專利名稱：一種利用線蟲鑒定地溝油的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鑒定地溝油的方法。
背景技術(shù)：
地溝油，泛指在生活中存在的各類劣質(zhì)油，如回收的食用油、反復(fù)使用的炸油，以及通過過濾、加熱、沉淀、分離等方法對(duì)城市下水道里的垃圾加工而成的“食用油”?！暗販嫌汀笔且环N質(zhì)量極差、極不衛(wèi)生的非食用油。一旦食用“地溝油”，它會(huì)破壞人們的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的嚴(yán)重后果。地溝油回流到餐桌的現(xiàn)象在中國(guó)普遍存在并在近年被廣泛關(guān)注，而鑒定地溝油成為難題。目前國(guó)內(nèi)尚未有檢測(cè)地溝油的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。 單憑人的感官，地溝油的色、香、味與普通食用油幾乎沒有分別。即便是能探明底細(xì)的儀器也常常難以辨別真假。見諸報(bào)道的地溝油檢測(cè)方法都存在一定盲區(qū)，準(zhǔn)確率也有待提高，尚不足以對(duì)地溝油進(jìn)行充分有效的鑒定。一般地溝油中含有膽固醇類物質(zhì)，而植物油中沒用這類具有動(dòng)物油屬性的成分；即使地溝油經(jīng)過數(shù)級(jí)精煉，膽固醇也會(huì)痕量存在。常規(guī)的通過膽固醇檢測(cè)鑒定地溝油的方法，具有操作復(fù)雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且常規(guī)膽固醇檢測(cè)方法5mg/ g(10% )檢出限較高，無法針對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油進(jìn)行檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了解決常規(guī)的通過膽固醇檢測(cè)鑒定地溝油的方法，具有操作復(fù)雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且無法針對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油進(jìn)行檢測(cè)的問題，而提供一種利用線蟲鑒定地溝油的方法。利用線蟲鑒定地溝油的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至50 60°C，然后在無菌環(huán)境下加入I IOml的待檢測(cè)食用油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8 12h后接入5 10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，若幼蟲生長(zhǎng)緩慢，超過36h后才能發(fā)育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退， 則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若2處內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，則待檢測(cè)食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑒定地溝油。本發(fā)明通過對(duì)線蟲生長(zhǎng)觀測(cè)和行為觀察，借助膽固醇這樣關(guān)鍵因子對(duì)地溝油進(jìn)行判斷。膽固醇是線蟲的關(guān)鍵生長(zhǎng)因子，在缺乏膽固醇的線蟲培養(yǎng)基中，線蟲發(fā)育明顯滯后和不足；地溝油中普遍含有膽固醇，在無膽固醇成分的培養(yǎng)基中添加微量地溝油，線蟲生長(zhǎng)狀況與含有膽固醇成分的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的線蟲毫無差別。將疑似地溝油添加入無膽固醇成分的線蟲培養(yǎng)基中，如果此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲生長(zhǎng)良好、行為正常，與正常培養(yǎng)基生長(zhǎng)的線蟲無差別，便可確定此類食用油為地溝油。
本發(fā)明與傳統(tǒng)的利用分析儀器鑒定地溝油的方法相比，彌補(bǔ)了常規(guī)膽固醇檢測(cè)方法5mg/g(10%)檢出限較高的不足，對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑒定。利用線蟲生長(zhǎng)和行為指標(biāo)，可以直觀高效的甄別食用油的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。此外，本檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)驗(yàn)操作方便，靈敏度高，準(zhǔn)確度好， 成本低廉，易于培訓(xùn)和掌握。


圖I為實(shí)施例中幼蟲長(zhǎng)至成蟲時(shí)間，以幼蟲生長(zhǎng)產(chǎn)卵小時(shí)數(shù)計(jì)的柱狀圖；圖2為實(shí)施例中線蟲頭擺率的柱狀圖。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式利用線蟲鑒定地溝油的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至50 60°C，然后在無菌環(huán)境下加入I IOml的待檢測(cè)食用油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8 12h后接入5 10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，若幼蟲生長(zhǎng)緩慢，超過36h后才能發(fā)育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退， 則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若2處內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，則待檢測(cè)食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑒定地溝油。本實(shí)施方式步驟一中待檢測(cè)食用油為疑似地溝油的食用油。本實(shí)施方式中24h內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，是指幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中磷酸鹽緩沖液的配置將13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η,加蒸餾水定容至IOOmL,調(diào)節(jié)pH值為6. 0，獲得磷酸鹽緩沖液。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中再降溫至 55°C，然后在無菌環(huán)境下加入2ml的待檢測(cè)食用油。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟二中培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入8只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。實(shí)施例利用線蟲鑒定地溝油的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml的待檢測(cè)食用油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培
養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，若幼蟲生長(zhǎng)緩慢，超過36h后才能發(fā)育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若24h內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，則待檢測(cè)食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑒定地溝油。本實(shí)施例步驟一中待檢測(cè)食用油為疑似地溝油的食用油。本實(shí)施例中24h內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，是指幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵(圖I)，即發(fā)育為健康正常的成蟲，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)。對(duì)照組正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲，即幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲， 以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好；正常培養(yǎng)基將17g的瓊脂粉、2. 5g的蛋白胨、O. Ilg 的CaCl2、0. 12g的MgSO4,3g的NaCl和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml膽固醇溶液，獲得正常培養(yǎng)基；其中膽固醇溶液的濃度為10mg/ml?？梢?，實(shí)施例中生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；實(shí)施例中的待檢測(cè)食用油含有膽固醇成分，可鑒定為劣質(zhì)地溝油。實(shí)驗(yàn)佐證I :一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml膽固醇溶液和IOml動(dòng)物油，獲得培養(yǎng)基， 再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)?？