專利名稱：一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
銀屑病是一種常見、纏綿、難治愈、易復(fù)發(fā)、發(fā)病機(jī)理復(fù)雜而尚未被闡明的皮膚病。 自古醫(yī)家視銀屑病為難治病，故有“治病不治癬，治癬必丟臉”之說。本病的發(fā)病率在世界各地差異雖然較大，但是自然人群的患病率均在O. 1% 3%之間。且患病率較高，給患者的身心均帶來極大的痛苦。目前，國內(nèi)外治療銀屑病的藥物主要有皮質(zhì)類固醇類、免疫抑制劑類、維甲酸、鈣泊三醇、蒽林、焦油類等。這些系統(tǒng)及局部治療的藥物種類、數(shù)量雖然不少， 但療效都非常有限，常需要長期進(jìn)行治療、但還是反復(fù)甚至終身不能夠治愈。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種藥效物質(zhì)基礎(chǔ)明確、藥品質(zhì)量穩(wěn)定、安全性高、療效確切、復(fù)發(fā)率低、用量小的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法。上述的目的通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，本方法的分為八個步驟是 第一步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，第二步是薄層色譜鑒別洋中藥金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12 β，27-三羥基_6α、7α-環(huán)氧即20R，22R、_1_酮-醉茄-2、 24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，第三步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，第四步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總黃酮含量的方法，第五步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，第六步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-i3-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0-α-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，第七步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 α、12 β、27_三羥基-6 α、7 α -環(huán)氧-即 20R、22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯、27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，第八步是生物堿的限量檢查方法。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0- β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇2_5ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至4-6ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基-7-0-α-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至9-llml容量瓶中，制成對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上， 以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈254nm 或365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖
基山柰酚。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27三羥基-6α、7α-環(huán)氧即20R， 22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇90-110ml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，制的回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在9-llml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5 α，12 β，27-三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R，22R、_1_酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是8 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干， 噴以9-11%硫酸-乙醇溶液，100-110°C加熱至顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5α，12 β，27-三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R, 22R、-I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成 O. 05-0. 15mg/ml的溶液,另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 05-0. 15mg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊90-110粒，置90-1 IOml容量瓶中，加甲醇50_70ml濕潤后，超聲提取兩次，每次25-35min,濾過,濾液回收至干,殘洛加O. 4-0. 6mol/l的鹽酸90_110ml溶解,用氯仿萃取1-3次、190-210ml/次,棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10,再用氯仿萃取 1-4次、190-210ml/次，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上， 未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含對照品O. 05-1. 5mg的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇9-1 lml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以
3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚計，不得少于 4_5mg0所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品洋金花C，加甲醇配制成每O. 5-1. 5ml含對照品O. 26-3. OOmg的溶液；另取中藥洋金花膠囊20-30粒，加甲醇 90-110ml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液； 水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在
4-6ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液O.5-1. 5ml，供試品溶液O. 04-0. 08ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入O. 5-1. 5%香草醛-高氯酸O. 4-0. 6ml，置50-70°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱10-20min，立即用冰水冷卻l_3min，加入75-80% H2SO4溶液3_7ml， 搖勻，以試劑做空白；照紫外-可見分光光度法檢測；在515-519nm的波長處測定吸光度； 計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C的含量計，不得少于O. 60-0. 70mg。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-i3_D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0_a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為90-110 1-3的水為流動相；檢測波長260-270nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量， 精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含8-12 μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇 8-12ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至40-60ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液8-12 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0- β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于50-60 μ g。