專利名稱：：抗hmgb1的高親和力抗體及其用法的制作方法抗HMGB1的高親和カ抗體及其用法本申請(qǐng)是國(guó)際申請(qǐng)PCT/US2005/037734，國(guó)際申請(qǐng)日2005年10月21日，中國(guó)國(guó)家階段申請(qǐng)?zhí)?00580041546.0，名稱“抗HMGBl的高親和カ抗體及其用法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。I.
背景技術(shù)：
：炎癥通常由促炎細(xì)胞因子,例如腫瘤壞死因子(TNF)、白介素(IL)-Ia、IL-Iβ、IL-6、血小板活化因子(PAF)、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)和其它化合物誘導(dǎo)。幾種不同類型的細(xì)胞能產(chǎn)生這些促炎細(xì)胞因子，最重要的是免疫細(xì)胞(例如，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性白細(xì)胞)，但非免疫細(xì)胞，例如成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元也能產(chǎn)生。這些促炎細(xì)胞因子在炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)的早期可導(dǎo)致各種疾病。炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致許多疾病的有害特征，包括炎癥和凋亡。包括特征為局部和全身性反應(yīng)的慢性和急性疾病，包括但不限于涉及胃腸道及相關(guān)組織的疾病(例如闌尾炎、消化道、胃和十二指腸潰瘍、腹膜炎、胰腺炎、潰瘍性偽膜急性和局部缺血性結(jié)腸炎、憩室炎、會(huì)厭炎、失遲緩癥、膽管炎、膽嚢炎、腹部疾病、肝炎、克羅恩病、腸炎和惠普爾病)；全身性或局部炎性疾病和病癥(例如哮喘、過(guò)敏、過(guò)敏性休克、免疫復(fù)合物病、器官局部缺血、再灌注損傷、器官壞死、枯草熱、膿毒癥、敗血癥、內(nèi)毒素性休克、惡病質(zhì)、高燒、嗜酸性肉芽腫、肉芽腫病和結(jié)節(jié)病)；涉及泌尿生殖系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如膿毒性流產(chǎn)、附睪炎、陰道炎、前列腺炎和尿道炎)；涉及呼吸系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如支氣管炎、肺氣腫、鼻炎、囊性纖維化病、肺炎、C0PD、成人呼吸窘迫綜合征、pneumoultramicroscopicsilico-volcanoconiosis、肺泡炎、細(xì)支氣管炎、咽炎、胸膜炎和鼻竇炎)；各種病毒(例如流感病毒、呼吸道合胞病毒、HIV、こ肝病毒、丙肝病毒和皰疹病毒)、細(xì)菌(例如彌散性菌血癥、登革熱)、真菌(例如念珠菌病)和原生動(dòng)物及多細(xì)胞寄生蟲(chóng)(例如瘧疾、絲蟲(chóng)病、阿米巴病和棘球囊(hydatidcysts))感染導(dǎo)致的疾??；皮膚病和皮膚病癥(例如銀屑病、燒傷、皮炎、皮肌炎、灼傷、蕁麻疹、疣和風(fēng)疹)；涉及心血管系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如血管炎、脈管炎、心內(nèi)膜炎、動(dòng)脈炎、動(dòng)脈粥樣硬化、血栓性靜脈炎、心包炎、充血性心カ衰竭、心肌炎、心肌局部缺血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、再狹窄和風(fēng)濕熱)；涉及中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)和相關(guān)組織的疾病(例如阿耳茨海默病、腦膜炎、腦炎、多發(fā)性硬化癥、腦梗塞、腦栓塞、格-巴綜合征(Guillame-Barresyndrome)、神經(jīng)炎、神經(jīng)痛、脊髓損傷、麻痹和眼色素層炎)；骨、關(guān)節(jié)、肌肉和結(jié)締組織的疾病(例如各種關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)痛、骨髄炎、筋膜炎、佩吉特病、痛風(fēng)、牙周病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和滑膜炎)；其它自身免疫疾病和炎性疾病(例如重癥肌無(wú)力、甲狀腺炎、全身性紅斑狼瘡、古德帕斯丘綜合征、貝切特綜合征、同種異體移植物排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、強(qiáng)直性脊柱炎、貝格爾病、I型糖尿病、強(qiáng)直性脊柱炎、貝格爾病和萊特綜合征)；以及各種癌癥、腫瘤和增殖性疾病(例如何杰金病)；以及在任何情況中，對(duì)任何原發(fā)性疾病的宿主炎性或免疫應(yīng)答。早期促炎細(xì)胞因子(例如，TNF、IL-I等)介導(dǎo)炎癥，誘導(dǎo)高遷移率族蛋白I(HMGl)(也稱為HMG-1、HMG1和HMGB1)的后期釋放，該蛋白在血清中累積，介導(dǎo)遲發(fā)性致死并進(jìn)ー步誘導(dǎo)早期促炎細(xì)胞因子。HMGl先前鑒定為稱為高遷移率族(HMG)DNA-結(jié)合蛋白家族的奠基成員(foundingmember)，這些蛋白對(duì)DNA結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性至關(guān)重要。幾乎在40年前鑒定它為能結(jié)合雙鏈DNA，但不具序列特異性的遍在表達(dá)的核蛋白。HMGl結(jié)合使DNA彎曲從而促進(jìn)核蛋白復(fù)合物的形成和穩(wěn)定，有利于，例如糖皮質(zhì)激素受體和RAG重組酶的基因轉(zhuǎn)錄。HMGl分子有3個(gè)結(jié)構(gòu)域稱為HMGA和HMGB框(box)的兩個(gè)DNA結(jié)合基序，和酸性羧基末端。兩個(gè)HMG框是高度保守的80個(gè)氨基酸，L-形結(jié)構(gòu)域。HMG框也在其它轉(zhuǎn)錄因子，包括RNA聚合酶I轉(zhuǎn)錄因子、人上游結(jié)合因子和淋巴特異性因子中表達(dá)。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)HMGA框用作HMG促炎作用的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，HMGB框具有HMG的主要促炎活性(參見(jiàn)，例如US20040005316)。與誘導(dǎo)炎癥的凋亡細(xì)胞相反，已證明HMGl是長(zhǎng)期找尋的壞死(細(xì)胞)被動(dòng)釋放的核危險(xiǎn)信號(hào)。HMGl也顯示在需要こ酰化該分子的過(guò)程中由激活的巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞主動(dòng)分泌，從而能從核中易位至分泌性溶酶體并分泌HMGl的こ?；问?。參見(jiàn)PCT/IB2003/005718。因此，壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放的HMGl和炎性細(xì)胞主動(dòng)分泌的HMGBl是不同的分子。此外，HMGl涉及作為內(nèi)毒素血癥中遲發(fā)性致死的細(xì)胞因子介質(zhì)。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利6，468，533和6，448，223。更具體地說(shuō)，已證明細(xì)菌內(nèi)毒素(脂多糖(LPS))能激活單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞釋放HMGl作為激活的晩期效應(yīng)，從而導(dǎo)致有毒的血清HMGl水平升高?？笻MGl的抗體顯示能防止內(nèi)毒素的致死作用，即使當(dāng)抗體給藥延遲至早期細(xì)胞因子效應(yīng)后。與其它促炎細(xì)胞因子相似，HMGl是單核細(xì)胞的強(qiáng)效激活物。氣管內(nèi)應(yīng)用HMGl可導(dǎo)致急性肺損傷，而抗-HMGl抗體可保護(hù)避免內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肺水腫。此外，在患有膿毒癥或失血性休克的危急病人中血清HMGl水平升高，與存活者相比，未存活者的水平顯著較高。胞外HMGl通過(guò)高級(jí)糖基化終產(chǎn)物的受體(RAGE)和Toll樣受體(TLR)家族成員轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)而成為炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)的強(qiáng)效介質(zhì)。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利公布號(hào)US20040053841。高遷移率族蛋白2(HMG2)(也稱為HMGB2和HMG-2)是同樣源于基因復(fù)制的HMGl近親。其存在于許多細(xì)胞類型中，并且與HMGl共有許多(如果不是所有)生化特性(Bustin，1999，Mol.Cell.Biol.，19,5237-46和Thomas等，2001，TrendsBiochem.Sci.，26，167-74)。雖然在成年小鼠組織中，HMG2不及HMGl豐富，并且分布更有限，但其在淋巴器官、睪丸和肺中較為豐富，在這些器官中也起到炎癥介質(zhì)的作用。與HMGl相似，在許多自身免疫疾病中HMG2也是自身抗體(如核外周抗嗜中性白細(xì)胞胞質(zhì)抗體)的明顯靶抗原，所述疾病包括全身性風(fēng)濕病(Uesugi等，1998，JRheumatol.,25:703-9)，潰瘍性結(jié)腸炎(Sobajima等，1998,ClinExpImmunol.,111:402-7)和青少年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(Wittemann等，1990,ArthritisRheum.,331378-83;Rosenberg等，2000,JRheumatol.，27,2489-93)。鑒于能與HMGl及其多肽片段(例如，HMGA和HMGB框)結(jié)合的抗體已顯示能調(diào)節(jié)HMGl的活性(例如，促炎活性)，和調(diào)節(jié)人HMGl活性可能對(duì)于許多疾病和病癥具有深遠(yuǎn)的治療應(yīng)用，本領(lǐng)域需要鑒定具有HMGl高親和カ和低免疫原性井能與HMGl及其多肽片段特異性結(jié)合的抗體。類似地，對(duì)于許多疾病和病癥，能調(diào)節(jié)HMG2活性的分子(例如，能與HMG2及其多肽片段特異性結(jié)合的抗體)也可以是有用的治療劑。2.發(fā)明概述本發(fā)明部分根據(jù)發(fā)現(xiàn)了能與HMGl(在本文也稱為“HMGB1”)及其抗原性片段特異性結(jié)合的高親和カ抗體。本發(fā)明的高親和カ抗體和含有其的藥物組合物可用于許多目的，例如作為抵御各種炎性疾病和病癥的治療劑，所述疾病和病癥例如是膿毒癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腹膜炎、克羅恩病、再灌注損傷、敗血癥、內(nèi)毒素性休克、囊性纖維化病、心內(nèi)膜炎、銀屑病、關(guān)節(jié)炎(如，銀屑病關(guān)節(jié)炎)、過(guò)敏性休克、器官局部缺血、再灌注損傷、脊髓損傷和同種異體移植物排斥。此外，本發(fā)明的高親和カ抗體可用于診斷性應(yīng)用。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人或其它動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物)的HMGl多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人HMGl多肽(SEQIDNO:1或SEQIDNO2)或由其構(gòu)成。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的全長(zhǎng)HMGl多肽(參見(jiàn)，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223)。人HMGBl的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào)NP_002119)MGKGDPKKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKDPNAPKRPPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKSKKKKEEEEDEEDEEDEEEEEDEEDEDEEEDDDDE(SEQIDNO1)人HMGBl的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào)AAA64970)MGKGDPKKPTGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKDPNAPKRLPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKSKKKKEEEEDEEDEEDEEEEEDEEDEEDEEDDDDE(SEQIDNO2)在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人或其它動(dòng)物(例如哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物)的HMG2多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人HMG2多肽(SEQIDN021)或由其構(gòu)成。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的全長(zhǎng)HMG2多肽。參見(jiàn)，例如Majumdar等，1991，NucleicAcidsRes.,19:6643;Shirakawa等，1992，JBiolChem，267:6641_6645。人HMGB2的氨基酸序列(GenBank登錄號(hào)AAA58659)MGKGDPNKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDSSVNFAEFSKKCSERWKTMSAKEKSKFEDMAKSDKARYDREMKNYVPPKGDKKGKKKDPNAPKRPPSAFFLFCSEHRPKIKSEHPGLSI⑶TAKKLGEMWSEQSAKDKQPYEQKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKSEAGKKGPGRPTGSKKKNEPEDEEEEEEEEDEDEEEEDEDEE(SEQIDNO:21)在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有哺乳動(dòng)物(或其它動(dòng)物)的HMGlA框或HMGlB框多肽(優(yōu)選人HMGl多肽)或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的HMGlA框及HMGlB框多肽的氨基酸序列高度保守(參見(jiàn)，例如US20040005316;6，468，533;6，448，223和US20040053841)。