專利名稱：確定慢性腎病分期的方法、其設(shè)備和操作所述設(shè)備的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于確定慢性腎病的分期的方法和設(shè)備，以及用于操作所述設(shè)備的方法。
背景技術(shù)：
慢性腎病(CKD)是一種進展的疾病，指示腎損傷的發(fā)現(xiàn)或腎功能惡化不進行治療 時長期持續(xù)的狀態(tài)。隨著其進展，所述疾病導(dǎo)致晚期腎衰竭，并且如果不進行人工透析或腎 臟移植，生存將變得困難。
晚期腎衰竭在全球范圍內(nèi)增長。為了治療這種疾病，認為早期治療和早期檢測，特 別是在疾病是所謂的“隱藏的慢性腎病”時的檢測是重要的。
據(jù)稱日本目前有大約13，300，000名CKD患者。這表示8名成年人中大約有I人 就是CKD患者。
在透析患者中最常發(fā)生的原發(fā)病是糖尿病性腎病，其是三種主要的糖尿病并發(fā)癥 中的一種。由于糖尿病性腎病是CKDs中的一種，因此患有糖尿病的患者可能患有CKD。按照 2006年的國家健康和營養(yǎng)檢查調(diào)查(健康、勞動和福利部(Ministry ofHealth, Labor and Welfare))估計糖尿病患者的人數(shù)為8，200，000人，包括潛在的糖尿病患者為18，700，000 人。由于假定這些患者中的30%將發(fā)展腎衰竭，在將來CKD患者的人數(shù)將持續(xù)增長。例如， 日本每年用于透析治療的醫(yī)療費用約為5，400，000日元/人，總共為1.5萬億日元。由于 透析患者的人數(shù)增長，透析治療所需要的醫(yī)療費用也在增長。因此，減少這些醫(yī)療費用的措 施是急需的。由于這一原因，腎損傷的早期檢測、防止癥狀加重的早期治療、以及最終盡可 能減少導(dǎo)入透析的患者人數(shù)在全世界認為是重要的。
CKD按照腎小球濾過率(GFR)分期，腎小球濾過率是腎功能的評價指標。即，按照 GFR(NPLl)，CKD 分成五期。
然而，這樣進行的CKD分期的確定是基于血清肌酸酐濃度。由于血清肌酸酐濃度 受肌肉量的強影響，因此，存在問題，如排除這樣的影響進行準確的確定是困難的。此外，由 于直到估算的GFR(eGFR)變?yōu)?0%以下時才觀察到血清肌酸酐濃度的增加，因此難以發(fā)現(xiàn) 微小的腎損傷。盡管如此，還沒有開發(fā)出替代前述方法的適當(dāng)?shù)拇_定方法。
引用列表
非專利文獻
NPLl :2007年5月23日修訂的CKD Shinryo Guide [用于慢性腎病的診斷和 治療的臨床實踐指南(Clinical Practice Guidebook for Diagnosis and Treatment of Chronic Kidney Disease)]的第 12-13 頁，由日本腎臟學(xué)會(Japanese Society of Nephrology)編輯,2009 年出版。
發(fā)明概述
技術(shù)問題
本發(fā)明的目的在于提供一種用于確定慢性腎病的分期的方法和設(shè)備，以及用于操作所述設(shè)備的方法。
問題的方案
經(jīng)過持續(xù)的反復(fù)試驗，本發(fā)明人進行了各個分期之間的CKD患者的透析前血漿和透析前尿液的準確比較，并且努力尋找一種低分子量化合物，所述低分子量化合物的含量認為與分期進展有關(guān)系。
經(jīng)過這樣持久的努力，本發(fā)明人最終發(fā)現(xiàn)存在這樣一種低分子量化合物，其含量隨著分期進展而增加。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)存在僅在特定的分期中觀察到的低分子量化合物。并且，作為廣泛研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這樣的特定的低分子量化合物在血漿中的含量可以用作適當(dāng)確定慢性腎病的分期的指標。
具體地，本發(fā)明如下述
(I)用于確定慢性腎病的分期的方法
[1-1]
一種用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步驟
(A-1)通過用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下文所示的特定條件下處理來自所述受試者的樣品，確定至少一種選自由下文所示的標記(1)-(16)組成的組的標記的含量，和
(B-1)通過將已經(jīng)在步驟(A-1)中測定的每種標記在來自所述受試者的樣品中的 含量與在每個分期中確定的參照含量范圍進行比較，而確定由每個標記指示的分期
液相色譜條件
液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；
柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；
前置柱(Pre-column) TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；
移動相A :0. 05%甲酸;
移動相B :乙腈；
對于梯度洗脫
0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，
15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和
20-35min :保持100%的移動相B ；
流速0. 2mL/min ;和
測量樣品容量5yL。
飛行時間質(zhì)譜條件
測量范圍m/z70至1,000 ；
Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；
離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；
檢測器2,800V ;和
測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)
標記
標記(I):在陽離子測定[M+H]+中具有2. 03±0. 5(min)的保留時間和104. 10±10mDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
標記 257.1OilOmDa
標記 312. 12± IOmDa
標記 232.15±IOmDa
標記 265.12±IOmDa
標記 300.22±IOmDa
標記 211.08±IOmDa
標記 411. 13± IOmDa
標記 263.1OilOmDa
標記 286.13±IOmDa
標記 495.23±IOmDa
標記 529.22±IOmDa
標記 304.13±IOmDa
標記 389.21±IOmDa