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 α、12β、27_三羥基-6 a、7a-環(huán)氧-即20R、 22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯、27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長220-230nm ;理論塔板數(shù)不低于 4000 ;另取洋金花苷C對照品5-10mg，精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含10-11 μ g的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊10-30粒，加甲醇90-110ml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在8-12ml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5 a、12 β，27，三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-20R、22R，-I-酮-醉茄_2， 24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于4 μ g。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)PH至2. 0-4. O ;檢測波長210-220nm ;理論塔板數(shù)不低于2500-3500 ;精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04-0. 06mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 01-0. 03mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊90-110粒，置90_110ml容量瓶中，加甲醇50-70ml濕潤后，超聲提取1-3次，每次30min，濾過，濾液回收至干，殘渣加 O. 3-0. 7mol/l的鹽酸90_110ml溶解，用氯仿萃取1_3次每次180_220ml/次，棄去氯仿液， 母液用氨水堿化至PH9 10，再用氯仿萃取2-4次每次180-220ml/次，合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至O. 5-1. 5ml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于3-7 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 0-3. O μ g/g。所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0- β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇3ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至5ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至IOml容量瓶中，制成對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈254nm 或365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)， 以確定樣品中是否含有3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚；所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12 β，27-三羥基-6 α、7α-環(huán)氧即20R，22R、-I-酮-醉茄_2、24-二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，制的回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5 α，12 β，27-三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液， 作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是8 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以10% 硫酸-乙醇溶液，105°C加熱至顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5α，12β，27_三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷；所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后，超聲提取兩次，每次30min，濾過，濾液回收至干，殘渣加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解， 用氯仿萃取2次、200ml/次,棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取3次、 200ml/次，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開， 取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分；所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚， 加甲醇制成每Iml含對照品O. Img的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚計， 不得少于4. 6mg ；所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每Iml含對照品O. 28mg的溶液；另取中藥洋金花膠囊25粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在5ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液I. 0ml，供試品溶液O. 06ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入I %香草醛-高氯酸O. 5ml，置60°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱15min，立即用冰水冷卻2min，加入77% H2SO4溶液5ml，搖勻，以試劑做空白；照紫外-可見分光光度法檢測；在517nm的波長處測定吸光度；計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C的含量計，不得少于O. 65mg ；所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基、I 葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為100 2的水為流動相；檢測波長268nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10 μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至50ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0-i3-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于56 μ g ;所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α、12β、 27-三羥基-6 α ,7 α -環(huán)氧-即20R、22R、_1_酮-醉茄-2,24- 二烯內(nèi)酯、27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長227nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;另取洋金花苷C對照品5_10mg，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10. 5μ g的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取 30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5a、12 β，27，三羥基-6 a，7a-環(huán)氧-20R、22R，-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于Wg;所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)pH至3. O ;檢測波長217nm ;理論塔板數(shù)不低于 3000 ;精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 02mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后,超聲提取兩次,每次30min,濾過,濾液回收至干，殘洛加O. 5mol/ I的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次每次200ml/次，棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取3次每次200ml/次，合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至Iml 容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于5 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 4 μ g/g ο有益效果I.本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，洋金花中的非生物堿類水溶性成分才具有確切的治療銀屑病的臨床效果，并開展了大量的新藥研究工作，已經(jīng)確定了其治療銀屑病的有效部位，在臨床上也獲得了令人振奮的治療效果。由該有效部位制成的洋金花膠囊，對治療銀屑病這種，且具有服用量小、顯效快、無毒副作用，開發(fā)這種中藥將極大促進(jìn)銀屑病患者的治療。2.本發(fā)明中的洋金花膠囊中的洋金花的非生物堿類水溶性成分是治療銀屑病的有效部位，以此有效部位制成的洋金花膠囊在臨床上治療銀屑病取得了顯著的療效，不僅
