiàn)狀是無法簡便地檢測出它們。另外，對于進行了加工處理(加熱、加壓、酶解處理、冷凍、干燥、鹽藏等)的食品，由于處理而使食品中的蛋白質成分發(fā)生分子結構性的改性或分子修飾。因此，為了簡便地檢測出加工食品中的這些成分，針對加工處理過的成分和未經(jīng)加工處理的生鮮成分分別使用與其對應的適當?shù)目乖虮砦皇欠浅Ｖ匾?，這方面的探索和研究也得到了進展。例如，人們發(fā)現(xiàn)作為用于檢測在高溫、例如超過100°C的溫度條件下加熱處理存在于罐裝食品或家畜用飼料等試樣中的來自以牛、豬、雞為代表的動物性組織的原料的檢測試劑，用加熱改性的血清白蛋白作為免疫原對動物進行免疫所生產(chǎn)的抗體可特異性地識別該加熱改性的血清白蛋白，而對非加熱的血清白蛋白不顯示交叉反應性，從而提供了一種用于檢測試樣中加熱處理過的來自動物性組織的原料的存在的方法(包含免疫層析法)。(參照專利文獻I、專利文獻2)將含有未改性和/或改性物質的食物變態(tài)反應原的混合物(蛋白質)對動物免疫所得到的IgE (免疫球蛋白E)抗體，以及使用該抗體檢測食物變態(tài)反應原和食物變態(tài)反應誘發(fā)性食品的方法(包含免疫層析法)是公知的。(參照專利文獻3)不僅如此，將已經(jīng)保藏的特定細胞(加熱的豬肉中的特定蛋白質對動物免疫所得的細胞)生產(chǎn)的單克隆抗體用于ELISA (免疫學測定的I種)方法中以檢測加熱處理的食品中的豬肉也是公知的。(參照專利文獻4)由于該檢測方法使用了由特定細胞(加熱的豬肉中特定蛋白質對動物免疫所得的細胞)生產(chǎn)的單克隆抗體，因此可以準確地進行檢測。然而，單克隆抗體的制備需要高額費用，因此該方法不適合針對醫(yī)療領域中的多數(shù)患者或具有不同飲食文化的一般消費者的普及。本發(fā)明人使用多克隆抗體代替使用上述單克隆抗體，對檢測非加熱食品中的生豬肉的免疫層析法進行了深入的研究。結果，在使用對兔進行免疫得到的來自兔的多克隆抗體時，發(fā)現(xiàn)即使僅有標準緩沖液也會發(fā)生反應，并且觀察到很強的非特異性反應，因此從精度方面考慮無法使用。如上所述，在使用多克隆抗體、通過免疫層析法檢測試樣中的檢測對象物一非加熱食品中的生豬肉時，可觀察到依然發(fā)生非特異性反應。因此，無法充分抑制非特異性反應的問題依然存在。目前，作為檢查是否有向絞肉類中混入其它肉類(牛、豬、雞等)的方法，公知的是一種免疫學方法CEIA法(cloth-based enzyme immunoassay)。已經(jīng)知道,該方法是使用標記抗體檢查有否豬肉混入，該檢查中使用的標記抗體(偶聯(lián)物)是兔抗豬IgG-辣根過氧化物酶(HRP)標記抗體。(參照非專利文獻I)。但是，該CEIA法的檢查時間約需30分鐘左右，并且在檢查牛肉中有否混入其它肉 類時必須有5%以上的混入濃度。因此，該方法的檢出靈敏度差，無法滿足實際應用。為了將該CEIA法應用于更實用的、簡便的、檢測時間迅速的免疫層析法，本發(fā)明人進行了進一步的研究。結果發(fā)現(xiàn)，在嘗試使用兔抗豬IgG作為檢測抗體時，引發(fā)了非特異性的識別，這使得其無法使用。因此，需要進行進一步的研究。以往在肉類的檢查中，作為免疫學方法，已知有CEIA法和ELISA (酶聯(lián)免疫測試)法；作為遺傳學方法，已知有PCR法。ELISA法與PCR法相比檢測時間更快，但是與免疫層析法相比，檢出仍需相當長的時間，并且還需要檢測裝置。ELISA法與PCR法相比特異性較低。PCR法雖然特異性高，但是檢測大約需要3小時左右的時間，并且存在需要基因擴增裝置或檢測裝置等設備的問題?，F(xiàn)有技術文獻專利文獻專利文獻I :日本特開2006-317226專利文獻2 :日本特開2005-164583專利文獻3 :日本特開2003-155297專利文獻4 :美國專利第6288215非專利文獻非專利文獻I Biotechnoby Techniques, Vol. 11, No. 7, July 1997, 533-535 頁