標記 197.05±IOmDa
標記 327.09±IOmDa⑵在陽離子測定[Μ+ΗΓ3. 80±0·的精確質(zhì)量(3):在陽離子測定[M+H]+中具有6. 52±0.的精確質(zhì)量⑷在陽離子測定[Μ+ΗΓ的精確質(zhì)量(5):在陽離子測定[Μ+ΗΓ的精確質(zhì)量 (6):在陽離的精確質(zhì)量⑵在陰離子測定[Μ-ΗΓ的精確質(zhì)量⑶在陰 離子測定[Μ-ΗΓ的精確質(zhì)量(9):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有8. 25±0.的精確質(zhì)量(10)在陽的精確質(zhì)量(11):在陽的精確質(zhì)量(12)在陽的精確質(zhì)量(13)在陽的精確質(zhì)量(14)在陽的精確質(zhì)量(15)在陰的精確質(zhì)量(16)在陰的精確質(zhì)量fi/z)的標記fl/z)的標記fl/z)的標記6. 87±0·8. 32±0·n/z)的標記；子測定[Μ+ΗΓ n/z)的標記；fi/z)的標記中具有10. 54±0·6. 57±0·19±0·fi/z)的標記/z)的標記；離子測定[M+H]+中具有2. 26±0./z)的標記；離子測定[M+H]+中具有8. 29±0./z)的標記；離子測定[M+H]+中具有8. 32±0./z)的標記；離子測定[M+H]+中具有8. 64±0./z)的標記；離子測定[M+H]+中具有9. 24±0./z)的標記；離子測定[Μ-ΗΓ中具有3. 93±0./z)的標記；和離子測定[Μ-ΗΓ中具有5. 55±0. /z)5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和5 (min)的保留時間和的標記。
下文中，液相色譜和飛行時間質(zhì)譜的條件與上述相同，并且，除非另外指明，標記 (1)-(16)是由前述保留時間和精確質(zhì)量指定的那些。
[1-2]
根據(jù)1-1項所述的方法，所述方法還包括下述步驟(C-1)當(dāng)已經(jīng)在步驟(B-1)中確定每個標記指示同一分期時，確定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
[1-3]
根據(jù)1-1項或1-2項所述的方法，其中步驟(A-1)中測定的標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
[1-4]
一種用于確定患有腎病的受試者中慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步 驟
(A-2)通過用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在前述特定條件下處理來自所述受試者的 樣品，測定至少一種選自由標記(10)-(16)組成的組的標記，和
(B-2)當(dāng)在步驟(A-2)中檢測到所述至少一種標記時，確定所述受試者中的慢性 腎病的分期是嚴重的。
[1-5]
一種用于確定患有腎病的受試者中慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步 驟
(B-1)通過將至少一種選自由上述標記(1)-(16)組成的組的標記在來自所述受 試者的樣品中的含量與在每個分期中確定的參照含量范圍比較來確定由每種標記指示的 分期，所述至少一種標記的含量已經(jīng)通過液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在前述特定條件下測 定；和
(C-1)當(dāng)已經(jīng)在步驟(B-1)中確定每種標記指示同一分期時，確定所述受試者中 的慢性腎病處于所述分期。
[1-6]
根據(jù)1-5項所述的方法，其中步驟(B-1)中的目的標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
(II)用于確定慢性腎病的分期的設(shè)備和用于操作所述設(shè)備的方法。
[I1-1]
—種用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的設(shè)備，所述設(shè)備包括
(A-1)用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在前述特定條件下測定至少一種選自由上文所 示的標記(1)-(16)組成的組的標記在來自所述受試者的樣品中的含量的裝置，
(B-1)通過將已經(jīng)通過裝置(A-1)測定的每種標記在來自所述受試者的樣品中的 含量與在每個分期中確定的參照含量范圍進行比較來確定由每種標記指示的分期的裝置， 和
(C-1)當(dāng)已經(jīng)通過裝置(B-1)確定每種標記指示同一分期時，確定所述受試者中 的慢性腎病處于所述分期的裝置。
[I1-2]
根據(jù)I1-1項所述的設(shè)備，其中通過裝置(A-1)測定的標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
[I1-3]
一種用于確定患有設(shè)備的受試者中的慢性腎病的分期的設(shè)備，所述設(shè)備包括
(A-2)用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在前述特定條件下測定至少一種選自由上文所 示的標記(10)-(16)組成的組的標記的裝置，和
(B-2)當(dāng)通過裝置(A-2)檢測到所述至少一種標記時，確定所述受試者中的慢性 腎病的分期是嚴重的裝置。
[I1-4]
一種用于操作I1-1項的設(shè)備的方法，所述方法包括下述步驟
(a-Ι)操作裝置(A-1)來測定至少一種選自由標記(1)-(16)組成的組的標記在提 取自受試者的樣品中的含量，
(b-Ι)操作裝置(B-1)通過將在步驟(a-Ι)中測定的含量與在每個分期中確定的 參照含量范圍進行比較來確定由每種標記指示的分期，和
(c-Ι)操作裝置(C-1)，當(dāng)已經(jīng)在步驟(b-Ι)中確定每種標記指示同一分期時，確 定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
[I1-5]
一種用于操作I1-2項的設(shè)備的方法，所述方法包括下述步驟
(a-Ι)操作裝置(A-1)來測定至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記在提 取自受試者的樣品中的含量，
(b-Ι)操作裝置(B-1)通過將在步驟(a-Ι)中測定的含量與在每個分期中確定的 參照含量范圍進行比較來確定由每種標記指示的分期，和
