專利名稱：含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法，所述判定方法使用了有效排除自身熒光導(dǎo)致的影響、能以高精度定量地進行分析的組織染色法。
背景技術(shù)：
癌癥與心肌梗塞、腦梗塞代表的血管系統(tǒng)疾病一起，是成年人死亡原因兩大類疾病。例如，雖然日本人的乳癌罹患率比歐美諸國低，但近年來有增加的傾向，1998年超過胃癌的罹患率，成為女性罹患率的第I位。根據(jù)作為最近的報告的2005年日本厚生勞動省統(tǒng)計，乳癌的年罹患數(shù)超過5萬人。該數(shù)字在全世界也同樣逐年增加，根據(jù)2008年WHO的報告，即使男女合計，乳癌也成為罹患率第I位的疾病，其年罹患數(shù)超過138萬人，占女性癌癥全部的約23%。關(guān)于癌癥的診斷，除了 X射線CT、MRI等圖像診斷之外，檢測在特定的癌癥中特異性表達的癌癥標志物、滲出至血液、組織中的癌癥標志物等的方法也是常用的。作為乳癌的一般性篩查檢查，實施問診、觸診、乳房X射線照相術(shù)(乳房造影術(shù)(mammography))、超聲波檢查等，如果產(chǎn)生臨床懷疑，則實施細胞診斷、活組織檢查，通過病理學(xué)診斷判別是否是癌癥。為了判定癌癥治療、預(yù)后的發(fā)展，病理學(xué)診斷很重要，成為這種診斷的中心的是“用于進行形態(tài)觀察的HE (蘇木精.伊紅)染色法”和“使用針對癌癥標志物因子的抗體的免疫組織化學(xué)法”。特別地，由于近年來抗體藥物的登場，免疫組織化學(xué)的重要性非常高。作為人癌基因HER2/neu(c-erbB-2)的基因產(chǎn)物的HER2蛋白質(zhì)是屬于人上皮生長因子受體家族的生長因子受體，是在其細胞質(zhì)側(cè)具有酪氨酸激酶活性區(qū)域的分子量約185kDa的跨膜型蛋白質(zhì)。在人乳癌細胞中，確認了 HER2的高表達。作為包含抗HER2抗體的抗體醫(yī)藥赫賽汀(Herceptin ;注冊商標)市售的曲妥珠單抗(Trastuzumab,通用名)已知是乳癌的代表性抗癌劑，所述抗HER2抗體將人上皮生長因子受體2(humanepidermal growth factor receptor 2 ;HER2)作為祀標，所述人上皮生長因子受體2是與癌癥增殖相關(guān)的因子。曲妥珠單抗在特異性結(jié)合至HER2之后，通過以NK細胞、單核細胞作為作用細胞的抗體依賴性細胞毒性(ADCC)發(fā)揮抗腫瘤效果。作為該藥劑施用有效性的判定方法，分析HER2蛋白質(zhì)等蛋白質(zhì)的表達的免疫組織化學(xué)(Immunohistochemisty ；IHC)法和分析HER2基因等的基因拷貝數(shù)的增加的FISH (熒光原位雜交，F(xiàn)luorescencein situ hybridization)法在臨床中被廣泛使用。通過IHC法,可用DAB(二氨基聯(lián)苯胺；Diaminobenzidine)對與HER2抗原部位結(jié)合的HER2抗體進行染色,通過可視化檢測HER2的表達量。但是，因為該判定基準是通過染色水平為分數(shù)O 3的僅4個級別進行的大致性的判定基準，所以欠缺定量性，此外，判定基準受病理醫(yī)師的熟練度所左右，因而在臨床上成為問題。另一方面，F(xiàn)ISH法使用檢測HER2基因的探針和檢測第17號染色體著絲粒的探針來進行，其能基于通過該FISH法分析出的每條第17號染色的HER2基因的拷貝數(shù)，判定基因組上HER2基因拷貝數(shù)有無增加。FISH法雖然是定量性的檢查方法，但并非直接評價HER2蛋白質(zhì)的量和HER2蛋白質(zhì)的細胞內(nèi)定位的方法。在癌癥治療中，定量分析局部的“癌基因拷貝數(shù)”和“癌基因產(chǎn)物的量”、對相關(guān)關(guān)系加以研究被認為很重要，因此，人們認為需要開發(fā)能定量檢測局部的癌基因產(chǎn)物的量、即HER2蛋白質(zhì)等癌癥關(guān)聯(lián)蛋白質(zhì)的量的判定方法。近年來，代替通過DAB的酶法，作為檢測靈敏度.定量性優(yōu)秀的檢測方法，量子點等熒光性粒子受到關(guān)注。對量子點而言，因為粒子數(shù)與熒光亮度呈比例關(guān)系，因此通過在免疫組織化學(xué)法中使用使量子點與抗體結(jié)合而成的探針，有可能能高精度、定量地分析癌癥標志物的表達量。另外，乳癌患者中曲妥珠單抗單種藥劑施用的有效率為15 34%，作為抗體醫(yī)藥其效果較低也是問題。有報道稱，盡管通過使用DAB法的免疫組織染色確認到HER2的過量表達，曲妥珠單抗治療效果低的患者中，曲妥珠單抗識別的HER2的細胞外結(jié)構(gòu)域缺失(Nahta R et al, Breast Cancer Res.2006；8:215-223, Scaltriti M et al, J.Natl.Cancer Inst.2007 ；99:628-638)，乳癌的診斷中用于檢測HER2的抗HER2抗體識別的HER2的抗原部位和乳癌的治療中曲妥珠單抗識別的HER2的抗原部位不同被認為是上述問題的原因之一。非專利文獻I:Nahta R et al, Breast Cancer Res.2006 ；8:215-223非專利文獻2:Scaltriti M et al, J.Natl.Cancer Inst.2007 ;99:628-638

發(fā)明內(nèi)容
雖然量子點等熒光粒子因為能發(fā)揮自身具有的穩(wěn)定性和定量分析的威力、人們對其作為熒光免疫染色中的新工具期望較高，但目前作為定量分析卻僅限于培養(yǎng)細胞。作為其理由，很大的原因在于，培養(yǎng)細胞由于細胞自身熒光較弱，量子點熒光粒子的熒光亮度能以足夠高的S (信號)/N(噪聲)比算出，與之相對，生物體組織由于具有與培養(yǎng)細胞相比為非常強的自身熒光，因此量子點熒光粒子的熒光亮度不能以足夠高的S/N比算出。雖然生物體組織的長波長的自身熒光比短波長的自身熒光量少，但是也不能忽視自身熒光在觀察中的影響，難于進行定量分析。進一步地，因為乳癌診斷中用于檢測HER2蛋白質(zhì)的抗體與將HER2蛋白質(zhì)作為靶標的治療藥物(抗體)的抗原決定簇(表位)不同，所以現(xiàn)在使用抗HER2抗體的IHC法被認為不足以用作為用于選擇包含曲妥珠單抗抗原決定簇的HER2過量表達的、適合施用曲妥珠單抗的患者的方法。