專利名稱：氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
氯桂丁胺是一芳香基丙烯酰胺衍生物，是3，4- 二氯桂皮酰另丁胺的簡略名，其化學(xué)名稱為(IS, IR)-(E)-3-(3,4-二氯苯基)-N-(I-甲基丙基)-2_丙烯酰胺。該化合物屬于一種創(chuàng)新的桂皮酰胺類衍生物，動物試驗證明它具有較強的抗癲癇作用。如何快速、準(zhǔn)確的控制氯桂丁胺的質(zhì)量是需要解決的技術(shù)問題。本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種氯桂丁胺質(zhì)量控制方法，該方法能夠快速、準(zhǔn)確的檢測出氯桂丁胺產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明技術(shù)方案是一種氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括氯桂丁胺的含量和有關(guān)物質(zhì)的測定，方法為供試品溶液的制備取樣品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀釋至刻度，搖勻。該樣品每Iml含供試品IOOug,備用。對照品溶液的制備取對照品約2. 5mg,精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀釋至刻度，搖勻。該樣品每Iml含對照品IOOug,備用。其中對照品制備取氯桂丁胺一次精制品350克，去離子水2500ml，濃氨水40ml。 加熱攪拌至氯桂丁胺為熔融狀態(tài)?；亓?0分鐘。靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水。加入去離子水1000ml，加熱攪拌回流10分鐘。靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水(以上操作的目的是去除少量存在的中間體3，4 二氯苯基丙烯酸)。加入80%乙醇 600ml，活性炭20克，加熱攪拌回流20分鐘，熱濾，濾液于10 15°C放置5 6小時自然結(jié)晶。過濾，用75%乙醇150ml洗滌結(jié)晶。濾干，紅外干燥至恒重。得氯桂丁胺二次精制品。氯桂丁胺二次精制品260克，80%乙醇440ml，加熱至回流。熱濾。濾液于10 15°C放置5 6小時自然結(jié)晶。過濾，結(jié)晶用75%乙醇IOOml洗滌。濾干，紅外干燥至恒重。得氯桂丁胺對照品。系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠做為填充劑，以醋酸鹽緩沖溶液-甲醇(20 : 80，體積比)為流動相；流速為每分鐘Iml ;檢測波長為276nm。理論板數(shù)按氯桂丁胺峰計算應(yīng)不低于 2000。其中醋酸鹽緩沖溶液的制備醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調(diào)節(jié)ρΗ4· 2±0· 1，補水至1000ml，搖勻。含量測定取供試品溶液20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氯桂丁胺對照品溶液20ul，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。有關(guān)物質(zhì)含量的測定對照品溶液稀釋為每Iml含氯桂丁胺O. 5ug。
照含量項下的方法試驗，取對照液20ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的20%，再取供試溶液和稀釋后的對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試溶液色譜圖中顯示的雜質(zhì)峰，除溶劑峰外，各雜質(zhì)峰面積的總和不得大于對照液主峰的面積(O. 5% )。本發(fā)明氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中還包括殘留有機溶劑吡啶的測定，其方法是色譜條件與系統(tǒng)適用性以直徑為O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，柱長I. 6m,內(nèi)徑3. 2mm，柱溫170°C，進樣器溫度200°C，氫火焰離子化檢測溫度為200°C，內(nèi)標(biāo)物苯與吡啶的分離度不小于I. 5，理論板數(shù)按吡啶峰計算應(yīng)不低于1000。