(c-Ι)操作裝置(C-1)，當(dāng)已經(jīng)在步驟(b-Ι)中確定每種標記指示同一分期時，確 定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
[I1-6]
一種用于操作I1-3項的設(shè)備的方法，所述方法包括下述步驟
(a-2)操作裝置(A-2)來測定在提取自受試者的樣品中的至少一種選自由標記(10)-(16)組成的組的標記，和
(b-2)操作裝置(B-2)，當(dāng)在步驟(a-2)中在所述樣品中檢測到所述至少一種標記 時，確定所述受試者中的慢性腎病的分期是嚴重的。
(III)用于確定慢性腎病的分期的試劑盒
[II1-1]
一種用于確定慢性腎病的分期的試劑盒，所述試劑盒包括用液相色譜/飛行時間 質(zhì)譜在前述特定條件下檢測至少一種選自由上文所示的標記(1)-(16)組成的組的標記所 需要的材料。
[II1-2]
一種用于確定慢性腎病的分期的試劑盒，所述試劑盒包括用液相色譜/飛行時間 質(zhì)譜在前述特定條件下檢測至少一種選自由上文所示的標記(1)-(9)組成的組的標記所 需要的材料。
[II1-3]
一種用于確定慢性腎病的分期的試劑盒，所述試劑盒包括用液相色譜/飛行時間 質(zhì)譜在前述特定條件下檢測至少一種選自由上文所示的標記(10)-(16)組成的組的標記 所需要的材料。
發(fā)明的有益效果
按照本發(fā)明，應(yīng)用新標記確保比應(yīng)用常規(guī)方法更適當(dāng)?shù)拇_定慢性腎病分期。
特別地，按照本發(fā)明，可以以低成本在短時間內(nèi)容易地確定慢性腎病的分期。
此外，通過應(yīng)用本發(fā)明確定慢性腎病的分期，預(yù)計許多患有腎病的患者以及涉及 腎病的診斷、治療等的醫(yī)療機構(gòu)將得到多種益處。
附圖簡述
[

圖1]圖1顯示表明每個分期中每種標記(ESI-正)的成分變化(SN>20)的圖 表。[圖2]圖2顯示表明每個分期中每種標記(ESI-正)的成分變化(SN> 20)的圖表。[圖3]圖3顯示表明每個分期中每種標記(ESI-正)的成分變化(SN> 20)的圖表。[圖4]圖4顯示表明每個分期中每種標記(ESI-負)的成分變化(SN> 20)的圖表。[圖5]圖5顯示表明每個分期中每種標記(ESI-正)的成分變化的圖表。[圖6]圖6顯不表明每個分期中每種標記(ESI-負)的成分變化的圖表。實施方案描述I.用于確定慢性腎病的分期的方法本發(fā)明所述的確定慢性腎病的分期的第一實施方案(方法(1))包括下述步驟(A-1)評估至少一種標記在來自受試者的樣品中的含量，所述至少一種標記選自 由標記(1)_(16)組成的組，其中保留時間和精確質(zhì)量(m/z)如下文在下述條件下進行的液 相色譜/飛行時間質(zhì)譜測定中定義液相色譜條件液相色譜設(shè)備Agilentll00系列(Agilent)；柱CadenzaC182xl50mm, 3 u m(Imtakt)；前置柱TCIOPT I-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸；移動相B:乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和20-35min :保持 100% 的移動相 B ；流速0.2mL/min ;和測量樣品容量5 ii L。飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至 1，000 ；Orificel 電壓10to40V，-10to (-40) V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V;和測量設(shè)備AccuT0F JMS-T100LC (JE0L)。(1):在陽離子測定[M+H].中具有2. 03±0. 5(min)的保留時間和104. 10±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(2):在陽離子測定[M+H].中具有3. 80±0. 5(min)的保留時間和257. 10±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(3):在陽離子測定[M+H]+中具有6. 52±0. 5(min)的保留時間和312. 12±10mDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(4):在陽離子測定[M+H]+中具有6. 87±0. 5(min)的保留時間和232. 15± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(5):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 32±0. 5(min)的保留時間和265. 12± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(6):在陽離子測定[M+H]+中具有10. 54±0. 5(min)的保留時間和300. 22± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(7):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有6. 57±0. 5(min)的保留時間和211.1OilOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(8):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有7. 19±0. 5(min)的保留時間和411. 13± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(9):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有8. 25±0. 5(min)的保留時間和263.1OilOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(10):在陽離子測定[M+H]+中具有2. 26±0. 5(min)的保留時間和286. 13± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 29±0. 5(min)的保留時間和495. 23± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 32±0. 5(min)的保留時間和529. 22± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(13):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 64±0. 5(min)的保留時間和304. 13± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9. 24±0. 5(min)的保留時間和389. 21 ± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3. 93±0. 5(min)的保留時間和197. 05± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和
