專利名稱：一種麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于檢測麥角生物堿的酶聯(lián)免疫測試盒及其檢測方法，主要適用于用該試劑盒快速批量測定原糧及其制品中多種麥角生物堿的含量，屬于食品分析檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
麥角是麥角菌在寄生植物的子房中形成的紫黑色、具有真菌結(jié)構(gòu)的長角形菌核，形狀像動物的角，故稱麥角(ergot)。其宿主多為禾本科植物。世界范圍內(nèi)種植的小麥、玉米、大麥、水稻、谷子、燕麥、高粱、黑麥等均可被麥角菌侵染。麥角中毒是由于受麥角菌侵、染谷物中的一系列有活性的生物堿引起的。麥角菌毒素的有毒成分主要是以麥角酸為基本結(jié)構(gòu)的一系列生物堿衍生物，如麥角毒堿(ergotoxin)、麥角胺(ergotamine)、麥角新堿(6找0]10￥；[116)、麥角生堿(6找08；[116)、麥角克堿(6找001^81；[116)等。麥角堿是一類物質(zhì)的總稱，醫(yī)學上常用來收縮子宮、促進產(chǎn)程、治療偏頭痛及高血壓等。另一方面麥角也是谷類作物的重要病害，不但能引起谷物減產(chǎn)，而且當人們食用了混雜有較大量的麥角谷物或面粉所做的食品后，就可能發(fā)生麥角菌中毒。麥角中毒的癥狀主要有兩類，即壞疽性麥角中毒和痙攣性麥角中毒。前者癥狀包括劇烈疼痛，支端感染和肢體出現(xiàn)焦灼、發(fā)黑等壞疽癥狀；后者癥狀包括神經(jīng)失調(diào)，主要是麻木、抽搐、運動失協(xié)、呼吸困難、脈搏加快、痙攣等，有的還會出現(xiàn)感覺神經(jīng)紊亂而出現(xiàn)幻覺。由于麥角生物堿種類繁多，并且不同糧食作物中麥角生物堿的含量也不同，因此沒有統(tǒng)一的限量標準。德國及瑞士規(guī)定總麥角堿在谷物中的限量分別是^OlOOyg/kg和lOOyg/kg。關(guān)于麥角在小麥中的限量，我國為0. 01%，歐盟為0. 05%，美國為0. 3%,日本為0. 04%ο目前，有關(guān)麥角的檢測大都采用感官檢驗以及化學定性分析。但對于已經(jīng)研磨或某種處理使得菌核難于或不能辨認的谷物，就必須進行麥角生物堿含量的測定。針對麥角生物堿的檢測方法有薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法(HPLC-MS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和毛細管電泳法等。儀器法雖然具有很好的靈敏度和特異性，但操作繁瑣、耗時長，且需要昂貴的儀器設(shè)備，檢測成本高，也不適合現(xiàn)場監(jiān)控及大量樣本的篩選；ELISA方法具有特異性強、靈敏度高、方便快捷、分析容量大、安全廉價、儀器化程度要求不高、適應性強等特點，對復雜樣品中超微量有毒有害物質(zhì)殘留分析和現(xiàn)場快速檢測方面，具有廣闊的應用前景和開發(fā)潛力。對于麥角生物堿的免疫分析方法早有報道，但要同時測定多種麥角生物堿并將其研制成酶聯(lián)免疫測試盒，從而更好地應用于實際檢測當中，這在國內(nèi)外鮮有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，提供一種高特異性、高靈敏度，操作方法簡單快速，并能用于大批量樣品快速檢測的適用于多種麥角生物堿含量測定的酶聯(lián)免疫測試盒。按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，一種用于檢測麥角生物堿的酶聯(lián)免疫測試盒，包括盒體，盒體內(nèi)設(shè)置有試劑板和96或48孔抗原包被板；所述試劑板包括泡沫塑料模具，泡沫塑料模具上設(shè)置有若干個試劑孔，每個試劑孔內(nèi)均安放試劑瓶。所述試劑盒泡沫塑料模具中若干個試劑孔中安放的試劑瓶包括濃縮洗滌液、樣品稀釋液、顯色液a、顯色液b、終止液、第一抗體溶液、酶標二抗溶液和麥角生物堿標準品。