本發(fā)明的課題是，提供通過生物體組織中定量的組織染色法對作為曲妥珠單抗等抗體醫(yī)藥的有效成分的抗體、有效成分的用于靶向靶標部位的抗體識別的蛋白質(zhì)進行高精度定量，而進行的含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法。本發(fā)明的發(fā)明人認為，通過用經(jīng)量子點熒光粒子直接標記的曲妥珠單抗進行生物體組織染色法，能更正確地選定適合施用曲妥珠單抗的患者。而且，對除去生物體組織染色法中自身熒光的影響的方法進行了深入研究，發(fā)現(xiàn):用波長為488nm的激發(fā)光照射用經(jīng)量子點熒光粒子(Qdot705)標記的作為曲妥珠單抗的有效成分的HER2抗體(曲妥珠單抗+QD705)進行了免疫染色的乳癌組織試樣，通過熒光波長的獲得區(qū)域為695 740nm的帶通濾波器獲得量子點熒光粒子的熒光圖像(量子點熒光粒子的熒光+自身熒光)，之后通過熒光波長的獲得區(qū)域為640 690nm的帶通濾波器獲得與上述熒光圖像為完全相同焦平面及完全相同視野下的僅自身熒光的自身熒光圖像，通過從熒光靜止圖像的各像素的熒光亮度減去自身熒光圖像中相應(yīng)的各像素的熒光亮度，能獲得從熒光靜止圖像減去了自身熒光圖像(自身熒光)的僅量子點熒光粒子的熒光的圖像(校正熒光圖像)。另外，為了確定上述校正熒光圖像中含有的量子點熒光粒子的粒子數(shù)，利用了量子點特有的“閃爍(明滅)性”。即，確認了:對I粒子的量子點熒光粒子來說，因為在20秒的激發(fā)光照射時間中關(guān)閉狀態(tài)(off-state，滅失狀態(tài))呈約4秒，所以算出具有約4秒的關(guān)閉狀態(tài)(滅失狀態(tài))的粒子的平均亮度作為I粒子的量子點熒光粒子的熒光亮度，然后即可算出校正熒光圖像中每I個細胞的量子點的熒光粒子的粒子數(shù)。另外確認到，通過算出乳癌患者的乳腺組織中用曲妥珠單抗+QD705檢測的量子點熒光粒子數(shù)，能以比IHC-DAB法更廣的范圍定量HER2蛋白質(zhì)的表達量。進一步地，認識到了用曲妥珠單抗+QD705檢測的量子點熒光粒子數(shù)和通過曲妥珠單抗的治療效果的相關(guān)性。本發(fā)明基于上述發(fā)現(xiàn)而完成。S卩，本發(fā)明涉及:(I)含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法，其特征在于使用包括下述工序(a) (d)的組織染色方法，工序(a)，用熒光物質(zhì)標記含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體，使該經(jīng)熒光標記的抗體與組織試樣接觸；工序(b)，向所述抗體接觸的組織部位照射激發(fā)光，獲得熒光圖像；工序(C)，獲得在與所述熒光圖像為相同視野及相同焦點時的、與所述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域相比為短波長側(cè)或長波長側(cè)的附近區(qū)域的自身熒光圖像；工序(d)，進行圖像處理，從所述熒光圖像的熒光亮度除去所述自身熒光圖像的熒光亮度，獲得校正熒光圖像。(2)上述(I)所述的判定方法，特征在于含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體是識別癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子的抗體。(3)上述(2)所述的判定方法，特征在于癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子是HER2 (人上皮生長因子受體2)。(4)上述(2)或(3)所述的判定方法，特征在于，癌癥為乳癌。(5)上述(I) (4)中任一項所述的判定方法，特征在于，熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域與其附近區(qū)域的波長之差在IOOnm以內(nèi)。(6)上述(I) (5)中任一項所述的判定方法，特征在于，熒光物質(zhì)為熒光粒子。(7)上述(6)所述的判定方法，特征在于，熒光粒子為量子點熒光粒子。(8)上述(6)或(7)所述的判定方法，特征在于，進一步包括以下工序(e) (g)，工序(e)，對抗體接觸的組織部位的細胞數(shù)進行計數(shù)；工序(f)，基于熒光圖像，確定I粒子的熒光粒子，計算測量對應(yīng)于該I粒子的熒光粒子的校正熒光圖像內(nèi)的I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度；工序(g)，將校正熒光圖像內(nèi)的總熒光亮度除以所述I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度，求出熒光粒子數(shù)，將該熒光粒子數(shù)除以通過工序(e)計數(shù)出的細胞數(shù)，算出每I個細胞的熒光粒子數(shù)。(9)上述(8)所述的判定方法，特征在于，利用熒光粒子具有的明滅性，來確定I粒子的熒光粒子。另外，本發(fā)明涉及:
(10)含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定系統(tǒng)，特征在于包括以下(A)
(D),(A)含有經(jīng)熒光物質(zhì)標記的抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體；(B)激發(fā)光照射裝置；(C)獲得熒光圖像的裝置；(D)用于獲得熒光圖像 的帶通濾波器。(11)上述(10)所述的判定系統(tǒng)，特征在于含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體是識別癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子的抗體。(12)上述(11)所述的判定系統(tǒng)，特征在于，癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子為HER2 (人上皮生長因子受體2)。(13)上述(10) (12)中任一項所述的判定系統(tǒng)，特征在于，進一步包括(E)獲得細胞核熒光圖像的帶通濾波器。(14)上述(10) (13)中任一項所述的判定系統(tǒng)，特征在于，熒光物質(zhì)為熒光粒子。(15)上述(14)所述的判定系統(tǒng)，特征在于，熒光粒子為量子點熒光粒子。