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明的目的在于通過制備可將非加熱食品中所含的生豬肉與其它肉類區(qū)分開并特異性識別生豬肉的檢測抗體，利用免疫測定法提供了一種不引發(fā)非特異性反應且可迅速、高性能和高靈敏度地進行非加熱食品中的生豬肉的檢出的最佳的免疫層析檢測法，更具體地說，提供了一種使用多克隆抗體來檢測非加熱食品中的生豬肉的簡便且高精度的免疫層析檢測法，以及該檢測法所需的檢查用試劑盒，其中，所述多克隆抗體能作為可特異性識別生豬肉中含有的特定蛋白質的免疫球蛋白G的檢測抗體而將非加熱食品中所含的生豬肉與其它肉類區(qū)分開。解決該問題的手段本發(fā)明涉及非加熱食品中的來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測，檢測中所使用的展開液組成或試驗試劑盒中使用的化學物質(生物物質以外)的組成是以往在免疫層析法中常用的試劑。例如，提取展開液是在超純水加入非離子性表面活性劑(Tween 20、Triton-100等)和氯化鈉,進ー步加入防腐劑(疊氮化鈉等)。本發(fā)明人使用的作為用于制備在非加熱食品檢測系統(tǒng)中使用的抗體的免疫用抗原是由豬血清純化的蛋白質ー免疫球蛋白G (以下簡稱“IgG”)，可以使用市售商品。因此，本發(fā)明的用于檢測來自非加熱食品中的生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測所使用的檢測抗體(生物物質)特別適合于非加熱食品的檢測系統(tǒng)。該檢測抗體不僅與針對來自加熱食品中的豬肉的蛋白質的免疫層析檢測系統(tǒng)中所用的檢測抗體不同，也與針對來自非加熱食品中的豬肉的蛋白質的以往公知的免疫層析檢測中使用的檢測抗體(生物物質) 不同。在該檢測抗體的基礎上，本發(fā)明人首次完成了通過免疫層析法檢查(探測)非加熱食品中有無生豬肉的方法以及檢查(檢測)試劑盒。在本發(fā)明的非加熱食品的檢測系統(tǒng)中，例如優(yōu)選使用可特異性識別生豬肉中所含的特定蛋白質IgG的多克隆抗體作為檢測抗體。本發(fā)明提供下述(a)-(f)的免疫層析檢測法、其中使用的抗體、檢測用裝置以及檢測用試劑盒。(a)本發(fā)明的第I特征涉及針對來自生豬肉的蛋白質的使用多克隆抗體作為檢測抗體的免疫層析檢測法，其中該檢測抗體以豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到，并能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G。(b)本發(fā)明的第2特征涉及根據(jù)(a)的免疫層析檢測法，其中，檢測抗體是山羊抗豬免疫球蛋白G抗體。(c)本發(fā)明的第3特征涉及針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測裝置，該裝置包括標記物保持部，其保持有標記抗體，該標記抗體是通過將豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到、可特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G并用標記物標記的多克隆抗體；以及檢測部，其固定有可特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G的多克隆抗體。(d)本發(fā)明的第4特征涉及根據(jù)(C)的免疫層析檢測裝置，該裝置基本上由試樣添加部、標記物保持部、層析介質、檢測部和吸收部構成。(e)本發(fā)明的第5特征涉及針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測用試劑盒，該試劑盒基本上由試樣添加部、標記物保持部、層析介質、檢測部和吸收部構成，其中，所述標記物保持部保持有標記抗體，該標記抗體通過將豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到，可特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G的多克隆抗體，并用標記物標記；所述檢測部固定有可特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G的多克隆抗體。(f)本發(fā)明的第6特征涉及根據(jù)上述(e)的免疫層析檢測用試劑盒，其中，標記抗體和固定于檢測部的抗體是用同一方法對山羊免疫得到的。