專利名稱：醋酸格拉默分子量標(biāo)記的制作方法
醋酸格拉默分子量標(biāo)記引言本發(fā)明的方面涉及不具有預(yù)定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標(biāo)記，并且用于精確測定醋酸格拉默的平均分子量。醋酸格拉默(以前稱為共聚物-1)化學(xué)上稱為L-谷氨酸與L-丙氨酸、L-賴氨酸和L-酪氨酸的聚合物的醋酸鹽。其具有式(I)的結(jié)構(gòu)式。(Glu, Ala, Lys, Tyr) x. XCH3COOH(C5H9NO4. C3H7NO2. C6H14N2O2. C9H11NO3) x. XC2H4O2式⑴醋酸格拉默是多肽的合成混合物的乙酸鹽，所述多肽的每一種基本由四種天然氨基酸組成平均摩爾份數(shù)分別為0. 141,0. 427,0. 095和0. 338的L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸和L-賴氨酸。醋酸格拉默的平均分子量為5，000-9，000道爾頓。醋酸格拉默在美國以 Copaxone (Teva Pharmaceutical Industries Ltd.的注冊(cè)商標(biāo))銷售。指出醋酸
格拉默用于降低患有復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化癥(RRMS)的患者的復(fù)發(fā)頻率。第6，514，938號(hào)美國專利公開了七種具有在該專利中鑒定的氨基酸序列的多肽。第7，074，580號(hào)美國專利公開了用于獲得含有多肽混合物的藥品的方法。每種多肽基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成?；旌衔锞哂?000道爾頓至13，000道爾頓的平均分子量，并且在該混合物中，丙氨酸的摩爾份數(shù)為0. 427，谷氨酸的摩爾份數(shù)為0. 141，賴氨酸的摩爾份數(shù)為0. 337，并且酪氨酸的摩爾份數(shù)為0. 093。該專利教導(dǎo)了測定某一批次的多肽水性混合物的分子量分布，所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成。分子量分布測定使用凝膠滲透色譜柱以測定混合物是否具有用于包含在藥品中的4000道爾頓至13，000道爾頓的平均分子量。測定方法包括使用凝膠滲透色譜柱通過使多種分子量標(biāo)記在柱上進(jìn)行層析來建立在柱上的保留時(shí)間與分子量之間的關(guān)系，從而校準(zhǔn)所獲得的分子量，其中所述分子量標(biāo)記的每一種為基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽。第7，163，802號(hào)美國專利公開了用于獲得含多肽混合物的藥品的方法，所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成。多肽混合物具有2000道爾頓至40，000道爾頓的平均分子量，并且在該混合物中，丙氨酸的摩爾份數(shù)為0. 38至0. 5，谷氨酸的摩爾份數(shù)為0. 13至0. 15，酪氨酸的摩爾份數(shù)為0. 08至0. 10，并且賴氨酸的摩爾份數(shù)為0.3至0.4。在所述方法中，使用凝膠滲透色譜柱檢測某一批次的多肽混合物(所述多肽的每一種基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成)以測定混合物是否具有用于包含在藥品中的2000道爾頓至40，000道爾頓的平均分子量。檢測方法包括通過使多種分子量標(biāo)記(所述分子量標(biāo)記各自為基本由丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成并且具有預(yù)定氨基酸序列的多肽)在柱上進(jìn)行層析來建立在柱上的保留時(shí)間與分子量之間的關(guān)系，從而校準(zhǔn)凝膠滲透色譜柱，所述關(guān)系用于測定多肽混合物的平均分子量。仍亟需提供用作用于測定醋酸格拉默多肽組合物的峰值平均分子量(peakaverage molecular weight)的標(biāo)準(zhǔn)的醋酸格拉默分子量標(biāo)記。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了不具有預(yù)定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標(biāo)記，所述分子量標(biāo)記用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的標(biāo)準(zhǔn)。附圖簡述