11具有洋金花注射液的優(yōu)點(diǎn)，且毒副作用明顯減輕，是一種療效顯著且毒副作用少的新制劑。3.本發(fā)明中的洋金花膠囊是選用洋金花單味入藥制成的中藥制劑，原有以洋金花單味入藥的洋金花注射液對銀屑病具有一定得療效，單由于洋金花總堿具有一定的毒性， 且在治療過程中使患者處于麻醉狀態(tài)，使藥物治療變得繁雜并伴有較高的危險性。因此本申請研究洋金花去除生物堿部分為治療銀屑病的主要成分，所以對此部分進(jìn)行進(jìn)一步的研究開發(fā)，并制定了本申請的質(zhì)量控制方法內(nèi)容。4.本發(fā)明是具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的治療銀屑病的創(chuàng)新藥物；符合臨床醫(yī)療迫切需求和醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要，具有重要的社會需求，也是能夠獲得重大的經(jīng)濟(jì)效益的。5.本發(fā)明是在研制開發(fā)新藥的過程中，也將深入開展洋金花膠囊治療銀屑病的有效成分及其作用機(jī)理等研究，這對于豐富中醫(yī)藥的科學(xué)內(nèi)涵，促進(jìn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化和國際化等也具有積極的作用。6.本發(fā)明可更準(zhǔn)確地檢驗出假藥和劣藥，對中藥現(xiàn)代化和中藥的國際化具有重要意義。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，本方法的分為八個步驟是 第一步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，第二步是薄層色譜鑒別洋中藥金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12 β，27-三羥基_6α、7α-環(huán)氧即20R，22R、_1_酮-醉茄-2、
24-二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，第三步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，第四步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總黃酮含量的方法，第五步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，第六步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-i3-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，第七步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α、12β、27_三羥基_6α、7α-環(huán)氧-即 20R、22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯、27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，第八步是生物堿的限量檢查方法。實(shí)施例2 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L和2 鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇2_3ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至4-6ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至9-llml容量瓶中，制成對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上， 以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈256nm 下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚。實(shí)施例3 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27_三羥基_6α、7α-環(huán)氧即 20R，22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇90-110ml，密塞，超聲提取25_35分鐘，靜置，濾過，制的回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在9-llml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5 α，12 β，27-三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R，22R、_1_酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是8 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干， 噴以9-11%硫酸-乙醇溶液，100-110°C加熱至顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5α，12 β，27-三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R, 22R、-I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷。實(shí)施例4:實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 05-0. 15mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成 O. 05-0. 15mg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊90-110粒，置90_110ml容量瓶中，加甲醇 50-70ml濕潤后,超聲提取兩次,每次25-35min,濾過,濾液回收至干,殘洛加O. 4-0. 6mol/l 的鹽酸90-110ml溶解,用氯仿萃取1-3次、190_210ml/次，棄去氯仿液，母液用氨水堿化至 pH9 10，再用氯仿萃取1-4次、190-210ml/次,合并氯仿液，回收至干,用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分。實(shí)施例5 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml 含對照品O. 05-1. 5mg的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇9-1 lml，密塞，超聲提取
25-35分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚計， 不得少于4_5mg。實(shí)施例6 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每O. 5-1. 5ml含對照品O. 26-3. OOmg的溶液；另取中藥洋金花膠囊20-30粒，加甲醇90-1 IOml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在4-6ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液O. 5-1. 5ml，供試品溶液O. 04-0. 08ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入O. 5-1. 5%香草醛-高氯酸O. 4-0. 6ml，置50-70°C 恒溫水浴上充分混勻后，加熱10-20min，立即用冰水冷卻l_3min，加入75-80 % H2SO4溶液3-7ml，搖勻，以試劑做空白；照紫外-可見分光光度法檢測；在515-519nm的波長處測定吸光度；計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總留體以洋金花苷C的含量計，不得少于 O. 60-0. 70mg。