專利名稱：干制魚中敵百蟲的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于敵百蟲的含量測定領(lǐng)域，適用于干制魚中敵百蟲殘留量的檢測。
背景技術(shù)：
敵百蟲是高效、低毒及低殘留的殺蟲劑。對魚體內(nèi)外寄生的吸蟲、線蟲、棘頭蟲及危害魚苗、魚卵的枝角類、橈角類、蛘鉤介幼蟲和水蜈蚣等均有良好的殺滅作用。但由于敵百蟲在弱堿性條件下，可形成殘毒性更大的敵敵畏，當(dāng)PH值為8 10時，敵百蟲轉(zhuǎn)變成敵敵畏僅需半小時。因此，不但要顧及魚蝦的毒性效應(yīng)，而且對人、畜的安全也不可忽視。近年來，我國曾多次發(fā)現(xiàn)有不法商販?zhǔn)褂脭嘲傧x加工咸魚，給人們的身體健康和生命安全帶來了極大的安全隱患。針對這一現(xiàn)象，我們建立了干制魚中敵百蟲的測定方法。該方法可準(zhǔn)確檢測干制魚中的敵百蟲，能夠為餐飲食品安全風(fēng)險監(jiān)測提供技術(shù)支撐。針對樣品的差異性，各行業(yè)對于敵百蟲的檢測標(biāo)準(zhǔn)也存在差異，涉及的方法包括液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等方法。目前主要的現(xiàn)有技術(shù)是以下2個
I、農(nóng)業(yè)部783號公告-3-2006水產(chǎn)品中敵百蟲殘留量的測定；農(nóng)業(yè)部783號公告-3-2006的測定方法是用乙腈提取干魚中的敵百蟲，通過乙酸鋅去脂和三氯甲烷萃取后，直接用氣相色譜測定。處理后的樣品溶液中雜質(zhì)很多，氣相色譜圖中出現(xiàn)很多雜峰，對測定有干擾。且樣品溶液中仍保留有大量油脂類成分，不易揮發(fā)，累積在進樣口，會污染襯管等進樣系統(tǒng)，易對測定造成交叉污染。2、SNT 1920-2007的測定方法只針對鮮肉、腸衣和蜂蜜中敵百蟲的測定，通過二氯甲烷提取敵百蟲后，濃縮至干，用乙腈溶解殘渣后，加少量環(huán)己烷去脂。同樣存在較多雜質(zhì)干擾，且液質(zhì)聯(lián)用儀運行成本高，流動相所需大量有機溶劑易對環(huán)境造成污染。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供干制魚中敵百蟲的含量測定方法，可以準(zhǔn)確、快速的檢測出干魚中敵百蟲的含量，且降低樣品中油脂類物質(zhì)對測定的干擾，減少了出現(xiàn)假陽性結(jié)果的幾率。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是—種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，包括以下步驟I)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備；2)供試品溶液的制備①預(yù)處理取干魚絞碎混勻，得預(yù)處理后的樣品，備用；②提取a、取預(yù)處理后的樣品，先加入乙酸鋅，再加入乙腈水溶液均質(zhì)，離心，上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；b、離心管中殘渣重復(fù)步驟a 1-2次，合并上清液于同一分液漏斗中，加硫酸鈉水溶液，震蕩混勻；c、在上述上清液中加入三氯甲烷，劇烈振搖后，靜置分層；d、重復(fù)2-3次c步驟，合并下層液體，得下層三氯甲烷液；③濃縮將下層三氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱流至濃縮瓶中，濃縮至干；
④凈化加入乙腈溶解殘留物，加入乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2-3分鐘，置冰箱中冷凍保存2-3小時，低溫離心2-3分鐘，取上清液，即得供試品溶液；3)用氣質(zhì)聯(lián)用方法對供試品溶液進行檢測。其中，所述步驟2)供試品溶液的制備優(yōu)選為①預(yù)處理取干魚，絞碎，混勻，得預(yù)處理后的樣品，備用；②提取a、取預(yù)處理后的樣品5g，置50ml離心管中，加入乙酸鋅O. 5g，再加入乙腈水溶液18-29mL,均質(zhì)儀均質(zhì)lmin, 4000r/min離心3min,上清液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中；b、離心管中殘渣重復(fù)以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸鈉水溶液IOOmL,震蕩混勻，加入30mL三氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層；d、重復(fù)2_3次c步驟，合并下層液體，得下層三氯甲烷液；③濃縮將下層三氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱流至250mL濃縮瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干；④凈化定量加入ImL乙腈溶解殘留物，加入2mL乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2分鐘，置冰箱中冷凍保存2小時，10000r/min低溫離心3分鐘，取上清液，即得供試品溶液。