圖1為使用基于保留時(shí)間(RT)的算法，本發(fā)明的分子量標(biāo)記的RT對(duì)那些標(biāo)記的對(duì)數(shù)分子量(log molecular weight)的圖。圖2是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記I的MALDI譜的圖示。圖3是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記2的MALDI譜的圖示。圖4是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記3的MALDI譜的圖示。圖5是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記4的MALDI譜的圖不。圖6是Copaxone 的圓二色譜的圖示。圖7是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記2的圓二色譜的圖示。圖8是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記3的圓二色譜的圖示。圖9是根據(jù)實(shí)施例1制備的分子量標(biāo)記4的圓二色譜的圖示。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了不具有預(yù)定氨基酸序列的多肽，其用作醋酸格拉默的分子量標(biāo)記，所述分子量標(biāo)記用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明提供了用作用于測定醋酸格拉默多肽的峰值平均分子量的醋酸格拉默分子量標(biāo)記的多肽。一方面，本發(fā)明提供了具有與醋酸格拉默多肽對(duì)應(yīng)的氨基酸組成且經(jīng)鑒定的分子量(identified molecular weight)為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓或約2，000道爾頓至約20，000道爾頓或約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓的多肽，其用作用于測定多肽的平均分子量的分子量標(biāo)記。—方面，本發(fā)明提供了具有與醋酸格拉默對(duì)應(yīng)的氨基酸組成且經(jīng)鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓或約2，000道爾頓至約20，000道爾頓或約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓的多肽，其用作用于測定醋酸格拉默的平均分子量的分子量標(biāo)記。一方面，本發(fā)明提供基本由以下氨基酸組成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數(shù)為約0. 38至約0. 50的丙氨酸、約0. 13至約0. 155的谷氨酸、約0. 08至約0. 12的酪氨酸和約0. 28至約0. 4的賴氨酸,其用作用于測定多肽的平均分子量的分子量標(biāo)記。一方面，本發(fā)明提供基本由以下氨基酸組成的多肽丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數(shù)為約0. 38的丙氨酸至約0. 50的丙氨酸、約0. 13的谷氨酸至約0. 155的谷氨酸、約0. 08的酪氨酸至約0. 12的酪氨酸和約0. 28的賴氨酸至約0. 4的賴氨酸組成，其用作用于測定醋酸格拉默的平均分子量的分子量標(biāo)記。一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的分子量標(biāo)記的方法，其包括單獨(dú)的或以所述順序進(jìn)行的下列步驟中的一步或多步(a)將醋酸格拉默多肽在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級(jí)；(b)使步驟(a)中收集的流份通過分子量截留膜；以及
(c)通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離所述分子量標(biāo)記。一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明的分子量標(biāo)記的方法，其包括單獨(dú)的或以所述順序進(jìn)行的下列步驟中的一步或多步(a)將醋酸格拉默在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級(jí)；(b)使步驟(a)中收集的流份通過分子量截留膜；以及(C)通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離所述分子量標(biāo)記。步驟(a)包括在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級(jí)醋酸格拉默樣品。可以在步驟(a)中使用的用于凝膠過濾的合適的色譜介質(zhì)包括但不限于Superdex 、Sephacryl 、Superose 和Sephadex 等。Superdex 是基于已與葡聚糖共價(jià)結(jié)合的高度交聯(lián)的多孔瓊脂糖顆粒的復(fù)合介質(zhì)。Superdex 是GEHealthcare公司的商標(biāo)。Sephacryl 是與N，N，-亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)的烯丙基葡聚糖。Sephacryl 是GE Healthcare的商標(biāo)。Superose 是基于高度交聯(lián)的多孔瓊脂糖顆粒的具有高度物理和化學(xué)穩(wěn)定性的介質(zhì)。