專利名稱：一種靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝孢子粉多糖的離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，屬于中藥及其制品和功能食品原料及其制品的指紋圖譜技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
靈芝是屬于真菌門，擔(dān)子菌綱，多孔菌科，靈芝科，靈芝屬的真菌。我國(guó)藥典規(guī)定可入藥的靈芝有赤芝[Ganoderma lucidumCLeyss. exFr)Karst.]和紫芝(Ganoderma sinenseZhao, Xu et Zhang);國(guó)家食品藥品監(jiān)瞀管理局公布的可用于保健食品的靈芝品種有赤芝、紫芝和松衫靈芝(Ganoderma tsugae Murr)。靈芝抱子(Ganoderma lucidum spore)是靈芝(一般為赤芝)成熟期從菌蓋彈射出來(lái)的極其微小的卵形生殖細(xì)胞，生物學(xué)上稱孢子，集中起來(lái)后呈粉末狀，通稱靈芝孢子粉。靈芝孢子具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血脂、降血糖等 多種生理功效，故在近年來(lái)其市場(chǎng)甚為火熱。但因缺乏科學(xué)全面的檢測(cè)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，靈芝孢子粉及其加工產(chǎn)品的質(zhì)量良莠不齊，難以有效控制和鑒別。目前已有靈芝孢子脂溶性成分指紋圖譜分析方法的專利，也已有本專利申請(qǐng)人關(guān)于靈芝孢子粉水溶性成分即多糖的水解物的柱前PMP衍生-反相HPLC指紋圖譜的專利及其分析方法的研究論文的報(bào)道。但柱前PMP衍生-反相HPLC指紋圖譜的專利方法由于僅使用酸水解，水解選擇性單一，加之PMP衍生-反相HPLC分析中寡糖組分的檢測(cè)靈敏度不高，故該法指紋圖譜中反映結(jié)構(gòu)特性的寡糖組分信息不夠豐富。因此，故本專利擬將酸水解和酶水解結(jié)合進(jìn)行，再對(duì)得到的單糖組分和多糖組分分別分析，綜合兩個(gè)部分的分析結(jié)果以更靈敏、更全面地表征靈芝多糖及靈芝孢子粉產(chǎn)品的特征和差異，為我國(guó)靈芝孢子粉的質(zhì)量檢測(cè)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升及完善進(jìn)ー步提供科學(xué)依據(jù)與參考。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，借此可將靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜作為靈芝孢子粉類產(chǎn)品的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別的主要指標(biāo)之一。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案為提取靈芝孢子粉多糖后，采用酸-酶部分水解靈芝孢子粉多糖，最后通過(guò)離子色譜分析構(gòu)建水解產(chǎn)物中單、寡糖組分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明的技術(shù)方案具體包括下列步驟( I)靈芝孢子粉多糖的提取對(duì)于破壁孢子粉，準(zhǔn)確稱取樣品0. 5-1. Og于50mL離心管中，加入30mL超純水,于水浴60-80°C功率300瓦超聲30-60min，冷卻后離心，殘?jiān)蒙倭砍兯礈觳㈦x心后，將兩次上清液合并，合并后的上清液置于透析袋中用超純水透析12小吋，50-60°C真空濃縮近干，加超純水溶解并定容至5mL作為粗多糖水溶液待測(cè)；對(duì)于未破壁孢子粉，稱取5g左右的樣品于研缽中,研磨IOmin后準(zhǔn)確稱取其樣品0. 5-1. Og于50mL離心管中，加入30mL超純水，于水浴60_80°C功率300瓦超聲30_60min，