其中，所述步驟3)所述用氣質(zhì)聯(lián)用方法對供試品溶液進行檢測的檢測條件優(yōu)選為色譜柱DB_5MS毛細管柱；進樣口溫度200°C -220°C ;接口溫度250°C -260°C ；離子源溫度220°C -230°C;四極桿溫度145°C _155°C，電子能量65eV_75eV ;載氣N2，流速為0. 8ml/min-l. 5ml/min,脈沖不分流進樣；進樣量1 μ 1-1. 5 μ I ；升溫程序為從40 V -50 °C起，保留2-3分鐘，以8 °C /min-15 V /min升至1650C _175°C，保留 1-3 分鐘，再以 15。。/min_25°C /min 升至 198°C _205°C，保留 2-4 分鐘。所述檢測條件更優(yōu)選為色譜柱DB_5MS毛細管柱；進樣口溫度200°C ;接口溫度260°C;離子源溫度230°C;四極桿溫度150°C，電子能量70eV ;載氣=N2，流速為I. Oml/min,脈沖不分流進樣；進樣量1 μ I ;升溫程序為從50°C起，保留2分鐘，以10°C /min升至170°C，保留I分鐘，再以200C /min升至200。。，保留3分鐘。下面對本發(fā)明做進一步解釋和說明原理試樣中敵百蟲經(jīng)三氯甲烷提取，提取液濃縮、脫脂、凈化后，用氣相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，外標(biāo)峰面積法定量，子離子豐度比定性。干魚經(jīng)預(yù)處理、提取、濃縮后，因三氯甲烷的極性與油脂類成分接近，所以供試品溶液中仍存在大量油脂類成分。經(jīng)凈化步驟后，因正己烷極性比乙腈弱很多，油脂類成分會進入正己烷層，達到凈化的效果。供試品溶液去掉油脂類雜質(zhì)后，色譜圖的雜峰會少很多(見圖2)，避免了雜峰對測定造成干擾。且油脂類成分不易揮發(fā)，若不去除，則會累積在進樣口，污染襯管等進樣系統(tǒng)，對測定造成交叉污染。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于I、增加了前處理過程中的凈化步驟，增加了前處理過程中的凈化步驟，大大降低了樣品中油脂類物質(zhì)對測定的干擾，減少了出現(xiàn)假陽性結(jié)果的幾率，且采用氣質(zhì)聯(lián)用方法檢測，定性準(zhǔn)確，檢測靈敏度高。、
2、采用了氣質(zhì)聯(lián)用法檢測敵百蟲的方法，這是現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)體系中沒有的。


圖I是實施例I的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖2、敵百蟲的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用圖，其中I是亞磷酸二甲酯；2是敵敵畏。
具體實施例方式為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步地詳細說明。實施例I : I試劑和材料I. I液體試劑乙腈(色譜純)、三氯甲烷(色譜純)、乙酸乙酯(色譜純)、正己烷(農(nóng)殘級)I. 2固體試劑無水硫酸鈉(分析純)、乙酸鋅(分析純)I. 3純化水I. 4實驗用具進樣瓶、離心管(50ml)、精密可調(diào)移液槍(100 1000μ1、10 100 μ I)、容量瓶、濃縮瓶(250ml)、分液漏斗(250ml)I. 5標(biāo)準(zhǔn)品敵百蟲純度均在98. 0%以上2儀器及分析條件2. IAgilent 7890N/5975C 氣相色譜 / 質(zhì)譜聯(lián)用儀2. 2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2. 3均質(zhì)儀2. 4渦旋混勻器2. 5 離心機(5000r/min)2. 