內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密量取苯適量，加二甲亞砜-水(3 7)混合溶劑溶解并稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為內(nèi)標(biāo)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取吡啶適量,加同一混合溶劑并稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量,加同一混合溶劑溶解并稀釋成每Iml含 50mg的溶液，作為供試品溶液。測定方法精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各1ml，分置于頂空進樣瓶中，并分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml、同一混合溶劑1ml，混合。在60°C恒溫水浴中加熱30分鐘，用頂空進樣法進樣，同時進行空白試驗。供試品溶液所得的峰面積比不得大于由標(biāo)準(zhǔn)溶液所得峰面積比(O. 02% ) ο本發(fā)明氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于還包括鑒別。本發(fā)明氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是取本品50克，置IOml試管，加lmol/L鹽酸羥胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分鐘，使溶液呈黃色，放置至室溫，加5%三氯化鐵溶液5 6滴，輕搖，放置片刻，顯紫紅色，加 1，2_丙二醇2ml，靜置，兩液界面的紫紅色更加明顯可辨。本發(fā)明氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是在含量項下記錄的色譜圖中供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致。本發(fā)明氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照品的圖譜一致。本發(fā)明的有益效果是提供了一種氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，該方法能在較短時間內(nèi)快速準(zhǔn)確的檢測氯桂丁胺的含量、有關(guān)物質(zhì)和殘留溶劑的含量。實驗例I有關(guān)物質(zhì)的分離(I)概況依申請?zhí)枮?01010179527. 7的中國專利，制備氯桂丁胺。由起始原料3，4_ 二氯苯甲醛制備中間體3，4- 二氯苯丙烯酸的perkin反應(yīng)收率約為81% (按一次精制品計)， 二次精制品的含量約為99. 5%, HLPC檢測為單峰。用含量98 99%的中間體投入后一步反應(yīng)，則前步反應(yīng)的副產(chǎn)物引入最后產(chǎn)品的可能性甚小。由中間體3，4_ 二氯苯丙烯酸經(jīng)過氯化反應(yīng)和胺解反應(yīng)制備氯桂丁胺的粗品收率約為82%。分離出氯桂丁胺后的母液濃縮、干燥得深棕色殘渣(以下稱總殘渣)?？倸堅牧肯喈?dāng)于氯桂丁胺的五分之一，每結(jié)晶出Ikg的氯桂丁胺，母液濃縮可得到200g的總殘渣。此總殘渣含有反應(yīng)后的所有有關(guān)物質(zhì)，氯桂丁胺中可能會含有的雜質(zhì)或有關(guān)物質(zhì)必定與總殘渣的組成直接相關(guān)?？倸堅?jīng)柱層析、薄層層析、高效液相色譜分析可以粗知其中約含70 80%的氯桂丁胺，15 20%的中間體3，4_ 二氯苯丙烯酸。其他組分則為氯化、胺解產(chǎn)物。(2)有關(guān)物質(zhì)的分離中間體的分離取總殘渣50g，加入二氯甲烷150ml，水100ml。攪拌下加入40%氫氧化鈉溶液至 PH8. 5，攪拌10分鐘。靜置分層。水層加入濃鹽酸至pH2，有沉淀析出。過濾，用30ml水洗， 用50ml 二氯甲烷洗。干燥，得白色粉末7. 57g。經(jīng)用95%乙醇重結(jié)晶得到白色結(jié)晶6. 81g， 熔點226 227°C .薄層檢測為單一物質(zhì)。經(jīng)IR、HLPC檢測，此化合物至中間體3，4- 二氯苯丙烯酸(以下稱為雜質(zhì)一)。氯桂丁胺的分離取總殘渣50g，加二氯甲烷150ml，水100ml。攪拌下加入40%氫氧化鈉溶液至 PH8.5，攪拌10分鐘。靜置分層。二氯甲烷層用水30ml洗，蒸餾除盡二氯甲烷。