專利名稱：芪白平肺膠囊定性定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥膠囊的定性定量檢測方法，具體是針對中國專利(一種治療慢阻肺疾病痰瘀阻肺證的中藥膠囊及其制備方法，CN102038841B)進(jìn)行定性定量檢測。
背景技術(shù)：
芪白平膠囊(一種治療慢阻肺疾病痰瘀阻肺證的中藥膠囊及其制備方法， CN102038841B)，用于治療慢阻肺疾病痰瘀阻肺證的中藥膠囊，該發(fā)明專利公開了其中藥原料按以下重量配比組成生曬參3、黃芪10、川芎6、薤白6、五味子6、葶藶子6、地龍6。芪白平膠囊的制備方法為①將生曬參打粉，過100目篩，生曬參粗粉、細(xì)粉分放。 ②將川芎、薤白、五味子、葶藶子四味中藥加水蒸餾，提取揮發(fā)油，并用環(huán)糊精包合，揮發(fā)油提取后的濾液暫放。③將四味中藥藥渣和生曬參粗粉、黃芪、地龍藥材加水煎煮2 3 次，每次2 3小時，合并煎液和揮發(fā)油提取后的濾液，醇沉，濾過，回收乙醇，濃縮成浸膏并干燥。④干燥浸膏加入生曬參細(xì)粉、藥用輔料(淀粉和/或糊精)，噴霧干燥制粒，顆粒與揮發(fā)油包合物混合均勻，裝入膠囊。為了更好地控制芪白平肺膠囊的質(zhì)量，本專利對黃芪、生曬參、川芎、五味子、薤白進(jìn)行了薄層色譜(TLC)定性鑒別方法的研究，同時，采用UPLC對組方中君藥黃芪的含量的測定方法進(jìn)行了研究。黃芪為本處方中的君藥，黃芪的化學(xué)成分有皂苷類、多糖等，在測定黃芪含量時候，常常以皂苷成分黃芪甲苷作為黃芪的定量指標(biāo)。測定黃芪甲苷的常用方法有HPLC-UV、 HPLC-ELSD、薄層掃描法、薄層比色法等。HPLC-UV法由于末端吸收溶劑，干擾較大。薄層掃描法及薄層比色法，影響因素較多、重復(fù)性差。蒸發(fā)光散射檢測器能很好地消除溶劑的背景干擾，而且基線較平穩(wěn)，對于測定紫外末端有吸收的物質(zhì)尤其適宜。HPLC-ELSD法分離度、重復(fù)性、回收率都較理想，但出峰時間較長，一般需20min左右，分析效率低，浪費氮氣等。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種定性鑒別專屬性好、簡單、易于識別的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，包括采用TLC建立黃芪、生曬參、 川芎、五味子、薤白定性鑒別方法，以及采用UPLC建立黃芪甲苷的定量測定方法。生曬參的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，用水濕潤后，加水飽和正丁醇10mL，超聲處理30min，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取人參對照藥材lg，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除生曬參以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含生曬參的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水=15 40 22 10并在10°C以下放置的下層溶液為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。黃芪的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加甲醇IOOmL,加熱回流提取液接近無色，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次 20mL,合并正丁醇液，用氨水調(diào)pH至8 9的水提取2次，每次20mL，棄去水液，正丁醇液濃縮至干，加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取黃芪對照藥材2g，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除黃芪以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含黃芪的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。川芎的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加水20mL，使溶解，加1 % 的Na2CO3溶液50mL，超聲處理30min，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL， 合并乙醚液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯ImL使溶解；對照品溶液取阿魏酸對照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；陰性對照品溶液取除川芎以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含川芎的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。五味子的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷ImL使溶解；對照品溶液取五味子對照藥材lg，加80%的乙醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加80 %的乙醇ImL使溶解；陰性對照品溶液取除五味子以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含五味子的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各15 μ L、對照品溶液2 μ L，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 7 1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。薤白的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉10g，加正己烷20mL，超聲處理 20min,濾過，濾液揮干，殘渣加正己烷ImL使溶解；
