專利名稱：Fab和Fab’分子的分析方法
Fab和Fab’分子的分析方法本發(fā)明涉及一種測(cè)量聚乙二醇化蛋白中的酸性物質(zhì)的改進(jìn)的測(cè)定方法。特別地，本發(fā)明涉及一種測(cè)量聚乙二醇化Fab和聚乙二醇化Fab’抗體形式中的酸性物質(zhì)的改進(jìn)的測(cè)定方法。聚乙二醇化Fab和聚乙二醇化Fab’抗體形式是有用的，因?yàn)槠涮峁┡c全抗體類似的體內(nèi)循環(huán)半衰期，卻沒(méi)有與全抗體相關(guān)的效應(yīng)子功能。這些形式已經(jīng)開(kāi)始用于治療中，并且需要進(jìn)行長(zhǎng)期穩(wěn)定性測(cè)試，以輔助許可這些治療性產(chǎn)品出售的監(jiān)管批準(zhǔn)過(guò)程。此外，一旦被批準(zhǔn)在公眾中使用，所制造的產(chǎn)品在可供出售之前必須進(jìn)行批次釋放測(cè)試。制劑中存在酸性物質(zhì)，例如在儲(chǔ)藏之后，可能表明Fab和Fab’發(fā)生了降解(特別是脫酰胺化)。脫酰胺化被監(jiān)管機(jī)構(gòu)歸類為一種降解途徑，就此而言為產(chǎn)品設(shè)定了脫酰胺化水平的界限。在產(chǎn)品的保質(zhì)期內(nèi)不應(yīng)當(dāng)超過(guò)這些水平。同時(shí)不期望受到理論的約束，認(rèn)為天冬酰胺殘基可能通過(guò)脫酰胺化經(jīng)由琥珀酰亞胺基碳酸酯中間體而被降解，從而產(chǎn)生酸性物質(zhì)，例如異天冬氨酸/天冬氨酸，如方案I中所列出:
權(quán)利要求
1.一種測(cè)量由Fab-PEG或Fab’ -PEG的Fab或Fab’組分降解所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)的方法，包括步驟: a)用酶從Fab-PEG或Fab’-PEG中將PEG和連接子切割下來(lái)， b)任選地將步驟a)中產(chǎn)生的PEG和連接子從Fab或Fab’中分離出來(lái)，以提供Fab或Fab’以及 c)對(duì)與經(jīng)切割的Fab或Fab’和/或經(jīng)切割的PEG相關(guān)的酸性物質(zhì)進(jìn)行定量分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶或胰凝膠蛋白酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中步驟a)中的切割在25至40°C的溫度范圍下進(jìn)行，例如37°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟a)中的切割發(fā)生于賴氨酸與蘇氨酸之間，特別是在Fab或Fab’重鏈的C末端中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中賴氨酸和蘇氨酸發(fā)現(xiàn)于位于Fab’C末端的序列SCDKTHTCAA 中。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述酶切割Fab’的絞鏈部分，從Fab’中釋放出PEG和連接子。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的方法，其中將步驟a)中產(chǎn)生的PEG和連接子從Fab或Fab’中分離出來(lái)，以提供Fab或Fab’。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述分離通過(guò)使用陽(yáng)離子交換色譜、cIEF和/或尺寸排阻色譜實(shí)現(xiàn)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的方法，其中通過(guò)使用陽(yáng)離子交換色譜或成像毛細(xì)管等電電泳，例如CEX-HPLC，對(duì)酸性物質(zhì)進(jìn)行定量。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的方法，其中所述Fab’包含或由SEQID N0:10組 成。
全文摘要
一種測(cè)量由Fab-PEG或Fab’-PEG中的Fab或Fab’組分降解所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)的方法，包括步驟a)用酶從Fab-PEG或Fab’-PEG中將PEG和連接子切割下來(lái)，b)任選地將步驟a)中產(chǎn)生的PEG和連接子從Fab或Fab’中分離出來(lái)，以提供Fab或Fab’以及c)對(duì)與經(jīng)切割的Fab或Fab’和/或經(jīng)切割的PEG相關(guān)的酸性物質(zhì)進(jìn)行定量分析。
文檔編號(hào)G01N33/68GK103229058SQ201180036182
公開(kāi)日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2011年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者B·J·史密斯, H·M·凱爾克 申請(qǐng)人:Ucb醫(yī)藥有限公司