Superose 是GEHealthcare Ltd (General Electric的一個(gè)公司)的商標(biāo)。Sephadex 是與表氯醇交聯(lián)的葡聚糖。Sephadex 是GE Healthcare公司的商標(biāo)。可以通過溶解于合適的溶劑，然后將所得溶液通過注射器式過濾器(springefilter)過濾以除去任何不期望的顆粒狀物質(zhì)，從而制備醋酸格拉默的樣品。可用于制備醋酸格拉默的樣品的合適的溶劑包括但不限于Milli Qk水等。Mili1-Q也是MilliporeCorporation, Billerica, MA 的注冊(cè)商標(biāo)?？捎糜诓襟E(a)的合適的緩沖液包括但不限于乙酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液和氯化鈉或者它們的混合物。步驟(b)包括使步驟(a)中收集的流份通過分子截留膜以獲得具有窄分子量分布的標(biāo)記?？捎糜诓襟E(b)的合適的分子截留膜可為IKDa至IOKDa或IKDa至20KDa或IKDa至 30KDa。在步驟(b)之前可以進(jìn)行以下步驟任選地將步驟(a)中收集的各流份凍干，將凍干產(chǎn)物溶解在溶劑中，然后通過分子截留膜。步驟(C)包括通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離分子量標(biāo)記。可以通過包括現(xiàn)有技術(shù)中所述方法的任意方法來測定本發(fā)明的標(biāo)記的分子量。例如，可以通過基質(zhì)輔助激光解吸/電離(MALDI)或低角度激光光散射檢測(Low AngleLaser Light Scattering Detection, LALLS)或多角度光散射檢測(MALLS)來測定本發(fā)明的標(biāo)記的分子量?？梢酝ㄟ^包括現(xiàn)有技術(shù)中所述方法的任意方法獲得用作本發(fā)明方法的進(jìn)料(input)的醋酸格拉默。例如，可以通過在第PCT/US11/34102號(hào)國際申請(qǐng)中描述的方法制備醋酸格拉默?！矫?，本發(fā)明提供了測定多肽或其藥學(xué)可接受的鹽的峰值平均分子量的方法，其包括使所述多肽或其藥學(xué)可接受的鹽在色譜柱上進(jìn)行層析以測定所述多肽或其藥學(xué)可接受的鹽的平均分子量，其中通過使用多種本發(fā)明的分子量標(biāo)記來校準(zhǔn)所述色譜柱，其中每種分子量標(biāo)記為不具有預(yù)定的氨基酸序列的多肽。一方面，本發(fā)明提供了測定醋酸格拉默或其藥學(xué)可接受的鹽的峰值平均分子量的方法，其包括使所述格拉默醋酸或其藥學(xué)可接受的鹽在色譜柱上進(jìn)行層析以測定所述醋酸格拉默或其藥學(xué)可接受的鹽的峰值平均分子量，其中通過使用多種本發(fā)明的分子量標(biāo)記來校準(zhǔn)所述色譜柱，其中每種分子量標(biāo)記為不具有預(yù)定的氨基酸序列的多肽。另一方面，本發(fā)明提供了通過使用本發(fā)明的分子量標(biāo)記來校準(zhǔn)凝膠滲透色譜柱的方法。一方面，本發(fā)明提供了用于在分子量分級(jí)柱上測定多肽的平均分子量的多種分子量標(biāo)記。一方面，本發(fā)明提供了用于在分子量分級(jí)柱上測定醋酸格拉默的平均分子量的多種分子量標(biāo)記。另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的醋酸格拉默分子量標(biāo)記的對(duì)數(shù)分子量與所述分子量標(biāo)記在分子量分級(jí)柱上的保留時(shí)間之間的線性關(guān)系。為了確認(rèn)多肽例如共聚物I (用于藥品的醋酸格拉默制劑)，必須精確測定在該制劑中的多肽的平均分子量。具有與多肽類似的化學(xué)和物理特性的分子量標(biāo)記提供了用于測定生產(chǎn)批次的分子量的精確且穩(wěn)定的校準(zhǔn)設(shè)定。本發(fā)明提供了多肽的衍生物，例如用作用于測定多肽例如醋酸格拉默制劑的平均分子量的分子量標(biāo)記的醋酸格拉默。本發(fā)明的分子量標(biāo)記包括具有與多肽例如醋酸格拉默大致對(duì)應(yīng)的氨基酸組成且經(jīng)鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓、約2，000道爾頓至約20，000道爾頓、約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓的多肽，并且用于精確測定多肽例如醋酸格拉默的平均分子量。根據(jù)經(jīng)鑒定的分子量的需求，分子量標(biāo)記不應(yīng)為聞度多分散的，并且應(yīng)具有窄分子量分布。本發(fā)明的分子量標(biāo)記不是定序標(biāo)記(fixed sequence marker)。一方面，本發(fā)明提供了基本由確定摩爾比的以下氨基酸組成的分子量標(biāo)記丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸。本發(fā)明的分子量標(biāo)記的氨基酸的摩爾比與在多肽例如醋酸格拉默中所發(fā)現(xiàn)的相同。這樣的摩爾比一致性提供了最好的分子量標(biāo)記，因?yàn)槟切?biāo)記會(huì)具有與多肽例如醋酸格拉默類似的電荷和分子形狀。當(dāng)使用結(jié)構(gòu)不同的標(biāo)記時(shí)，該標(biāo)記可能以多少不同于多肽例如醋酸格拉默共聚物制劑的方式遷移或洗脫，盡管這些制劑具有與標(biāo)記物相同的分子量。多種分子量標(biāo)記是多肽。多種標(biāo)記可以是兩種至約十種或更多種。這些多肽的每一種的經(jīng)鑒定的峰值平均分子量(identified peak average molecular weight)為約2，000道爾頓至約40，000道爾頓、約2，000道爾頓至約20，000道爾頓、約2，000道爾頓至約15，000道爾頓或約2，000道爾頓至約10，000道爾頓，并且具有與多肽例如醋酸格拉默