對照品溶液取薤白對照藥材4g，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除薤白以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含薤白的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，在365nm紫外燈下檢視。黃芪甲苷的定量測定方法為①、色譜條件色譜柱WatersAcquity UPLC BEH C18 色譜柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；檢測器AcquityELSD ；流動相乙睛水=；35 65 ；流速0. 3mL/min ；柱溫30°C；漂流管溫度60°C;②、對照品溶液精密稱量黃芪甲苷對照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL對照品溶液；③、供試品溶液精密稱定芪白平肺膠囊內(nèi)容物1. 92g，加甲醇SOmL超聲處理30min，濾液蒸干，殘渣用水轉(zhuǎn)入分液漏斗中，乙醚脫脂后正丁醇萃取4次，分別使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇，萃取液分別用20mL氨試液洗滌2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；④、線性范圍考察分別精密吸取對照品溶液lmL、anL、;3mL、％iL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL, 0. 371mg/mL、0. 477mg/mL 的對照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分別注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積， 以峰面積值的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程，線性范圍考察；⑤、精密度試驗精密吸?、趯φ掌啡芤? μ L注入超高液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積， 重復(fù)6次；⑥、穩(wěn)定性試驗精密吸?、酃┰嚻啡芤? μ L分別于0h，2h，4h，8h，12h進(jìn)樣，按照①色譜條件測定峰面積，計算峰面積的RSD值；⑦、重現(xiàn)性試驗精密稱取供試品6份，按照③方法制得供試品溶液，按照①色譜條件測定峰面積， 計算黃芪甲苷含量；⑧、加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對照品，再按照③方法制得6份待測液，精密吸取6份待測液，注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積；⑨、三批樣品含量測定精密稱取三批樣品，按③方法處理制得待測液，按①色譜條件測定，計算黃芪甲苷平均含量。本發(fā)明芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，采用UPLC-ELSD法對黃芪甲苷的含量進(jìn)行測定，以達(dá)到控制本品質(zhì)量的目的，經(jīng)過方法學(xué)驗證，方法穩(wěn)定、可行。同時出峰時間在 3min左右，節(jié)省時間，分析效率高，而且靈敏度高，進(jìn)樣量少，減少溶劑損耗及廢液處置費用。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。一、儀器與試藥A、儀器ACQUITY UPLC(美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、ELSD檢測器、Empower2色譜工作站)；BP211D電子天平(德國Sartorius公司)；Kudos超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；薄層硅膠G板(青島海洋化工有限公司制造)。B、試藥黃芪甲苷(批號:110781-200613)、黃芪對照藥材(批號120974-200407 )、生曬參對照藥材(批號120917-200613)、川芎對照藥材(批號120918-200406)、薤白對照藥材(批號121130-200402)，均由中國藥品生物制品檢定所提供；芪白平肺膠囊由安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑中心提供，批號20111002、 20111005,20111008 ；乙腈(批號AS1122_011，美國Fisher)，甲醇為色譜純，水為屈臣氏蒸餾水、其余試劑為分析純。二、黃芪、生曬參、川芎、五味子、薤白TLC定性鑒別方法①、生曬參的定性鑒別方法供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，用水濕潤后，加水飽和正丁醇10mL，超聲處理30min，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取人參對照藥材lg，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除生曬參以外的處方量(背景技術(shù)中已表述，下同)藥材，按制備工藝(背景技術(shù)中已表述，下同)制成不含生曬參的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法按照2010年版《中國藥典》薄層色譜法(附錄VIB)試驗(下同)， 吸取三種溶液各5yL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水 =15 40 22 10并在10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。
供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾。②、黃芪的定性鑒別方法供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加甲醇IOOmL,加熱回流提取液接近無色，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次 20mL,合并正丁醇液，用氨水調(diào)pH至8 9的水提取2次，每次20mL，棄去水液，正丁醇液濃縮至干，加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取黃芪對照藥材2g，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除黃芪以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含黃芪的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色熒光斑點，且陰性無干擾。③、川芎的定性鑒別方法供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加水20mL，使溶解，加1 % 的Na2CO3溶液50mL，超聲處理30min，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL， 合并乙醚液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯ImL使溶解；對照品溶液取阿魏酸對照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；陰性對照品溶液取除川芎以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含川芎的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾。④、五味子的定性鑒別方法供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷ImL使溶解；對照品溶液取五味子對照藥材lg，加80%的乙醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加80 %的乙醇ImL使溶解；陰性對照品溶液取除五味子以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含五味子的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各15 μ L、對照品溶液2 μ L，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 7 1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾。
