診斷方法
【專利摘要】本文描述了用于鑒定對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的哺乳動(dòng)物的方法，以及針對(duì)其的試劑盒和其相關(guān)的用途和方法。
【專利說(shuō)明】診斷方法
[0001]發(fā)明背景
由于在牙醫(yī)和患者中對(duì)侵蝕及其影響的認(rèn)識(shí)增加，因此有正確診斷侵蝕的來(lái)源并鑒定對(duì)侵蝕有升高的易感性的個(gè)體的方法的需要。與由于長(zhǎng)時(shí)間暴露于細(xì)菌酸產(chǎn)生局部很深的亞表面病灶的齲齒不同，侵蝕是由以下原因造成:由于短且頻繁暴露于低PH膳食酸，整個(gè)牙釉質(zhì)表面的溶解和軟化，導(dǎo)致軟化和微米級(jí)礦物質(zhì)的流失，尤其是當(dāng)用研磨劑牙膏刷牙后。膳食酸例如檸檬酸是特別有害的，不僅由于其酸性PH，而且由于其鈣螯合能力，其引發(fā)進(jìn)一步的牙釉質(zhì)溶解。
[0002]獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)針對(duì)對(duì)牙釉質(zhì)的酸攻擊，天然地提供了一些保護(hù)。AEP包含鈣離子、磷酸根離子以及蛋白質(zhì)和酶。表膜的形成是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過(guò)程，其中前體蛋白例如富酪蛋白和富含脯氨酸的蛋白最初結(jié)合并為其它蛋白(粘蛋白等)提供結(jié)合位點(diǎn)。成熟涉及表膜蛋白質(zhì)的交聯(lián)和去磷酸化以及2小時(shí)后在后期牙斑菌的結(jié)合。表膜的組成高度依賴于唾液含量，其隨流速、刺激、每天的不同時(shí)間、膳食等而變化。唾液流速極大地影響了唾液的pH、離子成分和緩沖能力。
[0003]侵蝕可源自數(shù)種條件-頻繁暴露于膳食酸、胃酸或缺乏足夠的唾液(口干癥)?；加形该訝€的患者通常通過(guò)糜爛損傷的嚴(yán)重性和位置(上腭表面)的評(píng)價(jià)來(lái)鑒定，而患有口干癥的那些則通過(guò)目測(cè)唾液和測(cè)量唾液流速來(lái)鑒定。侵蝕和酸性飲料的攝入量增加、較低的唾液流速和由較低的唾液流速造成的較低的唾液PH /緩沖能力之間存在聯(lián)系。然而，一些具有正常唾液流速且無(wú)胃酸暴露跡象的患者仍患有膳食性侵蝕損傷，即使當(dāng)暴露于膳食酸被最小化時(shí)，這 表明對(duì)侵蝕的易感性升高，可能與其AEP有關(guān)。存在用于鑒定該高度易感患者的亞群以正確治療的簡(jiǎn)單和可靠的方法的需要，以及用于鑒定患者以臨床研究評(píng)價(jià)口腔護(hù)理活性物質(zhì)減少、減輕和控制來(lái)自膳食酸的牙本質(zhì)侵蝕的方法的需要。
[0004]發(fā)明簡(jiǎn)沭
出乎意料的是，已發(fā)現(xiàn)對(duì)膳食性牙釉質(zhì)侵蝕具有高易感性的患者表現(xiàn)出相對(duì)于具有相似唾液流速和膳食的健康對(duì)照組，D整個(gè)口腔唾液中顯著較低的粘蛋白5B、碳酸酐酶6和/或較高的富酪蛋白水平，和2) AEP中顯著較低的總蛋白、富酪蛋白和/或鈣濃度。利用基于總蛋白濃度、鈣分析及蛋白鑒定的唾液和表膜的診斷方法，這些因素可用于鑒定對(duì)侵蝕易感的患者。由于測(cè)試樣品為唾液和唾液表膜，樣品收集是容易的且存在與蛋白及礦物質(zhì)含量相關(guān)的豐富信息。
[0005]因此，本發(fā)明的一些實(shí)施方案提供了用于鑒定對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的患者的方法，其包括以下步驟的一個(gè)或兩個(gè):
(i)從患者獲得整個(gè)口腔唾液的樣品并檢測(cè)所述唾液中粘蛋白5B水平、碳酸酐酶6水平和富酪蛋白水平中的一個(gè)或多個(gè)，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的粘蛋白5B、較低的碳酸酐酶和/或較高的富酪蛋白水平各自表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高；和
(?)從患者獲得獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)的樣品并測(cè)量所述AEP中總蛋白濃度、富酪蛋白濃度和鈣濃度中的一個(gè)或多個(gè)，其中相對(duì)于對(duì)照值，每個(gè)這些物質(zhì)的較低水平各自表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高。[0006]在一些實(shí)施方案中，所述侵蝕的病因是膳食。
[0007]本發(fā)明應(yīng)用的其它領(lǐng)域?qū)⒃谝韵绿峁┑脑斒鲋凶兊蔑@而易見(jiàn)。應(yīng)理解的是，詳述和具體實(shí)施例，當(dāng)表示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案時(shí)，僅旨在說(shuō)明的目的，而并非旨在限制本發(fā)明的范圍。
[0008]發(fā)明詳沭
一個(gè)或多個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案的以下描述在本質(zhì)上僅為示例性的，并且不以任何方式意圖限制本發(fā)明的范圍、其應(yīng)用或用途。
[0009]因此本發(fā)明的一些實(shí)施方案提供了用于鑒定對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的患者的方法(方法I)，包括測(cè)量以下的一種或多種，例如以下任何2、3、4或5種，例如全部6種:
(i)在來(lái)自患者的整個(gè)口腔唾液例如未刺激的整個(gè)口腔唾液(UWMS)的樣品中測(cè)量粘蛋白5B的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的粘蛋白5B的濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升聞;
(?)在來(lái)自患者的整個(gè)口腔唾液例如未刺激的整個(gè)口腔唾液(UWMS)的樣品中測(cè)量碳酸酐酶6的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的碳酸酐酶6的濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升聞;