濃縮洗滌液，l(T30mL/瓶；取氯化鈉15(T200g、磷酸二氫鈉4 6g、磷酸氫二鈉50 70g、吐溫-208 12mL，以雙蒸水定容至IL ；樣品稀釋液，為質(zhì)量濃度為10°/Γ20%的甲醇-PBS溶液；顯色液a, 3 7mL/瓶,為O. 005mol/L過氧化氫脲素溶液； 顯色液b，3 7mL/瓶，為O. 0005mol/L 3，3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺溶液； 終止液，3^7mL/瓶，為2mol/L的硫酸；第一抗體溶液，3 5mL/瓶；取I 2mg麥角酸-KLH，用2 4mL O. lmol/L的經(jīng)121°C高溫滅菌20min的PBS溶解，然后取f2mL溶解的抗原與等量完全弗氏佐劑充分混合，注射，分離抗血清，采用Protein A親和純化多克隆抗體；酶標二抗溶液，4飛mL/瓶；為辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體溶液；麥角生物堿標準品，共6瓶，2 4mL/瓶，濃度分別為0、5、10、20、40、80ng/mL，稀釋液為質(zhì)量濃度10% 20%的甲醇-PBS溶液；所述96或48孔抗原包被板的每個孔內(nèi)均由包被液包被能與抗麥角生物堿抗體特異性結(jié)合反應的包被抗原，并用質(zhì)量濃度I. (Γ3. 0%的牛血清白蛋白進行封閉；所述的包被液為碳酸鹽緩沖液，其含碳酸鈉2. 5^3. 5g、碳酸氫鈉4. 5飛.5g、并用雙蒸水定容至IL ;所述包被抗原為麥角酸與卵清蛋白的偶聯(lián)物。一種麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒的檢測方法，步驟如下(I)酶標板的制備包被抗原麥角酸-OVA用pH9. 6,0. 005mol/L的碳酸鹽緩沖液，其含碳酸鈉2. 5^3. 5g、碳酸氫鈉4. 5^6. 5g、雙蒸水定容至1L,稀釋成1 4 μ g/mL,在96或48孔抗原包被板的每孔中各加入105 μ L，2飛。C下包被過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌I次，拍干，然后每孔中加入質(zhì)量濃度為I. 09Γ3. 0%的牛血清白蛋白，2飛。C下封閉過夜，傾去封閉液，用洗滌液洗滌2次，得到酶標版，拍干后，真空包裝后于_20°C保存；(2)待測樣液的制備稱取2. 5 5. Og樣品，置IOOmL棕色具塞圓底燒瓶中，加入12. 5 25. OmL 50%的甲醇-PBS溶液，振搖15 20min，過濾，棄去1/4初濾液，收集試樣濾液，此即樣品提取液；取質(zhì)量濃度為10°/Γ20%甲醇-PBS溶液稀釋后作為待測樣液用于ELISA檢測；(3)測試過程取步驟(I)制備的酶標板，恢復至室溫后備用；按照常規(guī)ELISA方法加入50 μ L的標準溶液或處理好的待測樣液到各自的微孔中，每孔加50 μ L第一抗體溶液，置于37°c溫育I小時，洗滌液洗3次，再于每孔內(nèi)加入100 μ L酶標二抗溶液，37°C溫育
O.5小時，用洗滌液洗5次，每孔各加入50 μ L顯色液a和50 μ L顯色液b，37°C溫育15分鐘，最后于每孔內(nèi)加入50 μ L終止液終止反應，并在450nm處測其吸光度值，從標準曲線計算樣品中的麥角生物堿含量。本發(fā)明具有如下優(yōu)點該試劑盒對麥角生物堿的特異性較好，與簡單的吲哚衍生物(如色氨酸)無交叉反應。間接競爭ELISA法對不同麥角生物堿的最低檢測限各不相同，其中對麥角胺為5. 7ng/mL,雙氫麥角毒堿為4. 3ng/mL、麥角新堿為6. 5ng/mL ;樣品的加標回收率在7(Γ80%之間。測試盒在2 6°C下至少保存6個月。本發(fā)明能用于原糧(小麥、玉米、大麥、水稻、燕麥、高粱、黑麥等)及其制品(面包等)中多種麥角生物堿殘留的分析，樣品的前處理過程簡單，耗時少，能同時檢測批量樣品，檢測成本遠低于傳統(tǒng)的檢測方法。試劑盒采用高特異性、高效價、廣譜性較好的多克隆抗體，提高了檢測的靈敏度和準確性。測試盒保質(zhì)期至少6個月。該發(fā)明提供的快速檢測方法操作簡便、快速，完成整個操作過程只需I. 5^2小時，非常適合現(xiàn)場檢測的需要。此外，該發(fā)明成本低廉、檢測效率高、操作簡便，既有經(jīng)濟效益又有社會效益，是一種創(chuàng)新性較高的具有良好應用前景的多殘留免疫檢測試劑盒。