⑤、薤白的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉10g，加正己烷20mL，超聲處理 20min,濾過，濾液揮干，殘渣加正己烷ImL使溶解；對照品溶液取薤白對照藥材4g，按供試品溶液制備方法制成；陰性對照品溶液取除薤白以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含薤白的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，在365nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾。三、黃芪甲苷的定量測定方法①、色譜條件色譜柱WatersAcquity UPLC BEH C18 色譜柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；檢測器AcquityELSD ；流動相乙睛水=35 65 ；、流速0. 3mL/min ；柱溫30°C；漂流管溫度60°C ；②、對照品溶液精密稱量黃芪甲苷對照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL對照品溶液；③、供試品溶液精密稱定芪白平肺膠囊(批號20111002)內(nèi)容物1. 92g(相當(dāng)于原生藥材IOg)，加甲醇SOmL超聲處理O50W、50kHZ)30min，濾液蒸干，殘渣用水轉(zhuǎn)入分液漏斗中，乙醚脫脂后正丁醇萃取4次，分別使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇，萃取液分別用20mL氨試液洗滌 2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；④、線性范圍考察分別精密吸取對照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL, 0. 371mg/mL、0. 477mg/mL 的對照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分別注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積， 以峰面積值的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)(Y)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程，線性范圍考察。數(shù)據(jù)表明回歸方程Y= 1. 7728X+15. 797, r = 0. 9995，黃芪甲苷在0. 106 μ g 0. 954 μ g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。⑤、精密度試驗精密吸?、趯φ掌啡芤? μ L注入超高液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積，
重復(fù)6次。計算得平均峰面積1533018，RSD = 1.2% (n = 6)，表明儀器精密度良好。
⑥、穩(wěn)定性試驗精密吸取③供試品溶液2 μ L分別于0h，2h，4h，8h，12h進(jìn)樣，按照①色譜條件測定峰面積，計算峰面積的RSD值。結(jié)果為RSD = 1. 1%，結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。⑦、重現(xiàn)性試驗精密稱取供試品(批號20111002)6份，按照③方法制得供試品溶液，按照①色譜條件測定峰面積，計算黃芪甲苷含量。結(jié)果表明，黃芪甲苷含量的RSD值為1.4%，說明方法的重現(xiàn)性良好。⑧、加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對照品，再按照③方法制得6份待測液，精密吸取6份待測液，注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積，結(jié)構(gòu)見表1。表1黃芪甲苷回收率試驗結(jié)果
序號取樣量 /g樣品中含量/mg對照品加入量/mg實測量 /mg回收率 /%平均回收率 /%RSD11. 99580. 42710. 340. 755198.4321.98790.42540. 330. 748597. 7931. 93240.41350. 420. 825399. 020. 80%41. 98610. 42500.410. 832998. 5798. 0751. 95430. 41820. 510. 906297. 6361. 99870. 42770. 490. 909396. 97⑨、三批樣品含量測定精密稱取三批樣品(批號20111002、20111005、20111008)，按③方法處理制得待
測液，按①色譜條件測定，計算黃芪甲苷平均含量，測定結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，包括采用TLC建立黃芪、生曬參、川芎、五味子、薤白定性鑒別方法，以及采用UPLC建立黃芪甲苷的定量測定方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，生曬參的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，用水濕潤后，加水飽和正丁醇 IOmL,超聲處理30min，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取人參對照藥材lg，按供試品溶液制備方法制成； 陰性對照品溶液取除生曬參以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含生曬參的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水=15 40 22 10并在10°C以下放置的下層溶液為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，黃芪的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加甲醇lOOmL，加熱回流提取液接近無色，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20mL， 合并正丁醇液，用氨水調(diào)pH至8 9的水提取2次，每次20mL，棄去水液，正丁醇液濃縮至干，加甲醇ImL使溶解；對照品溶液取黃芪對照藥材2g，按供試品溶液制備方法制成； 陰性對照品溶液取除黃芪以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含黃芪的陰性樣品， 再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各5 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇水=13 6 2的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在 105°C下加熱至斑點清晰，置365nm紫外光燈下檢視。