后續(xù)操作同上。(2)靈芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解吸取500 u L步驟(I)所得的粗多糖水溶液，加入500 u L l-3mol/L的H2SO4溶液，漩渦混勻，于80-100°C酸水解l_3h，冷卻至室溫，用碳酸鋇中和，12000r/min離心15min。取其上清液100 u L，加入酵母裂解 酶溶液(100u/mg) 50 u L，再用0. 05mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 6. 5)補(bǔ)加至反應(yīng)體積為lmL。于45°C下反應(yīng)12h。酶解液100°C加熱5min，終止反應(yīng)。12000r/min離心30min,取上清液用0. 45 y m微孔濾膜過(guò)濾,其濾液用于下步離子色譜分析。(3)靈芝孢子粉多糖部分水解產(chǎn)物的離子色譜指紋分析針對(duì)酸-酶水解物中的單糖組分，離子色譜分析條件為色譜柱CarboPac卩八-20，包括分析柱(3\150111111)和保護(hù)柱(3X 50mm);脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器ED40 ;金工作電極；Ag/AgCl參比電極；四電位波形；流速0. 5mL/min ;進(jìn)樣體積20ii L ;柱溫30°C ;流動(dòng)相:A(水)-B(0. 25mol/L NaOH 溶液)-C (Imol/LNaAc 溶液)，三元梯度洗脫:0 21min，97.6%A, 2. 4%B, 0%C;21. lmin, 92. 6%A, 2. 4%B, 5. 0%C;30min, 77. 6%A, 2. 4%B, 20%C;30. f 50min,20%A, 80%B, 0%C.針對(duì)酸-酶水解物中的寡糖組分，離子色譜分析條件為色譜柱CarboPacPA-200，包括分析柱(3 X 150mm)和保護(hù)柱(3 X 50mm);脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器ED40 ;金工作電極；Ag/AgCl參比電極；四電位波形；流速0. 5mL/min ;進(jìn)樣體積20ii L ;柱溫30°C ;流動(dòng)相A (水)-B (0. 25mol/LNa0H 溶液)-C (Imol/LNaAc 溶液)，三元梯度洗脫0min，57. 6%A，38. 4%B, 4. 0%C;40min, 36%A, 24%B, 40%C;40. l 60min，57. 6%A, 38. 4%B, 4. 0%C.(4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定通過(guò)20個(gè)不同產(chǎn)地的靈芝孢子粉樣品中的多糖酸-酶水解產(chǎn)物中單、寡糖組分的離子色譜測(cè)定，運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版”，分別構(gòu)建了靈芝孢子粉多糖水解物中單糖組分和寡糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，并確定了單糖圖譜中的11個(gè)單糖共有特征峰，以及寡糖圖譜中的4個(gè)寡糖共有峰和I個(gè)多糖峰。單糖峰的相對(duì)保留時(shí)間RT(以葡萄糖峰為參照)和寡糖的相對(duì)保留時(shí)間RT(以五糖峰為參照)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均小于2%,即單糖指紋圖譜中I 號(hào)峰平均 RT 為 0. 314，RSD 為 0. 62% ；2 號(hào)峰平均 RT 為 0. 611，RSD 為 0. 92% ；3 號(hào)峰平均 RT 為 0. 643，RSD 為 I. 64% ；4 號(hào)峰平均 RT 為 0. 689，RSD 為 0. 19% ；5 號(hào)峰平均 RT 為 0. 775，RSD 為 0. 35% ；6 號(hào)峰平均 RT 為 0. 880，RSD 為 0. 20% ；7 號(hào)峰平均 RT 為 I. 000，RSD 為 0% ；8 號(hào)峰平均 RT 為 I. 180，RSD 為 0. 32% ；9 號(hào)峰平均 RT 為 I. 219，RSD 為 0. 32% ；10 號(hào)峰平均 RT 為 2. 603，RSD 為 I. 24% ；