6天平精度10mg/0. Olmg,作供試品稱量用和作標(biāo)準(zhǔn)品稱量用3試樣制備與保存3. I標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備3. I. I標(biāo)準(zhǔn)品儲備液取敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)品約10mg，精密稱重，置20ml容量瓶中，用乙酸乙酯配制成濃度為500μ g/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。根據(jù)需要再用乙酸乙酯稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。3. I. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白樣品，取樣9份，每份5g，分別加入適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液
O.01、0· 02、0· 05、0· 1、0· 2、0· 5、1· 0ml，按供試品溶液制備的方法，從“加入O. 5g乙酸鋅”開始，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀，測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖I所示。3. 2供試品溶液的制備①預(yù)處理取干魚，絞碎，混勻，備用；②提取a、取預(yù)處理后的樣品5g，置50ml離心管中，加入乙酸鋅O. 5g，再加入乙腈水溶液18-29mL,均質(zhì)儀均質(zhì)lmin, 4000r/min離心3min,上清液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中；b、離心管中殘渣重復(fù)以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸鈉水溶液IOOmL,震蕩混勻，加入30mL三氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層；d、重復(fù)2_3次c步驟，合并下層液體，得下層三氯甲烷液；
③濃縮將下層三氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱流至250mL濃縮瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干；④凈化定量加入ImL乙腈溶解殘留物，加入2mL乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2分鐘，置冰箱中冷凍保存2小時，10000r/min低溫離心3分鐘，取上清液，即得供試品溶液。3. 3加樣樣品溶液的制備 每次供試品溶液的制備時，應(yīng)隨行做一批樣品的加樣回收，加入上述標(biāo)準(zhǔn)工作液O. 1ml，按供試品溶液制備的方法，從“加入O. 5g乙酸鋅”開始，制成加樣樣品溶液，注入氣質(zhì)聯(lián)用儀，測定。各農(nóng)藥的回收率范圍應(yīng)在70% 120%內(nèi)。如回收率達不到要求，本次所提取樣品應(yīng)全部重做(隨行回收的目的在于實時監(jiān)控本次實驗的操作，使實驗結(jié)果更為真實可靠。若回收率低于70%，則很可能樣品前處理過程中損失；若回收率高于120%，則樣品基質(zhì)對測定結(jié)果有干擾或操作失誤)。3. 4干擾試驗作總試劑表的空白實驗，按上述供試品溶液制備的方法，從“加入
0.5g乙酸鋅”開始，制成空白對照溶液?？瞻讓φ諔?yīng)無干擾。4 測試使用儀器及色譜條件Agilent 7890N/5975C氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀；質(zhì)譜儀為四極桿質(zhì)譜儀，選擇離子監(jiān)測(監(jiān)測離子詳見表1，各農(nóng)藥組分監(jiān)測的特征離子詳見表2)。DB-5MS毛細管柱(柱長30m，內(nèi)徑O. 25mm，膜厚度O. 25 μ m);載氣高純氦氣，恒流，流速為
1.Oml/min ;脈沖不分流進樣，進樣量I μ I。進樣口溫度20(TC，接口溫度260°C，離子源溫度為230°C，四極桿溫度為150°C，電子能量70eV。升溫程序從50°C起，保留2分鐘，以10°C /min升至170°C，保留I分鐘，再以200C /min升至200。。，保留3分鐘。表I監(jiān)測離子
權(quán)利要求
