專利名稱：辣椒藥材及其提取物的指紋圖譜測定方法
技術領域：
本發(fā)明涉及辣椒藥材和辣椒提取物指紋圖譜的測定方法，更具體的說，是涉及用高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜方法來測定辣椒藥材及辣椒提取物的化學成分的方法。
背景技術：
中藥指紋圖譜是指某種中藥材(提取物、中成藥)中所共有的、具有特征性的成分共同組成的光譜或色譜圖譜。指紋圖譜技術可以用在鑒別中藥的真?zhèn)?、生產質量監(jiān)控、藥材
到成品某些成分的變化、同種產品之間的質量差異等多個方面，是綜合的，可量化的鑒定手段。它是建立在中藥化學成分系統(tǒng)研究的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復雜體系，因此評價其質量應采用與之相適應的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數量，進而對藥品質量進行整體描述和評價。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜的研究和建立，對于有效控制中藥材或中成藥的質量具有重要意義。辣椒藥材用途廣泛，既具有藥用價值，還是日常生活的佳肴。辣椒具有通經活絡、活血化瘀、驅風散寒、開胃健胃、補肝明目、溫中下氣、抑菌止氧和防腐驅蟲等功效。所以常將它稱為“紅色藥材”，用來預防和治療某些多發(fā)病和常見病。如傷風感冒、脾胃受寒、消化不良、關節(jié)疼痛、腳手凍傷等。辣椒的營養(yǎng)價值很高，堪稱“蔬菜之冠”，含有維持人體正常生理機能和增強人體抵抗性及活力的多種化學物質。辣椒藥材在我國廣泛種植，由于種源、產地、采收期不同而造成質量參差不齊，辣椒藥材的質量控制中有顯微和薄層鑒別，含量測定這兩項；辣椒提取物的質量標準也較簡単。由于辣椒種源較復雜，各種源間存在較大的區(qū)別，單是鑒別和含量測定不能全面控制藥材的質量，保證入藥藥材的穩(wěn)定；單ー測定辣椒素的含量不能有效控制辣椒提取物的質量，也不能全面反映生產エ藝的穩(wěn)定性。為了從源頭上保證入藥中藥量和半成品辣椒提取物的質量，同時監(jiān)控生產エ藝的穩(wěn)定性，使其質量控制技術更加完善、科學并對其今后的標準化提供一種可以利用的質量控制模式，現對辣椒藥材及辣椒提取物指紋圖譜進行研究。對15份辣椒藥材和連續(xù)十五批的辣椒提取物進行了考察比較，建立了辣椒藥材與辣椒提取物的指紋圖譜HPLC方法，并最終確定辣椒藥材與辣椒提取物標準圖譜，為產品質量得到更好的控制奠定基礎。

發(fā)明內容
本發(fā)明的ー個目的是提供一種辣椒藥材指紋圖譜的測定方法，保證藥材質量在一定范圍內穩(wěn)定可控。本發(fā)明的另ー個目的是提供辣椒提取物的指紋圖譜的測定方法。本發(fā)明的目的是通過下述技術方案來實現的一種辣椒藥材指紋圖譜的測定方法，該方法包括以下步驟
(a)辣椒藥材的制備取辣椒藥材粉末適量，精密稱定，加甲醇提取，定容，濾過，濾液作為供試品溶液。(b)辣椒藥材溶液的測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，以高效液相色譜法采用梯度洗脫進行測定，得到辣椒藥材的指紋圖譜；其中，高效液相色譜的色譜條件為色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相A為磷酸水溶液，流動相B為こ腈、甲醇，流動相中流動相A與流動相B的體積比隨時間增加逐漸變化；檢測波長為210-280nm。上述高效液相色譜法的檢測波長優(yōu)選210nm;色譜柱柱溫為30_50°C，優(yōu)選為350C ;流動相A優(yōu)選為O. 01%磷酸水溶液；流動相B優(yōu)選為こ腈。
上述高效液相色譜梯度洗脫的程序如下，其中下述比例均為體積比0-45min 時，流動相 A :流動相 B = 95 5-50 5045-63min 時，流動相 A :流動相 B = 50 50-50 50優(yōu)選下屬的梯度洗脫的程序Omin時,流動相A :流動相B = 95 : 545min時，流動相A :流動相B = 50 : 5063min時，流動相A :流動相B = 50 : 50ー種辣椒提取物指紋圖譜的測定方法，該方法包括以下步驟(a)辣椒提取物溶液的制備取辣椒提取物適量，精密稱定，加入甲醇、こ醇或與水混合一定比例的甲醇、こ醇中的至少ー種溶劑提取定容，過濾，濾液作為供試品溶液。(b)辣椒提取物溶液的測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，以高效液相色譜法采用梯度洗脫進行測定，得到辣椒提取物的指紋圖譜；其中，高效液相色譜的色譜條件為色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相A為磷酸的水溶液，流動相B為こ臆、甲醇，流動相中流動相A與流動相B的體積比隨時間增加逐漸變化；檢測波長為210-280nm。