實(shí)施例7 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、 2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為90-110 1-3的水為流動相；檢測波長260-270nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量， 精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含8-12 μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇 8-12ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至40-60ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液8-12 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0- β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于50-60 μ g。實(shí)施例8 實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 α、12β、27_三羥基_6α、7α-環(huán)氧-即 20R、22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯、27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長220-230nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;另取洋金花苷C對照品5-10mg，精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含10-11 μ g 的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊10-30粒，加甲醇90-110ml，密塞，超聲提取25-35分鐘， 靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在8-12ml容量瓶中制成供試品溶液; 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5a、12β，27，三羥基_6 a，7 a -環(huán)氧_20R、22R，_1_酮-醉茄_2， 24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于4 μ g。實(shí)施例9:實(shí)施例I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)PH至2. 0-4. O ;檢測波長210-220nm ;理論塔板數(shù)不低于2500-3500 ； 精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04-0. 06mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 01-0. 03mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊90-110粒，置 90-1 IOml容量瓶中，加甲醇50-70ml濕潤后，超聲提取1_3次，每次30min，濾過，濾液回收至干，殘渣加O. 3-0. 7mol/l的鹽酸90_110ml溶解，用氯仿萃取1_3次每次180_220ml/次， 棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取2-4次每次180-220ml/次，合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至O. 5-1. 5ml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于3-7 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 0-3. O μ g/g。實(shí)施例10 上述實(shí)施例所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，本方法的分為八個步驟是第一步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-i3_D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，第二步是薄層色譜鑒別洋中藥金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27_三羥基_6α、7α-環(huán)氧即20R， 22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，第三步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，第四步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總黃酮含量的方法，第五步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，第六步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0_a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，第七步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 a、12 β、27_三羥基-6 a、7a-環(huán)氧-即20R、22R、-I-酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯、27_0_β-D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，第八步是生物堿的限量檢查方法。所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇2_3ml密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至5ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至IOml容量瓶中，制成對照品溶液； 照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5% 三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈256nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚。所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 a，12 β，27-三羥基-6 a、7 a-環(huán)氧即20R，22R、-I-酮-醉茄_2、24-二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5a，12 β，27-三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄_2，24-二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液， 作為對照品溶液；照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是 8:1: O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以10%硫酸-乙醇溶液，105°C加熱至顯色清晰； 供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5α，12β，27_三羥基_6 a，7 a -環(huán)氧-20R，22R、_1_酮-醉茄_2，24_ 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷。所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后，超聲提取兩次，每次30min，濾過，濾液回收至干，殘渣加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解， 用氯仿萃取2次、200ml/次,棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取3次、 200ml/次，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開， 取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分。所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法(照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB紫外分光光度法測定)，精密稱取對照品 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每Iml含對照品O. Img的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得。中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚計，不得少于4. 6mg。