11 號(hào)峰平 均 RT 為 2. 695，RSD 為 I. 19% ；寡糖指紋圖譜中I 號(hào)峰平均 RT 為 0. 691，RSD 為 0. 56% ；2 號(hào)峰平均 RT 為 I. 000，RSD 為 0% ；3 號(hào)峰平均 RT 為 I. 321，RSD 為 I. 00% ；4 號(hào)峰平均 RT 為 I. 342，RSD 為 I. 04% ；5 號(hào)峰平均 RT 為 3. 276，RSD 為 I. 51% ；其中單糖峰中超過(guò)總峰面積5%的指紋峰有3個(gè)，分別為6號(hào)峰半乳糖，相對(duì)峰面積12. 29%-29. 88% ；7號(hào)峰葡萄糖,相對(duì)峰面積49. 01%-73. 63% ；9號(hào)峰甘露糖,相對(duì)峰面積7. 40%-15. 42%o寡糖指紋圖譜中5號(hào)峰占總峰面積5. 79%-26. 77%。通過(guò)對(duì)對(duì)單糖組分進(jìn)行離子色譜分析，得到的11個(gè)共有特征峰分別對(duì)應(yīng)巖藻糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、氨基半乳糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸；這些糖均依據(jù)與靈芝孢子粉樣品分析同樣的色譜條件下測(cè)定的單糖混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時(shí)間對(duì)照定性。寡糖指紋圖譜中的5個(gè)共有特征峰則依據(jù)與靈芝孢子粉樣品的寡糖分析同樣色譜條件下測(cè)定的菊粉對(duì)照品中不同聚合度糖組分色譜峰的保留時(shí)間對(duì)照定性，這5個(gè)共有特征峰分別確定為三糖、五糖、六糖、七糖和多糖。本發(fā)明提供的靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，具有方法穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，易于掌握的特點(diǎn)。作為ー種生物大分子的分析方法，避免了傳統(tǒng)方法因必須進(jìn)行多步分離純化和多種波譜手段分析而帶來(lái)的耗時(shí)、費(fèi)力、成本高、無(wú)法快速檢測(cè)的缺陷。


圖I 12種單糖混合標(biāo)樣的HPAEC圖譜各個(gè)峰分別為1-Fuc,2-GlcN, 3-Rham, 4-Ara, 5-GalN, 6-Gal, 7-Glc, 8-Xyl, 9-Man，10-Rib, 11-GalUA, 12-GlcUA圖2菊粉的HPAEC圖譜峰I- ニ糖,2_ ニ糖，3_四糖，4_五糖，5_六糖，6 t糖，7_八糖，8_九糖，9_十糖圖3 20個(gè)靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶水解物單糖組分的HPAEC指紋圖譜圖4靈芝孢子粉多糖的酸-酶水解物單糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有特征峰分別為1-Fuc,2-GlcN, 3-Rham, 4-Ara, 5-GalN, 6-Gal, 7-Glc, 8-Xyl, 9-Man, 10-GalUA, Il-GlcUA圖5 20個(gè)靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶水解物寡糖組分的HPAEC指紋圖譜圖6靈芝孢子粉多糖的酸-酶水解物寡糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜共有特征峰分別為1-三糖，2-五糖，3-六糖，4-七糖，5-多糖圖7吉林某產(chǎn)地破壁靈芝孢子粉樣品的多糖離子色譜指紋圖譜圖7(I)為吉林某產(chǎn)地破壁靈芝孢子粉樣品的多糖中單糖組分的離子色譜指紋圖譜，其中 1-Fuc, 2-GlcN, 3-Rham, 4-Ara, 5-GalN, 6-Gal, 7-Glc, 8-Xyl, 9-Man, 10-GalUA, Il-GIcUA圖7 (2)為該樣品的多糖中寡糖組分的離子色譜指紋圖譜，其中2-三糖，5-五糖，9-六糖，10 t糖，14-多糖圖8安徽某產(chǎn)地破壁靈芝孢子粉樣品的多糖離子色譜指紋圖譜圖8 (I)為安徽某產(chǎn)地破壁靈芝孢子粉樣品的多糖中單糖組分的離子色譜指紋圖譜，其中 1-Fuc, 2-GlcN, 3-Rham, 4-Ara, 5-GalN, 6-Gal, 7-Glc, 8-Xyl, 9-Man, 10-GalUA, Il-GIcUA圖8(2)為該樣品樣品的多糖中寡糖組分的離子色譜指紋圖譜，其中2-三糖，5-五糖，9-六糖，10-七糖，14-多糖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)ー步說(shuō)明，下述實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非對(duì)本 發(fā)明的限制。實(shí)施例I、靈芝孢子粉多糖離子色譜標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立方法I、儀器、試劑及樣品I. I 儀器ICS5000多功能離子色譜(美國(guó)Dionex公司),脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器。