發(fā)明效果在根據(jù)本發(fā)明的針對非加熱食品中來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測法中，使用通過生豬肉中所含的特定蛋白質IgG對山羊或兔(采用兔抗體時需進行預備操作)免疫所得的多克隆抗體作為檢測抗體(生物物質)，因此與使用單克隆抗體的情形相比，價格便宜、可穩(wěn)定且容易地獲得，因此該檢測法可適用于針對眾多需求者、例如醫(yī)療領域中的很多的食物變態(tài)反應患者或者在飲食文化上對豬肉有所避忌的一般消費者的食品成分識別。在本發(fā)明中，使用通過生豬肉中所含的特定蛋白質IgG對山羊或兔(采用兔抗體時需進行預備操作)免疫所得的多克隆抗體作為檢測抗體(生物物質)，因此，不僅對大豆等來自植物的蛋白質沒有交叉反應，對來自牛、雞、羊等的豬以外動物的蛋白質也沒有交叉反應，靈敏度不會降低，可正確且容易地進行非加熱食品中來自生豬肉的蛋白質的免疫層析法的檢測結果的判定。根據(jù)本發(fā)明的針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測法不僅能簡便且低成本地應用于檢測來自非加熱食品中的生豬肉的蛋白質，而且能同樣地應用于檢測實施了不會引起蛋白質改性的加工處理(加熱、成型、干燥等)的健康食品、藥品、家畜飼料、寵物食品等中的來自生豬肉的蛋白質。因此，本發(fā)明能夠低成本地、簡單地、正確地解決與食肉相關的各問題，從而可以處理對于生豬肉可引發(fā)變態(tài)反應的患者、或者基于嗜好上或飲食文化上不食用豬肉等理由的所謂與飲食生活相關的社會理念相關的問題。 與PCR或ELISA法相比，本發(fā)明的免疫層析檢測用試劑盒不僅裝置簡便，操作容易，可迅速且正確地檢測非加熱食品中來自生豬肉的蛋白質，而且其器具的供給也非常便宜，因此對一般消費者的需求具有普及和貢獻的優(yōu)點。


圖I是顯示了針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測用試劑盒的使用方法的概略圖。
具體實施例方式以下詳細說明本發(fā)明。作為通過免疫測定法來將非加熱食品中所含的生豬肉與其它肉類進行區(qū)別并特異性識別生豬肉的方法，本發(fā)明著眼于生豬肉中所含的蛋白質、特別是免疫球蛋白G (以下稱為“IgG”)，發(fā)現(xiàn)了用于IgG的免疫層析檢測的多克隆抗體，它可在免疫層析法中作為識別上述免疫球蛋白G的抗體而有效地發(fā)揮功能。已經(jīng)知道，酶標記的標記抗體(偶聯(lián)物)作為檢測該IgG的抗體在CEIA法中是有效的，但其識別的性能、靈敏度和所需時間等方面無法令人滿意。作為IgG檢測用抗體，人們考慮過采用各種具有特異性的抗體，例如免疫能力精密且抗體生成能力也勝過一籌的來自鳥類的典型代表為雞的單(或多)克隆抗體、來自小鼠的單(或多)克隆抗體、來自馬的單(或多)克隆抗體、來自山羊的單(或多)克隆抗體或來自兔的單(或多)克隆抗體。但是經(jīng)進一步深入研究，結果發(fā)現(xiàn)，在這些單(或多)克隆抗體中，用IgG對山羊或兔進行免疫得到的多克隆抗體(對于來自兔的多克隆抗體需制成抗原結合性片段使用)是最簡便且性能良好且能低成本地供給的檢測抗體。并且，來自山羊的多克隆抗體和來自兔的多克隆抗體的抗原結合性片段在進行非加熱食品中生豬肉的IgG的檢測中不會引起非特異性反應，可以迅速、高性能且高靈敏度地進行非加熱食品中生豬肉的IgG的檢測，因此非常有效。
來自山羊的多克隆抗體和來自兔的多克隆抗體的抗原結合性片段的識別性能具備最適合免疫層析檢測法的性能。更具體地說，一個最佳的實施方案是可提供簡便且高精度的免疫層析檢測法以及針對于此的檢查用試劑盒，其中該檢測法使用由來自山羊的多克隆抗體或來自兔的多克隆抗體的抗原結合性片段所構成的多克隆抗體作為可特異性識別特定蛋白質IgG的檢測抗體，從而可將非加熱食品中所含的生豬肉與其它肉類區(qū)分開。來自山羊的多克隆抗體可以直接作為抗體使用。然而在采用來自兔的多克隆抗體的情況下，至少在作為標記成分ー側的檢測抗體使用時，需要用酶切割脂溶性較高的Fe區(qū)域以制成抗原結合性片段，作為識別用抗體直接使用。以下將說明根據(jù)本發(fā)明的使用來自山羊的多克隆抗體或來自兔的多克隆抗體的試驗試劑盒以檢測非加熱食品中生豬肉的IgG的實施方案。 