專利名稱：一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物制劑及其分析領域，特別涉及一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法。
背景技術：
市場上的依達拉奉注射液(商品名:百依達,英文名:Edaravone Injection,漢語拼音:Yidalafeng Zhusheye),主要成分為依達拉奉,化學名稱為3_甲基-1-苯基_2_卩比唑啉-5-酮，分子式=CiciHltlN2tl，分子量:174.2，依達拉奉的結(jié)構式為:
人H
HiC**
依達拉奉是一種自由基清除劑，可以抑制腦缺血、缺氧后再灌注引起的大量自由基和脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，從而減輕腦細胞損害，促進神經(jīng)功能恢復。依達拉奉是一種腦保護劑，臨床研究提示N-乙酰門冬氨酸(NAA)是特異性的存活神經(jīng)細胞的標志，腦梗塞發(fā)病初期含量急劇減少。腦梗塞急性期患者給予依達拉奉，可抑制梗塞周圍局部腦血流量的減少，使發(fā)病后第28天腦中NAA含量較甘油對照組明顯升高。臨床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后靜脈給予依達拉奉，可阻止腦水腫和腦梗塞的進展，并緩解所伴隨的神經(jīng)癥狀，抑制遲發(fā)性神經(jīng)元死亡。機理研究提示，依達拉奉可清除自由基，抑制脂質(zhì)過氧化，從而抑制腦細胞、血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞的氧化損傷。
依達拉奉注射液是一種理想的腦保護劑藥物制劑，具有良好的市場前景；所以，需要建立專門質(zhì)量檢測方法以保證其質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)為0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法的檢測項目包括:鹽酸半胱氨酸含量檢測、亞硫酸氫鈉含量檢測。本發(fā)明的目的是通過以下的技術方案實現(xiàn)的:
一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，該注射液的原料中包括依達拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、注射用水，其重量份數(shù)比為750:500:250:500000 ;所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)為0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法所檢測項目包括:鹽酸半胱氨酸含量檢測、亞硫酸氫鈉含量檢測。所述的鹽酸半胱氨酸含量檢測的方法為:
A、依達拉奉注射液供試品制備:
a.將所述的依達拉奉注射液加水稀釋至原體積的5倍，得到依達拉奉注射液的稀釋
液；
b.將所述的依達拉奉注射液的稀釋液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依達拉奉混合液A ;所述的依達拉奉注射液的稀釋液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ;
c.將所述的依達拉奉混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ;
d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度。B、鹽酸半胱氨酸對照品制備:
a.精密配制100u g/mL的鹽酸半胱氨酸水溶液；
b.將所述的鹽酸半胱氨酸水溶液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到鹽酸半胱氨酸混合液A ;所述的鹽酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ;
c.將所述的鹽酸半胱氨酸混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的鹽酸半胱氨酸對照品；所述的鹽酸半胱氨酸混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ；
d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度；
經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2 S HCI H2O計)，為
0.2mg/ml 0.5mg/ml。所述的亞硫酸氫鈉含量檢測的方法為:
A、依達拉奉注射液供試品制備:
a、取所述的依達拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液稀釋至原體積的250倍，得到依達拉奉注射液的稀釋液；
b、將所述的依達拉奉注射液的稀釋液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依達拉奉混合液A，將所述的依達拉奉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉注射液的稀釋液、堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為 10:1:1 ；
C、將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在557 nm波長處測定吸收度；
B、亞硫酸氣納對照品制備:
a.用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液作為溶劑精密配制2g/mL的亞硫酸氫鈉溶液；