人HMGBlA框(SEQIDNO3)PTGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGET人HMGBlB框(SEQIDNO4)FKDPNAPKRLPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAY在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有哺乳動(dòng)物(或其它動(dòng)物)的HMG2A框或HMG2B框多肽(優(yōu)選人HMG2多肽)或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的HMG框多肽的氨基酸序列高度保守。參見(jiàn)，例如Jantzen等，1990,Nature,344:830-6；Kolodrubetz,1990,NucleicAcidsRes.，18:5565；Laudet等，1993，NucleicAcidsRes.,21:2493-501和Thomas等，2001，TrendsBiochemSci.,26:167_74。人HMGB2A框(SEQIDNO:22)PRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDSSVNFAEFSKKCSERWKTMSAKEKSKFEDMAKSDKARYDREMKNYVPPK⑶K人HMGB2B框(SEQIDNO:23)KKKDPNAPKRPPSAFFLFCSEHRPKIKSEHPGLSI⑶TAKKLGEMWSEQSAKDKQPYEQKAAKLKEKYEKDIAAY本發(fā)明也包括能與含有衍生自HMGl和/或HMG2的A框和B框的氨基酸殘基或者由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的表位特異結(jié)合的抗體。衍生自A框及B框的氨基酸殘基的表位可以是A和B框相連得到的線形多肽，或者可以是含有A和B框氨基酸殘基的三維構(gòu)象多肽。在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能與含有人(或其它動(dòng)物)HMGBl的多肽片段或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的抗原性HMGBl多肽片段特異性結(jié)合。在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能與含有人(或其它動(dòng)物)HMGB2的多肽片段或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的抗原性HMGB2多肽片段特異性結(jié)合。特別考慮的本發(fā)明高親和カ抗體能與こ?；?或非こ?；疕MGl及其抗原性片段特異性結(jié)合。也特別考慮了本發(fā)明高親和カ抗體能區(qū)分這兩種形式。還特別考慮本發(fā)明高親和カ抗體能與こ?；?或非こ酰化HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合。也特別考慮了本發(fā)明高親和カ抗體能區(qū)分這兩種形式。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式中，能與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合的抗體是人源化抗體或人抗體。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方式中，能與HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合的抗體是人源化抗體或人抗體。本發(fā)明的另ー實(shí)施方式是能以小于1(Γ5Μ、或小于1(Γ6Μ、或小于ΙΟΙ、或小于1(Γ8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于1(T1QM、或小于1(ΓηΜ、或小于1(Γ12Μ、或小于1(Γ13Μ的解離常數(shù)或Kd(koff/kon)與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合的抗體。本發(fā)明的另ー實(shí)施方式是能以小于1(Γ5Μ、或小于1(Γ6Μ、或小于ΙΟΙ、或小于1(Γ8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于1(T1QM、或小于1(ΓηΜ、或小于1(Γ12Μ、或小于1(Γ13Μ的解離常數(shù)或Kd(koff/kon)與HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合的抗體。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能以小于IX10、'或小于3XΙΟ、—1的Ktjff與HMGl和/或其抗原性片段結(jié)合。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMGl和/或其抗原性片段結(jié)合的Ktjff小于ΙΟ、—1、小于5XΙΟ、—1、小于ΙΟ、—1、小于δΧΙΟΛΓ1、小于ΙΟ、—1、小于5ΧKT5S'小于KT6S'小于5XKT6S'小于l(T7s'小于5Χl(T7s'小于1θΛベ、小于5Χ1θΛ'小于ΙΟΛ—1、小于δΧΙΟΛ—1或小于KT10S'在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能以小于IX10、'或小于3XΙΟ、—1的Ktjff與HMG2和/或其抗原性片段結(jié)合。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMG2和/或其抗原性片段結(jié)合的Ktjff小于ΙΟ、—1、小于5XΙΟ、—1、小于ΙΟ、—1、小于δΧΙΟΛΓ1、小于ΙΟ、—1、小于5ΧKT5S'小于KT6S'小于5XKT6S'小于l(T7s'小于5Χl(T7s'小于1θΛベ、小于5Χ1θΛ'小于ΙΟΛ—1、小于δΧΙΟΛ—1或小于KT10S'在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMGl和/或其抗原性片段結(jié)合的締合速率常數(shù)或km速率至少是IO5M-1S'至少SXlO5M-1S'至少lOfs—1、至少5X10''至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMG2和/或其抗原性片段結(jié)合的締合速率常數(shù)或km速率至少是IO5M-1S'至少SXlO5M-1S'至少lOfs—1、至少5X10''至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'考慮本發(fā)明高親和カ抗體能與HMGl特異性結(jié)合而不與HMG2結(jié)合，或者能與HMG2特異性結(jié)合而不與HMGl結(jié)合。還考慮本發(fā)明高親和カ抗體與HMGl和HMG2都能特異性結(jié)合(例如，能特異性識(shí)別存在于HMGl和HMG2中的表位的抗體)?？紤]本發(fā)明高親和カ抗體分別能與HMGl或能與HMG2特異性結(jié)合，和能與HMG2或能與HMGl交叉反應(yīng)。還考慮本發(fā)明高親和カ抗體能以相同或不同的結(jié)合親和力與HMGl和HMG2結(jié)合。本發(fā)明的高親和カ抗體包括但不限于合成抗體、單克隆抗體、重組產(chǎn)生的抗體、胞內(nèi)抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、合成抗體、單鏈Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、ニ硫鍵連接的Fv(sdFv)(包括雙特異性sdFv)和抗獨(dú)特型(杭-Id)抗體及以上任何抗體的表位結(jié)合片段。本發(fā)明的其它非排他性實(shí)施方式包括具有某些優(yōu)選生化特征(例如特定的等電點(diǎn)(PD或解鏈溫度(Tm))的本發(fā)明高親和カ抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的高親和カ抗體具有5.5-9.5的pi。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的高親和カ抗體具有約65°C-約120°C的Tm。本發(fā)明的具體實(shí)施方式也包括能以高親和力與HMGl特異性結(jié)合的具體抗體(及其片段)，所述抗體由美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所(10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110-2209)保藏并分別指定了ATCC保藏號(hào)PTA-6142(2004年8月4日保藏)、PTA-6143(2004年8月4日保藏)、PTA-6259(2004年10月19曰保藏)和PTA-6258(2004年10月19日保藏)(在本文也分別稱為“S2”、“S6”、“S16”和“G4”)。這些保藏物按照國(guó)際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約的條款而維持。由于提及的這些抗體株按照布達(dá)佩斯條約的條款而維持，則簽署了布達(dá)佩斯條約的專利局可獲得這些抗體株。本發(fā)明的其它具體實(shí)施方式也包括能以高親和力與HMGl特異性結(jié)合并含有至少ー個(gè)本文所述可變區(qū)(參見(jiàn)，例如圖2A-J和SEQIDNO:5-20、24-27和30-73)的具體抗體(及其片段)。具有本文所述抗體的至少I個(gè)、至少2個(gè)、至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5個(gè)或至少6個(gè)CDR(參見(jiàn)，例如圖2A-J中下劃線所示的CDR和SEQIDNO:74-103)的抗體是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。具有所保藏抗體的至少I個(gè)、至少2個(gè)、至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5個(gè)或至少6個(gè)⑶R的抗體是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。本發(fā)明實(shí)施方式也考慮編碼這些抗體(及其片段)的分離的多核苷酸。此外，本發(fā)明包括能與本文所述抗-HMGl抗體的相同表位(例如，HMGl肽中的91-169或150-183表位)特異性結(jié)合的任何抗體。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明包括能與所保藏抗體的相同表位特異性結(jié)合的抗體。具體考慮了這些抗體能以至少相等的親和力、或更好的親和力、或較低的親和カ與所保藏抗體的相同表位特異性結(jié)合。編碼這些抗體(及其片段)的分離的多核苷酸也是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。本發(fā)明的實(shí)施方式包括編碼任何本發(fā)明高親和カ抗體的分離的多核苷酸。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及含有本發(fā)明高親和カ抗體和藥學(xué)上可接受的賦形劑的組合物，例如藥物組合物。在一具體實(shí)施方式中，組合物含有能與HMGl的A框(例如，SEQIDNO3內(nèi)的表位)特異性結(jié)合的本發(fā)明高親和カ抗體。在另一具體實(shí)施方式中，組合物含有能與HMGl的B框(例如，SEQIDNO:4,28,29內(nèi)的表位)特異性結(jié)合的本發(fā)明高親和カ抗體。在還有另一具體實(shí)施方式中，組合物含有與衍生自HMGl和/或HMG2的A框及B框的表位特異性結(jié)合的本發(fā)明高親和力抗體。也考慮本發(fā)明組合物可含有本發(fā)明高親和カ抗體的組合,例如與A框特異性結(jié)合的抗體和與B框特異性結(jié)合的抗體的組合。本發(fā)明組合物含有単獨(dú)的本發(fā)明高親和カ抗體或其與其它活性治療性分子和/或佐劑，例如類固醇，其它抗炎分子或其它抗體治療劑的組合。更具體地說(shuō)，本發(fā)明組合物含有早期膿毒癥介質(zhì)的拮抗劑。早期膿毒癥介質(zhì)的拮抗劑是ー種實(shí)施方式，細(xì)胞因子的拮抗劑選自TNF、IL-Ia、IL-1β、MIF和IL-6。在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物能抑制由炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活所介導(dǎo)或以其為特征的病癥，包括急性和慢性炎性病癥。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在動(dòng)物CLP膿毒癥模型(例如，小鼠或小豬CLP模型)中比對(duì)照組合物的保護(hù)カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型(例如，大鼠ΑΙΑ、小鼠被動(dòng)或主動(dòng)CIA模型)中比對(duì)照組合物的保護(hù)カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型(例如，大鼠ΑΙΑ、小鼠被動(dòng)或主動(dòng)CIA模型)中減少骨喪失和/或軟骨損傷比對(duì)照組合物更低(低至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在人中減少骨喪失和/或軟骨損傷比對(duì)照組合物更低(低至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在嚙齒類關(guān)節(jié)炎模型中比Renbrel(加或不加氨甲喋呤)的保護(hù)カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在人中比Eenbrel(加或不加氨甲喋呤)的保護(hù)カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在小鼠腹膜炎模型中比對(duì)照組合物的保護(hù)カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。本發(fā)明考慮的其它實(shí)施方式包括治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、破骨細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或其它炎性關(guān)節(jié)疾病的方法，其包括給予本文所述抗體組合物。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明包括治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、破骨細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括給予能與HMGl或其抗原性片段(例如，HMGB框)特異性結(jié)合的任何抗體(或抗體組合物)，而無(wú)論該抗體的結(jié)合親和力。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明包括治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、破骨細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括給予能與HMG2或其抗原性片段(例如，HMGB框)特異性結(jié)合的任何抗體(或抗體組合物)，而無(wú)論該抗體的結(jié)合親和力。