I. 2試劑及樣品單糖標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖(Glc，99%)、甘露糖(Man，99 %)、半乳糖(Gal,彡99%)均購(gòu)于上海化學(xué)試劑公司；鼠李糖(Rha，彡99%)、巖藻糖(Fuc，彡99%)、葡萄糖醛酸(GlcUA，彡99%)、半乳糖醛酸(GalUA，彡97%)均為美國(guó)Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品；木糖(Xyl，98%)、氨基葡萄糖(GlcN，98%)、氨基半乳糖(GalN，99%)均為美國(guó)ACROS ORGANICS公司產(chǎn)品；核糖(Rib，> 99. 0%)、阿拉伯糖(Ara，99%)均購(gòu)于廈門星隆達(dá)生化試劑有限公司。菊糖(優(yōu)級(jí)純，比利時(shí)Orafti公司)。酵母裂解酶ZymolyaseTM_20T (20ku/mg,美國(guó)NorthstarBioProducts公司)；濃硫酸、醋酸、醋酸鈉和碳酸鋇均系國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；超純水；pH試紙(上海三愛(ài)思試劑有限公司)。靈芝孢子粉樣品20個(gè)批號(hào)分別采自山東、安徽、福建、吉林、湖北、廣東等不同產(chǎn)地。2、破壁靈芝孢子粉多糖的提取準(zhǔn)確稱取破壁靈芝孢子粉樣品I. Og于50mL離心管中，加入30mL超純水，于水浴60°C功率300瓦超聲60min，冷卻后離心，殘?jiān)蒙倭砍兯礈觳㈦x心后，將兩次上清液合并，合并后的上清液置于透析袋中用超純水透析12小吋，50-60°C真空濃縮近干，加超純水溶解并定容至5mL作為粗多糖水溶液，待測(cè)；3、靈芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解吸取500 U L以上提取得到的粗多糖水溶液，加入500 U L3mol/L的H2S04溶液，漩渦混勻，于80°C酸水解Ih，冷卻至室溫，用碳酸鋇中和，12000r/min離心15min。取其上清液100 u L，加入酵母裂解酶溶液(100u/mg) 50 u L，再用0. 05mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH 6. 5)補(bǔ)加至反應(yīng)體積為lmL。于45°C下反應(yīng)12h。酶解液100°C加熱5min，終止反應(yīng)。12000r/min離心30min,取上清液用0. 45 y m微孔濾膜過(guò)濾,得到的水相用于下步離子色譜分析。4、靈芝孢子粉多糖部分水解產(chǎn)物的離子色譜指紋分析
色譜條件與上述發(fā)明內(nèi)容中離子色譜指紋圖譜建立方法的步驟(3)所述的離子色譜指紋分析條件相同。5、標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定及共有指紋峰特征將20個(gè)靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶部分水解并經(jīng)CarboPac PA-20色譜柱分析后的單糖組分色譜圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入指紋圖譜專用軟件“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版”，得到它們的指紋圖譜于圖3;由此生成靈芝孢子粉多糖酸-酶水解后單糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，見(jiàn)圖4。對(duì)得到的靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶水解物單糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析，確定了 11個(gè)共有特征峰，標(biāo)定為I 11峰，這11個(gè)單糖峰分別代表巖藻糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、氨基半乳糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳 糖醛酸和葡萄糖醛酸。