所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法(照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB紫外分光光度法測定)，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每Iml含對照品O. 28mg的溶液；另取中藥洋金花膠囊25粒，加甲醇 IOOml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在5ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液I. 0ml，供試品溶液O. 06ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入I %香草醛-高氯酸O. 5ml，置60°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱15min，立即用冰水冷卻2min，加入77% H2SO4溶液5ml，搖勻，以試劑做空白；照紫外-可見分光光度法檢測；在517nm的波長處測定吸光度；計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C的含量計，不得少于O. 65mg。所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基、 I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法(照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VID高效液相色譜法)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為100 2的水為流動相；檢測波長268nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量， 精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至50ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各 10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于56 μ g。所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α、12β、 27-三羥基-6 a、7a-環(huán)氧-gp 20R、22R、-I-酮-醉茄 _2、24_ 二烯內(nèi)酯、27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法(照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VID高效液相色譜法)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長227nm;理論塔板數(shù)不低于4000 ;另取洋金花苷C對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10. 5μ g的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過， 回收濾液，用2-5ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5a、12β，27，三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-20R、22R，-I-酮-醉茄_2，24-二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于4 μ g。所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄 VID)測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào) pH至3. O ;檢測波長217nm ;理論塔板數(shù)不低于3000 ;精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04mg/ml的溶液,另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 02mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后，超聲提取兩次，每次30min,濾過,濾液回收至干,殘洛加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次每次 200ml/次,棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10,再用氯仿萃取3次每次200ml/次,合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至Iml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于5 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 4 μ g/g。實(shí)施例10 上述所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其步驟是(I)采用薄層鑒別法，以(3-0- β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a-L-鼠李吡喃糖基山柰酚)為對照品，鑒別洋金花膠囊中(3-0-β-D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚)。取中藥洋金花膠囊I粒， 加甲醇適量，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至5ml作為供試品溶液。另取對照品(3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚)2mg，加甲醇定容至IOml容量瓶中，制成對照品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水-冰醋酸(4 6 O. I)為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈(256nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。(2)采用薄層鑒別法，以洋金花苷C (5 a，12 β，27-三羥基_6 a，7 0-環(huán)氧-(201 ， 22R)-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷)為對照品，鑒別洋金花膠囊中洋金花苷C (5 α，12β，27_三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-(20R，22R)-I-酮-醉茄_2，24_ 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷)。取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出。水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中，作為供試品溶液。另取對照品洋金花苷C(5 a，12 β， 27-三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-(20R, 22R) -I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷)，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水(8 I O. I)為展開劑，展開，取出，吹干，噴以10%硫酸-乙醇溶液，105°C加熱至顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。采用薄層色譜鑒別，以氫溴酸東莨菪堿、阿托品為對照品，鑒別洋金花膠囊中生物堿類成分。精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液。取中藥洋金花膠囊100粒,置IOOml容量瓶中， 加甲醇60ml濕潤后,超聲提取兩次,每次30min,濾過,濾液回收至干，殘洛加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次(200ml/次)，棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取3次(200ml/次)，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品。吸取上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水(5 I 0.1)為展開劑，展開，取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，說明洋金花膠囊中不有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分。采用紫外分光光度法，以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(1 — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚為對照品，測定洋金花膠囊有效部位中總黃酮含量。照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB紫外分光光度法測定，精密稱取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每Iml含對照品O. Img的溶液。