通過本發(fā)明，例如，通過除去自身熒光的影響、使用經(jīng)量子點熒光粒子標記的PARl抗體的本發(fā)明的組織染色法，能比作為現(xiàn)有的乳癌診斷方法之一而使用的組織染色法(IHC-DAB法)在更廣的范圍內(nèi)定量HER2蛋白質(zhì)的表達量，能進行代替IHC-DAB法的高靈敏度、定量的新的乳癌病理診斷。進一步地，因為認識到通過經(jīng)量子點熒光粒子標記的作為曲妥珠單抗有效成分的HER2抗體檢測的HER2蛋白質(zhì)的水平與通過曲妥珠單抗的治療效果的相關(guān)性，故而期待可通過本發(fā)明來預(yù)測曲妥珠單抗的治療效果。由此通過本發(fā)明，并不限于曲妥珠單抗，也能判定所有含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性。另外，通過將本發(fā)明的含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法與現(xiàn)有技術(shù)的FISH法等組合，可對乳癌中HER2基因拷貝數(shù)和HER2蛋白質(zhì)的量同時進行定量評價，有效促進乳癌中的癌癥治療。


圖1(a)為表示進行了使用量子點熒光粒子的免疫染色(IHC-QDs)法的組織試樣的制作方法的圖。(b)為表示抗體(曲妥珠單抗)的硫醇基與量子點熒光粒子的馬來亞酰胺基的偶聯(lián)反應(yīng)的圖。圖2為獲得的熒光圖像的代表性圖。圖3為說明除去自身熒光的影響的現(xiàn)有方法的圖。(a)為表示通過激發(fā)光照射的自身突光褪色法(參見Hikage等人,Nanotechnology (2010))的結(jié)果的圖，(b)為對比度調(diào)整法的示意圖。(b)中表示的灰色區(qū)域表示人眼可見為黑色的范圍。圖4(a)為表示通過減法進行的圖像處理中的圖像轉(zhuǎn)換的圖。(b)為表示量子點熒光粒子的熒光波長特性與自身熒光的熒光波長特性的圖。實線表示量子點熒光粒子(QD705)的熒光波長特性。另外，附有誤差條的點圖表示了分別用熒光波長的獲得區(qū)域為505 545nm、565 595nm、585 630nm、640 690nm、695 740nm 及 760 800nm 的共計6種帶通濾波器獲得的組織試樣切片上的自身熒光的熒光亮度的實測值。上述實測值的平均值的點以虛線連接，作為自身熒光的熒光波長特性表示。另外，帶通濾波器的波長寬度以條(bar)表示。圖5為表示除去了自身熒光的校正熒光圖像的制作法的圖。圖6為表示在進行了通過IHC-DAB法的病理診斷的組織試樣中IHC-DAB法的染色結(jié)果與IHC-QDs法的染色結(jié)果的圖。圖7為表示量子點熒光粒子具有的閃爍(明滅)性的圖?？v軸表示量子點熒光粒子的熒光亮度，橫軸表示量子點熒光粒子的激發(fā)光的照射時間(秒)。箭頭頭部表示將量子點熒光粒子的最大熒光亮度的10 %設(shè)定為熒光亮度的閾值。圖8(a)為表示通過FISH法算出的HER2基因拷貝數(shù)與通過IHC-DAB法算出的HER2蛋白質(zhì)的量的關(guān)系的圖。圖中FISH分數(shù)2.2表示用于病理判斷的FISH分數(shù)的閾值。(b)為表示通過FISH法算出的HER2基因拷貝數(shù)與通過IHC-QDs法算出的HER2蛋白質(zhì)的量的關(guān)系的圖。圖中FISH分數(shù)2.2及IHC-QDs分數(shù)5.5分別表示用于病理判斷的FISH分數(shù)和IHC-QDs分數(shù)的閾值。圖9為表示IHC-DAB法的操作步驟和IHC-QDs法的操作步驟的圖。圖10為表示通過IHC-QDs法算出的HER2蛋白質(zhì)的量與通過IHC-DAB法算出的HER2蛋白質(zhì)的量的關(guān)系的圖。圖11為表示通過FISH法算出的HER2基因拷貝數(shù)與通過曲妥珠單抗的治療效果(TTP[疾病無進展的時間(time to progression);通過施用藥劑腫瘤增殖被控制的時間])的關(guān)系的圖。(b)為表示通過IHC-QDs法算出的HER2蛋白質(zhì)的量與通過曲妥珠單抗的治療效果(TTP[疾病無 進展的時間(time to progression);通過施用藥劑腫瘤增殖被控制的時間])的關(guān)系的圖。
具體實施例方式作為本發(fā)明的含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法，只要是使用了包括下述工序的組織染色方法的方法(但通過醫(yī)師進行的診斷行為除外)則沒有特別限制，工序(a)，用熒光物質(zhì)標記含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體，使該經(jīng)熒光標記的抗體與組織試樣接觸；工序(b)，向所述抗體接觸的組織部位照射激發(fā)光，獲得熒光圖像；工序(C)，獲得在與所述熒光圖像為相同視野及相同焦點時的、與所述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域相比為短波長側(cè)或長波長側(cè)的附近區(qū)域的自身熒光圖像；工序(d)，進行圖像處理，從所述熒光圖像的熒光亮度除去所述自身熒光圖像的熒光亮度，獲得校正熒光圖像；進一步地，優(yōu)選包括如下工序:工序(e)，對抗體接觸的組織部位的細胞數(shù)進行計數(shù)；工序(f)，基于熒光圖像，確定I粒子的熒光粒子，計算測量對應(yīng)于該I粒子的熒光粒子的校正熒光圖像內(nèi)的I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度；工序(g)，將校正熒光圖像內(nèi)的總熒光亮度除以所述I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度，求出熒光粒子數(shù)，將該熒光粒子數(shù)除以通過工序(e)計數(shù)出的細胞數(shù)，算出每I個細胞的熒光粒子數(shù)，另外，作為本發(fā)明的含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定系統(tǒng)，只要是包括下述(A) (D)的系統(tǒng)則沒有特別限制，(A)含有經(jīng)熒光物質(zhì)標記的抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體；(B)激發(fā)光照射裝置；(C)獲得熒光圖像的裝置；(D)用于獲得熒光圖像的帶通濾波器；進一步地，優(yōu)選為包括下述(E)的系統(tǒng):(E)獲得細胞核熒光圖像的帶通濾波器；作為施用上述含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的對象，可舉出例如癌癥患者、感染癥患者、自身免疫疾病患者等，其中可優(yōu)選舉例癌癥患者。