(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5. 55±0. 5(min)的保留時間和327. 09± IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；
(B-1)通過將已經(jīng)在步驟(A-1)中測定的每種標記在來自所述受試者的樣品中的含量與在每個分期中確 定的參照含量范圍進行比較來確定由每種標記指示的分期，和
(C-1)當(dāng)已經(jīng)在步驟(B-1)中確定每種標記指示同一分期時，確定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
本發(fā)明所述的確定慢性腎病的分期的第二實施方案(方法(2))包括下述步驟
(A-2)評估至少一種標記在來自受試者的樣品中的含量，所述至少一種標記選自由標記(10)-(16)組成的組，其中保留時間和精確質(zhì)量(m/z)如下文在下述條件下進行的液相色譜/飛行時間質(zhì)譜測定中所示
液相色譜條件
液相色譜設(shè)備Agilentll00系列(Agilent)；
柱CadenzaC182xl50mm, 3 μ m(Imtakt)；
前置柱TCIOPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；
移動相A :0. 05%甲酸；移動相B:乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和20-35min :保持 100% 的移動相 B ；流速0.2mL/min ;和測量樣品容量5li L。飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至 1，000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(_40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V;和測量設(shè)備AccuTOF JMS-T100LC (JE0L)。(10):在陽離子測定[M+H]+中具有2. 26±0. 5(min)的保留時間和286. 13±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 29±0. 5(min)的保留時間和495. 23±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 32±0. 5(min)的保留時間和529. 22±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H]+中具有8. 64±0. 5(min)的保留時間和304. 13±10mDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9. 24±0. 5(min)的保留時間和389. 21 ± lOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[M-H]_中具有3. 93±0. 5(min)的保留時間和197. 06± lOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[M-H]_中具有5. 55±0. 5(min)的保留時間和327. 09± lOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(B-2)當(dāng)在步驟(A-2)中證實存在所述至少一種標記時，確定所述受試者中的慢 性腎病的分期是嚴重的。本發(fā)明所述的用于確定慢性腎病的分期的方法⑴和⑵是檢驗來自受試者的樣 品來確定每名受試者屬于何種分期的方法。關(guān)于分期，例如，可以應(yīng)用基于腎小球濾過率(GFR)分期，腎小球濾過率(GFR) 是腎功能的評價指標。具體地，如表1所示，可以無需修正應(yīng)用依據(jù)GFR量的五個分期 (2007年5月23日修訂的CKD Shinryo Guide [用于慢性腎病的診斷和治療的臨床實踐指 南(Clinical Practice Guidebook for Diagnosis and Treatment of Chronic Kidney Disease)]的第 12-13 頁，由日本腎臟學(xué)會(Japanese Society ofNephrology)編輯，2009 年出版)。GFR的量可以由估算等式估算，其中基于血清肌酸酐水平。這種估算的GFR的量 稱為 “eGFR”。
表I
權(quán)利要求
1.用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步驟 (A-1)通過用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下述條件下處理來自所述受試者的樣品，測定至少一種選自由下文所示的標記(1)-(16)組成的組的標記的含量液相色譜條件液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；前置柱TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸;移動相B :乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100%的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和測量樣品容量5 μ L ;飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至1,000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)；標記(1):在陽離子測定[M+H]+中具有2.03±0.5(min)的保留時間和104.