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明包括治療或預(yù)防關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、破骨細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括給予能與HMGl和/或HMG2或其抗原性片段(例如，HMGB框)特異性結(jié)合的抗體組合(或抗體組合物)，而無(wú)論該抗體的結(jié)合親和力。在本發(fā)明還有另ー實(shí)施方式中，本文所述組合物在人或嚙齒類SCI模型中緩解脊髓損傷(SCI)的嚴(yán)重性比對(duì)照組合物更好(好至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在其它具體實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及給予和利用本發(fā)明組合物和抗體來(lái)治療和預(yù)防各種炎性病癥的方法，所述病癥包括慢性和急性病癥，例如闌尾炎、消化道、胃和十二指腸潰瘍、腹膜炎、胰腺炎、潰瘍性偽膜急性和局部缺血性結(jié)腸炎、憩室炎、會(huì)厭炎、失遲緩癥、膽管炎、膽嚢炎、肝炎、克羅恩病、腸炎和惠普爾病、哮喘、過(guò)敏、過(guò)敏性休克、免疫復(fù)合物病、器官局部缺血、再灌注損傷、器官壞死、枯草熱、膿毒癥、敗血癥、內(nèi)毒素性休克、惡病質(zhì)、高燒、嗜酸性肉芽腫、肉芽腫病、結(jié)節(jié)病、膿毒性流產(chǎn)、附睪炎、陰道炎、前列腺炎和尿道炎、支氣管炎、肺氣腫、鼻炎、囊性纖維化病、肺炎、pneumoultramicroscopicsilico-volcanoconiosis、肺泡炎、細(xì)支氣管炎、咽炎、胸膜炎、鼻竇炎、流感、呼吸道合胞病毒感染、皰疹感染、HIV感染、こ肝病毒感染、丙肝病毒感染、彌散性菌血癥、登革熱、念珠菌病、瘧疾、絲蟲(chóng)病、阿米巴病、棘球囊、燒傷、皮炎、皮肌炎、灼傷、蕁麻疹、疣、風(fēng)疹、血管炎、脈管炎、心內(nèi)膜炎、動(dòng)脈炎、動(dòng)脈粥樣硬化、血栓性靜脈炎、心包炎、心肌炎、心肌局部缺血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、風(fēng)濕熱、阿耳茨海默病、腹部疾病、充血性心カ衰竭、再狹窄、C0PD、成人呼吸窘迫綜合征、腦膜炎、腦炎、多發(fā)性硬化癥、腦梗塞、腦栓塞、格-巴綜合征、神經(jīng)炎、神經(jīng)痛、脊髄損傷、麻痹、眼色素層炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛、骨髄炎、筋膜炎、佩吉特病、痛風(fēng)、牙周病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、滑膜炎、重癥肌無(wú)力、甲狀腺炎、全身性紅斑狼瘡、古德帕斯丘綜合征、貝切特綜合征、同種異體移植物排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、強(qiáng)直性脊柱炎、貝格爾病、I型糖尿病、強(qiáng)直性脊柱炎、貝格爾病和萊特綜合征和何杰金病。本發(fā)明也涉及抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子的方法。該方法包括用足夠量的本發(fā)明抗體或抗體組合物處理細(xì)胞以抑制細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子。在這些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是能釋放促炎細(xì)胞因子的任何細(xì)胞，包括但不限于外周血單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。此外，所述促炎細(xì)胞因子可選自TNF、IL-Ia、IL-1β、MIF和IL-6。在一具體實(shí)施方式中，所述細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，所述促炎細(xì)胞因子選自TNF、IL-la、IL-li3、MIF和IL_6。在ー個(gè)實(shí)施方式中，可采用這些方法來(lái)處理患有以炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活為特征的病癥或處于患病風(fēng)險(xiǎn)的患者細(xì)胞。本文列舉了具體的病癥。在相關(guān)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及治療以炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活為特征的患者病癥的方法。該方法包括給予患者本發(fā)明的抗體或抗體組合物。已列舉了具體的病癥。3.附圖簡(jiǎn)述圖I.人HMGl和HMG2的比對(duì)。圖2.本發(fā)明的人抗-HMGl抗體的重鏈(Vh)和輕鏈(Vj可變區(qū)的核苷酸序列和相應(yīng)的氨基酸序列。下劃線處CDR(Kabat定義)。A)S2Vl(SEQIDNO.:5_6)；B)S2Vh(SEQIDNO.7-8)；C)S6Vl(SEQIDNO.:9-10)；D)S6Vh(SEQIDNO.:1ト12)；E)S16Vl(SEQIDNO.:13-14)；F)S16Vh(SEQIDNO.:15-16)；G)G4Vl(SEQIDNO.:17-18)；H)G4Vh(SEQIDNO.:19-20)；I)E11Vl(SEQIDNO.:24-25);和J)E11Vh(SEQIDNO.:26-27)。SEQIDNO.指氨基酸序列和核苷酸序列，詳見(jiàn)表3。圖3.人抗-HMBl抗體的物理特性。A)人抗-HMBl抗體的等電聚焦(IEF)分析圖表明不同的人抗-HMGl抗體的pi值范圍廣泛(例如，約7.77-約9.24)。B)人抗-HMGl抗體的示差掃描量熱法(DSC)分析圖表明不同的人抗-HMGl抗體的Tm值范圍廣泛(例如，約660C-約90°C)。C)IEF和DSC分析的圖示表明pi和Tm值之間不直接相關(guān)。圖4.人抗-HMGl抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)和特異性。圖A)幾種人抗-HMGl抗體的HMGl捕捉ELISA結(jié)合曲線，顯示這些抗體對(duì)大腸桿菌(E.coli)產(chǎn)生的重組HMGl具有不同的親和力。圖B)幾種人抗-HMGl抗體的HMGl捕捉ELISA結(jié)合曲線比較了對(duì)重組HMGl(左圖)和天然核HMGl(右圖)的捕捉情況，表明S16和G4能與HMGl的兩種形式結(jié)合，而S2、S6和SlO與重組HMGl的結(jié)合優(yōu)于和天然核HMGl的結(jié)合。圖C)幾種人抗-HMGl抗體的HMGl捕捉ELISA結(jié)合曲線比較了天然核的、壞死的和激活的HMGl的捕捉情況，表明S6和G4(程度較低)能以不同的親和カ與各種形式結(jié)合，而S16不能。圖D)為幾種人抗-HMGl抗體進(jìn)行的捕捉ELISA試驗(yàn)結(jié)合曲線，比較了兩種不同的捕捉形式固定的抗體(正方形)和固定的HMGl(三角形)，表明Ell和S17(程度較低)對(duì)于可溶性HMGl具有較高親和力，而G2、G4、G9和G12顯示與固定的或可溶性HMGl結(jié)合的差異小。圖E)ELISA數(shù)據(jù)顯示了幾種人抗-HMGl抗體對(duì)HMGI和HMG2的相對(duì)結(jié)合親和力，表明在該試驗(yàn)中，所測(cè)試的大多數(shù)抗體(G2、G4、G9、G12、S3、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S14和S17)是HMGl特異性的，而S12和S16顯示與HMGl和HMG2均有一定結(jié)合，Ell顯示對(duì)HMG2具有較高結(jié)合親和力。這些試驗(yàn)的數(shù)據(jù)和其它未顯示的數(shù)據(jù)總結(jié)于表I。圖5.HMGlB框表位的作圖研究。顯示了幾種人抗-HMGl抗體的HMGlB框肽ELISA結(jié)合曲線。這些曲線表明S12、S16和G4能與HMGl肽91-169結(jié)合(圖A)。S12也能與HMGl肽150-183結(jié)合(圖B)。其余測(cè)試的抗體(S2、S6、S10、G2和G9)不能與該試驗(yàn)中測(cè)試的任一HMGlB框肽結(jié)合。圖6.許多人抗-HMGl抗體能抑制HMGl刺激人PBMC釋放細(xì)胞因子。圖A顯示了幾種人抗-HMGl抗體(G9、S14、G20、S2、S6和S17)抑制重組HMGl刺激IL-1B、IL-6和TNF-a釋放的活性的代表性劑量反應(yīng)曲線。結(jié)果以所釋放細(xì)胞因子的pg/ml(上圖)和抑制百分比(下圖)作圖。圖B顯示了幾種人抗-HMGl抗體(G4、S6、S16和S6+S16)和RAGE-Fc融合蛋白抑制重組HMGl刺激IL-6釋放的代表性劑量反應(yīng)曲線。圖C顯示了Ell、S13、S16、S17、G4、G9、S6、RAGE-Fc和A框融合蛋白抑制天然活化的HMGl刺激IL-6釋放的代表性劑、量反應(yīng)曲線。從這些數(shù)據(jù)和其它未顯示數(shù)據(jù)計(jì)算的IC5tl值總結(jié)于表I。圖7.幾種人抗-HMGl抗體抑制小鼠巨噬細(xì)胞(mM0)中HMGl刺激的細(xì)胞因子基因表達(dá)。顯示了用緩沖液，單用重組HMGl(E-HMGBl)，聯(lián)用E-HMGBl加人同種型對(duì)照(HuIgG)，人抗-HMGl抗體(E11、G2、G4、S6和寡克隆(oligoclonal))以及小鼠和人RAGE-Fc融合蛋白處理的小鼠巨噬細(xì)胞中IL-Iβ(左)或TNF-a(右)的相對(duì)基因表達(dá)。E11、G2、G4和寡克隆以及兩種RAGE-Fc融合蛋白均穩(wěn)定地抑制IL-Iβ表達(dá)。G2和小鼠RAGE-Fc融合蛋白穩(wěn)定地抑制TNF-a表達(dá)。這些數(shù)據(jù)和未顯示的其它數(shù)據(jù)總結(jié)于表I。圖8.人抗-HMGl抗體的亞組阻斷重組HMGl與RAGE結(jié)合。采用ELISA結(jié)合試驗(yàn)檢測(cè)HMGl與RAGE-Ig融合體的結(jié)合情況。顯示了許多人抗-HMGl抗體的抑制百分率。G2、G4、S10、S16、S2和S6顯示明顯能阻斷HMGl和RAGE的結(jié)合，而E11、G12、G16、G20、G34、G9、寡克隆、S12、S14和S17不能阻斷。這些數(shù)據(jù)和未顯示的其它數(shù)據(jù)總結(jié)于表I。圖9.Ell部分阻斷TLR4激活。采用細(xì)胞螢光素酶報(bào)道系統(tǒng)檢測(cè)HMGl誘導(dǎo)的TLR4激活。顯示了單用培養(yǎng)基、單用重組HMGl(rHMGB)和聯(lián)用rHMGB加S2、Ell、S6、G4、S14或多克隆抗體處理的細(xì)胞的螢光素酶總活性。Ell顯示明顯能阻斷HMGl誘導(dǎo)的TLR4激活。這些數(shù)據(jù)和未顯示的其它數(shù)據(jù)總結(jié)于表I。圖10.抑制重組HMGl與Thp-I細(xì)胞(結(jié)合)。顯示了E11、G2和RAGE-Fc融合蛋白抑制重組HMGl與Thp-I細(xì)胞結(jié)合的代表性劑量反應(yīng)曲線。從這些數(shù)據(jù)和其它未顯示數(shù)據(jù)計(jì)算的IC5。值總結(jié)于表I。圖11.人抗-HMGl抗體在膿毒癥小鼠CLP模型中具有保護(hù)作用。顯示的膿毒癥小鼠CLP模型的代表性存活曲線比較了用人杭-HMGl抗體或人同種型對(duì)照抗體(R3-47)的處理。G4(圖A和B)、S16(圖A和D)、S6(圖C)、E11和寡克隆(均在圖D中)抗-HMGl抗體能改善存活率高達(dá)60%。圖12.HMGl在幾種炎性疾病模型中上調(diào)。在第10天收獲的未處理被動(dòng)CIA小鼠前爪中，存在的HMGl水平發(fā)現(xiàn)比正常小鼠中存在的至少增加了10倍(圖A)。在未處理主動(dòng)CIA小鼠的關(guān)節(jié)中，發(fā)現(xiàn)后爪(右)中HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4和TLR9的相對(duì)基因表達(dá)水平升高，而前爪(左)中只有HMGB1、RAGE和TLR2的相對(duì)基因表達(dá)水平升高(均在圖B中)。在未處理主動(dòng)CIA小鼠中，發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)后爪(圖)和前爪(圖)中IL-lb、IL-6和TNF-a的相對(duì)基因表達(dá)水平均升高(圖C)。AIA大鼠踝關(guān)節(jié)中HMGBl水平升高(右上圖)與爪炎癥評(píng)分增加(左上圖)和相對(duì)體重降低(左下圖)相關(guān)(均在圖D中)。發(fā)現(xiàn)用金黃色葡萄球菌(S.aureus)攻擊的動(dòng)物血清中HMBGl、IL_1B和TNF_a水平升高(圖E)，其中HMGBl水平從攻擊后2小時(shí)開(kāi)始恒定升高，TNF-a在2小時(shí)顯示早期高峰，然后在約7小時(shí)降低至接近基線，在約12小時(shí)出現(xiàn)第二高峰，而IL-6在約2小時(shí)出現(xiàn)高峰，然后緩慢升高。ALI小鼠BAL液中HMGBl水平在給予LPS后50小時(shí)內(nèi)增加至16ng/ml以上，最顯著升高始于約第26小時(shí)(左圖)，與BAL液中觀察到的細(xì)胞總數(shù)最大增高相關(guān)(右圖)(均在圖F中)。(顯示了)用PBS、人同種型對(duì)照(HuIgG)、抗-HMGl抗體G4、HMG1A-框-Fe融合蛋白、氨甲喋呤(Methyltrexate)(MTX)、MTX+HuIgG、MTX+Renbrel和MTX+G4處理后AIA大鼠踝關(guān)節(jié)中HMBGl(左上圖)和IL-6(左下圖)的水平。也顯示了用HuIgG、G4或MTX+HuIgG治療后AIA大鼠踝關(guān)節(jié)中的TNF-a水平(右上圖)。單用G4和MTX+HuIgG或MTX+Renbrel顯示HMGUIL-6和TNF-a水平降低，然而聯(lián)用MTX+G4顯示降低作用最驚人。這些數(shù)據(jù)與各種處理時(shí)爪炎癥評(píng)分所見(jiàn)的降低相關(guān)(見(jiàn)圖16B)。圖13.人抗-HMGl抗體在關(guān)節(jié)炎被動(dòng)CIA小鼠模型中具有保護(hù)作用。圖A顯示了用MTX和Renbrel(左上圖)、人抗-HMGl抗體S6(右上圖)和G16(左下圖)和HMGlA-框-Fe融合蛋白(右下圖)治療的被動(dòng)CIA小鼠隨時(shí)間變化的爪炎癥評(píng)分。在此模型中，MTX/Renbrel聯(lián)用和S6抗體均降低了臨床評(píng)分，而S6的作用更顯著。顯示了對(duì)前爪和后爪(圖B)或単獨(dú)前爪(圖C)組織學(xué)檢查獲得的骨(左上圖)、軟骨(右上圖)和炎癥(左下圖)的評(píng)分圖。圖D顯示用MTX和Renbrel(左上圖)、人抗-HMGl抗體S6(右上圖)和G16(左下圖)及HMGlA-框-Fe融合蛋白(左下圖)治療的小鼠體重指數(shù)隨時(shí)間的變化。如臨床評(píng)分所示，MTX/Renbrel聯(lián)用和S6顯示了保護(hù)作用，而S6效カ更好。圖14.人抗-HMGl抗體在關(guān)節(jié)炎被動(dòng)CIA小鼠模型中具有保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)2(圖A)顯示了用PBS、Renbrel或G4(右圖)和用PBS、G4或同種型對(duì)照抗體(左圖)治療的被動(dòng)CIA小鼠的爪炎癥評(píng)分隨時(shí)間的變化。