以葡萄糖峰為參照，計(jì)算單糖混合標(biāo)樣圖譜和樣品的單糖色譜指紋圖譜中各單糖峰的相對(duì)保留時(shí)間，根據(jù)標(biāo)樣和樣品的相對(duì)保留時(shí)間對(duì)照定性靈芝孢子多糖樣品的單糖色譜指紋圖譜中相關(guān)色譜峰，并以峰面積歸ー化法計(jì)算樣品圖譜各峰的相對(duì)峰面積。將20個(gè)靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶水解并經(jīng)CarboPac PA-200柱分析后的寡糖組分的色譜圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入指紋圖譜專用軟件“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版”，得到它們的指紋圖譜于圖5 ;由此生成靈芝孢子粉多糖酸-酶水解后寡糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，見(jiàn)圖6。對(duì)得到的靈芝孢子粉多糖樣品酸-酶水解物寡糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行分析，確定了 5個(gè)共有特征峰。由于寡糖組分較復(fù)雜，故我們僅選取具有代表性的共有特征峰進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。被選定的五個(gè)峰標(biāo)定為1-5號(hào)峰，通過(guò)與菊粉標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照定性，確定它們分別為三糖、五糖、六糖、七糖和多糖。以五糖峰為參照，計(jì)算菊粉對(duì)照品圖譜和靈芝孢子粉樣品的寡糖色譜指紋圖譜中各寡糖及多糖峰的相對(duì)保留時(shí)間，根據(jù)菊粉對(duì)照品和樣品的相對(duì)保留時(shí)間對(duì)照定性靈芝孢子多糖樣品的寡糖色譜指紋圖譜中相關(guān)色譜峰，并以峰面積歸ー化法計(jì)算樣品圖譜各峰的相對(duì)峰面積。20個(gè)不同產(chǎn)地的靈芝孢子粉樣品的共有峰相對(duì)保留時(shí)間見(jiàn)表I。表I靈芝孢子粉多糖酸-酶部分水解產(chǎn)物的離子色譜分析共有特征峰的相對(duì)保留時(shí)間
_ル棚_ I三爾t臓P RSD(%)
園指譽(yù) (Fuc)f0.3 丨4f0.62
譜霞糖[2(GlcN) f0.611f0.9權(quán)利要求
1.一種靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于包括靈芝孢子粉多糖的提取、靈芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解、水解產(chǎn)物中單、寡糖組分的離子色譜的指紋分析及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定，具體步驟為 (1)靈芝孢子粉多糖的提取 對(duì)于破壁孢子粉，準(zhǔn)確稱取樣品0. 5-1. Og于50mL離心管中，加入30mL超純水，于水浴60-80°C功率300瓦超聲30-60min，冷卻后離心，殘?jiān)蒙倭砍兯礈觳㈦x心后，將兩次上清液合并，合并后的上清液置于透析袋中用超純水透析12小吋，50-60°C真空濃縮近干，加超純水溶解并定容至5mL作為粗多糖水溶液待測(cè)； 對(duì)于未破壁孢子粉，稱取5g左右的樣品于研缽中，研磨IOmin后準(zhǔn)確稱取其樣品0. 5-1. Og于50mL離心管中，加入30mL超純水，于水浴60_80°C功率300瓦超聲30_60min，后續(xù)操作同上； (2)靈芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解 吸取500 u L步驟(I)所得的粗多糖水溶液，加入500 u Ll-3mol/L的H2SO4溶液，漩渦混勻，于80-100°C酸水解l_3h，冷卻至室溫，用碳酸鋇中和，12000r/min離心15min。取其上清液100 u L，加入一定量酵母裂解酶溶液，再用0. 05mol/L, pH為6. 5的醋酸-醋酸鈉緩沖液補(bǔ)加至反應(yīng)體積為ImL ;于45で下反應(yīng)12h ;酶解液100°C加熱5min終止反應(yīng)；12000r/min離心30min,取上清液用0. 