本發(fā)明中使用的展開液組成或試驗試劑盒中使用的化學物質(非生物物質)的組成是以往的免疫層析法中常用的試劑。作為上述免疫層析用試劑，可以使用各種化學物質，例如非離子性表面活性剤、鹽、防腐剤，根據(jù)情況使用的緩沖劑、螯合劑等，以實現(xiàn)其功能/作用?？稍诒景l(fā)明的免疫層析用試劑組合物中使用的非離子性表面活性劑的例子有聚氧こ烯烷基醚、聚氧こ烯/聚氧丙烯烷基醚、聚氧こ烯失水山梨醇脂肪酸酷(商品名“Tween”系列)、聚氧こ烯對叔辛基苯基醚(商品名“Triton”系列)、聚氧こ烯對叔壬基苯基醚(商品名“TritonN”系列)、烷基聚葡糖苷、脂肪酸ニこ醇酰胺、烷基單甘油基醚等。非離子性表面活性劑可以単獨地使用，或將兩種以上混合使用。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中使用的非離子性表面活性劑的含量為相對于免疫層析用試劑組合物的O. 01-10%重量的范圍,優(yōu)選在O. 05-5%重量的范圍。含量低于O. 01%重量、例如為O. 005%重量，則無法進行正確的判定。低于O. 05%重量時，無法抑制非特異性反應，顯示較難進行正確判定的傾向。含量為10%重量以上、例如12%重量或18%重量，則高于所需的濃度，不僅不會對非特異性反應的抑制帶來有利的影響，并且在技術上無意義，不經(jīng)濟，浪費。非離子性表面活性劑還可以任意配合其它非離子性表面活性剤、離子性表面活性劑等結合使用。作為在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物如提取展開液中使用的鹽的典型例子有氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣和氯化鎂等。優(yōu)選氯化鈉。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物如提取展開液中使用的鹽的濃度為O. 02-2M的范圍，優(yōu)選O. 05-1M的范圍，更優(yōu)選O. 1-0. 5M的范圍。濃度低于O. 02M、例如少至O. 002M,則蛋白質的提取作用不足。濃度為2M以上、例如多至5M或10M，則在技術上是無意義的量，高于所需濃度，不經(jīng)濟，浪費。作為本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中使用的鹽，可以只使用ー種，也可以將兩種以上配合使用。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物如提取展開液中，根據(jù)需要使用的緩沖劑沒有特別的限定，只要它能夠實現(xiàn)其作用(緩沖作用)，不會因試樣的添加、或試樣的蒸發(fā)或稀釋所導致的濃度變化、也不會因為自外部混入少許雜質而產(chǎn)生顯著的影響。
本發(fā)明的緩沖劑的例子有乙酸緩沖液(乙酸+乙酸鈉)、磷酸緩沖液(磷酸+磷酸鈉)、檸檬酸緩沖液(檸檬酸+檸檬酸鈉)、硼酸緩沖液、Tris鹽酸緩沖液(三(羥基甲基)氨基甲烷+鹽酸)、TE緩沖液(Tris+乙二胺四乙酸)、TAE緩沖液(Tris+乙酸+乙二胺四乙酸)、TBE緩沖液(Tris+硼酸+乙二胺四乙酸)或HEPES緩沖液(2-[4_(2_羥基乙基)_1_哌嗪基]乙磺酸)等。這些緩沖劑可以單獨地使用，或將至少兩種相結合地使用。優(yōu)選乙酸緩沖液、磷酸緩沖液、Tris鹽酸緩沖液等，更優(yōu)選Tris鹽酸緩沖液。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中，根據(jù)需要使用的緩沖劑的濃度為O. 01-250mM的范圍，優(yōu)選10_200mM的范圍，更優(yōu)選30_180mM的范圍。濃度低于O. OlmM、例如少至O. 008mM,則緩沖作用不足。濃度為250mM以上、例如多至260mM、280mM，則在技術上
是無意義的量，高于所需濃度，不經(jīng)濟，浪費。作為本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中的根據(jù)需要使用的緩沖劑，可以是將兩種以上配合使用。