實(shí)驗(yàn)3(圖B)顯示了用PBS、G4或同種型對(duì)照抗體治療的被動(dòng)CIA小鼠的爪炎癥評(píng)分隨時(shí)間的變化。此兩項(xiàng)向研究也追蹤了正常小鼠的臨床評(píng)分并作圖。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)均證明在該模型中G4人抗-HMGl抗體能保護(hù)(小鼠)免于發(fā)生炎癥。在實(shí)驗(yàn)2中，G4顯示效カ優(yōu)于Renbrel。圖15.人抗-HMGl抗體在關(guān)節(jié)炎主動(dòng)CIA小鼠模型中具有保護(hù)作用。圖A顯示了用PBS、同種型對(duì)照抗體或G4治療的主動(dòng)CIA小鼠(左圖)和用PBS或Renbrel治療的主動(dòng)CIA小鼠(右圖)的爪炎癥評(píng)分隨時(shí)間的變化。圖B是顯示同種型對(duì)照和G4抗體治療組的相對(duì)體重隨時(shí)間變化繪制的圖。所有圖也繪制了PBS處理小鼠和正常小鼠的評(píng)分。在此模型中，G4人抗-HMGl抗體對(duì)炎癥和體重喪失的保護(hù)作用顯示優(yōu)于Renbrel。圖16.人抗-HMGl抗體在關(guān)節(jié)炎AIA大鼠模型中具有保護(hù)作用。用PBS、同種型對(duì)照抗體或G4治療AIA大鼠(左圖)和用PBS或Renbrel治療的CIA小鼠(右圖)爪炎癥評(píng)分隨時(shí)間變化作的圖(均在圖A中，也可參見(jiàn)圖B)，顯示在此模型中，與PBS對(duì)照相比G4抗-HMGl抗體能降低爪炎癥評(píng)分約35%，而單用Renbrel只能降低爪炎癥評(píng)分25%(圖A)。聯(lián)用氨甲喋呤和第二藥物(同種型對(duì)照、G4或Renbrel)治療的AIA大鼠爪炎癥評(píng)分隨時(shí)間變化作的圖(圖16B)顯示MTX和G4聯(lián)用甚至比單用G4和MTX/Renbrel聯(lián)用更有效。用MTX和G4治療能降低爪炎癥評(píng)分至接近正常(圖B)。也顯示了用HMGlA-框-Fe融合蛋白治療的爪炎癥評(píng)分，其效カ低于單用G4。圖17.人抗-HMGl抗體在腹膜炎小鼠模型中具有保護(hù)作用。與用PBS或同種型對(duì)照(R347)治療的小鼠相比，在用熱滅活金黃色葡萄球菌攻擊誘導(dǎo)腹膜炎的小鼠中，96小時(shí)的存活百分比顯示G4能提高存活率近30%(圖A)?？贵w在-30分鐘時(shí)給予(星形)，金黃色葡萄球菌攻擊在第O分鐘時(shí)給予(三角形)。圖18.人抗-HMGl抗體在急性肺損傷(ALI)小鼠模型中具有保護(hù)作用。與用任一種同種型對(duì)照抗體(R347)治療的小鼠相比，用G4或Ell治療的ALI小鼠BAL液中回收的總細(xì)胞降低了近40%。用HMGlA-框-Fe融合蛋白治療只使回收的總細(xì)胞降低23%。圖19.多發(fā)性硬化癥(MS)樣品人腦組織中的HMGl染色模式。樣品A)含有激活小膠質(zhì)細(xì)胞的MS病灶(plaque)背景染色，利用Iμg/ml同種型對(duì)照；B)小膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和含有激活小膠質(zhì)細(xì)胞的MS病灶間質(zhì)的特異性HMGBl染色，利用Iμg/ml同種型對(duì)照；和C)發(fā)現(xiàn)在含有脫髓鞘的、少量激活小膠質(zhì)細(xì)胞和大量淋巴細(xì)胞的MS病灶中染色降低，利用Iμg/mlG16。4.表格簡(jiǎn)述表I-抗體特征和保藏信息。表2-保守性氨基酸取代家族。表3-序列表的說(shuō)明表4-被動(dòng)CIA小鼠模型治療方案的說(shuō)明表5-AIA大鼠模型治療方案的說(shuō)明表6-腹膜炎模型治療方案的說(shuō)明5.發(fā)明詳述本發(fā)明部分根據(jù)發(fā)現(xiàn)能與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合的抗體(本文也稱為“HMGB1”)，所述抗體顯示某些生物化學(xué)、結(jié)合和功能特征。能與HMGl特異性結(jié)合的抗體在本文專門(mén)稱為“本發(fā)明的高親和カ抗體”、“高親和カ抗體”，也包括更寬泛的術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明抗體”、“抗-HMGl抗體”和簡(jiǎn)稱的“HMG抗體”以及類似術(shù)語(yǔ)。本發(fā)明也部分根據(jù)發(fā)現(xiàn)能與HMGl和HMG2都結(jié)合的抗體。本發(fā)明抗體的生物化學(xué)特征包括但不限于等電點(diǎn)(Pl)和解鏈溫度(Tm)。本發(fā)明抗體的結(jié)合特征包括但不限于結(jié)合特異性、解離常數(shù)(Kd)、表位、區(qū)分HMGl的各種形式(例如，重組的、天然的、こ?；?和/或HMGl制品的能力以及與可溶性和/或固定化抗原結(jié)合的能力。本發(fā)明抗體的功能特征包括但不限于抑制HMGl誘導(dǎo)的細(xì)胞因子釋放、抑制HMGl與ー種或多種受體結(jié)合、抑制HMGl與細(xì)胞表面結(jié)合以及在一種或多種炎性疾病(例如，膿毒癥、關(guān)節(jié)炎、急性肺損傷、腹膜炎)模型中的保護(hù)作用。本發(fā)明抗體和含有這些抗體的組合物可用于許多目的，例如作為抵御各種慢性和急性炎性疾病和病癥的治療劑，所述疾病和病癥包括但不限于膿毒癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腹膜炎、克羅恩病、再灌注損傷、敗血癥、內(nèi)毒素性休克、囊性纖維化、心內(nèi)膜炎、銀屑病、關(guān)節(jié)炎(例如，銀屑病關(guān)節(jié)炎)、過(guò)敏性休克、器官局部缺血、再灌注損傷、脊髄損傷和同種異體移植物排斥。此外，本發(fā)明高親和カ抗體可用于診斷性應(yīng)用。本發(fā)明抗體可用于，例如但不限于純化、檢測(cè)和靶向本發(fā)明的HMGl和/或HMG2多肽，包括體外和體內(nèi)診斷和治療方法。例如，所述抗體可用于免疫測(cè)定來(lái)定性和定量檢測(cè)生物學(xué)樣品中本發(fā)明HMGl和/或HMG2多肽的水平。參見(jiàn)，例如Harlow等,Antibodies:ALaboratoryManual(《抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》)，(冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，第二版，1988)。5.I本發(fā)明抗體本文所用的“能與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合”的高親和カ抗體或其片段指，例如所述高親和力抗體或其片段能與HMGl多肽或HMGl多肽片段(例如，HMGlA框和HMGlB框)或HMGl多肽的某表位特異性結(jié)合(用本領(lǐng)域熟知的檢測(cè)特異性抗體-抗原結(jié)合的免疫測(cè)定來(lái)檢測(cè))，但不與其它多肽特異性結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方式中，能與HMGl多肽或其片段特異性結(jié)合的高親和カ抗體或其片段不與其它抗原發(fā)生非特異性交叉反應(yīng)(例如，不能用非HMGl蛋白，如BSA競(jìng)爭(zhēng)除去結(jié)合)。本發(fā)明也包括能與HMG2多肽或HMG2多肽片段(例如，HMG2A框和HMG2B框)或HMG2多肽的抗原性片段特異性結(jié)合的高親和カ抗體或其片段。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)知道雖然HMGl和HMG2是不同的蛋白質(zhì)，但二者可具有同源性區(qū)域(參見(jiàn)圖I)。因此，預(yù)計(jì)所述高親和力抗體或其片段可與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合，但不與HMG2或其抗原性片段結(jié)合。還預(yù)計(jì)所述高親和力抗體或其片段可與HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合，但不與HMGl或其抗原性片段結(jié)合。還預(yù)計(jì)本發(fā)明高親和カ抗體可與HMGl和HMG2共有的某表位特異性結(jié)合。HMGl和HMG2中共有的表位可相同，在這種情況下，HMGl和HMG2中含有該表位的氨基酸序列相同。因此，本發(fā)明高親和カ抗體與HMGl和HMG2都能特異性結(jié)合(例如，抗體能特異性識(shí)別同時(shí)存在于HMGl和HMG2中的相同表位)。或者，HMGl和HMG2中均可能有相似的共有表位。例如HMGl和HMG2之間的相似表位可享有顯著的同源性(例如，60%-99%相同性)和/或采取相似的三維構(gòu)象，因而本發(fā)明高親和力抗體能與該共享表位交叉反應(yīng)。因此，本發(fā)明高親和カ抗體能分別與HMGl或HMG2特異性結(jié)合，和能與HMG2或HMGl交叉反應(yīng)。本發(fā)明高親和カ抗體對(duì)存在干HMGl和HMG2上的相似表位可具有不同親和力。因此，還預(yù)計(jì)本發(fā)明高親和カ抗體可以相同或不同的親和力與HMGl和HMG2結(jié)合。在一具體實(shí)施方式中，高親和カ抗體或其片段與HMGl和/或HMG2的特異性結(jié)合勝過(guò)其它抗原。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有HMGl和/或HMG2的A框(例如，分別是SEQIDNO.3和22)或者由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有HMGl和/或HMG2的B框(例如，分別是SEQIDNO.4和23)或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。本發(fā)明也包括能與含有衍生自HMGl和/或HMG2的A框及B框的氨基酸殘基或者由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的表位特異性結(jié)合的抗體。衍生自A框及B框的氨基酸殘基的表位可以是A和B框相連得到的線形多肽，或者可以是含有A和B框氨基酸殘基的三維構(gòu)象多肽。本發(fā)明也具體包括具有多種特異性的抗體(例如，對(duì)兩個(gè)或多個(gè)不連續(xù)的抗原具有特異性的抗體(總結(jié)于Cao等，2003,AdvDrugDelivRev,55171;Hudson等，2003,NatMed,I129)。例如，雙特異性抗體可含有融合在一起的兩個(gè)不同的結(jié)合特異性(位點(diǎn))。在最簡(jiǎn)單的情況中，雙特異性抗體能與ー個(gè)靶抗原上的兩個(gè)毗鄰表位結(jié)合，這種抗體不與其它抗原交叉反應(yīng)(如上所述)?；蛘?，雙特異性抗體能與兩個(gè)不同的抗原結(jié)合，這種抗體能與兩個(gè)不同的分子(例如，HMGl和HMG2)結(jié)合，但不能與其它不相關(guān)的分子(例如，BSA)結(jié)合。此外，能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合的抗體可能與相關(guān)的HMG蛋白交叉反應(yīng)。本文所述的術(shù)語(yǔ)HMGl和/或HMG2“片段”包括含有HMGl和/或HMG2多肽(例如，人HMGl和/或HMG2)氨基酸序列中以下數(shù)個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列或者由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的HMGl和/或HMG2肽或多肽至少5個(gè)毗連氨基酸殘基、至少10個(gè)毗連氨基酸殘基、至少15個(gè)毗連氨基酸殘基、至少20個(gè)毗連氨基酸殘基、至少25個(gè)毗連氨基酸殘基、至少40個(gè)毗連氨基酸殘基、至少50個(gè)毗連氨基酸殘基、至少60個(gè)毗連氨基酸殘基、至少70個(gè)毗連氨基酸殘基、至少80個(gè)毗連氨基酸殘基、至少90個(gè)毗連氨基酸殘基、至少100個(gè)毗連氨基酸殘基、至少125個(gè)毗連氨基酸殘基、至少150個(gè)毗連氨基酸殘基、至少175個(gè)毗連氨基酸殘基、至少200個(gè)毗連氨基酸殘基或至少250個(gè)毗連氨基酸殘基。本文所述的術(shù)語(yǔ)HMGl和/或HMG2“片段”具體也包括含有HMGA(例如，人HMGl和/或HMG2A框)框或HMGB(例如，人HMGl和/或HMG2B框)框中以下數(shù)個(gè)氨基酸殘基的氨基酸序列或者由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)的多肽至少5個(gè)毗連氨基酸殘基、至少10個(gè)毗連氨基酸殘基、至少15個(gè)毗連氨基酸殘基、至少20個(gè)毗連氨基酸殘基、至少25個(gè)毗連氨基酸殘基、至少40個(gè)毗連氨基酸殘基、至少50個(gè)毗連氨基酸殘基、至少60個(gè)毗連氨基酸殘基、至少70個(gè)毗連氨基酸殘基或至少80個(gè)毗連氨基酸殘基。本發(fā)明“高親和カ抗體”(本文也稱為“本發(fā)明高親和カ抗體”、“高親和カ抗體”，也包括更寬泛的術(shù)語(yǔ)“本發(fā)明抗體”和簡(jiǎn)稱的“HMG抗體”)包括但不限于合成抗體、單克隆抗體、重組產(chǎn)生的抗體、胞內(nèi)抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、合成抗體、單鏈Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、ニ硫鍵連接的Fv(sdFv)(包括雙特異性sdFv)和抗獨(dú)特型(杭-Id)抗體和以上任何抗體的表位結(jié)合片段。本發(fā)明抗體可以是單特異性、雙特異性、三特異性或更高的多特異性。多特異性抗體可以是對(duì)本發(fā)明多肽不同表位特異性的，或者可對(duì)本發(fā)明多肽以及異源表位，例如異源多肽或固體支持材料特異。參見(jiàn)，例如PCT公開(kāi)WO93/17715；W092/08802；W091/00360；W092/05793；Tutt等，J.Immunol.，147:60-69(1991);美國(guó)專利號(hào)4，474，893;4，714，681;4，925，648；5，573，920;5，601，819；Kostelny等，J.Immunol.，148:1547-1553,(1992)。多特異性抗體至少對(duì)兩種不同抗原具有結(jié)合特異性。雖然這種分子通常只與兩種抗原結(jié)合(雙特異性抗體，BsAbs)，但本發(fā)明包括具有額外特異性的抗體，例如三特異性抗體。BsAbs的例子包括但不限于ー個(gè)臂針對(duì)HMGl和/或HMG2表位，而另一臂針對(duì)任何其它抗原的那些抗體。本領(lǐng)域已知制備雙特異性抗體的方法。全長(zhǎng)雙特異性抗體的常規(guī)制備方法以共同表達(dá)兩對(duì)免疫球蛋白重鏈為基礎(chǔ)，其中所述兩鏈具有不同特異性(Millstein等，1983，Nature,305:537-539)。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機(jī)重配，這些雜交瘤(四源瘤(quadroma))產(chǎn)生了不同抗體分子的可能混合物,其中只有ー種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。