上述高效液相色譜的檢測波長優(yōu)選2IOnm ;色譜柱柱溫為30_50°C，優(yōu)選為35°C ；流動相A優(yōu)選為O. 01%且磷酸水溶液；流動相B優(yōu)選為こ臆。上述高效液相色譜梯度洗脫的程序如下，其中下述比例均為體積比0-45min 時，流動相 A :流動相 B = 95 5-50 5045-63min 時，流動相 A :流動相 B = 50 50-50 50優(yōu)選下屬的梯度洗脫的程序Omin時，流動相A :流動相B = 95 : 545min時，流動相A :流動相B = 50 : 5063min時，流動相A :流動相B = 50 : 50本發(fā)明提供了一種辣椒藥材和辣椒提取物的指紋圖譜測定方法。本發(fā)明是在大量實驗基礎上所得到得切實可行的辦法，具有可重復性。在本發(fā)明中，通過高效液相色譜法，在相同的測試條件下所獲取的辣椒藥材的高效液相指紋圖譜及辣椒提取物的高效液相指紋圖譜基本相同，說明重復性好。因此可通過將上述測定方法建立的辣椒藥材指紋圖譜作為辣椒的標準指紋圖譜、辣椒提取物的指紋圖譜作為提取物的標準指紋圖譜，上述測定方法可以作為辣椒和辣椒提取物的質量控制標準，該方法能夠客觀的反應產品內在成分的變化，可以全面控制產品的質量。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(I)辣椒藥材和辣椒提取物標準指紋圖譜能有效的表征其質量，從而實現對辣椒藥材和辣椒提取物各化學成分進行相似度評價，可以從整體上、宏觀上控制辣椒藥材和辣椒提取物的質量。(2)與現有方法相比，本發(fā)明為全面、準確評價辣椒藥材和辣椒提取物的質量提供了新的對照標準。將辣椒藥材和辣椒提取物中各成分指紋圖譜作為ー個整體看待，注重各個構成指紋特征峰的前后順序和互相關系，注重整體面貌特征。本發(fā)明為完整、準確評價辣椒藥材和辣椒提取物的質量提供了新的對照標準，將為提高辣椒藥材的質量和辣椒提取物的生產エ藝控制提供參考依據。(3)本發(fā)明可以增強辣椒藥材真?zhèn)蔚谋孀R力，并從所含化學成分整體具有共性特征的角度更全面的評價藥材質量；辣椒提取物指紋圖譜的發(fā)明可用于生產エ藝穩(wěn)定性和產品穩(wěn)定性的考察，有利于對提取物的質量進行全方面監(jiān)控。(4)本發(fā)明方法具有簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現性好、易于掌握的特點。


圖I :辣椒10批藥材HPLC圖譜比較圖2 :辣椒藥材標準圖譜圖3:辣椒藥材與標準圖譜相似度評價圖4 :10批辣椒提取物HPLC圖譜比較圖5 :辣椒提取物標準圖譜圖6 :10批辣椒提取物與標準圖譜相似度評價
具體實施例方式下面將例舉具體的實施例對本發(fā)明進行詳細的說明，下述實施例僅用于說明本發(fā)明，對本發(fā)明不構成限制。實施例I.儀器與試劑儀器采用島津2010液相色譜儀，包括四元泵，在線脫氣裝置，自動進樣器，LC-solution工作站；こ腈為色譜純，磷酸、甲醇為分析純，純凈水；10批辣椒藥材；10批辣椒提取物。2.色譜條件Agilent C18 色譜柱(250mm*4. 6mm*5um);柱溫 35°C ;流速 lml/min ;流動相 A 為O. 01%磷酸水(O. ImL加入到IOOOmL水中);流動相B為こ腈，波長210nm，梯度洗脫，洗脫程序為Omin時，流動相A :流動相B = 95 : 545min時，流動相A :流動相B = 50 : 5063min時，流動相A :流動相B = 50 : 50
3.標準指紋圖譜的建立
3. I供試品溶液的制備3. I. I辣椒藥材溶液的制備；分別取10個批次辣椒藥材粉末約O. 5g，置于50mL的具塞三角瓶中，加甲醇25ml，超聲30min，放冷，補重，濾過，續(xù)濾液過O. 2 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。3. I. 2辣椒提取物溶液的制備分別取辣椒提取物10個批次約O. 25g，置于50mL的具塞三角瓶中，加甲醇25ml，超聲30min，放冷，補重，濾過，續(xù)濾液過O. 2 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。3. 2測定法分別吸取上述供試液IOul注入液相色譜儀測定，記錄63min的色譜/圖。構建標準指紋圖譜按上述方法，對10個批次辣椒藥材、10個批次辣椒提取物分別進行測定，分別找出其共有特征峰，經軟件-CHR0MAP1. 20指紋圖譜軟件擬合，建立各自的HPLC標準色譜指紋圖譜。具體為3. 2. I圖2為辣椒藥材標準指紋圖譜，所示，3. 2. 2圖5為辣椒提取物標準指紋圖譜，所示，3. 3方法學考察3. 3. I精密度考察分別以同一批辣椒藥材供試液，連續(xù)進樣6次，考察儀器的精密度。以標準圖譜中9號、10號峰保留時間(約48 54min之間)和峰面積計算，保留時間RSD(% )值分別為O. 16%,O. 20% ;峰面積RSD(% )值分別為O. 19%、O. 33%。結果表明精密度良好。3. 3. 2穩(wěn)定性考察分別以同一批辣椒藥材供試液，在O小時，2小時，4小時，6小時、8小時，10小時、