(iii)在來(lái)自患者的 整個(gè)口腔唾液例如未刺激的整個(gè)口腔唾液(UWMS)的樣品中測(cè)量富酪蛋白的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較高的富酪蛋白的濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升聞;
(iv)在來(lái)自患者的獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)樣品中測(cè)量總蛋白的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的總蛋白濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高；
(v)在來(lái)自患者的獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)樣品中測(cè)量富酪蛋白的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的富酪蛋白的濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高；和
(vi)在來(lái)自患者的獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)樣品中測(cè)量鈣的濃度，其中相對(duì)于對(duì)照值，較低的鈣的濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高。
[0010]例如，本發(fā)明提供了
1.1方法1，其中患者在收集樣品前禁食或禁飲水至少一小時(shí)，例如至少兩小時(shí)。
[0011]1.2方法I或方法1.1，其中當(dāng)患者表現(xiàn)出以下標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)時(shí)，所述患者鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)的侵蝕具有升高的易感性:
【權(quán)利要求】
1.一種用于鑒定對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的哺乳動(dòng)物的方法，其包括: a.從哺乳動(dòng)物的口腔中獲得整個(gè)口腔唾液的樣品； b.測(cè)定以下生物標(biāo)志物中的一種或多種的濃度: i)粘蛋白5B; ii)碳酸酐酶6;和 iii)富酪蛋白；和 c.將粘蛋白B的濃度、碳酸酐酶6的濃度和/或富酪蛋白的濃度與所述生物標(biāo)志物各自的對(duì)照值進(jìn)行比較； 其中，所述對(duì)照值是取自未患有侵蝕的哺乳動(dòng)物的口腔的整個(gè)口腔唾液樣品中所述生物標(biāo)志物的濃度；并且 其中相對(duì)于粘蛋白5B的所述對(duì)照值，較低的粘蛋白5B濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高； 其中相對(duì)于碳酸酐酶6的所述對(duì)照值，較低的碳酸酐酶6濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高；和 其中相對(duì)于富酪蛋白的對(duì)照值，較高的富酪蛋白濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升 聞。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述牙釉質(zhì)侵蝕的病因是膳食。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其中整個(gè)口腔唾液是未刺激的整個(gè)口腔唾液。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中當(dāng)哺乳動(dòng)物表現(xiàn)出以下標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)或多項(xiàng)時(shí)，所述哺乳動(dòng)物鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性: I參數(shù)丨表示對(duì)IHiiI感的范Bi I I % Ir & 5B (UWMS) I <2?丨,lig.1nl I I 後KiSf.1i fs (UWMS) 丨I3-1-j I a U-1tiJ IIJWMSI I > 15 1--! I
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中基于表現(xiàn)出以下標(biāo)準(zhǔn)中的至少兩項(xiàng)，所述哺乳動(dòng)物鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性: I -- =—]...........1 II ? Β<Η￥?ηΙ |1......................................................................................................................................................................4...............................................................-.......................................................1 I1, (UWMS) I <: 35 μρη? |。 1.................................................................................................................................................1................................................................:=======:^±^ I 富 M 蛋白 11 ；WMS) I > 15 Ut?/nii I ?......................................................................................................................................................................1..........................................................l...w...................................................1