純化該正確的分子一般通過(guò)親和層析步驟進(jìn)行，這相當(dāng)繁重并且產(chǎn)物收率低。類似的方法見(jiàn)WO93/08829和Traunecker等，1991，EMBOJ.，10:3655_3659。更直接的方法是產(chǎn)生ニ(價(jià))_雙抗體，一種四價(jià)雙特異性抗體。本領(lǐng)域已知產(chǎn)生ニ(價(jià))_雙抗體的方法(參見(jiàn)，例如Lu等，2003,JTmmunolMethods,279:219-32;Marvin等，2005，ActaPharmacolicalSinica,26649)。按照另ー種方法，將具有所需結(jié)合特異性的抗體可變區(qū)(抗體-抗原結(jié)合位點(diǎn))與免疫球蛋白恒定區(qū)序列融合。優(yōu)選與含有絞鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)至少一部分的免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)相融合。優(yōu)選至少ー種融合體中存在含輕鏈結(jié)合所需位點(diǎn)的第一重鏈恒定區(qū)(CHl)。將編碼免疫球蛋白重鏈融合體和免疫球蛋白輕鏈(如果需要)的DNA插入不同的表達(dá)載體中，共同轉(zhuǎn)染入合適的宿主生物體中。當(dāng)構(gòu)建所用這三種多肽鏈比例不等時(shí)可提供最佳產(chǎn)率，這對(duì)調(diào)節(jié)這三種多肽片段彼此的比例提供了高度靈活性。然而，當(dāng)?shù)缺壤磉_(dá)至少兩種多肽鏈獲得高產(chǎn)率或者當(dāng)所述比例不具有特別意義時(shí)，可將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入ー個(gè)表達(dá)載體中。在該方法的一個(gè)實(shí)施方式中，雙特異性抗體由一對(duì)在ー個(gè)臂中具有第一結(jié)合特異性(例如，HMGl和/或HMG2表位，如A-框、B-框)的雜交免疫球蛋白重鏈和另一臂中的雜交免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(duì)(提供第二結(jié)合特異性)構(gòu)成。發(fā)現(xiàn)此不對(duì)稱結(jié)構(gòu)有助于分離所需的雙特異性化合物和不要的免疫球蛋白鏈混合物，因?yàn)橹辉谠撾p特異性分子的一半中存在免疫球蛋白輕鏈而提供了方便的分離方法。此方法見(jiàn)WO94/04690。產(chǎn)生雙特異性抗體的其它細(xì)節(jié)可見(jiàn)，例如Suresh等，1986,MethodsinEnzymology,121:210。根據(jù)W096/27011所述的另一方法，可工程改造ー對(duì)抗體分子盡可能提高從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收異源ニ聚體的百分比。優(yōu)選的界面含有抗體恒定區(qū)CH3結(jié)構(gòu)域的至少一部分。在此方法中，用較大側(cè)鏈(例如，酪氨酸或色氨酸)替代第一抗體分子界面的一個(gè)或多個(gè)小氨基酸側(cè)鏈。通過(guò)用較小側(cè)鏈的氨基酸(例如，丙氨酸或蘇氨酸)替代大側(cè)鏈氨基酸可在第二抗體分子的界面上產(chǎn)生與大側(cè)鏈大小相同或相似的補(bǔ)償性“空穴”。這提供了増加異質(zhì)ニ聚體產(chǎn)率超過(guò)不要終產(chǎn)物(例如同質(zhì)ニ聚體)的機(jī)制。雙特異性抗體包括交聯(lián)的或“異質(zhì)綴合物(heteroconjugate)”抗體。例如，該異質(zhì)綴合物中的ー種抗體可與親和素偶聯(lián)，另ー抗體與生物素偶聯(lián)。有人提出，例如這種抗體可使免疫系統(tǒng)細(xì)胞靶向不要的細(xì)胞(美國(guó)專利號(hào)4，676，980)并可用于治療HIV感染(W091/00360、WO92/200373和EP03089)。可采用常規(guī)的交聯(lián)方法制備異質(zhì)綴合物抗體。本領(lǐng)域熟知合適的交聯(lián)劑和許多交聯(lián)技術(shù)，可參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，676，980。考慮了具有兩價(jià)以上的摻有至少ー個(gè)本發(fā)明絞鏈修飾的抗體。例如，可制備三特異性抗體。參見(jiàn)，例如Tutt等，J.Immunol.,147:60,(1991)。其它專門(mén)考慮的抗體是“寡克隆”抗體。本文所用的術(shù)語(yǔ)“寡克隆抗體”指不同單克隆抗體的預(yù)定混合物。本領(lǐng)域已知制備寡克隆抗體的方法。參見(jiàn)，例如“實(shí)施例章節(jié)”，實(shí)施例1，PCT公布WO95/20401;美國(guó)專利號(hào)5，789，208和6，335，163。在某些實(shí)施方式中，寡克隆抗體由在一個(gè)細(xì)胞中產(chǎn)生的針對(duì)ー種或多種表位的抗體預(yù)定混合物構(gòu)成。在其它實(shí)施方式中，寡克隆抗體含有多個(gè)重鏈，其能與共同的輕鏈配對(duì)從而產(chǎn)生具有多特異性的抗體(例如，PCT公布WO04/009618)。當(dāng)需要靶向ー個(gè)靶分子(例如，HMG1)上的多個(gè)表位時(shí)，寡克隆抗體特別有用。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道或能確定哪種類型的抗體或抗體混合物適用于所需目的和需要。具體地說(shuō)，本發(fā)明抗體包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性部分，即含有能與HMGl抗原特異性結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如，杭-HMGl抗體的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CRD))的分子。也專門(mén)考慮了本發(fā)明抗體可包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性部分，即含有能與HMG2抗原特異性結(jié)合的抗原結(jié)合位點(diǎn)(例如，抗-HMG2抗體的一個(gè)或多個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CRD))的分子。本發(fā)明免疫球蛋白分子可以是任何類型(例如，IgG,IgE,IgM,IgD,IgA和IgY)、類別(例如，IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可同時(shí)含有重鏈和輕鏈。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY重鏈的陣列可與κ或λ形式的輕鏈配對(duì)。本發(fā)明抗體也包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性片段，即含有抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子，可將這些片段與或不與另一免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(包括但不限于Fe區(qū)或其片段)融合。如本文所概述的，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括能與本文所述HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合的抗體、全長(zhǎng)抗體及其含有Fe區(qū)的Fe變體、或其與本文所述免疫球蛋白的免疫學(xué)活性片段或其它蛋白融合的含有至少ー個(gè)本文所述新氨基酸殘基的片段。這種變體Fe融合體包括但不限于scFv-Fc融合體、可變區(qū)(例如,VL和VH)-Fe融合體、scFv_scFv_Fc融合體。免疫球蛋白分子可以是任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、類別(例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亞類。本發(fā)明抗體也包括在哺乳動(dòng)物(例如，人)中具有以下半衰期(例如，血清半衰期)的抗體5天以上、10天以上、15天以上、20天以上、25天以上、30天以上、35天以上、40、天以上、45天以上、2個(gè)月以上、3個(gè)月以上、4個(gè)月以上或5個(gè)月以上。本發(fā)明抗體在哺乳動(dòng)物(例如，人)中半衰期增加導(dǎo)致所述抗體或抗體片段在哺乳動(dòng)物中的血清滴度較高，減少了所述抗體或抗體片段的給藥頻率和/或降低了給予所述抗體或抗體片段的濃度?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)制備體內(nèi)半衰期增加的抗體。例如，可通過(guò)修飾(如，取代、缺失或添加)經(jīng)鑒定參與Fe區(qū)和FcRn受體間相互作用的氨基酸殘基來(lái)產(chǎn)生體內(nèi)半衰期增加的抗體(參見(jiàn)，例如國(guó)際公布號(hào)WO97/34631；W004/029207；U.S.6，737056和美國(guó)專利公布號(hào)2003/0190311，下文將更詳細(xì)討論)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體可在其Fe區(qū)內(nèi)包含修飾/取代和/或新的氨基酸，例如以下文獻(xiàn)中所述的Ghetie等，1997,NatBiotech.，15:637-40；Duncan等，1988，Nature,332:563-564；Lund等，1991，J.Immunol,147:2657-2662；Lund等，1992，MolTmmunol,29:53-59;Alegre等，1994,Transplantation,571537-1543;Hutchins等，1995,ProcNatl.AcadSciUSA，92:11980-11984Jefferis等，1995，ImmunolLett.,44:111-117；Lund等，1995,FasebJ,9:115-119；Jefferis等，1996,TmmunolLett,54:101-104;Lund等，1996,JTmmunol,157:4963-4969;Armour等，1999,EurJTmmunol,292613-2624；Idusogie等，2000，JImmunol,164:4178-4184;Reddy等，2000，JTmmunol,164:1925-1933；Xu等，2000，CellImmunol,200:16-26；Idusogie等，2001，JImmunol,166:2571-2575；Shields等，2001，JBiolChem,276:6591-6604Jefferis等，2002，TmmunolLett,82:57-65；Presta等，2002,BiochemSocTrans,30:487-490;美國(guó)專利號(hào)5，624，821；5,885，573；5,677，425；6,165，745；6,277，375；5,869，046；6,121，022；5，624，821；5,648，260；6,194，551；6,737，056；6,821，505；6,277，375;美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/370，749和PCT公開(kāi)WO94/2935；W099/58572；W000/42072；W002/060919；W004/029207。本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解Fe區(qū)的其它修飾/取代?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的許多方法制備在Fe區(qū)域含有修飾/取代和/或新氨基酸殘基的本發(fā)明抗體。非限制性例子包括分離抗體或編碼區(qū)(例如，從雜交瘤分離)，在該分離的抗體編碼區(qū)中制作一個(gè)或多個(gè)所需取代。或者，可將本發(fā)明抗體的可變區(qū)亞克隆入編碼含有ー個(gè)或(多個(gè))修飾/取代和/或新的氨基酸殘基的Fe區(qū)的載體中。也可修飾本發(fā)明抗體而改變?cè)摽贵w的糖基化，再次改變其一種或多種功能特性。在一個(gè)實(shí)施方式中，修飾本發(fā)明抗體的糖基化。例如，可制備去糖基化(aglycosylate)的抗體(即，該抗體缺乏糖基化)?？筛淖兲腔瘡亩?，例如提高該抗體對(duì)靶抗原的親和カ。這種碳水化合物修飾可伴有，例如抗體序列中一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)的改變。例如，可制作一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代從而消除一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)框架的糖基化位點(diǎn)進(jìn)而消除該位點(diǎn)的糖基化。這種去糖基化可提高該抗體對(duì)抗原的親和力。美國(guó)專利號(hào)5，714，350和6，350，861進(jìn)ー步詳述了這種方法?；蛘?，可將本發(fā)明抗體制成具有改變的糖基化類型，例如巖藻糖基殘基含量減少的低巖藻糖基化(hypofucosylated)抗體或含有GlcNAc雙剖面結(jié)構(gòu)增強(qiáng)的抗體。已證明這種改變的糖基化模式提高了抗體的ADCC能力。這種碳水化合物修飾可伴有，例如在宿主細(xì)胞中表達(dá)改變了糖基化機(jī)制的抗體。本領(lǐng)域已描述了含有改變糖基化機(jī)制的細(xì)胞，這些細(xì)胞可用作宿主細(xì)胞來(lái)表達(dá)本發(fā)明重組抗體從而產(chǎn)生具有改變糖基化的抗體?？蓞⒁?jiàn)，例如Shields,R.L.等，(2002)，J.Biol.Chem.，277:26733-26740；Umana等，(1999)，Nat.Biotech.，17:176-1，以及歐洲專利號(hào)EPI,176，195；PCT公開(kāi)WO03/035835；W099/54342。如下文所詳述的，可単獨(dú)使用本發(fā)明抗體或與其它組合物聯(lián)用。所述抗體還可在N-或C-末端與異源多肽重組融合，或與多肽或其它組合物化學(xué)綴合(包括共價(jià)和非共價(jià)綴合)。例如，本發(fā)明抗體可與在檢測(cè)試驗(yàn)中用作標(biāo)記物的分子和效應(yīng)分子，例如異源多肽、藥物、放射性核素或毒素融合或綴合。參見(jiàn)，例如PCT公開(kāi)WO92/08495；W091/14438；W089/12624;美國(guó)專利號(hào)5，314，995和EP396,387。本發(fā)明抗體包括經(jīng)修飾的衍生物，即通過(guò)使任何類型的分子與該抗體共價(jià)連接，但該共價(jià)連接不會(huì)阻止該抗體與HMGl和/或HMG2多肽或其片段結(jié)合和/或產(chǎn)生所需反應(yīng)。例如但不限于抗體衍生物包括經(jīng)修飾的抗體，例如用已知的保護(hù)/封閉基團(tuán)、蛋白酶解切割、與細(xì)胞配體或其它蛋白質(zhì)連接等(實(shí)現(xiàn))糖基化、こ酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生?？赏ㄟ^(guò)已知技術(shù)，包括但不限于特異性化學(xué)切割、こ?