大致對(duì)應(yīng)的氨基酸組成。當(dāng)這樣的多種本發(fā)明的分子量標(biāo)記用作用于測定多肽例如醋酸格拉默的平均分子量的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，本發(fā)明分子量標(biāo)記在色譜柱上的保留時(shí)間與所述標(biāo)記的分子量對(duì)數(shù)之間存在近似線性的關(guān)系。使用足以在保留時(shí)間與分子量之間大致建立線性關(guān)系的多種標(biāo)記。本發(fā)明的分子量標(biāo)記可以具有與醋酸格拉默多肽類似的治療活性。這些標(biāo)記可用于使用任意可用的分子量測定操作或設(shè)備的任何分子大小辨別系統(tǒng)。例如，本發(fā)明的標(biāo)記可用于校準(zhǔn)用于多肽分子量測定的任何色譜操作或設(shè)備。這樣的色譜設(shè)備可以是基于多肽的分子大小而分尚多肽的分子量分級(jí)柱。分子量分級(jí)柱的實(shí)例包括TSK-GEL 柱、Sephadex 柱、Sepharose 柱、Sephacryl 柱和 Superose 柱。定義除非上下文另有所指，對(duì)于本發(fā)明使用下列定義。Sephacryl 是形成為珠的共價(jià)交聯(lián)的葡聚糖/雙丙烯酰胺共聚物凝膠。其在凝膠過濾柱中使用以分離大小為5kD至約150萬道爾頓的分子。Sephacryl S-1OO具有IkD至IOOkD的分子量范圍并且具有25 y m
至75 li m的粒度。Sephacryl ^ GEHealthcare的注冊(cè)商標(biāo)。Superose 12是為生物分子
的高性能凝膠過濾優(yōu)化的交聯(lián)的瓊脂糖系的介質(zhì)。其具有約2X IOf^的排阻限，并且是珠直徑為8 ii m至12 ii m的交聯(lián)瓊脂糖的復(fù)合物。Superose 是GE Healthcare Ltd.的商標(biāo)。
TSK-GEL 是 Tosoh Corporation 的注冊(cè)商標(biāo)。Sepharose 是 GE Healthcare 的注冊(cè)商標(biāo)。參考下列實(shí)施例會(huì)更詳細(xì)地描述本發(fā)明的某些特定方面和實(shí)施方案，所述實(shí)施例僅為例示目的，而不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。所述操作的合理變化旨在包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。盡管已經(jīng)例示和描述了本發(fā)明的特定方面，但本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是可以在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下進(jìn)行各種其它變化和修改。因此旨在在所附權(quán)利要求中覆蓋所有這樣的在本發(fā)明范圍內(nèi)的變化和修改。
實(shí)施例實(shí)施例1:醋酸格拉默分子量標(biāo)記的制備基質(zhì):S印hacryItmS-1OOHR(高分辨率)柱床體積:320mL洗脫方式:等度流速:1.8mL/min波長:280nm&215nm流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液(mM)，pH7.2，7.72g 的 NaH2P04、20.45g 的 Na2HPO4 和 35.05g的 NaCl(150mM)/4L 水樣品制備:將醋酸格拉默(350mg)溶解在Mill1-Q 水(IOmL)中，并通過0.45 y m注射器式過濾器來過濾。用上述制備的流動(dòng)相來使柱穩(wěn)定化。使流動(dòng)相的流速保持恒定，并且持續(xù)穩(wěn)定化，直至基線達(dá)到恒定值。通過泵B裝置將樣品以相同流速裝載到柱上。使用設(shè)定標(biāo)記選項(xiàng)(set mark option)來指示注射標(biāo)記。記錄雙波長例如215nm和280nm下的吸光度。在約IllmL的洗脫體積下，在280nm處峰開始上升。將流份收集器激活以遞送9mL的各流份。在180mL的洗脫體積下,峰達(dá)到其最大值。流動(dòng)相流仍然繼續(xù)。在約300mL的洗脫體積下,峰幾乎達(dá)到其基線。收集約15份流份(每份體積9mL)，停止分級(jí)。