專利名稱：一種低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法，屬于藥物化學(xué)提取及分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
植物藥由于種類繁多且具有明顯的療效與較低的副作用，因此在臨床方面的應(yīng)用具有歷史悠久的特點(diǎn)，然而植物藥中的復(fù)雜有機(jī)、無機(jī)化學(xué)成分尚未闡明，這便是植物藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、質(zhì)量控制及作用藥理研究中的主要瓶頸。目前我國(guó)植物藥的發(fā)展仍處于方興未艾的時(shí)期，因此，化學(xué)成分的定性定量分析在植物藥研究過程中顯得及其重要。各種色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用技術(shù)是目前定性定量分析有機(jī)化學(xué)成分的主流，王廣基等人采用高效液相-離子阱-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)中藥復(fù)雜體系中化學(xué)成分的快速篩選與鑒定(公開號(hào)CN 101382525A)對(duì)藥物中有機(jī)成分分析提供了一種快速簡(jiǎn)便的方法，但對(duì)于藥物中無機(jī)成分中的非金屬元素分析鮮有報(bào)道。植物藥在民間均以口服、水煎煮或直接入藥為主，植物藥中的無機(jī)成分在水溶液中易溶出，藥物中無機(jī)成分分析以金屬元素分析居多，而對(duì)陰離子成分研究甚少。無機(jī)陰離子對(duì)于人體健康的影響及藥理作用如何鮮有報(bào)道。近年來食品中陰離子的價(jià)值及潛在的危害開始受到人們的普遍關(guān)注。常見的無機(jī)陰離子F_、Cl' Br' N02_、N03_、PO43' S042_適當(dāng)攝入對(duì)人體是有益的，但攝入過多則會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害作用。因此，對(duì)植物藥藥中的水溶性陰離子進(jìn)行定性定量分析，為藥物中的藥效與陰離子的關(guān)系、無機(jī)陰離子對(duì)人體健康及藥物品質(zhì)的影響提供理論性依據(jù)，對(duì)于保障人類健康、促進(jìn)植物藥市場(chǎng)國(guó)際化具有重大意義。傳統(tǒng)的化學(xué)方法分析測(cè)定常見無機(jī)陰離子，存在操作繁瑣、耗時(shí)、檢出限高、并且只能分析測(cè)定單個(gè)陰離子的特點(diǎn)。當(dāng)前應(yīng)用較廣的連續(xù)流動(dòng)分析儀，仍存在不能同時(shí)測(cè)定多個(gè)離子的不足之處。目前食品安全檢測(cè)部分陰離子已存在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定的陰離子的方法多為傳統(tǒng)的化學(xué)分析方法，在同時(shí)測(cè)定多種陰離子方面仍存在不足。離子色譜法具有分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、選擇性穩(wěn)定性好、可同時(shí)檢測(cè)多種離子的特點(diǎn)，已經(jīng)成為無機(jī)陰、陽(yáng)離子和部分有機(jī)離子最主要的分析方法，在食品、農(nóng)藥及水質(zhì)檢驗(yàn)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。但離子色譜分析中前處理技術(shù)是一個(gè)關(guān)鍵的步驟，也是目前離子色譜發(fā)展過程中的薄弱環(huán)節(jié)之一。固體樣品提取的前處理技術(shù)有傳統(tǒng)浸提法及新型處理方法如加速溶劑萃取法(ASE)、微波輔助萃取法(MAE)、超臨界流體萃取法(SCFE)、超聲波提取法 (UAE)等，新型的處理技術(shù)雖然具有提取速度快、物耗能耗少等特點(diǎn)，可代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法，但是仍然存在儀器設(shè)備的運(yùn)行成本高，儀器工作噪聲大，而且在測(cè)定分析中會(huì)引入多種雜質(zhì)成分等的不足，在實(shí)際應(yīng)用中難以普及。