殘留物用 80%乙醇IOOml加熱溶解。15°C攪拌析出結(jié)晶，過濾，用70%乙醇30ml洗滌結(jié)晶，干燥得微黃色結(jié)晶38. 98g。用80%乙醇脫色重結(jié)晶后得白色結(jié)晶。熔點104 106°C。薄層檢測為單一物質(zhì)。經(jīng)IR、HLPC檢測，確認(rèn)此化合物為氯桂丁胺。弱極性雜質(zhì)(雜質(zhì)二與雜質(zhì)三的分離)取總殘渣300g，用石油醚(bp60 90°C ) 1500ml分三次提取，合并提取液，除去大部分石油醚。冰箱放置過夜，有結(jié)晶析出。過濾，結(jié)晶用石油醚洗滌，得一淡黃色結(jié)晶3. Igo 用石油醚脫色重結(jié)晶得一白色結(jié)晶，熔點119 121°C，薄層檢測為單一物質(zhì)。它在總殘渣中約占I. 03%。經(jīng)元素分析為一不含氮的有機物，核磁共振1H譜、13C譜、H-H譜相關(guān)譜證明為3，4_ 二氯苯丙烯酸甲酯(以下稱為雜質(zhì)二)。用3，4- 二氯苯丙烯酸與甲醇反應(yīng)合成的化合物，經(jīng)元素分析、紅外光譜與雜質(zhì)二相同，進一步確證了雜質(zhì)二的結(jié)構(gòu)。分離出雜質(zhì)二后的母液部分濃縮，得少量黃棕色膏狀物，因其量甚微，柱層析分離未能得到單一物質(zhì)，薄層層析時Rf值與雜質(zhì)二接近，也屬于弱極性雜質(zhì)(以下稱雜質(zhì)三)薄層原點物質(zhì)的分離取總殘渣50g，去除3，4- 二氯苯丙烯酸和氯桂丁胺后的各母液部分去除溶劑后合并，加入二氯甲烷100ml，水100ml，攪拌，靜置分層，二氯甲烷層去除溶劑至干，所得深棕色殘留物用硅膠做柱層析，用大量乙酸乙酯充分洗脫，洗去氯桂丁胺和中間體，殘留物為強極性。在甲醇、乙醇中溶解度很大，改用甲醇洗脫，濃縮甲醇洗脫液至干，得一深棕色物質(zhì)，薄層檢測時，用正己烷-丙酮-冰醋酸溶劑系統(tǒng)展不開，留在原點(以下稱為雜質(zhì)四)實驗例2有關(guān)物質(zhì)的測定(I)色譜條件的選擇色譜條件色譜柱INERTSIL 0DS_35um 4. 6 X 250mm檢測波長276nm
流速lml/min流動相醋酸鹽緩沖溶液ρΗ4· 2 ±O. I-甲醇20 80流動相選擇試驗取氯桂丁胺對照品，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成100ug/ml的供試液，取 20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗了以下幾種流動相，結(jié)果記錄在表I中。表I
名稱體積比保留時間，分鐘分離狀況氯桂丁胺3, 4-二氯苯丙烯酸甲醇-水80:208.88,8兩峰重疊75:25121270:302121乙腈-水80:207. 251.91兩峰雖能分開，但中間體峰的保留時間太短75:256.22. I70:305.482. 17甲醇-緩沖溶液80:208.76.3分離較好乙腈-緩沖溶液82:185. 204. 08分離較好實驗結(jié)果表明pH對3，4_ 二氯苯丙烯酸的分離影響較大，其在酸性條件下較穩(wěn)定，用醋酸鹽緩沖溶液pH4.2±0. I代替水。兩個系統(tǒng)分離效果都不錯，醋酸鹽緩沖溶液 pH4.2±0. I-甲醇20 80系統(tǒng)，主峰尖銳對稱，保留時間適中，從分離效果和節(jié)省費用考慮，故選用醋酸鹽緩沖溶液(PH4. 2±0. I)-甲醇(20 : 80，體積比)作為流動相。醋酸鹽緩沖溶液配制法稱取醋酸銨I. 4g，加超純水950ml，攪拌使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調(diào)節(jié)ρΗ4. 2±0· 1，補水至IOOOml即得。(2)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗取氯桂丁胺、中間體3，4- 二氯苯丙烯酸適量，精密稱定，分別加甲醇溶解并稀釋成約100ug/ml的溶液,在上述色譜條件下,取20ul注入液相色譜儀,記錄色譜圖。理論板數(shù)以氯桂丁胺峰計為4456。氯桂丁胺及制備工藝可能引入的雜質(zhì)(雜質(zhì)一、二、三、四)及總殘渣，同上述操作，考察色譜條件及分離效果，均能得到較滿意的結(jié)果。保留時間分別為氯桂丁胺8. I分鐘，雜質(zhì)一 4. 9分鐘，雜質(zhì)二 11.6分鐘。破壞性試驗酸破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml)3ml，加稀鹽酸2ml，置沸水浴中加熱2小時，用10%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH近中性，過濾。堿破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml) 3ml，加10%氫氧化鈉2ml，置沸水浴中加熱2小時，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH近中性，過濾。雙氧水破壞取氯桂丁胺供試液(100ug/ml) 3ml，加雙氧水1ml，放置I小時，過濾。強光照射強光4500Ix±500Ix照射20天的樣品，加甲醇制成100ug/ml的供試液。