在收集的流份中，來自上升峰的一份流份、接近峰頂端的兩份流份和在拖尾峰的一份流份在SUpeix)SeTM12柱上進(jìn)行層析，并且記錄每份流份的峰值保留時(shí)間。在不同的保留時(shí)間下洗脫這些流份的每一份。對(duì)多個(gè)批次重復(fù)相同的操作， 并且當(dāng)它們?cè)诜旨?jí)期間的洗脫時(shí)間和洗脫體積恒定時(shí)，在Supeix)SeTM-12柱上以相同保留時(shí)間洗脫所選的流份。將收集的流份分別凍干以產(chǎn)生每份80mg至90mg。然后分別通過IOKDa分子量截留膜、3KDa分子量截留膜、3KDa分子量截留膜和3KDa分子量截留膜濃縮在約RT23.0分鐘、約RT26分鐘、約RT29分鐘和約RT30分鐘的四種所選流份。分別凍干濃縮的溶液以產(chǎn)生15mg、30mg、35mg和12mg的標(biāo)題化合物。以下給出通過MALDI (基質(zhì)輔助激光解吸/電離)得出的本發(fā)明標(biāo)記的分子量的確認(rèn):
權(quán)利要求
1.分子量標(biāo)記，其具有與醋酸格拉默對(duì)應(yīng)的氨基酸組成和約2，OOO道爾頓至約40，000道爾頓的經(jīng)鑒定的分子量。
2.如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記，其中所述經(jīng)鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約20, 000道爾頓。
3.如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記，其中所述經(jīng)鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約15,000道爾頓。
4.如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記，其中所述經(jīng)鑒定的分子量為約2，000道爾頓至約10,000道爾頓。
5.如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記，其基本由以下氨基酸組成:丙氨酸、谷氨酸、酪氨酸和賴氨酸，所述氨基酸的摩爾份數(shù)為約0.38至約0.50的丙氨酸、約0.13至約0.15的谷氨酸、約0.08至約0.10的酪氨酸和約0.3至約0.4的賴氨酸。
6.如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記，其為峰值平均分子量為16833道爾頓的分子量標(biāo)記1、峰值平均分子量為8908道爾頓的分子量標(biāo)記2、峰值平均分子量為5006道爾頓的分子量標(biāo)記3或峰值平均分子量為3709道爾頓的分子量標(biāo)記4。
7.制備如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記的方法，其包括: (a)將醋酸格拉默多肽在凝膠滲透色譜(GPC)柱中分級(jí)； (b)使步驟(a)中收集的流份通過分子量截留膜；以及 (C)通過將從步驟(b)收集的流份凍干來分離所述分子量標(biāo)記。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中步驟(a)的所述凝膠滲透色譜(GPC)柱為Superdex ，其為基于已與葡聚糖共價(jià)結(jié)合的高度交聯(lián)的多孔瓊脂糖顆粒的復(fù)合介質(zhì)；Sephacryl ,其為與N，N’ -亞甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)的烯丙基葡聚糖；Superose ,其為基于高度交聯(lián)的多孔瓊脂糖顆粒的具有高度物理和化學(xué)穩(wěn)定性的介質(zhì)；或Sephadex ，其為與表氯醇交聯(lián)的葡聚糖。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中用于步驟(b)的所述分子量截留膜為IKDa至lOKDa、IKDa 至 20KDa 或 IKDa 至 30KDa。
10.測定醋酸格拉默或其另一種藥學(xué)可接受的鹽的峰值平均分子量的方法，其包括使所述醋酸格拉默或其另一種藥學(xué)可接受的鹽在色譜柱上進(jìn)行層析以測定所述醋酸格拉默或其藥學(xué)可接受的鹽的平均分子量，其中通過使用多種如權(quán)利要求1所述的分子量標(biāo)記來校準(zhǔn)所述色譜柱。
11.通過使用如權(quán)利要求1所 述的分子量標(biāo)記來校準(zhǔn)凝膠滲透色譜柱的方法。
全文摘要
本發(fā)明的方面涉及用于精確測定醋酸格拉默的平均分子量的醋酸格拉默分子量標(biāo)記。
文檔編號(hào)G01N33/68GK103080747SQ201180041836
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2011年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者S·斯里尼瓦桑, K·拉瑪薩米, C·K·N·哈勒姆, Y·K·K·科馬拉沃盧, S·R·卡勒姆, B·H·V·甘吉, R·C·鮑托朱, B·戴維 申請(qǐng)人:雷迪博士實(shí)驗(yàn)室有限公司, 雷迪博士實(shí)驗(yàn)室公司