因此，目前非常需要一種具有普遍實(shí)用性、引入雜質(zhì)成分小、環(huán)保型處理固體樣品的新技術(shù)，并對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確分析。目前，超低溫技術(shù)應(yīng)用在液化天然氣、醫(yī)療及生物科技等方面，尤其在生物技術(shù)保存細(xì)胞方面運(yùn)用極其廣泛，如超低溫法凍存滇紫草細(xì)胞(公開號(hào)CN 101343620A)，從人類同種異體細(xì)胞提取細(xì)胞液中采用超低溫萃取技術(shù)提取細(xì)胞液(公開號(hào)CN101380333A)，以及用于保健食品、護(hù)膚品、低溫設(shè)備的開發(fā)研究。但利用低溫提取植物藥中的無機(jī)陰離子組分，結(jié)合離子色譜法分析同時(shí)測(cè)定多種陰離子的方法尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有提取分離分析陰離子技術(shù)的不足，提供一種低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法。采用液氮與去離子水組合作為提取劑進(jìn)行提取無機(jī)陰離子，并聯(lián)合離子色譜分析系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)同時(shí)分析測(cè)定常見的無機(jī)陰離子。所測(cè)七種無機(jī)陰離子(F_、Cl_、N02_、Br_、N03_、P043_、S042_)在O. 4 12mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為I. 20 5· 00μ g/L，精密度為O. 05% 7%，加標(biāo)回收率為70% 82%。本發(fā)明包括以下步驟I、植物藥中無機(jī)陰離子提取液的制備將植物藥樣品在低于60°C條件下烘至含水量低于5%，冷卻，并用粉碎機(jī)粉碎至粒度為2 4mm放入干燥器中備用；稱取Ig IOg上述植物藥樣品置于250mL塑料燒杯中，加入5 30g的液氮(-196°C )進(jìn)行破碎，待液氮?dú)饣曛?，研磨至O. I O. 15mm ;稱取O. 5 Ig液氮處理過的植物藥樣品于IOmL離心管中加入5 6mL去離子水浸提8—15min ;在轉(zhuǎn)速為 2500—3000r/min下離心分離5_8min,得到無機(jī)陰離子提取液。取ImL提取液于IOmL容量瓶中用去離子水定容至刻度線，取5mL該定容后溶液經(jīng)O. 22 μ m濾膜過濾得待分析的提取液。2、無機(jī)陰離子組分的同時(shí)測(cè)定分析(I)離子色譜分析儀測(cè)試條件離子色譜儀分離柱250mmX4mm，保護(hù)柱50mmX4mm，自動(dòng)再生抑制器電流24mA ;色譜柱柱溫30°C，溫控電導(dǎo)檢測(cè)器池溫35°C。本發(fā)明中所設(shè)定的分析參數(shù)進(jìn)樣量為25 μ L，流速為I. 5mL/min，淋洗液為濃度 2. 8mmol/L的碳酸氫鈉與濃度為3. 5mmol/L的碳酸鈉的混合液。取ImL提取液在上述所設(shè)定的分析參數(shù)下按照附圖2中的離子色譜分析流程圖進(jìn)行陰離子分析。即淋洗瓶I中的淋洗液通過泵2輸送至進(jìn)樣閥3中與待分析的提取液一起輸送至保護(hù)柱4和分離柱5中，對(duì)不同的陰離子進(jìn)行分離，通過大抑制器降低背景導(dǎo)電， 提高靈敏度，并用檢測(cè)池7，檢測(cè)器8對(duì)陰離子進(jìn)行檢測(cè)。⑵結(jié)果在上述離子色譜分析儀測(cè)試條件下，通過檢測(cè)提取液中的陰離子，并對(duì)其進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，所測(cè)七種無機(jī)陰離子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為I. 20 5. 00μ g/L，精密度為O. 05% 7%，加標(biāo)回收率為70% 82%。