b、將所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亞硫酸氫鈉混合液A，將所述的亞硫酸氫鈉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的亞硫酸氫鈉對照品；所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為10:1:1 ;
C、將所述的亞硫 酸氫鈉對照品通過照紫外-可見分光光度法，在557nm波長處測定吸收度；經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)，為0.06mg/ml
0.6mg/ml o本發(fā)明的有益效果為:
本發(fā)明采用紫外-可見分光光度法進行鹽酸半胱氨酸、亞硫酸氫鈉的定量檢測，具操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，能夠保證目前市場上的依達拉奉注射液的質(zhì)量。
具體實施例方式實施例1:
一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，該注射液的原料中包括依達拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、注射用水，其重量份數(shù)比為750:500:250:500000 ;所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為0.2mg/ml 0.5mg/ml，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)為0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法的檢測項目包括:鹽酸半胱氨酸含量檢測、亞硫酸氫鈉含量檢測。所述的鹽酸半胱氨酸含量檢測的方法為:
A、依達拉奉注射液供試品制備:
a.將所述的依達拉奉注射液加水稀釋至原體積的5倍，得到依達拉奉注射液的稀釋
液；
具體的操作為:
精密量取所述的依達拉奉注射液10ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得到依達拉奉注射液的稀釋液；
b.將所述的依達拉奉注射液的稀釋液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依達拉奉混合液A ;所述的依達拉奉注射液的稀釋液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ;
所述的酸性茚三酮溶液的配制方法為:取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL與鹽酸4mL超聲使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需臨用新制；
具體的操作為:
精密量取所述的依達拉奉注射液的 稀釋液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸與酸性茚三酮溶液各lmL，輕輕搖勻，密塞；
c.將所述的依達拉奉混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ；
具體的操作為:
將裝有所述的依達拉奉混合液A的25ml量瓶水浴加熱10分鐘，立即冷卻，加入乙醇至刻度，搖勻，得到所述依達拉奉注射液供試品；
d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度。所述的紫外-可見分光光度法按照中國藥典2005年版二部附錄IV A中的記載進行；
B、鹽酸半胱氨酸對照品制備:
a.精密配制100 V- g/mL的鹽酸半胱氨酸水溶液；b.將所述的鹽酸半胱氨酸水溶液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到鹽酸半胱氨酸混合液A ;所述的鹽酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ;
所述的酸性茚三酮溶液的配制方法為:取茚三酮0.25g，加冰醋酸6mL與鹽酸4mL超聲使溶解，即得；所述的酸性茚三酮溶液需臨用新制；
具體的操作為:
精密量取所述的鹽酸半胱氨酸水溶液2mL，置25mL量瓶中，加入冰醋酸與酸性茚三酮溶液各lmL，輕輕搖勻，密塞；
c.將所述的鹽酸半胱氨酸混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的鹽酸半胱氨酸對照品；所述的鹽酸半胱氨酸混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ；
具體的操作為:
將裝有所述的鹽酸半胱氨酸混合液A的25ml量瓶水浴加熱10分鐘，立即冷卻，加入乙醇至刻度，搖勻，得到所述鹽酸半胱氨酸對照品；
d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度；
經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為
0.2mg/ml 0.5mg/ml。所述的亞硫酸氫鈉含量檢測的方法為:
A、依達拉奉注射液供試品制備:
a、取所述的依達拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液稀釋至原體積的250倍，得到依達拉奉注射液的稀釋液；
具體的操作為:
精密量取所述的依達拉奉注射液1ml，置250ml量瓶中，加0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，得到依達拉奉注射液的稀釋液；
b、將所述的依達拉奉注射液的稀釋液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依達拉奉混合液A，將所述的依達拉奉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉注射液的稀釋液、堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為 10:1:1 ；