取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得。中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0- a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚計，不得少于4. 6mg。采用紫外分光光度法，以洋金花苷C為對照品，測定洋金花膠囊有效部位中總甾體含量。照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VIB紫外分光光度法測定，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每Iml含對照品O. 28mg的溶液。另取中藥洋金花膠囊25 粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出。水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在5ml容量瓶中。分別精密量取對照品溶液I. 0ml，供試品溶液O. 06ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入1%香草醛-高氯酸O. 5ml，置60°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱15min，立即用冰水冷卻2min，加入77% H2SO4溶液5ml，搖勻，以試劑做空白。照紫外_可見分光光度法檢測。在517nm的波長處測定吸光度。計算，即得。中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C的含量計，不得少于O. 65mg。采用高效液相法，以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0- a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚為對照品，測定洋金花膠囊有效部位中3-0- β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚的含量。照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VID高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃(100 2)-水為流動相；檢測波長268nm;理論塔板數(shù)不低于4000。取3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(I — 2)葡萄吡喃糖基-7-0-a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液。另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至50ml容量瓶。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。中藥洋金花膠囊每粒含3-0-β -D-葡萄吡喃糖基(1 — 2)葡萄吡喃糖基-7-0- a -L-鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于56 μ g。采用高效液相法，以洋金花苷C(5a，12β，27_三羥基_6α，7α-環(huán)氧-(20R， 22R) -1 -酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷)為對照品，測定洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C (5 a，12 β，27-三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-(20R，22R) _1_酮-醉茄_2， 24-烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷)的含量。照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VID高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長227nm;理論塔板數(shù)不低于4000。另取洋金花苷C對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10. 5μ g的溶液。取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出。水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml 容量瓶中。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測定，即得。中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C (5 a ,12 β ,27-三羥基_6 a，7 a -環(huán)氧-(20R， 22R)-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷)，不得少于4 μ g。采用高效液相的方法，以東莨菪堿、阿托品為對照品，對生物堿限量檢查。照高效液相色譜法(中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VID)測定。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)pH至3. O ;檢測波長217nm ;理論塔板數(shù)不低于3000。精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. lmg/ml 的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 3mg/ml的溶液。取中藥洋金花膠囊 100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后，超聲提取兩次，每次30min，濾過，濾液回收至干，殘洛加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次(200ml/次)，棄去氯仿液,母液用氨水堿化至PH9 10，再用氯仿萃取3次(200ml/次)，合并氯仿液，回收至干,殘洛用甲醇溶解，定容至Iml容量瓶中。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀， 測定，即得。中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于5 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 4 μ g/g ο
權(quán)利要求
1.一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是本方法的分為八個步驟是第一步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-i3_D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，第二步是薄層色譜鑒別洋中藥金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27_三羥基_6α、7α-環(huán)氧即20R， 22R、-I-酮-醉茄-2、24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，第三步是薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，第四步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總黃酮含量的方法，第五步是紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，第六步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中 3-0-β-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0_a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，第七步是高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α、12β、27_三羥基-6 a、7a-環(huán)氧-gp 20R、22R、-I-酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯、27_0_β-D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，第八步是生物堿的限量檢查方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β -D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇2-5ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至4-6ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基_7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至9-llml容量瓶中，制成對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈254nm 