圖I本發(fā)明試劑盒結(jié)構(gòu)主視圖。圖2本發(fā)明試劑板結(jié)構(gòu)示意圖。圖3本發(fā)明96或48孔抗原包被板示意圖。圖4麥角生物堿標準曲線。圖5本發(fā)明試劑盒37 °C加速破壞曲線
具體實施例方式實施例I麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒及其制備如圖1-3所示，一種麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒，包括盒體11，盒體11內(nèi)設(shè)置有試劑板和96或48孔抗原包被板10 ;所述試劑板包括泡沫塑料模具1，泡沫塑料模具I上設(shè)置有若干個試劑孔2 9，每個試劑孔內(nèi)均安放試劑瓶。所述試劑盒泡沫塑料模具I中若干個試劑孔2、中安放的試劑瓶如下試劑孔2為濃縮洗滌液，IOlOmL/瓶；取氯化鈉15(T200g、磷酸二氫鈉4 6g、磷酸氫二鈉50 70g、吐溫-208 12mL，以雙蒸水定容至IL ；試劑孔3為樣品稀釋液；為10% 20%的甲醇-PBS溶液；試劑孔4為顯色液a, 3 7mL/瓶,為O. 005mol/L過氧化氫脲素溶液；試劑孔5為顯色液b，3^7mL/瓶，為O. 0005mol/L3, 3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺溶液；試劑孔6為終止液，3^7mL/瓶，為2mol/L的硫酸；試劑孔7為第一抗體溶液，3^5mL/瓶；取f 2mg麥角酸-KLH，用2 4mL0. lmol/L的PBS經(jīng)(經(jīng)121 °C高溫滅菌20min)溶解，然后取f2mL溶解的抗原與等量完全弗氏佐劑充分混合，注射，分離抗血清，采用Protein A親和純化多克隆抗體；試劑孔8為酶標二抗溶液，4^6mL/瓶；為辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體溶液；試劑孔9為麥角生物堿標準品，共6瓶，2 4mL/瓶，濃度分別為0、5、10、20、40、80ng/mL，稀釋液為質(zhì)量濃度10 20%的甲醇-PBS溶液。所述96或48孔抗原包被板10的每個孔內(nèi)均由包被液包被能與抗麥角生物堿抗體特異性結(jié)合反應的包被抗原，并用質(zhì)量濃度為I. (Γ3. 0%的牛血清白蛋白進行封閉；所述的包被液為碳酸鹽緩沖液，其含碳酸鈉2. 5^3. 5g、碳酸氫鈉4. 5飛.5g、并用雙蒸水定容至IL ;所述包被抗原為麥角酸與卵清蛋白的偶聯(lián)物。所述試劑的準備(I)完全抗原的制備麥角酸-鑰孔嘁血藍蛋白(KLH)或卵清蛋白(OVA)的制備①75 85mg麥角酸溶于l(Tl5mL 二氧六環(huán)(30°C左右水浴至麥角酸全部溶解)，然后加入到10(Tl20mg碳二亞胺(EDC)水溶液(5mL)中。②2(T40mg鑰孔嘁血藍蛋白(KLH)或卵清蛋白(OVA)溶于IOmL pH7. 4的PBS (內(nèi)含氯化鈉7. 5^9. 5g、磷酸二氫鈉O. 15^0. 35g、磷酸氫二鈉2 4g、雙蒸水1L)逐滴加入上一步制成的混合液中。③室溫攪拌10小時后，4°C過夜保存。再用PBS透析2天，于_40°C真空冷凍干燥 后-20°C保存?zhèn)溆谩?2)抗麥角生物堿多克隆抗體的制備及純化步驟(I)所獲得的免疫抗原(麥角酸-KLH)免疫三只健康雄性新西蘭大白兔。免疫前一周從兔耳緣靜脈采血作為陰性對照。稱取f2mg麥角酸-KLH，用2 4mL O. lmol/L的PBS (經(jīng)121°C高溫滅菌20min)溶解，然后取f2mL溶解的抗原與等量完全弗氏佐劑充分混合，乳化完全后在新西蘭大白兔背部進行多點皮下注射。I個月后進行第I次加強免疫，采用四肢內(nèi)部肌肉注射，劑量與首次免疫相同，與等量不完全弗氏佐劑混合充分乳化。共免疫5次，每次間隔2周。每次加強免疫前從兔耳緣靜脈采血，采用間接ELISA法測定抗血清效價。