12小吋，24小時進樣，考察樣品穩(wěn)定性。考察指標同精密度，保留時間RSD(% )值分別為O. 15%和O. 19% ;峰面積RSD(%)值為O. 49%、0. 58%。結果表明供試液在24小時內穩(wěn)定。3. 3. 3重復性考察取同一批辣椒藥材6份，按照樣品制備方法“3. I. 2”項下方法進行制備，測定，以標準圖譜9號、10號峰保留時間(約約48 54min之間)和峰面積計算，保留時間RSD(% )值均為O. 02% ;峰面積RSD(%)值為I. 27%、I. 26%。結果表明此方法重復性良好。4.測定辣椒藥材和辣椒提取物4. I按照所述檢測方法和條件分別測定5批辣椒藥材(除已經采用的10批以外)，采集63min色譜圖，即為這5批待測藥材指紋圖譜。4. 2按照所述檢測方法和條件分別測定5批辣椒提取物(除已經采用的10批以外)，采集63min色譜圖，即為這5批待測提取物指紋圖譜。5.測定結果5. I將5批辣椒藥材與3.2. I中建立的該藥材標準指紋圖譜比較，采用軟件《CHR0MAP1. 20指紋圖譜軟件》計算整體相似度，結果相似度分別為O. 9686,0. 9769、O. 9786,0. 9921,0. 9907。5批半成品與標準指紋圖譜的相似度大于O. 90，可以進入下ー步エ序。5. 2將5批辣椒提取物與3. 2. 2中建立的該提取物標準指紋圖譜比較，采用軟件《CHR0MAP1. 20指紋圖譜軟件》計算整體相似度，結果相似度分別為O. 9985,0. 9992、O. 9995,0. 9994,0. 9921。5批半成品與標準指紋圖譜的相似度大于O. 90，可以作為合格品
進入'~■步工序。
權利要求
1.一種辣椒藥材的指紋圖譜測定方法，其特征在于該方法包括如下步驟 (a)供試品溶液制備取辣椒藥材粉末適量，精密穩(wěn)定，置于具塞三角瓶中，加甲醇超聲，放冷，補重，濾過，取續(xù)濾液即得。
(b)供試品溶液的測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，以高效液相色譜法采用梯度洗脫進行測定，得到辣椒藥材的指紋圖譜； 其中，高效液相色譜的色譜 條件為色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相A為磷酸水溶液；檢測波長為210nm ;柱溫35°C ;流動相B為こ腈；其中流動相中流動相A與流動相B的體積比隨時間變化而變化。
2.ー種辣椒提取物的指紋圖譜測定方法，其特征在于該方法包括如下步驟 a)供試品溶液制備取辣椒提取物適量，精密穩(wěn)定，置于具塞三角瓶中，加甲醇超聲，放冷，補重，濾過，取續(xù)濾液即得。
(b)供試品溶液的測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，以高效液相色譜法采用梯度洗脫進行測定，得到辣椒提取物的指紋圖譜； 其中，高效液相色譜的色譜條件為色譜柱的填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相A為磷酸水溶液；檢測波長為210nm ;柱溫35°C ;流動相B為こ腈；其中流動相中流動相A與流動相B的體積比隨時間變化而變化。
3.根據權利要求I至2任一項所述的方法，其特征在于，所述流動相A中磷酸為O. 01%。
4.根據權利要求I至2任一項所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的程序如下，其中下述比例均為體積比 Omin時,流動相A 流動相B = 95 5 45min時,流動相A :流動相B = 50 : 50 63min時，流動相A :流動相B = 50 : 50。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種監(jiān)控辣椒藥材及其提取物質量的方法，它公開構建了辣椒藥材及其提取物指紋圖譜建立的方法及其標準HPLC指紋圖譜。本發(fā)明所述的辣椒藥材及其提取物質量控制方法由以下步驟組成1.制備辣椒藥材及其提取物供試品溶液；2.用HPLC色譜法制定辣椒藥材標準指紋圖譜；3.用HPLC色譜法對辣椒提取物指紋圖譜進行測定，并與其標準指紋圖譜進行比較，整體相似度符合要求的批次進入下一道工序。(見附圖)本發(fā)明的優(yōu)點是方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現性好，能從色譜整體特征面貌上把握辣椒藥材及其提取物的質量情況，可作為辣椒藥材及其提取物質量控制指標。
文檔編號G01N30/02GK102654486SQ20121007635
公開日2012年9月5日 申請日期2012年3月22日 優(yōu)先權日2012年3月22日
發(fā)明者姜家書, 張春霞, 李敦明, 武惠斌, 熊維政, 聶紅梅, 謝其亮 申請人:河南羚銳制藥股份有限公司