在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中，根據(jù)需要使用的螯合劑沒有特別限定，只要它可用作具有多個配位基的配位體即可。在本發(fā)明中，螯合劑的例子有乙二胺、二吡啶、乙二胺四乙酸(以下稱為“EDTA”)、EDTA · 2Na、EDTA · 3Na、EDTA · 4Na、EDTA 衍生物(例如 EDTA · 2NH4、EDTA · 3K、EDTA ·特殊銨鹽等)、EDTA金屬鹽(例如EDTA .Ca *2Na等)、羥基乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)系、二羥基乙基乙二胺二乙酸(DHEDDA)系、1,3-丙烷二胺四乙酸(1，3_PDTA)系、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)系、三乙烯四胺六乙酸(TTHA)系、亞硝基三乙酸(NTA)系、葡糖酸系、羥乙基亞氨基二乙酸(HMDA)系、L-天冬氨酸-N，N-二乙酸(ASDA)系、氨基三亞甲基膦酸(NTMP)系、羥基乙烷膦酸(HEDP)系、3-羥基-2，2’-亞氨基二琥珀酸四鈉、菲咯啉、葉啉、冠醚等。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中，根據(jù)需要含有的螯合劑的濃度為O. Ol-IOmM的范圍，優(yōu)選O. l-5mM的范圍，更優(yōu)選O. 5_2mM的范圍。濃度低于O. OlmM、例如少至O. 008mM，則無法抑制非特異性反應，無法進行正確的判定。濃度為IOmM以上、例如多至12mM或18mM，則高于所需濃度，不經(jīng)濟，浪費。在本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物中，可以添加公知的能抑制基于生物學親和性的副反應或抑制非特異性反應的添加劑，例如用于促進抗原抗體反應或抑制非特異性反應的蛋白質(例如牛血清白蛋白、酪蛋白、明膠等)、高分子化合物(例如聚乙二醇、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯基醇、葡聚糖等)、離子性表面活性劑或聚陰離子(例如硫酸葡聚糖、肝素、聚苯乙烯磺酸、硫酸軟骨素等)，以及防腐劑或抗菌劑等。這些添加劑可以單獨地使用，或兩種以上相結合地使用，其使用有效，沒有任何妨礙。這些用于促進抗原抗體反應或抑制非特異性反應的蛋白質、高分子化合物、離子性表面活性劑或聚陰離子以及防腐劑或抗菌劑等中的一種或多種添加劑可以保持在構成固定相的層析介質上的流動相的流路上，其使用有效，沒有任何妨礙。本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物的使用方法可以是將組合物涂布在免疫層析裝置的樣品板(試樣添加部分)中，或將樣品板浸潰在組合物中，然后進行干燥，由此將組合物保持在樣品板上。將本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物保持在免疫層析介質上的其它方式可以是在試樣添加部位的端部和吸收部位之間的適當位置處設置添加劑保持部，以這樣的方式將組合物保持在其中。例如，組合物的施加區(qū)域可以在試樣添加部分的附近、標記物保持部位或其附近。其中，優(yōu)選將組合物只保持在試樣添加部分和/或標記物保持部上。本發(fā)明的免疫層析用試劑組合物的使用方法并不限于上述使用方式，該組合物可以提取展開液的形式使用，也可以試樣的稀釋液的形式使用。例如，本發(fā)明的提取展開液是超純水或緩沖液，其中加入了非離子性表面活性劑(如Tween 20、Triton-100等)、氯化鈉、防腐劑(如疊氮化鈉)等，并且還可添加公知的能抑制基于生物學親和性的副反應或抑制非特異性反應的上述添加劑(例如牛血清白蛋白、PVP等)。提取展開液通常是使用超純水作為溶劑，在其中加入非離子表面活性剤、蛋白質和高分子化合物，還可以根據(jù)需要進ー步加入緩沖液或螯合劑等。加入的順序沒有特別限定，也可以同時加入。在該組合物作為提取展開液使用時，可以根據(jù)所要檢測的試樣的狀態(tài)、例如為固體狀還是糊劑狀來選擇合適提取展開液的使用方式?？梢詫⑺獧z測的試樣與展開液預先混合，將混合物供給/滴加到樣品板(試樣添加部)上以展開，也可以先將試樣供給/滴加到樣品板(試樣添加部)上，然后將展開液供給/滴加到樣品板(試樣添加部)上以展開。