效價合格后，采用兔頸動脈放血，收集血液于無菌離心管中。待血液凝固之后，用無菌滴管將血塊與瓶壁剝離后，放入37°C，l 2h后取出放入2飛。C冰箱過夜，使血清充分析出，經(jīng)3000r/min離心20min,分出抗血清,并采用ProteinA親和純化多克隆抗體,具體純化過程如下①裝柱將蛋白A sepharose CL-4B填料緩慢加入玻璃柱中,利用泵控制填充速度為f2mL/min，避免柱干，利用10倍于床體積并經(jīng)過預冷的TBS緩沖溶液(內(nèi)含5. 5飛.5gTris，8 9g氯化鈉，O. 4、. 6g疊氮化鈉，雙蒸水1L，并用鹽酸調(diào)節(jié)pH 7. 3 7. 5。)。②親和層析將抗體用TBS緩沖溶液以I : Γ1 6的比例進行稀釋，再用過濾器進行過濾。以
O.5mL/min的速度將抗血清上到柱上，用TBS緩沖溶液清洗柱子后，用洗脫緩沖溶液(內(nèi)含
3.5^4. 5g甘氨酸，雙蒸水1L，并用鹽酸調(diào)節(jié)pH 2. 5 3. O。)以O(shè). 5 mL/min的速度洗脫至所有蛋白均流下來。用已經(jīng)加入中和緩沖溶液(內(nèi)含12(Tl22g Tris，85 90g氯化鈉，O. 35 4. OgEDTA及4 6g疊氮化鈉溶于IL蒸餾水中，并用鹽酸調(diào)節(jié)pH7. 5^8. 5。)的試管收集洗脫液，混勻后用PH試紙檢查洗脫液的pH，如果pH低于7可利用中和緩沖液調(diào)至約ρΗ7. (Γ7. 5以防止抗體的變性。③純化好的抗體于_40°C真空冷凍干燥后_20°C保存?zhèn)溆?。實施?所述麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒的檢測方法(I)酶標板的制備實施例I制備的包被抗原麥角酸-OVA用pH9. 6,0. 005mol/L的碳酸鹽緩沖液(含碳酸鈉2. 5^3. 5g、碳酸氫鈉4. 5^6. 5g、雙蒸水定容至1L)稀釋成4 μ g/mL,在96或48孔抗原包被板的每孔中各加入105 μ L，2飛。C下包被過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌I次，拍干，然后每孔中加入質(zhì)量濃度為I. 09Γ3. 0%的牛血清白蛋白，2飛。C下封閉過夜，傾去封閉液，用洗滌液洗滌2次，拍干后，真空包裝后于_20°C保存。( 2 )檢測樣品的前處理
原糧及其制品稱取2. 5 5. Og樣品，置IOOmL棕色具塞圓底燒瓶中，加入12. 5 25. OmL 50%的甲醇-PBS溶液，振搖15 20min，過濾，棄去1/4初濾液，收集試樣濾液，此即樣品提取液。取適量提取液用質(zhì)量濃度為109Γ20%甲醇-PBS稀釋一定倍數(shù)后作為待測樣液，用于ELISA檢測。(3)試劑盒操作過程間接競爭ELISA法取一塊包被有麥角酸-OVA的酶標板，恢復至室溫后備用。加入50 μ L的標準溶液或處理好的檢測樣品到各自的微孔中，再給加50 μ L第一抗體溶液，置于37°C溫育I小時，洗滌液洗3次，再于每孔內(nèi)加入100 μ L酶標二抗工作溶液，37°C溫育
O.5小時，用洗滌液洗5次，每孔各加入50 μ L顯色液a和50 μ L顯色液b，37°C溫育15分鐘，最后于每孔內(nèi)加入50 μ L終止液終止反應，并在450nm處測其吸光度值，從圖4所示標 準曲線計算樣品中的麥角生物堿含量。實施例3試劑盒保存期試驗將試劑盒放入37°C環(huán)境下進行加速破壞試驗，每隔24小時進行一次ELISA測定，測定陰性對照孔(Ong/mL標準溶液孔)的吸光度值，對數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，根據(jù)37°C下24小時相當于4°C下45天，推算試劑盒的穩(wěn)定周期，結(jié)果圖5所示。一般地，當陰性對照的吸光度值(A)低于O. 6個單位時，測定結(jié)果的判斷將出現(xiàn)較大偏差，此時試劑已不適用于樣品測定，即試劑已失效。從圖3可知，本試劑盒試劑在4°C下至少保存6個月。實施例4試劑盒靈敏度測定常用50%抑制濃度(即IC5tl,指抑制率為50%時所對應的待測物濃度)來評價競爭ELISA試劑盒靈敏度的指標。