45 y m微孔濾膜過(guò)濾,其濾液用于下步離子色譜分析； (3)靈芝孢子粉多糖部分水解產(chǎn)物的離子色譜指紋分析 針對(duì)酸-酶水解物中的單糖組分，離子色譜分析條件為色譜柱CarboPac PA-20,包括3 X 150mm分析柱和3 X 50mm保護(hù)柱；脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器ED40 ;金工作電極；Ag/AgCl參比電極；四電位波形；流速0. 5mL/min ;進(jìn)樣體積20ii L ;柱溫30°C ;流動(dòng)相水-0. 25mol/L NaOH 溶液-Imol/LNaAc 溶液，三元梯度洗脫0 21min，97. 6% A,2. 4% B，0% C ；21. lmin, 92. 6%A,2. 4%B,5. 0% C ；30min, 77. 6%A,2. 4%B,20% C ；30. I 50min，20% A,80% B,0% C ； 針對(duì)酸-酶水解物中的寡糖組分，離子色譜分析條件為色譜柱=CarboPac PA-200,包括3X 150mm分析柱和(3X 50mm)保護(hù)柱；脈沖安培電化學(xué)檢測(cè)器ED40 ;金工作電極；Ag/AgCl參比電極；四電位波形；流速0. 5mL/min ;進(jìn)樣體積20 u L ;柱溫30°C ;流動(dòng)相水-0. 25mol/LNa0H 溶液-Imol/LNaAc 溶液，三元梯度洗脫0min，57. 6% A,38. 4% B,4. 0%C ；40min,36% A, 24% B,40% C;40. I 60min，57. 6% A, 38. 4% B，4. 0% C ； (4)標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定 通過(guò)20個(gè)不同產(chǎn)地的靈芝孢子粉樣品的多糖酸-酶水解產(chǎn)物中單、寡糖組分的離子色譜測(cè)定，分別構(gòu)建靈芝孢子粉多糖水解物中單糖組分和寡糖組分的HPAEC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，確定單糖圖譜中的11個(gè)單糖共有特征峰，以及寡糖圖譜中的4個(gè)寡糖共有峰和I個(gè)多糖峰。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述11個(gè)單糖共有特征峰分別對(duì)應(yīng)巖藻糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、氨基半乳糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸；所述寡糖指紋圖譜中的5個(gè)共有特征峰分別對(duì)應(yīng)三糖、五糖、六糖、七糖和多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述酵母裂解酶用量為lOOu/mg50 u L0
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種靈芝孢子粉多糖離子色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法包括靈芝孢子粉多糖的酸-酶部分水解及其水解產(chǎn)物單、寡糖組分的離子色譜指紋分析與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定。通過(guò)對(duì)20個(gè)不同產(chǎn)地的靈芝孢子粉樣品的多糖成分的HPAEC分析及其指紋圖譜的比較，確定了其共有指紋特征，分別得到單、寡糖組分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，確定了單糖圖譜中的11個(gè)單糖共有特征峰，以及寡糖圖譜中的4個(gè)寡糖共有峰和1個(gè)多糖峰。本方法穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握，能從反映孢子粉多糖組成和結(jié)構(gòu)特征的酸-酶部分水解產(chǎn)物的單糖組分與寡糖組分指紋圖譜兩個(gè)方面把握靈芝孢子粉多糖質(zhì)量情況及產(chǎn)地來(lái)源，為靈芝孢子粉的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供了一種新的科學(xué)方法。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102645504SQ201210145249
公開(kāi)日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月10日
發(fā)明者戴軍, 朱松, 王浩豪, 陳尚衛(wèi) 申請(qǐng)人:江南大學(xué)