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，川芎的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加水20mL，使溶解，加1 %的 Na2CO3溶液50mL，超聲處理30min，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至2_3，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯ImL使溶解；對照品溶液取阿魏酸對照品，加乙酸乙酯制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；陰性對照品溶液取除川芎以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含川芎的陰性樣品， 再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=3 1為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，五味子的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉5g，加三氯甲烷IOOmL,加熱回流 30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷ImL使溶解；對照品溶液取五味子對照藥材lg，加80 %的乙醇30mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加80%的乙醇ImL使溶解；陰性對照品溶液取除五味子以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含五味子的陰性樣品，再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各15 μ L、對照品溶液2 μ L，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚甲酸乙酯甲酸=15 \7 1的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置254nm紫外光燈下檢視。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，薤白的定性鑒別方法為供試品溶液取芪白平肺膠囊，倒出內(nèi)容物，取細(xì)粉10g，加正己烷20mL，超聲處理 20min,濾過，濾液揮干，殘渣加正己烷ImL使溶解；對照品溶液取薤白對照藥材4g，按供試品溶液制備方法制成； 陰性對照品溶液取除薤白以外的處方量藥材，按制備工藝制成不含薤白的陰性樣品， 再按照供試品溶液制備方法制成；定性鑒別方法吸取三種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷乙酸乙酯=10 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點清晰，在365nm紫外燈下檢視。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，其特征在于，黃芪甲苷的定量測定方法為①、色譜條件色譜柱Waters Acquity UPLC BEH C18 色譜柱(2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m)；檢測器Acquity_ELSD ；流動相乙睛水=35 65 ；流速:0. 3mL/min ；柱溫:30°C ；漂流管溫度60°C ；②、對照品溶液精密稱量黃芪甲苷對照品，加入甲醇溶解制成0. 53mg/mL對照品溶液；③、供試品溶液精密稱定芪白平肺膠囊內(nèi)容物1.92g，加甲醇SOmL超聲處理30min，濾液蒸干，殘渣用水轉(zhuǎn)入分液漏斗中，乙醚脫脂后正丁醇萃取4次，分別使用40mL、30mL、30mL、20mL正丁醇， 萃取液分別用20mL氨試液洗滌2次，正丁醇液蒸干，用甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度，搖勻；④、線性范圍考察分別精密吸取對照品溶液lmL、2mL、3mL、4mL、5mL、7mL、9mL至IOmL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成 0. 053mg/mL、0. 106mg/mL、0. 159mg/mL、0. 212mg/mL、0. 265mg/mL、0. 371mg/ mL、0. 477mg/mL的對照品溶液；精密吸取各溶液2mL，分別注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積，以峰面積值的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算回歸方程，線性范圍考察；⑤、精密度試驗精密吸?、趯φ掌啡芤? μ L注入超高液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積，重復(fù) 6次；⑥、穩(wěn)定性試驗精密吸?、酃┰嚻啡芤? μ L分別于0h，2h, 4h，8h，12h進(jìn)樣，按照①色譜條件測定峰面積，計算峰面積的RSD值；⑦、重現(xiàn)性試驗精密稱取供試品6份，按照③方法制得供試品溶液，按照①色譜條件測定峰面積，計算黃芪甲苷含量；⑧、加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的對照品，再按照③方法制得6份待測液，精密吸取6份待測液，注入超高效液相色譜儀，按照①色譜條件測定峰面積；⑨、三批樣品含量測定精密稱取三批樣品，按③方法處理制得待測液，按①色譜條件測定，計算黃芪甲苷平均含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥膠囊的定性定量檢測方法。包括采用TLC建立黃芪、生曬參、川芎、五味子、薤白定性鑒別方法，以及采用UPLC建立黃芪甲苷的定量測定方法。本發(fā)明芪白平肺膠囊定性定量檢測方法，采用UPLC-ELSD法對黃芪甲苷的含量進(jìn)行測定，以達(dá)到控制本品質(zhì)量的目的，經(jīng)過方法學(xué)驗證，方法穩(wěn)定、可行。同時出峰時間在3min左右，節(jié)省時間，分析效率高，而且靈敏度高，進(jìn)樣量少，減少溶劑損耗及廢液處置費用。
文檔編號G01N30/02GK102539615SQ201210084688
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月20日
發(fā)明者孟楣, 張念志, 彭波, 李澤庚, 楊程, 王傳博, 童佳兵, 肖偉, 高家榮 申請人:安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院