與目前現(xiàn)有的離子色譜樣品前處理技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢(shì)本方法是采用液氮與去離子水組合作為提取劑進(jìn)行提取無機(jī)陰離子，這種方法既排除了傳統(tǒng)提取方法的弊端又保留了目前常用提取方法的優(yōu)點(diǎn)，具有提取速度快且提取完全，提取劑用量少，試劑環(huán)保，操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，是一種高效處理樣品的理想方法。低溫提取的離子色譜分析方法為分析天然藥物中的陰離子提供了一種新的提取分析方法，為制定量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)，對(duì)保障我國(guó)人類健康具有現(xiàn)實(shí)意義。本方法對(duì)植物藥的種類沒有嚴(yán)格的限制，因此適用范圍廣。


圖I :植物藥中無機(jī)陰離子的提取流程2 :無機(jī)陰離子的離子色譜分析流程圖，圖2中I為淋洗液，2為泵，3為進(jìn)樣閥， 4為保護(hù)柱,5為分離柱,6為抑制器,7為檢測(cè)池,8為檢測(cè)器。
具體實(shí)施方案實(shí)施例I :金絲梅植物藥中無機(jī)陰離子的提取分析I、無機(jī)陰離子提取液的制備將金絲梅樣品置于50_60°C烘箱中烘至含水量為3%，冷卻，并用粉碎機(jī)粉碎至粒度為2-4mm放入干燥器中備用；稱取5g上述植物藥樣品置于250mL塑料燒杯中，加入15g的液氮進(jìn)行破碎，待液氮?dú)饣曛?，研磨至O. 1-0. 12mm ;稱取O. 5g液氮處理過的植物藥樣品于IOmL離心管加入6mL去離子水浸提IOmin,在轉(zhuǎn)速為3000r/min下離心分離5min,得到提取液,取提取液 ImL于IOmL容量瓶中用去離子水稀釋至10mL，取5mL該容量后溶液經(jīng)O. 22 μ m濾膜過濾得待分析的提取液。2、離子色譜分析(I)離子色譜分析儀測(cè)試條件Dionex ICS1500離子色譜儀(美國(guó)戴安公司)，Chromeleon6. O色譜工作站， IonPacASH 分離柱(250mmX4mm), IonPac AG14 保護(hù)柱(50mmX4mm), ASRS-300 自動(dòng)再生抑制器(電流24mA);色譜柱柱溫30°C，DS6溫控電導(dǎo)檢測(cè)器(檢測(cè)溫度35°C )。本發(fā)明中所設(shè)定的分析參數(shù)進(jìn)樣量25 μ L，流速I. 5mL/min,淋洗液為2. 8mmol/L 碳酸氫鈉與3. 5mmol/L碳酸鈉的混合液。取ImL提取液在上述所設(shè)定的分析參數(shù)下按照附圖2中的離子色譜分析流程圖進(jìn)行陰離子分析。(2)測(cè)定結(jié)果在上述離子色譜分析儀測(cè)試條件下，通過檢測(cè)提取液中的陰離子，并對(duì)其進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，所測(cè)七種無機(jī)陰離子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為I. 20 5. 00 μ g/L,精密度為3% 6%，加標(biāo)回收率為 75%。實(shí)施例2 :竹葉蘭植物藥中無機(jī)陰離子的提取分析I、無機(jī)陰離子提取液的制備將竹葉蘭樣品置于烘至含水量為4%，冷卻，并用粉碎機(jī)粉碎至粒度為2-4_放入干燥器中備用。稱取IOg上述植物藥樣品置于250mL塑料燒杯中，加入30g的液氮進(jìn)行破碎，待液氮?dú)饣曛螅心ブ罯. 1-0. 15mm ;稱取Ig液氮處理過的植物藥樣品于IOmL離心管加入 6mL去離子水浸提IOmin,在轉(zhuǎn)速為3000r/min下離心5min,取上清液ImL于IOmL容量瓶中用去離子水稀釋至刻度，取5mL該溶液通過碳十八固相萃取小柱凈化，再經(jīng)O. 22 μ m濾膜過濾得待分析的提取液。2、離子色譜分析(I)離子色譜分析儀測(cè)試條件Dionex ICS1500離子色譜儀(美國(guó)戴安公司)，Chromeleon6. O色譜工作站， IonPacASH 分離柱(250mmX4mm), IonPac AG14 保護(hù)柱(50mmX4mm), ASRS-300 自動(dòng)再生抑制器(電流24mA);色譜柱柱溫30°C，DS6溫控電導(dǎo)檢測(cè)器(池溫35°C )。本發(fā)明中所設(shè)定的分析參數(shù)進(jìn)樣量(25yL)，流速(1.5mL/min)，淋洗液 (2. 8mmol/L 碳酸氫鈉，3. 5mmol/L 碳酸鈉)。取ImL提取液在上述所設(shè)定的分析參數(shù)下按照附圖2中的離子色譜分析流程圖進(jìn)行陰離子分析。(2)測(cè)定結(jié)果在上述離子色譜分析儀測(cè)試條件下，通過檢測(cè)提取液中的陰離子，并對(duì)其進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，所測(cè)七種無機(jī)陰離子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為I. 20 5. 00 μ g/L,精密度為2% 7%，加標(biāo)回收率為 81%。