作為施用給癌癥患者的、含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體，可舉出如下抗體:以將癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子等作為靶標抗原、與該靶標抗原結(jié)合的抗體作為有效成分，該抗體通過與癌細胞結(jié)合而抑制癌細胞的增殖或殺死癌細胞。另外，作為含有抗體作為成分的醫(yī)藥品，除了含有上述抗體作為有效成分之外，還可舉出含有抗癌劑、抗病毒齊U、抗生素等作為有效成分且含有抗體作為遞送至癌細胞的手段的醫(yī)藥品等。作為上述醫(yī)藥品，可以舉出例如西那吉斯(Synagis)、類克(Remicade)、美羅華(rituxan)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)等，其中可優(yōu)選舉例曲妥珠單抗。作為癌癥，可舉出大腸癌、直腸癌、腎癌、乳癌、前列腺癌、子宮癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、血癌、肝癌、胰癌、皮膚癌、肺癌、乳癌等。另外，癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子中，作為癌癥的增殖控制因子，可舉出例如上皮生長因子(EGF:epidermal growth factor)、EGF受體(EGFR)、血小板來源的生長因子(F1DGF:p late let-derived growth factor)、PDGF 受體(F1DGFR)、膜島素樣生長因子(IGF:insulin-like growth factor)、IGF 受體(IGFR)、成纖維細胞生長因子(FGF:f ibroblastgrowth factor)、FGF 受體(FGFR)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF: vascular endotherialgrowth factor)、VEGF 受體(VEGFR)、肝細胞生長因子(HGF:hepatocyte growth factor)、HGF受體(HGFR)、神經(jīng)營養(yǎng)因子(NT:neurotropin)、轉(zhuǎn)化生長因子 β (TGF β:transforminggrowth factor-β )家族、人上皮生長因子受體 1、2、3或4(HER1、2、3或4:human epidermalgrowth factor receptor 1,2,3 或 4)、巨卩遼細胞集落刺激因子(CSF1:macrophagecolony-stimulating factor I)、CSFl受體(CSFlR)等調(diào)節(jié)細胞增殖的因子，和細胞周期蛋白(cyclin)、細胞周期蛋白依賴性激酶(O)K:cyclin_dependent kinase)、細胞周期蛋白A、細胞周期蛋白B、細胞周期蛋白D、細胞周期蛋白E、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、pl6INK、pl5、p21、p27、RB(視網(wǎng)膜母細胞瘤(retinoblastoma))等調(diào)節(jié)細胞周期的因子；作為癌癥的轉(zhuǎn)移控制因子，可舉出例如基質(zhì)金屬激酶I (MMPl)、基質(zhì)金屬激酶2 (MMP2) ,PARl (蛋白酶活化受體 I，protease activated receptor I)、CXCR4(趨化因子[C-X-C 基序]受體 4,chemokine [C-X-C motif]receptor 4)、CCR7(趨化因子[C-C 基序]受體 7, chemokine [C-Cmotif]receptor 7)等,其中因為以HER2為祀標的曲妥珠單抗被廣泛使用而可優(yōu)選舉例HER2。為了判定含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性，例如優(yōu)選與基因診斷法聯(lián)用，可與利用酶和底物的顯色反應(yīng)的免疫組織化學(xué)法等現(xiàn)有判定方法進行比較研究。作為基因診斷法，可舉出例如PCR法、Southern雜交法、FISH法等，作為利用酶和底物的顯色反應(yīng)的免疫組織化學(xué)法，可舉出例如辣根過氧化物酶(HRP)與作為HRP底物的DAB (3，3’ -二氨基聯(lián)苯胺)、堿性磷酸酶(ALP)與作為ALP底物的BCIP/INBT (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸酯/四唑硝基藍)、β -半乳糖苷酶和作為β -半乳糖苷酶的底物的X-gal (5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-吡喃半乳糖苷)的方法。其中，判定乳癌中曲妥珠單抗有效性的情況下，可優(yōu)選舉例FISH法和/或使用了 HRP和DAB的免疫組織化學(xué)(IHC-DAB)法的聯(lián)用。本發(fā)明的含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法和含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定系統(tǒng)中，作為判定有效性的對象的醫(yī)藥品，不限于含有抗體作為有效成分的醫(yī)藥品，可舉出含有抗癌劑、抗病毒劑、抗生素等作為有效成分且含有識別癌細胞特異性的蛋白質(zhì)的抗體作為遞送至癌細胞的手段的醫(yī)藥品，含有將被有效成分作為靶標的因子(蛋白質(zhì))的關(guān)聯(lián)信號傳遞途徑中的因子作為靶標的抗體的醫(yī)藥品等。上述含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體是HER2的情況下，作為存在于HER2的信號傳遞途徑下游的因子，可舉出例如與細胞增殖相關(guān)的因子Ras、Raf等，抗凋亡因子ΡΙ3Κ、AKT等。