或365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)， 以確定樣品中是否含有3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5a，12 β，27_三羥基_6a、 7a-環(huán)氧即20R，22R、-I-酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇90-1 IOml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過， 制的回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在9-llml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5 a，12 β，27-三羥基_6 a，7 a -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5 μ g的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是8 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干， 噴以9-11%硫酸-乙醇溶液，100-110°C加熱至顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5a，12 β，27-三羥基-6 a，7 a -環(huán)氧-20R, 22R、-I-酮-醉茄_2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是: 所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 05-0. 15mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 05-0. 15mg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊90-110粒，置90_1 IOml容量瓶中，加甲醇 50-70ml濕潤后,超聲提取兩次,每次25-35min,濾過,濾液回收至干,殘洛加O. 4-0. 6mol/l 的鹽酸90-110ml溶解,用氯仿萃取1-3次、190_210ml/次，棄去氯仿液，母液用氨水堿化至 pH9 10，再用氯仿萃取1-4次、190-210ml/次,合并氯仿液，回收至干,用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含對照品O. 05-1. 5mg的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇9_llml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖基山柰酹計，不得少于4-5mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每O. 5-1. 5ml含對照品O. 26-3. OOmg的溶液；另取中藥洋金花膠囊20-30粒，加甲醇90-110ml，密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在4-6ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液O. 5-1. 5ml，供試品溶液O. 04-0. 08ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入O. 5-1. 5%香草醛-高氯酸 O. 4-0. 6ml，置50-70°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱10_20min，立即用冰水冷卻l_3min， 加入75-80% H2SO4溶液3-7ml，搖勻，以試劑做空白；照紫外_可見分光光度法檢測；在 515-519nm的波長處測定吸光度；計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C 的含量計，不得少于O. 60-0. 80mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0-α-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為90-110 1-3的水為流動相；檢測波長260-270nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含8-12 μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇8-12ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至40-60ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液8-12 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0- β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L,2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于 50-60 μ go
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5 α、12β、27_三羥基-6 α、7α-環(huán)氧-即20R、22R、-I-酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯、27-0-β _D_葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長 220-230nm ;理論塔板數(shù)不低于4000 ;另取洋金花苷C對照品5-lOmg，精密稱定，加甲醇制成每O. 5-1. 5ml含10-11 μ g的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊10-30粒，加甲醇90_110ml， 密塞，超聲提取25-35分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在8-12ml 容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5a、12β，27，三羥基_6α，7α-環(huán)氧-20R、22R，-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于4 μ g。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是 所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)PH至2. 0-4. O ;檢測波長210-220nm ;理論塔板數(shù)不低于2500-3500 ;精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04-0. 06mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 01-0. 03mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊 90-110粒，置90-1 IOml容量瓶中，加甲醇50_70ml濕潤后，超聲提取1-3次，每次30min, 濾過，濾液回收至干，殘渣加O. 3-0. 7mol/l的鹽酸90_110ml溶解，用氯仿萃取1_3次每次180-220ml/次，棄去氯仿液，母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取2_4次每次 180-220ml/次，合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至O. 5-1. 5ml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于3-7 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2.0-3. O μ g/g。