所述的堿性品紅溶液的配制方法為:取堿性品紅0.05g置IOOml量瓶中，加鹽酸5ml溶解，加水至刻度， 搖勻即得。具體的操作為:
精密量取所述的依達拉奉注射液的稀釋液IOml，加入0.05%堿性品紅溶液Iml與0.2%甲醛溶液lml，搖勻，室溫下放置45分鐘，
C、將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在557 nm波長處測定吸收度；
所述的紫外-可見分光光度法按照中國藥典2005年版二部附錄IV A中的記載進行；
B、亞硫酸氣納對照品制備:
a.用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液作為溶劑精密配制2g/mL的亞硫酸氫鈉溶液；
b、將所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亞硫酸氫鈉混合液A，將所述的亞硫酸氫鈉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的亞硫酸氫鈉對照品；所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為10:1:1 ;
所述的堿性品紅溶液的配制方法為:取堿性品紅0.05g置IOOml量瓶中，加鹽酸5ml溶解，加水至刻度，搖勻即得。具體的操作為:
精密量取所述的亞硫酸氫鈉溶液10ml，加入0.05%堿性品紅溶液Iml與0.2%甲醛溶液lml,搖勻，室溫下放置45分鐘，
C、將所述的亞硫酸氫鈉對照品通過照紫外-可見分光光度法，在557 nm波長處測定吸收度；
經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)，為0.06mg/ml
0.6mg/ml o所述的檢測方法中，還包括以下檢測內(nèi)容:
1、性狀檢測:所述的依達拉奉注射液為無色澄明液體；
2、鑒別檢測:
(I)、取所述的依達拉奉注射液適量，滴加碘化鉍鉀試液，即生成橙黃色沉淀。(2)、在含量測定項下的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應與對照品峰的保留時間一致。
2、pH值檢測:應為3.0 4.5 (中國藥典2005年版二部附錄VI H)。3、有關物質(zhì)檢測:精密量取所述的依達拉奉注射液5ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為對照溶液。照含量測定項下的色譜條件，取對照溶液20 Ul注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的20% ;再取供試品溶液和對照溶液各20 yl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/2(0.5%)，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。4、細菌內(nèi)毒素檢測:取所述的依達拉奉注射液，用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至2倍體積，依法檢查(中國藥典2005年版二部附錄XI E)，每Iml中含內(nèi)毒素的量應小于
0.5EU。5、依達拉奉檢測:照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄V D)測定。6、色譜條件 與系統(tǒng)適用性試驗:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以
0.02mol/L磷酸二氫鉀(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0±0.5)_甲醇(70: 30)為流動相；檢測波長為240nm。理論板數(shù)按依達拉奉峰計算應不低于1000,依達拉奉峰與其它峰的分離度
應符合規(guī)定。7、測定法:精密量取所述的依達拉奉注射液適量，加水稀釋制成每Iml含15 ii g的溶液，精密量取20 u 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取依達拉奉對照品37mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。所述的依達拉奉注射液為腦保護劑。所述的依達拉奉注射液的規(guī)格為IOml: 15mg。
所述的依達拉奉注射液貯藏方式為密閉，置涼暗處保存。所述的依達拉奉注射液的有效期暫定18個月。本實施例所述的依達拉奉注射液的原料中包括依達拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、注射用水，其重量份數(shù)比為750:500:250 =500000 ；
所述的依達拉奉注射液的制備方法為:
A、配制:按照上述配比取的依達拉奉，加入上述配比的90 100°C的注射用水，攪拌使主藥完全溶解，加入處方量的亞硫酸氫鈉500g和鹽酸半胱氨酸250g，攪拌均勻，加注射用水至上述配比的80%，使溶液涼至80°C，加上藥用活性炭150g攪拌15分鐘，趁熱過濾，脫炭，濾液加注射用水至全量，用稀鹽酸或氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)PH值為4.0 4.5,用0.45 ii m微孔濾膜過濾，得到半成品；