作為上述工序(a)中含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體，優(yōu)選特異性識別癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子或癌細胞特異性蛋白質(zhì)等的抗體，可以為單克隆抗體、多克隆抗體。另外，對上述抗體的類別或亞類沒有特別限制，作為類別，可舉出IgA、IgG、IgE、IgD、IgM等，作為亞類，可舉出IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAU IgA2等。另外，此處的術(shù)語“抗體”以包含任意抗體片段或誘導(dǎo)體的含義而使用，例如，包含F(xiàn)ab、Fab’ 2、⑶R、人源化抗體、多功能抗體、單鏈抗體(ScFv)等。所述抗體可按照公知的方法制造(例如,參考HarlowE.&Lane D., Antibody, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988))。作為上述工序(a)中的熒光物質(zhì)，只要是響應(yīng)于選定波長的紫外光、可見光等放射線的照射而發(fā)出熒光的物質(zhì)就沒有特別限制，例如，作為有機熒光物質(zhì)，可舉出熒光素、羅丹明、Cy-5、Cy-3、Alexa等，作為無機熒光物質(zhì)，可舉出熒光二氧化硅納米粒子、量子點熒光粒子等熒光粒子。而且，因為長波長側(cè)自身熒光的影響較少，所以優(yōu)選使用發(fā)出近紅外區(qū)域側(cè)、特別是近紅外區(qū)域的熒光的熒光物質(zhì)，該熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域為近紅外區(qū)域側(cè)(570 800nm)，特別是近紅外區(qū)域(700 800nm)。上述有機熒光物質(zhì)通過激發(fā)光而急速發(fā)生褪色，不適合長時間激發(fā)光照射的分析，因此優(yōu)選使用光穩(wěn)定性高、即使長時間激發(fā)光照射也穩(wěn)定的熒光粒子，其中優(yōu)選量子點熒光粒子。作為熒光粒子，通過激發(fā)光的照射而發(fā)出熒光的粒子即可，對其材料等沒有限制，可以為材料自身發(fā)出熒光的物質(zhì)，也可以為含有熒光物質(zhì)的粒子或通過涂布熒光物質(zhì)而能發(fā)出熒光的粒子。另外，熒光粒子的形狀、大小沒有特別限制，可以舉出方形、圓盤狀、多面體、球狀，但優(yōu)選球狀，其大小為直徑0.0OOOlnm Imm,優(yōu)選為直徑0.0Olnm 100 μ m,更優(yōu)選為直徑0.0lnm 10 μ m,還可適當選擇熒光粒子發(fā)出的熒光的波長。熒光粒子可按照日本特開平9-241634、日本特開2010-242059等公開的方法來制作，但也可購入在聚苯乙烯芯粒子存在下通過適當?shù)臒晒馊玖匣虮揭蚁┑臒晒馊玖系木酆蠈郾揭蚁┝Ｗ尤旧苽涞腟PHERO熒光粒子(BayBioscience公司制)、突光粒子Estapor (注冊商標)標準微粒(Merck Chime公司制)等市售品。熒光粒子中，也被稱為膠體狀量子點(QD =Quantum Dot)的量子點熒光粒子由于熒光粒子兼具非常銳利的發(fā)光光譜和高度量子效率的特性而優(yōu)選。量子點熒光粒子是發(fā)光性的半導(dǎo)體納米粒子，直徑范圍為I 20nm，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域中被利用于熒光顯像。就量子點熒光粒子而言，電子被量子性地封閉在輪廓明確、三維且為納米大小的半導(dǎo)體結(jié)晶中，量子點熒光粒子的大小變小時，半導(dǎo)體的能隙(band gap)變大，因此，可通過大小在整個可見光譜的范圍內(nèi)來調(diào)節(jié)半導(dǎo)體光致發(fā)光的發(fā)光波長。作為本發(fā)明中的量子點熒光粒子，發(fā)光性的半導(dǎo)體納米粒子即可，關(guān)于其大小，優(yōu)選根據(jù)激發(fā)光及熒光波長對粒子大小進行適當調(diào)節(jié)。作為所述量子點熒光粒子，例如，可利用以半導(dǎo)體殼(ZnS)被覆的半導(dǎo)體材料(CdSe)的納米晶體、Qdot (注冊商標)525、Qdot565、Qdot585、Qdot605、Qdot625、Qdot655、Qdot705、Qdot800 (全部Invitrogen公司制)。獲得的熒光波長超過800nm時，攝像裝置的靈敏度降低，因此在發(fā)出近紅外區(qū)域的熒光的量子點熒光粒子中，優(yōu)選使用發(fā)出705nm的熒光的量子點熒光粒子(Qdot705)。上述工序(a)中，作為以熒光物質(zhì)標記抗體的方法，可舉出對該抗體具有特異的親和性的抗體(二抗)介入的方法、生物素-親和素法、硫醇基-馬來酰亞胺基的偶聯(lián)反應(yīng)、使用既有化學(xué)接頭的方法、交聯(lián)劑(EDC等)的交聯(lián)反應(yīng)、離子鍵法等，其中，在上述抗體是人源化抗體或人抗體的情況下，可優(yōu)選舉出硫醇基-馬來酰亞胺基的偶聯(lián)反應(yīng)法。作為上述工序(a)中的組織試樣，可舉例為福爾馬林固定的石蠟切片、凍結(jié)切片等固定組織試樣切片，可舉出病理組織試樣、外周血液組織試樣、從組織分離的細胞、從體液分離的細胞的細胞封閉(cell block)試樣、對外周血液白血球或細胞的懸浮試樣進行沉降或離心制成的細胞封閉試樣、組織擦拭試樣、外周血液、體液、滲出液、含有細胞的液體的涂抹試樣等。上述工序(a)中，作為所述經(jīng)熒光標記的抗體與組織試樣接觸的方法，沒有特別限制，因為通過所述接觸發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，所以接觸時的溫度優(yōu)選O 40°C。另外，接觸時間隨著使用的組織試樣的種類、抗體濃度、效價的高度、上述接觸(反應(yīng))溫度、靶因子(抗原)的量、局部部位的不同等而不同，對其沒有特別限制，可進行適當選擇，可舉出10分鐘 12小時，優(yōu)選10分鐘 2小時。另外，為防止抗體的非特異性結(jié)合，在使抗體與組織試樣接觸之前，可進行FBS、BSA、IgG等封閉處理。