；?、甲?；⒁旅顾氐拇x合成等進(jìn)行各種化學(xué)修飾。此外，所述衍生物可含有ー個(gè)或多個(gè)非典型氨基酸。見(jiàn)下文，名為“抗體衍生物和綴合物”的章節(jié)5.5。也可根據(jù)它們的交叉反應(yīng)性描述或指定本發(fā)明抗體。包括不與本發(fā)明多肽的任何其它類似物、直向同源物或同源物結(jié)合的抗體。本發(fā)明也包括能與和本發(fā)明的人HMGl多肽(例如，人HMGlA框或B框)具有至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%和至少50%相同性(利用本領(lǐng)域已知和本文所述方法計(jì)算)的多肽結(jié)合的抗體。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與人HMGl蛋白及其相應(yīng)表位的小鼠、大鼠和/或家兔同源物交叉反應(yīng)。本發(fā)明也包括能與和人HMG2(例如，人HMG2A框或B框)具有至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%和至少50%相同性(利用本領(lǐng)域已知和本文所述方法計(jì)算)的多肽結(jié)合的抗體。還考慮了能與人HMG2多肽或其片段結(jié)合的抗體可與人HMGl蛋白及其相應(yīng)表位的小鼠、大鼠和/或家兔同源物交叉反應(yīng)。本發(fā)明也包括不能與和本發(fā)明HMGl和/或HMG2多肽具有小于95%、小于90%、小于85%、小于80%、小于75%、小于70%、小于65%、小于60%、小于55%和小于50%相同性(利用本領(lǐng)域已知和本文所述方法計(jì)算)的多肽結(jié)合的抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，能與HMGl多肽或其片段特異性結(jié)合的抗體或其片段能預(yù)防/拮抗/抑制以下一種或多種情況=HMGBl與RAGE結(jié)合、HMGBl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)結(jié)合、HMGBI與細(xì)胞表面(例如，THP-I細(xì)胞)結(jié)合、HMGI-介導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子釋放、HMGl-介導(dǎo)的炎癥、HMGI-介導(dǎo)的膿毒癥、HMGl-介導(dǎo)的炎癥(例如，關(guān)節(jié)的炎癥)和HMGl-介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。可通過(guò)本領(lǐng)域已知的ー種或多種方法檢測(cè)這些活性。參見(jiàn)，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223;及下文名為“實(shí)施例”的章節(jié)6。術(shù)語(yǔ)“50%抑制濃度”(簡(jiǎn)寫(xiě)為“IC5(I”)表示抑制該抑制劑所靶向分子(例如，HMG1)某給定活性的50%所需的抑制劑(例如，本發(fā)明抗體)濃度。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知道較低的IC5tl值對(duì)應(yīng)于更強(qiáng)效的抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體抑制HMGl-介導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子釋放的IC5tl值是小于5000ng/ml、或小于4000ng/ml、或小于3000ng/ml、或小于2000ng/ml、或小于1000ng/ml、或小于500ng/ml、或小于250ng/ml、或小于IOOng/ml、或小于50ng/ml、或小于10ng/ml或小于5ng/ml。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體抑制HMGl-介導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子釋放的IC5tl值是小于ΙΟΟΟηΜ、或小于500nM、或小于250nM、或小于ΙΟΟηΜ、或小于50nM、或小于25nM、或小于ΙΟηΜ、或小于5nM、或小于O.25nM、或小于O.InM或小于O.OlnM0在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能預(yù)防/拮抗/抑制HMGl與RAGE結(jié)合，但基本上不影響HMGl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)結(jié)合。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能預(yù)防/拮抗/抑制HMGl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)結(jié)合，但基本上不影響HMGl與RAGE結(jié)合。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能預(yù)防/拮抗/抑制HMGl與RAGE結(jié)合并抑制HMGl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)結(jié)合?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的ー種或多種方法檢測(cè)這些活性。參見(jiàn)，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223;及下文名為“實(shí)施例”的章節(jié)6。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能抑制HMGl與RAGE的結(jié)合至少約10%、或至少約20%、或至少約30%、或至少約40%、或至少約50%、或至少約60%、或至少約70%、或至少約80%、或至少約90%、或至少約100%。在另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能抑制HMGl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)的結(jié)合至少約10%、或至少約20%、或至少約30%、或至少約40%、或至少約50%、或至少約60%、或至少約7%、或至少約80%、或至少約90%、或至少約100%。在另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能抑制HMGl與RAGE的結(jié)合至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%、或至少100%。在另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能抑制HMGl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)的結(jié)合至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%、或至少100%。如本文所述，這些抗體能區(qū)分從不同來(lái)源分離的同一種多肽。不希望受任何具體理論的束縛，但可通過(guò)許多差異來(lái)區(qū)分從不同來(lái)源分離的有相似或相同氨基酸序列的多肽，所述差異包括但不限于翻譯后修飾(例如，磷酸化、こ酰化、甲基化、糖基化等)、總體結(jié)構(gòu)中的改變(例如，ニ硫鍵和/或折疊的改變)和可能與該多肽有關(guān)的任何其它分子的差異(例如，鹽、其它亞基，如多核苷酸和/或其它多肽)。在一個(gè)實(shí)施方式中，與天然HMGl(例如，從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織分離)相比,本發(fā)明抗體對(duì)大腸桿菌重組產(chǎn)生的HMGl特異性結(jié)合親和力相同或較高。在另ー實(shí)施方式中，與大腸桿菌重組產(chǎn)生的HMGl相比，本發(fā)明抗體對(duì)天然HMGl(例如，從哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織分離)特異性結(jié)合親和力相同或較高。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與天然HMGl的ー種或多種形式結(jié)合，所述天然HMGl包括但不限于核HMGl(例如，通過(guò)凍融法從細(xì)胞中分離)、釋放的HMGl(例如，從壞死細(xì)胞上清液中分離)和激活的HMGl(例如，從刺激的細(xì)胞，如LPS刺激的細(xì)胞中分離)。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體不能與天然HMGl的ー種或多種形式結(jié)合，所述天然HMGl包括但不限于核HMGl(例如，通過(guò)凍融法從細(xì)胞中分離)、釋放的HMGl(例如，從壞死細(xì)胞的上清液中分離)和激活的HMGl(例如，從刺激的細(xì)胞，如LPS刺激的細(xì)胞中分離)。本文公開(kāi)了獲得天然和重組HMGl的具體方法(參見(jiàn)，下文實(shí)施例2)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與可溶性HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與固定的HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合。在還有另一實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與可溶性和不溶性的HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合。如上所述，已知HMGl和HMG2是結(jié)合多核苷酸(即，DNA和RNA)的蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能與HMGl和/或HMG2結(jié)合，而所述HMGl和/或HMG2與某多核苷酸分子結(jié)合。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體能預(yù)防/拮抗/抑制以下一種或多種情況HMGBl與RAGE結(jié)合、HMGBl與ー種或多種Toll-樣受體(例如，TLR2和TLR4)結(jié)合、HMGBl與細(xì)胞表面(例如，THP-I細(xì)胞)結(jié)合、HMGl-介導(dǎo)的促炎細(xì)胞因子釋放、HMGl-介導(dǎo)的炎癥、HMGl-介導(dǎo)的膿毒癥、HMGl-介導(dǎo)的炎癥(例如，關(guān)節(jié)的炎癥)和HMGl-介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎，而所述HMGl與某多核苷酸結(jié)合。在具體的實(shí)施方式中，所述多核苷酸分子是能促進(jìn)炎性反應(yīng)的分子(例如，源自微生物或壞死細(xì)胞的多核苷酸)。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與こ酰化HMGl結(jié)合的親和カ高于非こ?；疕MGl的。在另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與非こ酰化HMGl結(jié)合的親和カ高于こ?；疕MGl的。在還有另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與こ?；疕MGl和非こ?；疕MGl結(jié)合的親和カ基本相同。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人或其它動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物的HMGl多肽或其抗原性片段或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人HMGl多肽(SEQIDNO1或2)或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的HMGl多肽(參見(jiàn)，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:I或2所示人HMGl多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的HMGl多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:3所示人HMGlA框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:4和/或SEQIDNO28和/或SEQIDNO29所示人HMGlB框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人或其它動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物的HMG2多肽或其抗原性片段或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有人HMG2多肽(SEQIDN021)或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。本領(lǐng)域熟知人和其它動(dòng)物的HMG2多月太。參見(jiàn),例如Jantzen等，1990,Nature,344:830-6；Kolodrubetz,1990,NucleicAcidsRes.,18:5565；Laudet等，1993，NucleicAcidsRes.,21:2493-501和Thomas等，2001，TrendsBiochemSci.,26:167_74。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:21所示人HMG2多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的HMG2多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:22所示人HMG2A框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體能特異性結(jié)合的多肽含有與SEQIDNO:23所示人HMG2B框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其構(gòu)成(或基本上由其構(gòu)成)。例如，可通過(guò)以最佳比較為目的比對(duì)序列(例如，可在第一條序列的序列中引入空位)來(lái)測(cè)定兩條氨基酸序列(或兩條核酸序列)的相同性百分比。然后比較相應(yīng)位置的氨基酸或核苷酸，兩條序列間的相同性百分比是兩條序列所共有的相同位置數(shù)的函數(shù)(即，％相同性=相同位置數(shù)目/位置總數(shù)X100)?？赏ㄟ^(guò)熟知方法，例如利用數(shù)學(xué)算法進(jìn)行兩條序列的實(shí)際比較。這種數(shù)學(xué)算法的具體的非限制性例子描述于Karlin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:5873-5877,(1993)。如Schaffer等，NucleicAcidsRes.,292994-3005，(2001)所述這種算法已納入在BLASTN和BLASTX程序(2.2版)中。