B、灌封:半成品檢驗合格后，用0.22 y m微孔濾I吳過濾,灌封于IOml曲頸玻璃安it瓦中，裝量按10.5ml (增加量0.5ml)，灌封。C、滅菌、檢漏:將灌封合格的半成品置滅菌柜內(nèi)，用飽和蒸汽115°C滅菌30分鐘。用胭脂紅使用色素配制的紅色色水,真空度_80kpa以上條件下檢漏，純化水清洗，50°C以下烘干后檢出漏支即可。D、燈檢:按收滅菌檢漏后的半成品，檢出瓶身有裂紋、漏氣、破損、裝量不合格藥等廢品。 E、印字、包裝:按規(guī)定進行印字包裝。F、成品檢驗:對藥品質(zhì)量進行質(zhì)檢，并由質(zhì)檢部門對本批藥品生產(chǎn)過程按規(guī)定進行評估，合格后入庫。所述的依達拉奉注射液的成品率為80% 95%。
權利要求
1.一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:該注射液的原料中包括依達拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、注射用水，其重量份數(shù)比為750:500:250:500000 ;所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為0.2mg/ml 0.5mg/ml,含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)為0.06mg/ml 0.6mg/ml ;所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法的檢測項目包括:鹽酸半胱氨酸含量檢測、亞硫酸氫鈉含量檢測。
2.根據(jù)權利要求1所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述的鹽酸半胱氨酸含量檢測的方法為: A、依達拉奉注射液供試品制備: a.將所述的依達拉奉注射液加水稀釋至原體積的5倍，得到依達拉奉注射液的稀釋液； b.將所述的依達拉奉注射液的稀釋液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到依達拉奉混合液A ;所述的依達拉奉注射液的稀釋液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ; c.將所述的依達拉奉混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ; d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度； B、鹽酸半胱氨酸對照 品制備: a.配制100V- g/mL的鹽酸半胱氨酸水溶液； b.將所述的鹽酸半胱氨酸水溶液與冰醋酸、酸性茚三酮溶液混合，得到鹽酸半胱氨酸混合液A ;所述的鹽酸半胱氨酸水溶液、冰醋酸、酸性茚三酮的體積比為2:1:1 ; c.將所述的鹽酸半胱氨酸混合液A加熱10分鐘后，冷卻至室溫，加入乙醇，混勻，得到所述的鹽酸半胱氨酸對照品；所述的鹽酸半胱氨酸混合液A與所述的乙醇的體積比為4:21 ； d.將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在560nm波長處測定吸收度； 經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S HCl H2O計)，為0.2mg/ml 0.5mg/ml。
3.根據(jù)權利要求1所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述的亞硫酸氫鈉含量檢測的方法為: A、依達拉奉注射液供試品制備: a、取所述的依達拉奉注射液，用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液稀釋至原體積的250倍，得到依達拉奉注射液的稀釋液； b、將所述的依達拉奉注射液的稀釋液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到依達拉奉混合液A，將所述的依達拉奉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的依達拉奉注射液供試品；所述的依達拉奉注射液的稀釋液、堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為 10:1:1 ； C、將所述的依達拉奉注射液供試品通過照紫外-可見分光光度法，在557nm波長處測定吸收度； B、亞硫酸氣納對照品制備:a.用0.01%乙二胺四乙酸二鈉溶液作為溶劑配制2ii g/mL的亞硫酸氫鈉溶液； b、將所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液混合，得到亞硫酸氫鈉混合液A，將所述的亞硫酸氫鈉混合液A室溫下放置45分鐘，得到所述的亞硫酸氫鈉對照品；所述的亞硫酸氫鈉溶液、0.05%堿性品紅溶液、0.2%甲醛溶液的體積比為10:1:1 ; C、將所述的亞硫酸氫鈉對照品通過照紫外-可見分光光度法，在557 nm波長處測定吸收度； 經(jīng)計算，所述的依達拉奉注射液中，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO 3計)，為0.06mg/ml .0.6mg/ml o
全文摘要
本發(fā)明提供一種依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法，所述的依達拉奉注射液中，含有鹽酸半胱氨酸(C3H7NO2S·HCl·H2O計)，為0.2mg/ml～0.5mg/ml，含有亞硫酸氫鈉(NaHSO3計)為0.06mg/ml～0.6mg/ml；所述的依達拉奉注射液的質(zhì)量檢測方法的檢測項目包括鹽酸半胱氨酸含量檢測、亞硫酸氫鈉含量檢測。本發(fā)明采用紫外-可見分光光度法進行鹽酸半胱氨酸、亞硫酸氫鈉的定量檢測，具操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，能夠保證目前市場上的依達拉奉注射液的質(zhì)量。
文檔編號G01N21/31GK103245621SQ20121002971
公開日2013年8月14日 申請日期2012年2月10日 優(yōu)先權日2012年2月10日
發(fā)明者繆也夫, 郭冰洲 申請人:陜西健民制藥有限公司