作為上述工序(b)中的激發(fā)光的激發(fā)波長，其為比熒光物質(zhì)發(fā)光的熒光波長短的波長，從對人體安全性的方面來說優(yōu)選400 700nm，更優(yōu)選450 650nm，特別地，可具體舉出一般用作為激發(fā)波長的488nm、532nm或635nm。作為上述工序(b)中的熒光圖像，可舉出熒光靜止圖像、熒光靜止圖像及對應(yīng)于該熒光靜止圖像的熒光動態(tài)圖像。上述熒光靜止圖像能使用熒光顯微鏡來獲得，所述熒光顯微鏡能使用一般的PC等計算機作為控制器，進行對CCD攝像裝置的攝影條件的控制、獲得的熒光靜止圖像的圖像化表示、對光源的光亮度的控制等。為了熒光物質(zhì)發(fā)光的熒光亮度不飽和，進行激發(fā)光側(cè)的濾光器、二向色鏡等的必要的設(shè)定，進一步地優(yōu)選激發(fā)光的曝光時間設(shè)定為0.0003至30 60秒。作為熒光物質(zhì)的熒光各像素亮度是否不飽和的確認方法，也可如下進行:設(shè)定預(yù)先指定的亮度值或針對亮度值的最大值預(yù)先指定的比例的亮度值(例如，8位圖像的情況下255為最大值，由此設(shè)定220這樣的數(shù)值或亮度值的最大值的90%)，超過該值時判斷為飽和。另外，此時也可不僅用一個像素，而使用圖像全體的預(yù)先指定的比例的多個像素來判斷。在對熒光靜止圖像中熒光物質(zhì)的熒光亮度是否來源于I個粒子進行確定的情況下，可根據(jù)需要獲得熒光動態(tài)圖像。作為上述熒光動態(tài)圖像，優(yōu)選以2 500msec的分辨能力獲得50 200幀與上述熒光靜止圖像相同視野及相同焦點下的動態(tài)圖像。作為獲得上述熒光圖像的帶通濾波器，使用為了僅能讓熒光物質(zhì)發(fā)出的紅色、藍綠色、橙色、綠色、藍色等特定波長的熒光透過而選擇的帶通濾波器，希望使用能獲得上述熒光物質(zhì)的總熒光亮度的25%以上、優(yōu)選50%以上、更優(yōu)選75%以上的帶通濾波器。進一步地，關(guān)于獲得上述熒光圖像的帶通濾波器，希望使用能在30nm以內(nèi)、優(yōu)選15nm以內(nèi)、更優(yōu)選5nm以內(nèi)的波長區(qū)域中獲得上述熒光物質(zhì)的熒光亮度的30%的帶通濾波器。例如，使用發(fā)出705nm的熒光的熒光物質(zhì)的情況下，獲得上述熒光圖像的帶通濾波器優(yōu)選為熒光波長的獲得區(qū)域為695 740nm的帶通濾波器。上述工序(C)中，作為獲得自身熒光圖像的方法，可舉出下述方法:將用于獲得熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的帶通濾波器用能獲得與該帶通濾波器相比為短波長側(cè)或長波長側(cè)的附近區(qū)域、優(yōu)選短波長側(cè)的附近區(qū)域的波長的帶通濾波器代替，在與上述熒光靜止圖像相同視野和相同焦點的條件下獲得圖像，獲得不含熒光物質(zhì)的熒光而僅含自身熒光的圖像。由于長波長的熒光比短波長的熒光折射率小、比短波長的熒光在更遠處匯聚焦點，因此上述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域與獲得自身熒光圖像的波長區(qū)域的波長差異大時，上述熒光靜止圖像中含有的自身熒光的焦點和自身熒光圖像中自身熒光的焦點的間距就會變大。因此，上述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域與其附近區(qū)域的波長之差可優(yōu)選舉例為130nm以內(nèi)、優(yōu)選120nm以內(nèi)、更優(yōu)選IlOnm以內(nèi)的區(qū)域,特別是IOOnm以內(nèi)。作為用于獲得本發(fā)明的熒光圖像、自身熒光圖像的帶通濾波器，具體可舉出熒光波長的獲得領(lǐng)域為 505 545nm、565 595nm、585 630nm、640 690nm、695 740nm、760 800nm 等的帶通濾波器，例如使用熒光波長的獲得區(qū)域為695 740nm的帶通濾波器獲得上述熒光靜止圖像的情況下，獲得自身熒光圖像的帶通濾波器優(yōu)選為熒光波長的獲得區(qū)域為640 690nm的帶通濾波器。用于獲得上述自身熒光圖像的攝影條件設(shè)定為，比較上述熒光靜止圖像與該自身熒光圖像的相同區(qū)域的自身熒光的亮度，自身熒光圖像的任意的R01、例如25X 25像素的自身熒光的最大值，是熒光靜止圖像的1.1 1.3倍，優(yōu)選1.2倍。S卩，較之熒光靜止圖像，自身熒光圖像的自身熒光的亮度值優(yōu)選高10 30 %，特別是20 %左右。上述工序(d)中，作為獲得校正熒光圖像的方法，可舉出:在熒光靜止圖像及自身突光圖像轉(zhuǎn)換為 JPEG、TIF等圖像文件之后,用 Image *J(http://rsb.1nf0.nih.gov/ij/)、Photoshop (Adobe 公司制)、After Effect (Adobe 公司制)、G-Count (G-Angstrom 公司制)的圖像分析軟件，基于自身熒光圖像的亮度從熒光靜止圖像的亮度除去自身熒光的亮度的處理。需要說明的是，轉(zhuǎn)換圖像文件時，優(yōu)選選擇全部熒光分布均被包括進去的閾值。上述工序(e)中，作為對抗體接觸的組織部位的細胞數(shù)進行計數(shù)的方法，可舉出在用DAP1、Hoechst、PI (碘化丙啶)等與DNA結(jié)合發(fā)出熒光的核酸染色劑對細胞核染色之后、對與熒光圖像相同視野中的被染色的細胞核數(shù)的總數(shù)進行計數(shù)的方法，但在熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域為近紅外區(qū)域的情況下，較之發(fā)出熒光特性類似的紅色熒光的PI而言，優(yōu)選使用發(fā)出藍色熒光的DAPI或Hoechst。上述工序(f)中，作為確定I粒子的熒光粒子的方法，可舉出例如測定熒光圖像中的熒光粒子的熒光亮度、基于熒光I粒子發(fā)出的熒光的亮度信息求出上述熒光粒子相當于何種粒子的方法，或利用熒光粒子具有的“閃爍(明滅)性”的方法等，但在熒光粒子是量子點熒光粒子的情況下，優(yōu)選為利用閃爍(明滅)性的方法。此處，“閃爍(明滅)性”指下述情況反復(fù)進行的性質(zhì):相對于照射激發(fā)光時的照射時間或照射量，發(fā)光強度突然變?yōu)閹缀鯙榱?OFF)的消失時間(滅失時間)持續(xù)大約數(shù)毫秒 5秒、再得到原發(fā)光強度。