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括其中在從口腔采樣前哺乳動(dòng)物必需戒絕進(jìn)食或飲水至少I(mǎi)小時(shí)的步驟。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括治療鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的哺乳動(dòng)物的步驟，所述步驟包括給予所述哺乳動(dòng)物的口腔有效量的防止或減少牙本質(zhì)或牙釉質(zhì)侵蝕的作用劑或產(chǎn)品。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述防止或減少牙本質(zhì)或牙釉質(zhì)侵蝕的作用劑或產(chǎn)品選自:含氟漱口水；含高濃度氟的牙膏；含磷酸鈣或鈣研磨劑例如焦磷酸鈣、二水合磷酸二鈣或碳酸鈣的牙膏；包含呈游離或鹽形式的L-精氨酸的口腔護(hù)理組合物；牙本質(zhì)粘合劑或涂劑；包含亞錫離子源的口腔護(hù)理組合物；及其兩種或更多種的組合。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
10.一種用于診斷哺乳動(dòng)物中對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高的試劑盒，其包括用于測(cè)量采自哺乳動(dòng)物的口腔的整個(gè)口腔唾液樣品中粘蛋白5B、碳酸酐酶6和富酪蛋白中一種或多種的濃度的工具。
11.權(quán)利要求10的試劑盒，其中所述牙釉質(zhì)侵蝕的病因是膳食。
12.權(quán)利要求10或11的試劑盒，其中所述用于測(cè)量粘蛋白5B、碳酸酐酶6和富酪蛋白中一種或多種的濃度的工具包括針對(duì)其的抗體。
13.針對(duì)粘蛋白5B、碳酸酐酶6和富酪蛋白中一種或多種的抗體在制備用于診斷哺乳動(dòng)物中對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高的試劑盒中的用途。
14.一種用于鑒定對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的哺乳動(dòng)物的方法，其包括: a.從所述哺乳動(dòng)物的口腔中獲得獲得性牙釉質(zhì)表膜(AEP)的樣品； b.測(cè)量以下生物標(biāo)志物中一種或多種的濃度: i)總蛋白； ?)富酪蛋白；和 iii)鈣；和 c.將總蛋白的濃度、富酪蛋白的濃度和/或鈣的濃度與所述生物標(biāo)志物各自的對(duì)照值進(jìn)行比較； 其中，所述對(duì)照值是采自未患有侵蝕的哺乳動(dòng)物的口腔的AEP樣品中所述生物標(biāo)志物的濃度；并且 其中相對(duì)于總蛋白的所述對(duì)照值，較低的總蛋白濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升聞; 其中相對(duì)于富酪蛋白的所述對(duì)照值，較低的富酪蛋白濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升聞；和 其中相對(duì)于鈣的所述對(duì)照值，較低的鈣濃度表示對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述牙釉質(zhì)侵蝕的病因是膳食。
16.權(quán)利要求14或15的方法，其中當(dāng)哺乳動(dòng)物表現(xiàn)出以下標(biāo)準(zhǔn)中的一項(xiàng)或兩項(xiàng)時(shí)，所述哺乳動(dòng)物鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性:

17.權(quán)利要求14-16中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括治療鑒定為對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕具有升高的易感性的哺乳動(dòng)物的步驟，其中所述步驟包括給予所述哺乳動(dòng)物的口腔有效量的防止或減少牙本質(zhì)或牙釉質(zhì)侵蝕的作用劑或產(chǎn)品。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述防止或減少牙本質(zhì)或牙釉質(zhì)侵蝕的作用劑或產(chǎn)品選自:含氟漱口水；含高濃度氟的牙膏；含磷酸鈣或鈣研磨劑例如焦磷酸鈣、二水合磷酸二鈣或碳酸鈣的牙膏；包含呈游離或鹽形式的L-精氨酸的口腔護(hù)理組合物；牙本質(zhì)粘合劑或涂劑；包含亞錫離子源的口腔護(hù)理組合物；及其兩種或更多種的組合。
19.權(quán)利要求14-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述哺乳動(dòng)物為人。
20.一種用于診 斷哺乳動(dòng)物中對(duì)牙釉質(zhì)侵蝕的易感性升高的試劑盒，其包含用于測(cè)量經(jīng)I小時(shí)或更久形成的AEP樣品中鈣、富酪蛋白和/或總蛋白的工具。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103998936SQ201180075691
【公開(kāi)日】2014年8月20日 申請(qǐng)日期:2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月20日
【發(fā)明者】L.蔡德?tīng)? S.米勒, G.卡彭特, G.普羅克托爾, D.巴特萊特, R.莫亞澤斯 申請(qǐng)人:高露潔-棕欖公司