當(dāng)采用BLAST和空位BLAST程序時(shí)，可采用各程序(例如，BLASTN)的默認(rèn)參數(shù)。參見(jiàn)http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov,2002年4月10日可用。在一個(gè)實(shí)施方式中，檢索的數(shù)據(jù)庫(kù)是非冗余(NR)數(shù)據(jù)庫(kù),用于序列比較的參數(shù)可設(shè)置為無(wú)濾過(guò)(nofilters);預(yù)期值(Expectvalue)為10;字大小(WordSize)為3;矩陣是BL0SUM62;存在ー個(gè)空位為11和延伸為I。用于序列比較的數(shù)學(xué)算法的另ー非限制性例子是Myers和Miller算法，CABIOS(1989)ο該算法已納入ALIGN程序(2.O版)中，該程序是GCG(Accelrys)序列比對(duì)軟件包的一部分。當(dāng)利用ALIGN程序比對(duì)氨基酸序列時(shí)，可利用PAM120加權(quán)殘差表(weightresiduetable)、ー個(gè)空位長(zhǎng)罰分12、ー個(gè)空位罰分4。本領(lǐng)域已知用于序列分析的其它算法，這些算法包括Torellis和Robotti,Comput.Appl.Biosci.,10:3_5，(1994)所述的ADVANCE和ADAM，及Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.SciUSA,85:2444-8,(1988)所述的FASTA。在另一實(shí)施方式中，可利用GCG軟件包的GAP程序(http://www.accelrys.com,2001年8月31日可用)測(cè)定兩條氨基酸序列間的相同性百分比，該程序利用Blossom63矩陣或PAM250矩陣,空位加權(quán)(gapweight)12、10、8、6或4,長(zhǎng)度加權(quán)(lengthweight)2、3或4。在還有另ー實(shí)施方式中，可利用GCG軟件包的GAP程序(在http://www.cgc.com得到)測(cè)定兩條核酸序列間的相同性百分比，該程序采用空位加權(quán)50，長(zhǎng)度加權(quán)3。在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，所述抗體與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合的解離常數(shù)或KdUktJ小于10_5M、或小于10_6M、或小于10_7M、或小于10_8M、或小于1(Γ9Μ、或小于ΙΟ,Μ、或小于10_ηΜ、或小于10_12Μ、或小于10_13Μ、或小于5Χ1(Γ13Μ、或小于1(Γ14Μ、或小于5Χ10_14Μ、或小于10_15Μ、或小于5Χ10_15Μ。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMGl及其抗原性片段特異性結(jié)合的解離常數(shù)或KdUkJ介于約10_7Μ-約10_8Μ之間、介于約IQ-8M-約10_9Μ之間、介于約ΙΟ—、-約ΙΟ,Μ之間、介于約I(T10M-約10_ηΜ之間、介于約10_nM-約KT12M之間、介于約IO-12M-約10_13M之間、介于約KT13M-約10_14M之間。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMGl及其抗原性片段結(jié)合的解離常數(shù)或KdG^ffZXJ介于約1(Γ7Μ-約KT8M之間、介于約1(Γ8Μ-約KT9M之間、介于約1(Γ9Μ-約KTkiM之間、介于約ΙΟ,Μ-約10_ηΜ之間、介于約10_ηΜ-約10_12Μ之間、介于約10_12Μ-約10_13Μ之間、介于約KT13M-約1(Γ14Μ之間。在本發(fā)明的另ー實(shí)施方式中，所述抗體與HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合的解離常數(shù)或KdUktJ小于10_5Μ、或小于10_6M、或小于10_7Μ、或小于10_8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于ΙΟ,Μ、或小于10_ηΜ、或小于10_12Μ、或小于10_13Μ、或小于5Χ1(Γ13Μ、或小于1(Γ14Μ、或小于5Χ10_14Μ、或小于10_15Μ、或小于5Χ10_15Μ。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMG2及其抗原性片段特異性結(jié)合的解離常數(shù)或Kd(kjkj介于約10_7Μ-約10_8Μ之間、介于約IO-8M-約10_9Μ之間、介于約ΙΟ—、-約ΙΟ,Μ之間、介于約I(T10M-約10_ηΜ之間、介于約IO-11M-約KT12M之間、介于約IO-12M-約10_13Μ之間、介于約KT13M-約10_14Μ之間。在還有另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMG2及其抗原性片段結(jié)合的解離常數(shù)或KdG^ffZXJ介于約1(Γ7Μ-約KT8M之間、介于約1(Γ8Μ-約KT9M之間、介于約1(Γ9Μ-約KTkiM之間、介于約ΙΟ,Μ-約10_ηΜ之間、介于約10_ηΜ-約10_12Μ之間、介于約10_12Μ-約10_13Μ之間、介于約KT13M-約1(Γ14Μ之間。本領(lǐng)域熟知平衡解離常數(shù)(Kd)定義為kf/kw—般知道具有低Kd(S卩，高親和カ)的結(jié)合分子(例如，抗體)優(yōu)于具有高Kd(S卩，低親和力)的結(jié)合分子(例如，抗體)。然而在一些情況中，km或kf值比Kd值更相關(guān)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能確定哪種動(dòng)力學(xué)參數(shù)對(duì)于某給定抗體的應(yīng)用最重要。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體對(duì)某種抗原的Kd低于對(duì)其它抗原的。在另ー實(shí)施方式中，所述抗體與HMGl及其抗原性片段結(jié)合的kf值小于IXΙΟ、—1或小于SXlO-3S'在其它實(shí)施方式中，所述抗體與HMGl及其抗原性片段結(jié)合的匕值小于KT3S'小于5XKT3S'小于10小于5Χ10ΛΓ1、小于l(T5s'小于5Χl(T5s'小于KT6S'小于5XKT6S'小于KT7S'小于5XKT7S'小于1θΛ'小于5X1θΛ'小于ΙΟΛ-1、小于5XIO-V1或小于IO-10S'在另ー實(shí)施方式中，所述抗體與HMG2及其抗原性片段結(jié)合的Iitjff值小于IXΙΟ、—1或小于SXlO-3S'在其它實(shí)施方式中，所述抗體與HMG2及其抗原性片段結(jié)合的匕值小于KT3S'小于5XKT3S'小于10小于5Χ10ΛΓ1、小于l(T5s'小于5Χl(T5s'小于KT6S'小于5XKT6S'小于KT7S'小于5XKT7S'小于1θΛ'小于5X1θΛ'小于ΙΟΛ-1、小于5XIO-V1或小于IO-10S'在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMGl和/或其抗原性片段結(jié)合的締合速率常數(shù)或km速率值是至少IO5MW至少5XIO5IT1s'至少lOfs—1、至少5XIO6IT1s'至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明抗體與HMG2和/或其抗原性片段結(jié)合的締合速率常數(shù)或km速率值是至少IO5MW至少5XIO5M-1S'至少lOfs—1、至少5XIO6IT1s'至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'與所有多肽相似，所述抗體具有等電點(diǎn)(Pl)，其通常定義為多肽不攜帶凈電荷時(shí)的pH。本領(lǐng)域已知當(dāng)溶液的pH等于該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度通常最低。本文所用的Pi值定義為主要帶電荷形式的pi。可通過(guò)各種方法，包括但不限于等電聚焦和各種計(jì)算機(jī)算法測(cè)定蛋白質(zhì)的pi(參見(jiàn)，例如Bjellqvist等，1993,Electrophoresis,141023)。此外，抗體Fab結(jié)構(gòu)域的熱解鏈溫度(Tm)可作為抗體熱穩(wěn)定性的良好指標(biāo)，還可進(jìn)一歩表示保存期限。Tm較低表明凝聚較多/穩(wěn)定性較差，而Tm較高表明凝聚較少/穩(wěn)定性較好。因此，某些實(shí)施方式優(yōu)選Tm較高的抗體?？刹捎帽绢I(lǐng)域已知的任何標(biāo)準(zhǔn)方法，例如示差掃描量熱法檢測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域(例如，F(xiàn)ab結(jié)構(gòu)域)的Tm(參見(jiàn),例如Vermeer等，2000，Biophys.J.，78:394-404；Vermeer等，2000，Biophys.J.，79:2150-2154)。因此，本發(fā)明的其它非排他性實(shí)施方式包括具有某些優(yōu)選生化特征(例如特定等電點(diǎn)(PD或解鏈溫度(Tm))的本發(fā)明高親和カ抗體。更具體地說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的pi范圍是5.5-9.5。在還有另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Pl范圍是約5.5-約6.O、或約6.O-約6.5、或約6.5-約7.O、或約7.O-約7.5、或約7.5-約8.O、或約8.O-約8.5、或約8.5-約9.O、或約9.O-約9.5。在其它具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的pi范圍是5.5-6.O、或6.0-6.5、或6.5-7.O、或7.0-7.5、或7.5-8.O、或8.0-8.5、或8.5-9.O、或9.0-9.5。甚至更具體地說(shuō)，本發(fā)明高親和カ抗體的Pl是至少5.5、或至少6.O、或至少6.3、或至少6.5、或至少6.7、或至少6.9、或至少7.I、或至少7.3、或至少7.5、或至少7.7、或至少7.9、或至少8.I、或至少8.3、或至少8.5、或至少8.7、或至少8.9、或至少9.I、或至少9.3、或至少9.5。在其它具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Pl是至少5.5、或至少6.O、或至少6.3、或至少6.5、或至少6.7、或至少6.9、或至少7.I、或至少7.3、或至少7.5、或至少7.7、或至少7.9、或至少8.I、或至少8.3、或至少8.5、或至少8.7、或至少8.9、或至少9.I、或至少9.3、或至少9.5?？赡芡ㄟ^(guò)改變抗體中可電離殘基的數(shù)目和位置來(lái)調(diào)節(jié)pi從而優(yōu)化溶解性。例如，可通過(guò)制作合適的氨基酸取代(例如，用帶電荷的氨基酸，如賴氨酸取代不帶電荷的殘基，如丙氨酸)來(lái)調(diào)節(jié)多肽的P〗。不希望受任何具體理論的束縛，抗體中導(dǎo)致所述抗體Pi改變的氨基酸取代可提高抗體的溶解性和/或穩(wěn)定性。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道哪種氨基酸取代最適合具體抗體實(shí)現(xiàn)所需的Pi。在一個(gè)實(shí)施方式中，在本發(fā)明抗體中產(chǎn)生取代以改變pi。特別考慮了能導(dǎo)致與FeYR結(jié)合改變的Fe區(qū)取代(如上所述)也可導(dǎo)致Pl改變。在另ー實(shí)施方式中，專門(mén)選擇Fe區(qū)取代以實(shí)現(xiàn)FeYR結(jié)合(力)的改變和所需的pi改變。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Tm范圍是65°C_120°C。在具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Tm范圍是約75V-約120°C、或約75V-約85で、或約85°C-約95°C、或約95°C-約105°C、或約105°C-約115°C、或約115°C-約120°C。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Tm范圍是75°C_120°C、或75°C_85°C、或85°C-95V,或95°C_105°C、或105°C_115°C、或115°C_120°C。在還有其它具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Tm是至少約65°C、或至少約70°C、或至少約75°C、或至少約80°C、或至少約85°C、或至少約90°C、或至少約95°C、或至少約100°C、或至少約105°C、或至少約110°C、或至少約115°C、或至少約120°C。在還有其它具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體的Tm是至少65で、或至少70°C、或至少75で、或至少80°C、或至少85で、或至少90°C、或至少95°C、或至少100°C、或至少105°C、或至少110°C、或至少115°C、或至少120°C。在一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明高親和カ抗體或其片段是人抗體或人源化抗體。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明也包括能以高親和力與HMGl特異性結(jié)合的特定抗體(及其片段)。具體地說(shuō)，本文將抗-HMGl抗體分別稱為“32”、“36”、“316”和“64”，這些抗體由美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所(10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110-2209)保藏，分別指定了ATCC保藏號(hào)PTA-6142、PTA-6143、PTA-6259和PTA-6258。這些保藏物按照國(guó)際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約的條款而維持。由于提及的這些抗體株按照布達(dá)佩斯條約的條款而維持，則簽署了布達(dá)佩斯條約的專利局可獲得這些抗體株。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明包括的抗體含有本文公開(kāi)的ー個(gè)或多個(gè)可變區(qū)(參見(jiàn)圖2A-J,SEQIDNO:5-20,24-27和30-73)能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合。本發(fā)明也包括G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的變體，它們?cè)谳p鏈可變(Vl)結(jié)構(gòu)域和/或重鏈可變(Vh)結(jié)構(gòu)域中含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基取代。本發(fā)明也包括G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J,SEQIDNO:5-20，24-27和30-73)的變體，它們?cè)讴`個(gè)或多個(gè)\CDR和/或一個(gè)或多個(gè)VhCDR中含有一個(gè)或多個(gè)其它氨基酸殘基取代?？