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(2):在陽離子測定[M+H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(3):在陽離子測定[M+H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(4):在陽離子測定[M+H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(5):在陽離子測定[M+H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(6):在陽離子測定[M+H]精確質(zhì)量(m/z)的標記；(7):在陰離子測定[M-H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(8):在陰離子測定[M-H]確質(zhì)量(m/z)的標記；(9):在陰離子測定[M-H]中具有3. 80±0. 5(min)的保留時間和257.1OilOmDa的精中具有6. 52±0. 5(min)的保留時間和312. 12± IOmDa的精中具有6. 87±0. 5(min)的保留時間和232. 15± IOmDa的精中具有8. 32±0. 5(min)的保留時間和265. 12± IOmDa的精中具有10. 54±0. 5(min)的保留時間和300. 22 ± IOmDa的中具有6. 57±0. 5(min)的保留時間和211. 08± IOmDa的精中具有7. 19±0.5(min)的保留時間和411. 13± IOmDa的精中具有8. 25±0. 5(min)的保留時間和263.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(10):在陽離子測定[M+H] +中具有2.26±0·5 (min)的保留時間和286.13±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H] +中具有8.29±0·5 (min)的保留時間和495.23±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H] +中具有8.32±0·5 (min)的保留時間和529.22±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H] +中具有8.64±0·5 (min)的保留時間和304.13±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H] +中具有9.24±0·5 (min)的保留時間和389.21±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3.93±0·5 (min)的保留時間和197.05 + IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5.55±0·5 (min)的保留時間和327.09 + IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(B-1)通過將已經(jīng)在步驟(A-1)中測定的每種標記在來自所述受試者的樣品中的含量與在每個分期中確定的參照含量范圍進行比較，而確定由每個標記指示的分期；和(C-1)當(dāng)已經(jīng)在步驟(A-1)中測定的每個標記指示同一分期時，確定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(A-1)中測定的所述標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
3.用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步驟 (B-1)通過將至少一種選自由下文所示的標記(1)-(16)組成的組的標記 的含量與在每個分期中確定的參照含量范圍比較來確定由每種標記指示的分期，所述至少一種標記的含量已經(jīng)通過用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下述條件下處理來自所述受試者的樣品而測液相色譜條件液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；前置柱TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸;移動相B :乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度， 15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100%的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和測量樣品容量5 μ L ;飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至1,000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)；標記(1):在陽離子測定[M+H]+中具有2.03±0.5 (min)的保留時間和104.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(2):在陽離子測定[M+H]+中具有3.80±0. 5(min)的保留時間和257.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(3):在陽離子測定[M+H]+中具有6.52±0.5 (min)的保留時間和312. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(4):在陽離子測定[M+H]+中具有6.87±0.5 (min)的保留時間和232. 15± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(5):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0.5 (min)的保留時間和265. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(6):在陽離子測定[M+H]+中具有10.54±0. 5(min)的保留時間和300. 22± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(7):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有6.57±0.5 (min)的保留時間和211. 08± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(8):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有7.19±0.5(min)的保留時間和411. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(9):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有8.25 ±0.5 (min)的保留時間和263.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(10):在陽離子測定[M+H]+中具有2.26±0. 5(min)的保留時間和286. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8.29±0. 5(min)的保留時間和495. 23± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0. 5(min)的保留時間和529. 22± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H]+中具有8.64±0. 5(min)的保留時間和304. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9.24±0. 5(min)的保留時間和389. 21 ± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3.93±0. 5(min)的保留時間和197. 05± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5.55±0. 5(min)的保留時間和327. 09± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(C-1)當(dāng)已經(jīng)在步驟(B-1)中確定每種標記指示同一分期時，確定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中步驟(B-1)中的目的標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
5.用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步驟 (A-2)通過用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下述條件下處理來自所述受試者的樣品而測定至少一種選自由下文所示的標記(10)-(16)組成的組的標記的存在液相色譜條件液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；前置柱TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸;移動相B :乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100%的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和測量樣品容量5 μ L ;飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至1,000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)；標記(10):在陽離子測定[M+H]+中具有2.26±0. 5(min)的保留時間和286. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8.29±0. 5(min)的保留時間和495. 26± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0. 5(min)的保留時間和529. 28± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H]+中具有8.64±0. 5(min)的保留時間和304. 15± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9.24±0. 5(min)的保留時間和389. 24± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3.93±0. 5(min)的保留時間和197. 14± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5.55±0. 5(min)的保留時間和327. 28± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(B-2)當(dāng)在步驟(A-2)中檢測到所述至少一種標記時，確定所述受試者中的慢性腎病的分期是嚴重的。
6.用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的設(shè)備，所述設(shè)備包括(A-1)應(yīng)用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下述條件下測定至少一種選自由下文所示的標記(1)-(16)組成的組的標記在來自所述受試者的樣品中的含量的裝置液相色譜條件液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；前置柱TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸;移動相B :乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100%的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和測量樣品容量5 μ L ;飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至1,000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)；標記(1):在陽離子測定[M+H]+中具有2.03±0.5 (min)的保留時間和104.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(2):在陽離子測定[M+H]+中具有3.80±0. 