權(quán)利要求
1.一種低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法，其特征在于其包括以下步驟D、植物藥中無機(jī)陰離子提取液的制備將植物藥樣品在低于60°C條件下烘至含水量低于5%，冷卻，并用粉碎機(jī)粉碎至粒度為2 4mm放入干燥器中備用；稱取Ig IOg上述植物藥樣品置于250mL塑料燒杯中，加入_196°C的液氮5 30g進(jìn)行破碎，待液氮?dú)饣曛?，研磨?. I 0. 15mm ;稱取0. 5 Ig液氮處理過的植物藥樣品于IOmL離心管中加入5 6mL去離子水浸提8—15min ;在轉(zhuǎn)速為2500—3000r/min下離心分離5-8min，得到無機(jī)陰離子提取液；取ImL提取液于IOmL容量瓶中用去離子水定容至10mL，取5mL該定容后溶液經(jīng)0. 22 y m濾膜過濾得待分析的提取液；2)、無機(jī)陰離子組分的同時(shí)測(cè)定分析(1)、離子色譜分析儀測(cè)試條件離子色譜儀分離柱250mmX 4mm，保護(hù)柱50mmX 4mm，自動(dòng)再生抑制器電流24mA，色譜柱柱溫30°C，溫控電導(dǎo)檢測(cè)器池溫35°C ;進(jìn)樣量為25ii L，流速為I. 5mL/min，淋洗液為濃度2.8mmol/L的碳酸氫鈉與濃度為3. 5mmol/L的碳酸鈉的混合液；(2)、測(cè)試流程淋洗瓶⑴中的淋洗液通過泵⑵輸送至進(jìn)樣閥(3)中與ImL待分析的提取液一起輸送至保護(hù)柱(4)和分離柱(5)中，對(duì)不同的陰離子進(jìn)行分離，通過抑制器(6) 降低背景導(dǎo)電，提高靈敏度，并用檢測(cè)池(7)，檢測(cè)器(8)對(duì)陰離子進(jìn)行檢測(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法，其特征在于所述植物藥為金絲梅和竹葉蘭。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法，其特征在于所述離子色譜儀為美國(guó)戴安公司離子色譜儀。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種低溫提取植物藥中無機(jī)陰離子及離子色譜分析方法。以植物藥為原料，采用液氮與去離子水組合作為提取劑進(jìn)行提取無機(jī)陰離子，并聯(lián)合離子色譜分析系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)同時(shí)分析測(cè)定常見的無機(jī)陰離子。所測(cè)七種無機(jī)陰離子(F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-、SO42-)在0.4～12mg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為1.20～5.00μg/L，精密度為0.05％～7％，加標(biāo)回收率為70％～82％。為制定量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù)，對(duì)保障人類健康具有現(xiàn)實(shí)意義。本方法對(duì)植物藥的種類沒有嚴(yán)格的限制，因此適用范圍廣。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102590417SQ20121002049
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月30日
發(fā)明者張英杰, 楊敏, 楊樹科, 桂花, 王紅斌, 譚偉, 郭俊明, 馬林轉(zhuǎn) 申請(qǐng)人:云南民族大學(xué)