稍隗w外或體內(nèi)測(cè)試通過(guò)在G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參見(jiàn)圖2A-J,SEQIDNO:5-20，24-27和30-73)的Vh結(jié)構(gòu)域、Vh⑶R、Vl結(jié)構(gòu)域和/或'⑶R中引入取代而產(chǎn)生的抗體，例如測(cè)試其與HMGl和/或HMG2結(jié)合的能力(如通過(guò)免疫測(cè)定，包括但不限于=ELISA和BIAcore)，或其抑制HMGl誘導(dǎo)細(xì)胞因子釋放，預(yù)防、治療、控制或緩解炎性疾病或其ー種或多種癥狀的能力。應(yīng)該知道本文所提及的互補(bǔ)決定區(qū)(OTR)殘基編號(hào)是Kabat等，(1991，NIH出版物91-3242,NationalTechnicalInformationService,Springfield,VA)所述的那些(編號(hào))。具體說(shuō)是輕鏈可變區(qū)中的殘基24-34(⑶Rl)、50-56(⑶R2)和89-97(⑶R3)，重鏈可變區(qū)中的殘基31-35(⑶Rl)、50-65(⑶R2)和95-102(⑶R3)。應(yīng)注意抗體與抗體之間的⑶R差別巨大(根據(jù)定義未顯示與Kabat共有序列的同源性)?？蚣軞埢淖畲蟊葘?duì)往往需要將“間隔”殘基插入要用于Fv區(qū)的編號(hào)系統(tǒng)。應(yīng)該知道本文提及的CDR是Kabat等(同上)所述的那些(CDR)。此外，因?yàn)榉N間或等位基因趨異，位于任何給定Kabat位置編號(hào)的某些單個(gè)殘基身份在抗體鏈與抗體鏈之間可能不同。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明包括含有至少ー個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或至少六個(gè)本文所述CDR(參見(jiàn)，例如圖2A-J，CDR以下劃線標(biāo)出)的抗體。在還有其它實(shí)施方式中，本發(fā)明包括的抗體能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合，其含有的VhCDR具有表3所列任一VhCDR的氨基酸序列和/或衍生自表3所列任一抗體重鏈可變區(qū)的重鏈可變區(qū)。在另一具體實(shí)施方式中，本發(fā)明包括的抗體能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合，其含有的\CDR具有表3所列任一\CDR的氨基酸序列和/或衍生自表3所列任一抗體輕鏈可變區(qū)的輕鏈可變區(qū)。本發(fā)明包括的抗體能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合，其含有能與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合的本文所述Vh結(jié)構(gòu)域、Vh⑶R、ん結(jié)構(gòu)域或ん⑶R的衍生物?？刹捎帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將突變(例如，添加、缺失和/或取代)引入編碼本發(fā)明抗體的核苷酸序列，所述技術(shù)包括例如常規(guī)采用定點(diǎn)誘變和PCR-介導(dǎo)的誘變來(lái)產(chǎn)生氨基酸取代。在一個(gè)實(shí)施方式中，與最初的Vh和/或VfDR相比，Vh和/或\⑶R衍生物包含少于25個(gè)氨基酸取代、少于20個(gè)氨基酸取代、少于15個(gè)氨基酸取代、少于10個(gè)氨基酸取代、少于5個(gè)氨基酸取代、少于4個(gè)氨基酸取代、少于3個(gè)氨基酸取代或少于2個(gè)氨基酸取代。在另ー實(shí)施方式中，Vh和/或んCDR衍生物在一個(gè)或多個(gè)預(yù)計(jì)的非必需氨基酸殘基(即，對(duì)于抗體與HMGl和/或HMG2特異性結(jié)合不是至關(guān)重要的氨基酸殘基)處具有保守性氨基酸取代(例如，同上)?；蛘?，可沿著整個(gè)Vh和/或\CDR編碼序列或其一部分隨機(jī)引入突變，例如通過(guò)飽和誘變，可篩選得到的突變體的生物學(xué)活性以鑒定保留了活性的突變體。誘變后，可表達(dá)所編碼的抗體，測(cè)定該抗體的活性。本發(fā)明也包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體包含的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列與G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同。本發(fā)明也包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體包含的重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列與62、64、69、612、616、620、634、635、52、56、510、512、514、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的重鏈和/或輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列有至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%相同。本發(fā)明還包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體或抗體片段包含的ー個(gè)或多個(gè)CDR的氨基酸序列與G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的一個(gè)或多個(gè)⑶R的氨基酸序列有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同。本發(fā)明還包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體或抗體片段包含的ー個(gè)或多個(gè)CDR的氨基酸序列與G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的ー個(gè)或多個(gè)CDR的氨基酸序列有至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或至少約99%相同?？刹捎帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法(包括BLSAT蛋白質(zhì)檢索)測(cè)定兩條氨基酸序列的相同性百分比。本發(fā)明也包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體由能在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的核苷酸序列雜交的核苷酸序列編碼。在另ー實(shí)施方式中，本發(fā)明包括能與HMGl和/或HMG2或其片段特異性結(jié)合的抗體，所述抗體含有的ー個(gè)或多個(gè)⑶R由能在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參見(jiàn)圖2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的一個(gè)或多個(gè)CDR的核苷酸序列雜交的核苷酸序列編碼。嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件包括但不限于約45°C在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中與濾膜結(jié)合的DNA雜交，然后在約50-65°C用O.2XSSC/0.1%SDS洗滌一次或多次，高度嚴(yán)謹(jǐn)性條件例如約45°C在6XSSC中與濾膜結(jié)合的DNA雜交，然后在約60°C用O.1XSSC/0.2%SDS洗滌一次或多次，或者本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何其它嚴(yán)謹(jǐn)性雜交條件(參見(jiàn)，例如，Ausubel,F.Μ.等編，1989,CurrentProtocolsinMolecularBiology(《最新分子生物方法》)，第一卷，GreenPublishingAssociates,Inc.和JohnWileyandSons,Inc.，紐約，第6.3.1-6.3.6頁(yè)和2·10.3頁(yè))。具有保藏抗體的至少ー個(gè)、至少兩個(gè)、至少三個(gè)、至少四個(gè)、至少五個(gè)或所有六個(gè)⑶R的抗體是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。編碼這些抗體(及其片段)的分離的多核苷酸也是本發(fā)明的具體實(shí)施方式。“S2”、“S4”、“S16”和“G4”以及本發(fā)明其它幾種特定杭-HMGl抗體的結(jié)合與功能特征見(jiàn)表I。表I-抗-HMGl抗體a的特征和保藏信息權(quán)利要求1.一種與人HMGBl多肽或其抗原性片段特異性結(jié)合的分離的抗體，其中所述抗體與所述人HMGBl多肽或其抗原性片段結(jié)合的解離常數(shù)(Kd)等于或小于39nM。2.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體與所述人HMGBl多肽或其抗原性片段結(jié)合的解離常數(shù)(Kd)在22nM和39nM之間。3.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體與含有人HMGBlB框的多肽特異性彡口口4.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體與由人HMGBlB框構(gòu)成的多肽特異性結(jié)合。5.如權(quán)利要求3所述的抗體，其特征在于，所述人HMGBlB框選自SEQIDNO3；SEQIDNO:28和SEQIDNO:29。6.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體與基本上由SEQIDNO4所示的人HMGBlA框構(gòu)成的多肽特異性結(jié)合。7.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體與由SEQIDNO:4所示的人HMGBlA框構(gòu)成的多肽特異性結(jié)合。8.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體選自單克隆抗體、人源化抗體、嵌合型抗體、單鏈Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、胞內(nèi)抗體和合成抗體。9.如權(quán)利要求I、2、3、4、5、6、7或8所述的抗體，其特征在于，所述抗體是人抗體或其抗原性結(jié)合片段。10.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體的Pl介于6.5-9.5之間。11.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，所述抗體的Tm介于65°C_95°C之間。12.如權(quán)利要求9所述的抗體，其特征在于，所述抗體抑制用高遷移率族(HMG)蛋白處理的脊椎動(dòng)物細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子。13.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，當(dāng)給予小鼠時(shí)，所述抗體在小鼠CLP膿毒癥模型中至少有30%保護(hù)作用。14.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，當(dāng)給予嚙齒類動(dòng)物時(shí)，所述抗體在至少一種嚙齒類動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型中至少有30%保護(hù)作用。15.如權(quán)利要求14所述的抗體，其特征在于，所述嚙齒類動(dòng)物關(guān)節(jié)炎模型選自小鼠被動(dòng)性膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型、小鼠主動(dòng)性膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型和大鼠佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型。16.如權(quán)利要求I所述的抗體，其特征在于，當(dāng)給予小鼠時(shí)，所述抗體在小鼠腹膜炎模型中至少有30%保護(hù)作用。17.—種制備如權(quán)利要求I所述抗體的方法。18.一種含有如權(quán)利要求I所述抗體的抗體組合物。19.一種治療以炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活為特征的病癥的方法，所述方法包括給予治療有效量的至少一種權(quán)利要求I所述抗體。20.一種治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，所述方法包括給予治療有效量的至少一種權(quán)利要求9所述抗體。21.—種診斷、預(yù)后或監(jiān)測(cè)以炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活為特征的病癥的治療效果的方法，所述方法包括a)在合適的抗體-HMGB結(jié)合條件下使生物學(xué)樣品與權(quán)利要求I所述抗體接觸；和b)檢測(cè)所述生物學(xué)樣品中結(jié)合的HMGB。22.一種選自保藏抗體S2、S6、S16或G4的抗體。23.一種與權(quán)利要求22所述保藏抗體的相同表位結(jié)合的抗體，其中所述保藏抗體對(duì)HMGl多肽的親和力相等或較高。全文摘要公開(kāi)了抑制脊椎動(dòng)物細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子和抑制患者的炎性細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)的組合物和方法。所述組合物含有，例如能與HMG1及其抗原性片段特異性結(jié)合的高親和力抗體。本發(fā)明高親和力抗體和含有它的藥物組合物可用于許多目的，例如作為抵御各種炎性疾病和病癥的治療劑，所述疾病和病癥是例如膿毒癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腹膜炎、克羅恩病、再灌注損傷、敗血癥、內(nèi)毒素性休克、囊性纖維化、心內(nèi)膜炎、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、過(guò)敏性休克、器官局部缺血、再灌注損傷和同種異體移植物排斥。此外，本發(fā)明高親和力抗體可用作診斷抗體。文檔編號(hào)G01N33/68GK102731654SQ201210097800公開(kāi)日2012年10月17日申請(qǐng)日期2005年10月21日優(yōu)先權(quán)日2004年10月22日發(fā)明者A·科伊爾,C·B·埃蘭,H·吳,L·-L·安,P·基納,毛素殽,高長(zhǎng)壽申請(qǐng)人:米迪繆尼有限公司