5(min)的保留時間和257.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(3):在陽離子測定[M+H]+中具有6.52±0.5 (min)的保留時間和312. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(4):在陽離子測定[M+H]+中具有6.87±0.5 (min)的保留時間和232. 15± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(5):在陽離子測定[M±H]+中具有8.32±0. 5(min)的保留時間和265. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(6):在陽離子測定[M+H]+中具有10.54±O. 5 (min)的保留時間和300. 22 ± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(7):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有6.57±0.5 (min)的保留時間和211. 10± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(8):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有7.19±0.5(min)的保留時間和411. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(9):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有8. 25 ±0.5 (min)的保留時間和263.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(10):在陽離子測定[M+H] +中具有2.26±0·5 (min)的保留時間和286.13±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H] +中具有8.29±0·5 (min)的保留時間和495.23±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H] +中具有8.32±0·5 (min)的保留時間和529.22±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H] +中具有8.64±0·5 (min)的保留時間和304.13±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H] +中具有9.24±0·5 (min)的保留時間和389.21±IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3.93±0·5 (min)的保留時間和197.05 + IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5.55±0·5 (min)的保留時間和327.09 + IOmDa 的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(B-1)通過將已經(jīng)通過裝置(A-1)測定的每種標記在來自所述受試者的樣品中的含量與在每個分期中確定的參照含量范圍進行比較而確定由每種標記指示的分期的裝置，和 (C-1)當(dāng)已經(jīng)通過裝置(B-1)確定每種標記指示同一分期時，確定所述受試者中的慢性腎病處于所述分期的裝置。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的設(shè)備，其中通過裝置(A-1)測定的所述標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
8.用于確定患有腎病的受試者中的慢性腎病的分期的設(shè)備，所述設(shè)備包括(A-2)應(yīng)用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜在下述條件下測定至少一種選自由下文所示的標記(10)-(16)組成的組的標記的裝置液相色譜條件液相色譜設(shè)備=AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 μ m (Imtakt)；前置柱TCI OPT1-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A :0. 05%甲酸;移動相B :乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100%的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和測量樣品容量5 μ L ;飛行時間質(zhì)譜條件測量范圍m/z70至1,000 ；Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(_40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-T100LC (JE0L)；標記(10):在陽離子測定[M+H].中具有2.26±0. 5(min)的保留時間和286. 13±10mDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8.29±0. 5(min)的保留時間和495. 23± lOmDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0. 5(min)的保留時間和529. 22± lOmDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H].中具有8.64±0. 5(min)的保留時間和304. 13±10mDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9.24±0. 5(min)的保留時間和389. 21 ± lOmDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[M-HF中具有3.93±0. 5(min)的保留時間和197. 06±10mDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[M-HF中具有5.55±0. 5(min)的保留時間和327. 09± lOmDa的 精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(B-2)當(dāng)在步驟(A-2)中檢測到所述至少一種標記時，確定所述受試者中的慢性腎病 的分期是嚴重的裝置。