7
分別取上述已破壞的樣品20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。酸堿破壞的樣品在
8.3分鐘、5. I分鐘的峰，分別于氯桂丁胺、3，4-二氯苯丙烯酸的保留時間相吻合(由于更換了色譜柱，保留時間稍有變化)，可以認(rèn)為本品經(jīng)酸、堿破壞后的分解產(chǎn)物即是中間體3， 4-二氯苯丙烯酸。強光照射的樣品，色譜峰變化不大。雙氧水破壞的樣品在2. 7分鐘有一個大峰，其它峰沒有明顯變化，說明對酰胺鍵沒有影響，主要是側(cè)鏈C = C雙鍵被氧化。試驗證明本品的各雜質(zhì)峰在主峰保留時間的二倍以內(nèi)，均能分離完全，且不干擾主峰測定。測得的分離度，理論板數(shù)也符合要求，所設(shè)色譜條件可行。檢測限取雜質(zhì)一 8. Ong/ml的供試液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得檢測限為 O. 16ng0取雜質(zhì)二 7. 7ng/ml的供試液20ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測得檢測限為
O.15ng。校正因子測定取氯桂丁胺對照品與雜質(zhì)一、雜質(zhì)二適量，精密稱定，分別加入甲醇溶解并稀釋制成約各含O. 5ug/ml的混合溶液，搖勻，取20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算校正因子。結(jié)果見表2。表2校正因子
權(quán)利要求
1.一種氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，其特征在于包括氯桂丁胺的含量和有關(guān)物質(zhì)的測定。
2.權(quán)利要求I所述質(zhì)量控制方法，其特征在于氯桂丁胺含量的測定方法是供試品溶液的制備取樣品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀釋至刻度，搖勻，該樣品每Iml含供試品IOOug,備用；對照品溶液的制備取對照品約2. 5mg，精密稱定，置25ml量瓶，加甲醇溶液并稀釋至刻度，搖勻，該樣品每Iml含對照品IOOug,備用；其中對照品制備取氯桂丁胺一次精制品350克，去離子水2500ml，濃氨水40ml，加熱攪拌至氯桂丁胺為熔融狀態(tài)，回流10分鐘，靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水。 加入去離子水1000ml，加熱攪拌回流10分鐘，靜置分層，降溫，氯桂丁胺固化。傾出上層水 (以上操作的目的是去除少量存在的中間體3，4 二氯苯基丙烯酸)，加入80%乙醇600ml， 活性炭20克，加熱攪拌回流20分鐘，熱濾，濾液于10 15°C放置5 6小時自然結(jié)晶，過濾，用75%乙醇150ml洗滌結(jié)晶，濾干，紅外干燥至恒重。得氯桂丁胺二次精制品；氯桂丁胺二次精制品260克，80%乙醇440ml，加熱至回流，熱濾。濾液于10 15°C放置5 6小時自然結(jié)晶，過濾，結(jié)晶用75%乙醇IOOml洗滌，濾干，紅外干燥至恒重，得氯桂丁胺對照品。系統(tǒng)適用性用十八烷基硅烷鍵合硅膠做為填充劑，以醋酸鹽緩沖溶液-甲醇(20 : 80，體積比) 為流動相；流速為每分鐘Iml ;檢測波長為276nm，理論板數(shù)按氯桂丁胺峰計算應(yīng)不低于 2000 ；其中醋酸鹽緩沖溶液的制備醋酸I. 4g，加水980ml使溶解，加冰醋酸約2. 6ml，調(diào)節(jié) ρΗ4· 2±0· 1，補水至 1000ml，搖勻。含量測定取供試品溶液20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氯桂丁胺對照品溶液20ul，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。