梢?，實(shí)驗(yàn)佐證I的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；表明添加動(dòng)物油對(duì)線蟲的生長(zhǎng)和活動(dòng)沒有影響。實(shí)驗(yàn)佐證2 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml膽固醇溶液和IOml植物油，獲得培養(yǎng)基， 再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)?？梢姡瑢?shí)驗(yàn)佐證2的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；表明添加植物油對(duì)線蟲的生長(zhǎng)和活動(dòng)沒有影響。實(shí)驗(yàn)佐證3 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min,再降溫至55°C，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，線蟲在無膽固醇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，36h后開始產(chǎn)卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)?？梢姡瑢?shí)驗(yàn)佐證3中線蟲活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退；不添加膽固醇(或地溝油)，線蟲生長(zhǎng)緩慢；表明作為線蟲關(guān)鍵生長(zhǎng)因子的膽固醇缺失，使線蟲發(fā)育受阻，生長(zhǎng)減慢，活動(dòng)能力降低。實(shí)驗(yàn)佐證4 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml動(dòng)物油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)?？梢?，實(shí)驗(yàn)佐證4的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養(yǎng)基中，添加含有膽固醇成分的動(dòng)物油，彌補(bǔ)了培養(yǎng)基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長(zhǎng)和活動(dòng)得以正常。實(shí)驗(yàn)佐證5 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入5ml動(dòng)物油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)。可見，實(shí)驗(yàn)佐證5的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養(yǎng)基中，添加含有膽固醇成分的動(dòng)物油，彌補(bǔ)了培養(yǎng)基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長(zhǎng)和活動(dòng)得以正常。實(shí)驗(yàn)佐證6 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入IOml動(dòng)物油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，幼蟲在24h內(nèi)開始產(chǎn)卵，即發(fā)育為健康正常的成蟲(圖I)，以頭擺率為指標(biāo)表征其活動(dòng)狀況良好(圖2)?？梢姡瑢?shí)驗(yàn)佐證6的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲與正常培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的線蟲無差別；表明在無膽固醇成分的線蟲培養(yǎng)基中，添加含有膽固醇成分的動(dòng)物油，彌補(bǔ)了培養(yǎng)基中膽固醇的缺失，使得線蟲的生長(zhǎng)和活動(dòng)得以正常。實(shí)驗(yàn)佐證7 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入IOml植物油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固12h后接入5只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，線蟲在無膽固醇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，36h后開始產(chǎn)卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)?？梢?，實(shí)驗(yàn)佐證7中線蟲活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退；表明僅添加植物油，此培養(yǎng)基中無膽固醇成為，線蟲生長(zhǎng)緩慢，活動(dòng)能力降低。實(shí)驗(yàn)佐證8 一、將 17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl和25mL磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌 20min，再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入Iml植物油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固12h后接入5只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，線蟲在無膽固醇培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，36h后開始產(chǎn)卵(圖I)，成蟲明顯體弱瘦小，頭擺率顯著降低(圖2)?？梢姡瑢?shí)驗(yàn)佐證8中線蟲活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退；表明僅添加植物油，此培養(yǎng)基中無膽固醇成為，線蟲生長(zhǎng)緩慢，活動(dòng)能力降低。
權(quán)利要求
1.一種利用線蟲鑒定地溝油的方法，其特征在于利用線蟲鑒定地溝油的方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、將17g 的瓊脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgS04、3g 的 NaCl 和 25mL 磷酸鹽緩沖液，加蒸餾水定容至1000ml，然后放入高壓蒸汽滅菌鍋中于120°C滅菌20min， 再降溫至50 60°C，然后在無菌環(huán)境下加入I IOml的待檢測(cè)食用油，獲得培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8 12h后接入5 10只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，若幼蟲生長(zhǎng)緩慢，超過36h后才能發(fā)育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若24h內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，則待檢測(cè)食用油是地溝油，即完成利用線蟲鑒定地溝油。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種利用線蟲鑒定地溝油的方法，其特征在于步驟一中磷酸鹽緩沖液的配置將13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η，加蒸餾水定容至IOOmL,調(diào)節(jié)pH值為 6.0，獲得磷酸鹽緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的一種利用線蟲鑒定地溝油的方法，其特征在于步驟一中再降溫至55°C，然后在無菌環(huán)境下加入2ml的待檢測(cè)食用油。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用線蟲鑒定地溝油的方法，其特征在于步驟二中培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固8h后接入8只線蟲幼蟲進(jìn)行觀察。
全文摘要
一種利用線蟲鑒定地溝油的方法，它涉及一種鑒定地溝油的方法。它解決了常規(guī)的通過膽固醇檢測(cè)鑒定地溝油的方法，具有操作復(fù)雜、儀器依賴度大、成本較高的不足，而且無法針對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油進(jìn)行檢測(cè)的問題。方法一、制備培養(yǎng)基，再倒入培養(yǎng)皿；二、培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固后接入線蟲幼蟲進(jìn)行觀察，若幼蟲生長(zhǎng)緩慢，超過36h后才能發(fā)育為成蟲且成蟲體型明顯瘦小，活動(dòng)能力減弱，運(yùn)動(dòng)行為衰退，則待檢測(cè)食用油不是地溝油；若24h內(nèi)可發(fā)育為成蟲且生長(zhǎng)和活動(dòng)狀況良好，則待檢測(cè)食用油是地溝油，即完成。本發(fā)明對(duì)特異成分痕量低的高精煉地溝油可以有效鑒定。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)條件要求低，不需要特殊的高精分析儀器，操作方便，成本低廉。
文檔編號(hào)G01N33/03GK102608281SQ20121005157
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月1日
發(fā)明者徐鏡波, 李鑄衡, 王云彪 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所