9.用于確定慢性腎病的分期的試劑盒，所述試劑盒包括應(yīng)用液相色譜/飛行時間質(zhì)譜 在下述條件下檢測至少一種選自由下文所示的標記(1)_(16)組成的組的標記所需要的材 料液相色譜條件液相色譜設(shè)備AgilentllOO系列(Agilent)；柱Cadenza C182xl50mm, 3 u m (Imtakt)；前置柱TCI OPT I-GUARD Fit ODS(TCI)；移動相A:0. 05%甲酸;移動相B:乙腈；對于梯度洗脫0-15min :移動相A中5%至95%的移動相B的線性梯度，15-20min :移動相A中95%至100%的移動相B的線性梯度，和 20-35min :保持100 %的移動相B ；流速0. 2mL/min ;和 測量樣品容量5 ii L ;飛行時間質(zhì)譜條件 測量范圍m/z70至1,000 ；.Orificel 電壓10 至 40V, -10 至(-40)V 掃描；離子導(dǎo)向電壓500至2，500V掃描；檢測器2，800V ;和測量設(shè)備Accu TOF JMS-TIOOLC (JEOL)；標記(1):在陽離子測定[M+H]+中具有2.03±0.5 (min)的保留時間和104.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(2):在陽離子測定[M+H]+中具有3.80±0. 5(min)的保留時間和257.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(3):在陽離子測定[M+H]+中具有6.52±0.5 (min)的保留時間和312. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(4):在陽離子測定[M+H]+中具有6.87±0.5 (min)的保留時間和232. 15± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(5):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0.5 (min)的保留時間和265. 12± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(6):在陽離子測定[M+H]+中具有10.54±O. 5 (min)的保留時間和300. 22 ± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(7):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有6.57±0.5 (min)的保留時間和211. 10± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(8):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有7.19±0.5(min)的保留時間和411. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(9):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有8.25 ±0.5 (min)的保留時間和263.1OilOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(10):在陽離子測定[M+H]+中具有2.26±0. 5(min)的保留時間和286. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(11):在陽離子測定[M+H]+中具有8.29±0. 5(min)的保留時間和495. 23± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(12):在陽離子測定[M+H]+中具有8.32±0. 5(min)的保留時間和529. 22± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(13):在陽離子測定[M+H]+中具有8.64±0. 5(min)的保留時間和304. 13± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(14):在陽離子測定[M+H]+中具有9.24±0. 5(min)的保留時間和389. 21 ± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；(15):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有3.93±0. 5(min)的保留時間和197. 05± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記；和(16):在陰離子測定[Μ-ΗΓ中具有5.55±0. 5(min)的保留時間和327. 09± IOmDa的精確質(zhì)量(m/z)的標記。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其中所述標記是至少一種選自由標記(1)-(9)組成的組的標記。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其中所述標記是至少一種選自由標記(10)-(16)組成的組的標記。
全文摘要
本發(fā)明提供一種確定慢性腎病的分期的方法和設(shè)備和操作該設(shè)備的方法。本發(fā)明涉及用于確定患有腎病的受試者中慢性腎病的分期的方法，所述方法包括下述步驟步驟(A-1)測量獲自所述受試者的樣品中至少一種選自由標記(1)-(16)組成的組的標記的量；步驟(B-1)將在步驟(A-1)中測量的在獲自所述受試者的所述樣品中所述標記的量與已經(jīng)為各個分期確定的參照含量范圍進行比較，確定由每種標記指示的分期，和步驟(C-1)當(dāng)各標記指示同一分期時，確定所述受試者處于前述慢性腎病分期。
文檔編號G01N27/62GK103026218SQ201180036730
公開日2013年4月3日 申請日期2011年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月31日
發(fā)明者田仲紀陽, 河野雅弘, 佐藤惠美子, 藤原功一 申請人:田仲紀陽