另外，利用“閃爍(明滅)性”確定I粒子的熒光粒子的方法指下述方法:基于熒光靜止圖像或熒光動態(tài)圖像，測定照射激發(fā)光任意時間、例如10 100秒的情況下熒光粒子的滅失時間、進行該熒光粒子是否為I粒子的評價、確定I粒子的熒光粒子。例如，使用發(fā)出705nm的熒光的量子點熒光粒子作為熒光粒子的情況下，照射激發(fā)光20秒的情況下量子點熒光I粒子的滅失時間為約4秒，即，能將滅失時間為約4秒的熒光粒子確定為來源于I粒子的量子點熒光粒子。此處，為了判斷量子點熒光粒子是否滅失，可合適地設(shè)定量子點熒光粒子的熒光亮度的閾值，例如將量子點熒光粒子的最大熒光亮度的O 30%、優(yōu)選5 15%、更優(yōu)選10%設(shè)定為閾值。使用Image.J、Photoshop、After Effect、G-Count等圖像分析軟件,測定與已確定的I粒子對應(yīng)的校正熒光圖像內(nèi)的熒光亮度。就通過上述測定進行的對I粒子的平均熒光亮度的計算而言，從精力和準確性方面考慮，使用2 200個熒光粒子、優(yōu)選5 10個熒光粒子來進行。上述工序(g)中，算出每I個細胞的熒光粒子數(shù)。每I個細胞的熒光粒子數(shù)能通過下述方法算出:將從上述校正熒光圖像得到的量子點熒光粒子的總熒光亮度值(畫面內(nèi)的總熒光亮度)、從上述細胞核染色圖像得到的細胞數(shù)、及每I個粒子的量子點熒光粒子的平均熒光亮度的值(I粒子熒光亮度)代入下式中算出:(畫面內(nèi)的總熒光亮度/I粒子熒光亮度)/細胞數(shù)=畫面內(nèi)的總熒光粒子數(shù)/細胞數(shù)=突光粒子數(shù)/細胞。通過包括上述工序(a) (d)的本發(fā)明的判定方法，分別獲得判定對象組織試樣與正常組織試樣的校正熒光圖像，比較兩種校正熒光圖像內(nèi)的熒光亮度，在判定對象組織試樣的校正熒光圖像中的熒光亮度更高的情況下，由于這暗示了醫(yī)藥品中含有的抗體識別的蛋白質(zhì)的量較多，因此可判定為判定對象可預(yù)見通過所述醫(yī)藥品有治療效果，所述判定對象是適合施用所述醫(yī)藥品的患者。另外，通過包括上述工序(a) (g)的本發(fā)明的判定方法，分別算出判定對象組織試樣與正常組織試樣的每I個細胞的熒光粒子數(shù)，對兩者加以比較，當判定對象組織試樣中每I個細胞的熒光粒子數(shù)較多的情況下，因為暗示了醫(yī)藥品中含有的抗體識別的蛋白質(zhì)的量較多，可判定為判定對象可預(yù)見通過所述醫(yī)藥品有治療效果，所述判定對象是適合施用所述醫(yī)藥品的患者。例如，可以用量子點熒光粒子標記是作為乳癌的抗體醫(yī)療品的曲妥珠單抗的有效成分的抗HER2抗體，使用所述量子點熒光粒子標記抗體，算出每I個細胞的通過曲妥珠單抗檢測出的熒光粒子數(shù)，以該數(shù)作為指標，能選定適合施用曲妥珠單抗的患者、預(yù)測曲妥珠單抗的治療效果。作為前述本發(fā)明的判定系統(tǒng)中的激發(fā)光照射裝置，可舉出水銀燈(100V)、水銀燈(200V)、氙氣燈(75V)、氙氣燈(150V)、鹵素?zé)?12V 100W)、鎢燈(6V 30W)、氙氣燈(波長250 IOOOnm)、鎢燈(波長250 IOOOnm)、Cr: LiSAF燈(波長430nm)、氦-鎘激光器(波長325、442nm)、UV氬激光器(波長351、364nm)、氬離子激光器(波長488、514nm)、氦氖激光器(波長543、594、633nm)、氪離子激光器(波長568、647nm)、LD激發(fā)CW/Q_CW(連續(xù)振蕩 / 準連續(xù)振蕩)固體激光器(波長 375nm、405、440、473、488、505、515、532、561、594、635、785、1064nm)等,其中從對人體的安全性方面考慮,可合適地舉例為400 700nm的激發(fā)波長、優(yōu)選為LD激發(fā)CW/Q-CW固體激光器(波長488、532、635nm)。另外，作為本發(fā)明的判定系統(tǒng)中的熒光圖像獲得裝置，可舉出熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描型熒光顯微鏡等。作為通過所述熒光圖像獲得裝置能獲得的熒光圖像，可舉出熒光靜止圖像與自身熒光圖像，必要時還有熒光動態(tài)圖像。
另外，作為本發(fā)明的判定系統(tǒng)中用于獲得熒光圖像的帶通濾波器，可舉出用于獲得熒光靜止圖像(熒光動態(tài)圖像)及自身熒光圖像的帶通濾波器，另外，作為獲得細胞核熒光圖像的帶通濾波器，根據(jù)使用的核酸染色劑的熒光特性而有所不同，例如因為DAPI的最大突光波長為461nm, Hoechst 33342及Hoechst 33258的最大突光波長為465nm、PI (碘化丙啶)的最大熒光波長為617nm，優(yōu)選使用能充分覆蓋這些波長的帶通濾波器。通過以下實施例具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明的技術(shù)范圍不受這些實施例限制。實施例1
使用IHC-QDs法進行了免疫染色的組織試樣的制作方法作為人乳癌病理組織，選擇了基于IHC-DAB法的評價分數(shù)為O的6例，分數(shù)為I的6例，分數(shù)為2的11例，分數(shù)為3的14例，共計37例。另外，關(guān)于病例的背景，如表I所示，考慮為沒有偏向性的情況。針對上述37例的組織，按照通常的病理組織診斷中使用的方法來制備組織試樣。即，用福爾馬林固定癌癥患者的乳房組織檢測樣品，用乙醇進行脫水處理，之后進行二甲苯處理，浸于高溫的石蠟中進行石蠟包埋，制作組織試樣(圖1(a))。接下來將上述組織試樣進行2 4 μ m的切片，用二甲苯進行脫石蠟處理，進行乙醇處理，之后用去離子水洗凈。為了使抗體能高效接近固定組織內(nèi)的抗原部位，在IOmM檸檬酸(pH 6.0)中于121°C、15分鐘的條件下進行對上述試樣的活化，實施緩和固定組織結(jié)構(gòu)的處理。接下來，用去離子水、磷酸緩沖生理鹽水(PBS)依序洗凈上述試樣，然后，于25°C，在含有用發(fā)出705nm的熒光的量子點熒光粒子(Qdot705)標記的作為曲妥珠單抗的有效成分的HER2抗體(曲妥珠單抗+QD705) 15nM的PBS溶液中，將上述試樣進行3小時的抗體反應(yīng)。此處，作為向曲妥珠單抗標記Qdot705的方法，使用被還原的曲妥珠單抗的硫醇基與量子點熒光粒子的馬來酰亞胺基之間的偶聯(lián)反應(yīng)(圖1(b))。需要說明的是，使用經(jīng)Qdot705標記的人IgG(人IgG+QD705)作為對照。用PBS溶液進行4次洗凈，之后為了對細胞數(shù)計數(shù)，通過于25°C進行10分鐘的DAPI染色(2 μ g/mlPBS)來對細胞核染色。用PBS進行3次洗凈，之后封入，制作了進行了免疫染色(IHC-QDs)的組織試樣(圖1(a))。表I