3.權(quán)利要求I所述質(zhì)量控制方法，其特征在于氯桂丁胺有關(guān)物質(zhì)含量的測定方法是 對照品溶液稀釋為每Iml含氯桂丁胺O. 5ug ；照含量項下的方法試驗，取對照液20ul，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的20%，再取供試溶液和稀釋后的對照溶液各20ul，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試溶液色譜圖中顯示的雜質(zhì)峰，除溶劑峰外，各雜質(zhì)峰面積的總和不得大于對照液主峰的面積(O. 5% )。
4.權(quán)利要求I所述質(zhì)量控制方法，其特征在于還包括殘留溶劑吡啶的測定。
5.權(quán)利要求4所述質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中殘留溶劑吡啶的測定方法是 色譜條件與系統(tǒng)適用性以直徑為O. 25 O. 18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作為固定相，柱長I. 6m,內(nèi)徑3. 2mm,柱溫170°C，進樣器溫度200°C，氫火焰離子化檢測溫度為200°C，內(nèi)標(biāo)物苯與吡啶的分離度不小于I. 5，理論板數(shù)按吡啶峰計算應(yīng)不低于 1000 ；內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密量取苯適量，加二甲亞砜-水(3 7)混合溶劑溶解并稀釋成每 Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為內(nèi)標(biāo)溶液；標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密量取吡啶適量，加同一混合溶劑并稀釋成每Iml含IOug的溶液，搖勻，密閉保存，作為標(biāo)準(zhǔn)溶液；供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加同一混合溶劑溶解并稀釋成每Iml含50mg 的溶液，作為供試品溶液；測定方法精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各1ml，分置于頂空進樣瓶中，并分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液Iml、同一混合溶劑Iml，混合，在60°C恒溫水浴中加熱30分鐘，用頂空進樣法進樣，同時進行空白試驗，供試品溶液所得的峰面積比不得大于由標(biāo)準(zhǔn)溶液所得峰面積比 (O. 02% )。
6.權(quán)利要求I所述質(zhì)量控制方法，其特征在于還包括鑒別。
7.權(quán)利要求6所述質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是取本品50克，置IOml試管，加lmol/L鹽酸羥胺的1，2_丙二醇溶液4ml，煮沸5分鐘， 使溶液呈黃色，放置至室溫，加5%三氯化鐵溶液5 6滴，輕搖，放置片刻，顯紫紅色，加I， 2-丙二醇2ml，靜置，兩液界面的紫紅色更加明顯可辨。
8.權(quán)利要求6所述質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是在含量項下記錄的色譜圖中供試品主峰的保留時間與對照品主峰的保留時間一致。
9.權(quán)利要求6所述質(zhì)量控制方法，其特征在于所述鑒別方法是本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照品的圖譜一致。
全文摘要
本發(fā)明涉及氯桂丁胺的質(zhì)量控制方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過一定的化學(xué)處理和條件探索，通過高效液相法對氯桂丁胺的有關(guān)物質(zhì)、含量和殘留溶劑進行了分析，提供了一種氯桂丁胺質(zhì)量控制方法，該方法能夠快速、準(zhǔn)確的檢測出氯桂丁胺的含量。
文檔編號G01N30/02GK102590391SQ201210062100
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月2日
發(fā)明者于忠文, 林春, 高然 申請人:威海迪素制藥有限公司, 迪沙藥業(yè)集團山東迪沙藥業(yè)有限公司, 迪沙藥業(yè)集團有限公司