10.根據(jù)權(quán)利要求I或2或3或4或5或6或7或8或9所述的治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法，其特征是所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β-D-葡萄吡喃糖基I葡萄吡喃糖基-7-0-a -L和2鼠李吡喃糖基山柰酚的方法，首先取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇l_2ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液定容至5ml作為供試品溶液，然后另取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基2mg，即I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇定容至IOml容量瓶中，制成對照品溶液； 照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，以甲醇-水-冰醋酸4 6 O. I為展開劑，5%三氯化鋁乙醇溶液顯色后，置紫外燈256nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-a-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚；所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α，12β，27_三羥基-6 α、7 α-環(huán)氧即20R，22R、-I-酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷的方法，取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，制的回收濾液，用2-10ml轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中，作為供試品溶液；另取對照品洋金花苷C5a，12 β，27-三羥基_6a，7 a -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄_2，24-二烯內(nèi)酯-27-0-β-D-葡萄吡喃糖苷，精密稱定，加甲醇制成每Iml中含對照品10. 5yg的溶液， 作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和溶液對照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以二氯-甲醇-水比例是8 I O. I為展開劑，展開，取出，吹干，噴以10% 硫酸-乙醇溶液，105°C加熱至顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有洋金花苷C、即5α，12β，27_三羥基-6 α，7 α -環(huán)氧-20R，22R、-I-酮-醉茄-2，24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷；所述的薄層色譜鑒別中藥洋金花膠囊有效部位中生物堿類成分的方法，精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. lmg/ml的溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后，超聲提取兩次，每次30min,濾過,濾液回收至干,殘洛加O. 5mol/l的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次、200ml/次,棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10,再用氯仿萃取3次、200ml/ 次，合并氯仿液，回收至干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)出作為供試品；吸取本權(quán)利要求中上述三種溶液點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯-甲醇-氨水比例為5 I O. I為展開劑，展開，取出， 吹干，噴以碘化鉍鉀顯色劑；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，未找到相同顏色斑點(diǎn)，以確定樣品中是否含有氫溴酸東莨菪堿以及阿托品類生物堿成分；所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚，加甲醇制成每Iml含對照品O. Img的溶液；取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇10ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，濾液用甲醇定容至IOOml容量瓶中，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總黃酮以3-0-β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚計，不得少于4. 6mg ；所述的紫外分光光度法測定中藥洋金花膠囊有效部位中總留體含量的方法，精密稱取對照品洋金花苷C，加甲醇配制成每Iml含對照品O. 28mg的溶液；另取中藥洋金花膠囊25 粒，加甲醇IOOml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用少量水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在5ml容量瓶中；分別精密量取對照品溶液I. 0ml，供試品溶液O. 06ml分別置于具塞試管中，水浴蒸干，分別加入1%香草醛-高氯酸O. 5ml，置60°C恒溫水浴上充分混勻后，加熱 15min，立即用冰水冷卻2min，加入77% H2SO4溶液5ml，搖勻，以試劑做空白；照紫外-可見分光光度法檢測；在517nm的波長處測定吸光度；計算，即得；中藥洋金花膠囊每粒含總甾體以洋金花苷C的含量計，不得少于O. 65mg ；所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中3-0-β-D-葡萄吡喃糖基、I葡萄吡喃糖基-7-0-α -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃比例為100 2的水為流動相；檢測波長268nm;理論塔板數(shù)不低于4000 ;取3-0-β-D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0-α-L、2鼠李吡喃糖基山柰酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10 μ g的溶液；另取中藥洋金花膠囊I粒，加甲醇 10ml，密塞，超聲溶解，濾過，將濾液定容至50ml容量瓶；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含3-0- β -D-葡萄吡喃糖基，I葡萄吡喃糖基-7-0- a -L、2鼠李吡喃糖基山柰酚不得少于56 μ g ;所述的高效液相法測定中藥洋金花膠囊有效部位中洋金花苷C即5α、12β、27_三羥基-6 α、7 α -環(huán)氧-即20R、22R、_1_酮-醉茄_2、24_ 二烯內(nèi)酯、27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷的含量的方法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水為流動相；檢測波長227nm ；理論塔板數(shù)不低于4000 ;另取洋金花苷C對照品5-10mg精密稱定，加甲醇制成每Iml含 IOyg的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊20粒，加甲醇100ml，密塞，超聲提取30分鐘，靜置，濾過，回收濾液，用2-10ml水轉(zhuǎn)出制成水轉(zhuǎn)出液；水轉(zhuǎn)出液經(jīng)D941大孔弱堿性丙烯酸系陰離子交換樹脂，水洗脫液收干，用甲醇轉(zhuǎn)出定容在IOml容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；中藥洋金花膠囊每粒含洋金花苷C5a、12 β，27，三羥基-6 a，7a-環(huán)氧-20R、22R，-I-酮-醉茄_2， 24- 二烯內(nèi)酯-27-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，不得少于4 μ g ;所述的生物堿的限量檢查方法進(jìn)行測定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-磷酸二氫鈉溶液為流動相，用磷酸調(diào)pH至3. O ;檢測波長217nm ;理論塔板數(shù)不低于 3000 ;精密稱取干燥氫溴酸東莨菪堿用甲醇配制成O. 04mg/ml的溶液，另精密稱取干燥硫酸阿托品用甲醇配制成O. 02mg/ml的對照品溶液；取中藥洋金花膠囊100粒，置IOOml容量瓶中，加甲醇60ml濕潤后,超聲提取兩次,每次30min,濾過,濾液回收至干，殘洛加O. 5mol/ I的鹽酸IOOml溶解,用氯仿萃取2次每次200ml/次，棄去氯仿液,母液用氨水堿化至pH9 10，再用氯仿萃取3次每次200ml/次，合并氯仿液，回收至干，殘渣用甲醇溶解，定容至Iml 容量瓶中制成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，即得，中藥洋金花膠囊按干燥品計算氫溴酸東莨菪堿含量不得高于5 μ g/g，硫酸阿托品含量不得高于2. 4 μ g/g ο
全文摘要
一種治療銀屑病的中藥洋金花膠囊的質(zhì)量控制方法。銀屑病是發(fā)病機(jī)理復(fù)雜而尚未被闡明的皮膚病。本方法進(jìn)行薄層鑒別洋金花膠囊有效部位中是否含有3-O-β-D-葡萄吡喃糖基、洋金花苷C、5α，12β，27-三羥基-6α，7α-環(huán)氧、20R，22R、-1-酮-醉茄-2，24-二烯內(nèi)酯-27-O-β-D-葡萄吡喃糖苷、生物堿類成分；紫外分光光度法測定了洋金花膠囊有效部位中總黃酮、總甾體的含量；反相高效液相法測定了洋金花膠囊有效部位中3-O-β-D-葡萄吡喃糖基(1→2)葡萄吡喃糖基-7-O-α-L-鼠李吡喃糖基山柰酚、洋金花苷C的含量；建立了洋金花膠囊有效部位中生物堿的限量檢查。本發(fā)明用于洋金花膠囊的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/06GK102608253SQ20121010080
公開日2012年7月25日 申請日期2012年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月9日
發(fā)明者匡海學(xué), 孫海姣, 楊炳友, 王知斌, 王秋紅 申請人:匡海學(xué)