1.一種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，其特征是，包括以下步驟 1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備； 2)供試品溶液的制備 ①預(yù)處理取干魚絞碎混勻，得預(yù)處理后的樣品，備用； ②提取a、取預(yù)處理后的樣品，先加入乙酸鋅，再加入乙腈水溶液均質(zhì)，離心，上清液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中；b、離心管中殘渣重復(fù)步驟a 1-2次，合并上清液于同一分液漏斗中，加硫酸鈉水溶液，震蕩混勻；c、在上述上清液中加入三氯甲烷，劇烈振搖后，靜置分層；d、重復(fù)2-3次c步驟，合并下層液體，得下層三氯甲烷液； ③濃縮將下層三氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱流至濃縮瓶中，濃縮至干； ④凈化加入乙腈溶解殘留物，加入乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2-3分鐘，置冰箱中冷凍保存2-3小時，低溫離心2-3分鐘，取上清液，即得供試品溶液； 3)用氣質(zhì)聯(lián)用方法對供試品溶液進行檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，其特征是，所述步驟2)供試品溶液的制備為 ①預(yù)處理取干魚，絞碎，混勻，得預(yù)處理后的樣品，備用； ②提取a、取預(yù)處理后的樣品5g,置50ml離心管中，加入乙酸鋅O.5g,再加入乙腈水溶液18-29mL,均質(zhì)儀均質(zhì)lmin, 4000r/min離心3min,上清液轉(zhuǎn)移至250ml分液漏斗中；b、離心管中殘渣重復(fù)以上操作a—次，合并提取液于同一 250ml分液漏斗中；c、加20g/L硫酸鈉水溶液IOOmL,震蕩混勻，加入30mL三氯甲烷，劇烈振搖3min，靜置分層；d、重復(fù)2_3次c步驟，合并下層液體，得下層三氯甲烷液； ③濃縮將下層三氯甲烷液通過無水硫酸鈉柱流至250mL濃縮瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至干； ④凈化定量加入ImL乙腈溶解殘留物，加入2mL乙腈飽和的正己烷，渦旋振蕩2分鐘，置冰箱中冷凍保存2小時，10000r/min低溫離心3分鐘，取上清液，即得供試品溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述一種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，其特征是，所述步驟3)所述用氣質(zhì)聯(lián)用方法對供試品溶液進行檢測的檢測條件為 色譜柱DB-5MS毛細管柱；進樣口溫度20(TC -220°C ;接口溫度250°C -260°C ;離子源溫度220°C -230°C ;四極桿溫度145°C -155°C,電子能量65eV_75eV ;載氣N2，流速為0. 8ml/min-l. 5ml/min,脈沖不分流進樣；進樣量1 μ 1-1. 5 μ I ； 升溫程序為從40 V -50 V起，保留2-3分鐘，以8 °C /min-15 V /min升至1650C _175°C，保留 1-3 分鐘，再以 15。。/min_25°C /min 升至 198°C _205°C，保留 2-4 分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，其特征是，所述檢測條件為色譜柱DB-5MS毛細管柱；進樣口溫度200°C ;接口溫度260°C ;離子源溫度230°C ；四極桿溫度150°C，電子能量70eV ;載氣N2，流速為I. 0ml/min，脈沖不分流進樣；進樣量Iμ I ； 升溫程序為從50°C起，保留2分鐘，以10°C /min升至170°C，保留I分鐘，再以20°C /min升至200°C，保留3分鐘。
全文摘要
本發(fā)明屬于敵百蟲的含量測定領(lǐng)域，提供了一種干制魚中敵百蟲的含量測定方法，具體包括以下步驟1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備；2)供試品溶液的制備①預(yù)處理②提?、蹪饪s④凈化3)用氣質(zhì)聯(lián)用方法對樣品進行檢測。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢在于供試品溶液的制備，主要是增加了前處理過程中的凈化步驟，大大降低了樣品中油脂類物質(zhì)對測定的干擾，減少了出現(xiàn)假陽性結(jié)果的幾率，且采用氣質(zhì)聯(lián)用方法檢測敵百蟲，定性準(zhǔn)確，檢測靈敏度高。
文檔編號G01N30/88GK102628844SQ20121010147
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月9日
發(fā)明者劉雁鳴, 吳公平, 廖彬, 林海, 殷帥 申請人:湖南省食品藥品檢驗研究院