在該組合物作為試樣稀釋液使用時，將試樣稀釋為稀釋液，然后以展開液的形式供 給、滴加到樣品板(試樣添加部)上，也可以將樣品板部分(試樣添加部)浸潰在稀釋液中以進行展開。本發(fā)明的含有檢測對象物的試樣(檢體)的代表性例子有非加熱食品，在蛋白質未改性的溫度下進行了主要用于干燥或滅菌處理等處理的食品、健康食品和寵物食品等，但并不限于此，家畜飼料或藥品等也可以作為試樣(檢體)使用。在本發(fā)明中，優(yōu)選使用多克隆抗體作為檢測抗體，其中，所述多克隆抗體是通過將豬血清中所含的IgG (市售商品)作為免疫用抗原對兔或山羊進行免疫得到的，其可特異性識別上述IgG。本發(fā)明的多克隆抗體的制備方法如下所述。[多克隆抗體的制備]使用豬血清中所含的IgG (市售商品)按照常規(guī)方法對兔進行免疫，獲得抗血清。由抗血清中純化來自兔的抗豬IgG抗體，這通過用50%飽和硫酸銨進行鹽析，然后用DEAE柱(陰離子交換柱)進行純化、回收而實現(xiàn)。但是，該來自兔的抗豬IgG抗體如果直接在免疫層析檢測法或ELISA檢測法中作為檢測抗體使用，雖然會與生豬肉顯著反應，但是也會與標準緩沖液(背景)反應，因此無法作為檢測抗體使用。因此，沒有對牛肉、羊肉、雞肉實施。該試驗結果如“表I”所示。表中的“HamaPhoto”是“Hamamatsu光密度計”的簡稱。[表 I]
權利要求
1.ー種利用多克隆抗體作為檢測抗體的針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測法，其中，所述多克隆抗體通過用豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到，并且能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G。
2.一種針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測裝置，包括保持有標記抗體的標記物保持部，所述標記抗體是用豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到的、能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G且用標記物標記的多克隆抗體；以及檢測部，其中固定有能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G的多克隆抗體。
3.根據(jù)權利要求2所述的免疫層析檢測裝置，其特征在于，所述裝置基本上由試樣添加部、標記物保持部、層析介質、檢測部和吸收部構成。
4.一種針對來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測用試劑盒,所述試劑盒基本上由試樣添加部、標記物保持部、層析介質、檢測部和吸收部構成，其中，所述標記物保持部保有標記抗體，所述標記抗體是用豬免疫球蛋白G對山羊進行免疫得到的、能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G且用標記物標記的多克隆抗體；所述檢測部固定有能特異性識別生豬肉中所含的免疫球蛋白G的多克隆抗體。
5.根據(jù)權利要求4所述的免疫層析檢測用試劑盒，其特征在于，所述標記抗體和固定于所述檢測部的抗體是用同一方法對山羊進行免疫得到的。
全文摘要
本發(fā)明提供一種檢測抗體的制備方法，以及使用該檢測抗體進行的簡便且高精度的檢測方法及其檢查試劑盒。該檢測抗體適合用于特異性地、高性能且高靈敏度地通過免疫測定法對非加熱食品中生豬肉的進行檢測，且不會引發(fā)非特異性反應。本發(fā)明還提供了一種非加熱食品中來自生豬肉的蛋白質的免疫層析檢測法，其中，以可特異性識別非加熱食品中的生豬肉所含的免疫球蛋白G的抗體作為檢測抗體；以及用于實施該檢測法的免疫層析檢測裝置和免疫層析檢測用試劑盒。
文檔編號G01N33/543GK102687012SQ201180004957
公開日2012年9月19日 申請日期2011年2月24日 優(yōu)先權日2010年2月25日
發(fā)明者巖本久彥, 望月一芳, 榊原雄広, 芝井勇亮 申請人:田中貴金屬工業(yè)株式會社