權(quán)利要求
1.一種含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定方法，其特征在于，使用包括下述工序(a) (d)的組織染色方法， 工序(a)，用熒光物質(zhì)標記含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體，使該經(jīng)熒光標記的抗體與組織試樣接觸； 工序(b)，向所述抗體接觸的組織部位照射激發(fā)光，獲得熒光圖像； 工序(c)，獲得在與所述熒光圖像為相同視野及相同焦點時的、與所述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域相比為短波長側(cè)或長波長側(cè)的附近區(qū)域的自身熒光圖像； 工序(d)，進行圖像處理，從所述熒光圖像的熒光亮度除去所述自身熒光圖像的熒光亮度，獲得校正熒光圖像。
2.如權(quán)利要求1所述的判定方法，其特征在于，含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體是識別癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子的抗體。
3.如權(quán)利要求2所述的判定方法，其特征在于，癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子是HER2，所述HER2是人上皮生 長因子受體2。
4.如權(quán)利要求2或3所述的判定方法，其特征在于，癌癥為乳癌。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項所述的判定方法，其特征在于，熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域與其附近區(qū)域的波長之差在IOOnm以內(nèi)。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項所述的判定方法,其特征在于,突光物質(zhì)為突光粒子。
7.如權(quán)利要求6所述的判定方法，其特征在于，熒光粒子為量子點熒光粒子。
8.如權(quán)利要求6或7所述的判定方法，其特征在于，進一步包括下述工序(e) (g)， 工序(e)，對抗體接觸的組織部位的細胞數(shù)進行計數(shù)； 工序(f)，基于熒光圖像，確定I粒子的熒光粒子，計算測量對應(yīng)于該I粒子的熒光粒子的校正熒光圖像內(nèi)的I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度； 工序(g)，將校正熒光圖像內(nèi)的總熒光亮度除以所述I粒子的熒光粒子的平均熒光亮度，求出熒光粒子數(shù)，將該熒光粒子數(shù)除以通過工序(e)計數(shù)出的細胞數(shù)，算出每I個細胞的熒光粒子數(shù)。
9.如權(quán)利要求8所述的判定方法，其特征在于，利用熒光粒子具有的明滅性，來確定I粒子的突光粒子。
10.一種含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性的判定系統(tǒng)，其特征在于，包括以下(A) ⑶， (A)含有經(jīng)熒光物質(zhì)標記的抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體； (B)激發(fā)光照射裝置； (C)獲得熒光圖像的裝置； (D)用于獲得熒光圖像的帶通濾波器。
11.如權(quán)利要求10所述的判定系統(tǒng)，其特征在于，含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體是識別癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子的抗體。
12.如權(quán)利要求11所述的判定系統(tǒng)，其特征在于，癌癥的增殖控制因子或轉(zhuǎn)移控制因子是HER2，所述HER2是人上皮生長因子受體2。
13.如權(quán)利要求10 12中任一項所述的判定系統(tǒng)，其特征在于，進一步包括(E)獲得細胞核熒光圖像的帶通濾波器。
14.如權(quán)利要求10 13中任一項所述的判定系統(tǒng),其特征在于,突光物質(zhì)為突光粒子。
15.如權(quán)利要求14所述 的判定系統(tǒng)，其特征在于，熒光粒子為量子點熒光粒子。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過生物體組織中定量的組織染色法對作為曲妥珠單抗等抗體醫(yī)藥的有效成分的抗體、有效成分的用于靶向靶標部位的抗體識別的蛋白質(zhì)進行高精度定量，而進行的含有所述抗體作為成分的醫(yī)藥品的治療有效性的判定方法。本發(fā)明使用下述組織染色方法，判定含有抗體作為成分的醫(yī)藥品的有效性，所述組織染色方法包括如下工序用熒光物質(zhì)標記含有抗體作為成分的醫(yī)藥品中的抗體、使該經(jīng)熒光標記的抗體與組織試樣接觸的工序；向所述抗體接觸的組織部位照射激發(fā)光、獲得熒光圖像的工序；獲得在與所述熒光圖像為相同視野及相同焦點時的、與所述熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光波長的獲得區(qū)域相比為短波長側(cè)或長波長側(cè)的附近區(qū)域的自身熒光圖像的工序；進行圖像處理、從所述熒光圖像的熒光亮度除去所述自身熒光圖像的熒光亮度、獲得校正熒光圖像的工序；對抗體接觸的組織部位的細胞數(shù)進行計數(shù)的工序；計算測量1粒子的熒光粒子的平均熒光亮度的工序；算出每1個細胞的熒光粒子數(shù)的工序。
文檔編號G01N33/536GK103154741SQ20118004223
公開日2013年6月12日 申請日期2011年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者宮下穰, 權(quán)田幸祐, 大內(nèi)憲明, 武田元博 申請人:國立大學(xué)法人東北大學(xué)