將幾種麥角生物堿(麥角胺、雙氫麥角毒堿、麥角新堿等)標準溶液稀釋成系列濃度(O、5、15、45ng/mL)，分別用間接競爭ELISA法分析，結(jié)果顯示，該試劑盒對麥角胺、雙氫麥角毒堿、麥角新堿的最低檢出限分別為5. 7ng/mL、4. 3ng/mL、6. 5ng/mL0實施例5試劑盒特異性試驗以抗體與結(jié)構(gòu)類似化合物的交叉反應程度，即以抑制抗體最大結(jié)合率的50%所需目標分析物的濃度(IC50a)與所需各種結(jié)構(gòu)類化合物的濃度(IC5tlb)之比的百分數(shù)表示，即交叉反應率C. R (%)。C.R (%) =^xlOd交叉反應率越小，抗體特異性越好；反之，抗體光譜性越高。交叉反應結(jié)果如表I所示，結(jié)果表明該試劑盒對以麥角酸為基本結(jié)構(gòu)的麥角生物堿的廣譜性較好，可保證對糧食及其制品中幾種麥角生物堿的同時檢測。表I交叉反應率
權(quán)利要求
1.一種麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒，其特征是包括盒體(11)，盒體(11)內(nèi)設(shè)置有試劑板和96或48孔抗原包被板(10 );所述試劑板包括泡沫塑料模具(I)，泡沫塑料模具(I)上設(shè)置有若干個試劑孔(2 ) (9 )，每個試劑孔內(nèi)均安放試劑瓶。
2.如權(quán)利要求I所述麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒，其特征是所述試劑盒泡沫塑料模具(I)中若干個試劑孔(2) (9)中安放的試劑瓶如下 試劑孔(2)為濃縮洗滌液，1(T30 mL/瓶；取氯化鈉15(T200 g、磷酸二氫鈉4 6 g、磷酸氫二鈉50 70 g、吐溫-20 8 12 mL,以雙蒸水定容至I L ； 試劑孔(3)為樣品稀釋液；為質(zhì)量濃度為109^20%的甲醇-PBS溶液； 試劑孔(4)為顯色液a,3 7mL/瓶,為0. 005 mo I/L過氧化氫脲素溶液； 試劑孔(5)為顯色液b，3 7mL/瓶，為0.0005 mo I/L 3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺溶液; 試劑孔(6)為終止液，3^7mL/瓶，為2 mo I/L的硫酸； 試劑孔(7)為第一抗體溶液，3飛mL/瓶；取廣2 mg麥角酸-KLH，用2 4 mL 0. I mol/L的經(jīng)121 °C高溫滅菌20 min的PBS溶解，然后取f 2 mL溶解的抗原與等量完全弗氏佐劑充分混合，注射，分離抗血清，采用Protein A親和純化多克隆抗體； 試劑孔(8)為酶標二抗溶液，4飛mL/瓶；為辣根過氧化物酶標記羊抗兔抗體溶液；試劑孔(9)為麥角生物堿標準品，共6瓶，2 4 mL/瓶，濃度分別為0、5、10、20、40、80ng/mL，稀釋液為質(zhì)量濃度10% 20%的甲醇-PBS溶液； 所述96或48孔抗原包被板(10)的每個孔內(nèi)均由包被液包被能與抗麥角生物堿抗體特異性結(jié)合反應的包被抗原，并用質(zhì)量濃度I. (T3. 0%的牛血清白蛋白進行封閉； 所述的包被液為碳酸鹽緩沖液，其含碳酸鈉2. 5 3. 5 g、碳酸氫鈉4. 5飛.5 g、并用雙蒸水定容至I L ;所述包被抗原為麥角酸與卵清蛋白的偶聯(lián)物。
3.一種麥角生物堿多殘留分析的酶聯(lián)免疫分析測試盒的檢測方法，其特征是步驟如下 (1)酶標板的制備包被抗原麥角酸-OVA用pH9.6,0. 005 mo I/L的碳酸鹽緩沖液，其含碳酸鈉2. 5 3. 5 g、碳酸氫鈉4. 5飛.5 g、雙蒸水定容至I L,稀釋成1 4 iig/mL,在96或48孔抗原包被板的每孔中各加入105 u L，2飛。C下包被過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌I次，拍干，然后每孔中加入質(zhì)量濃度為I. 09T3. 0%的牛血清白蛋白，2飛。C下封閉過夜，傾去封閉液，用洗滌液洗滌2次，得到酶標版，拍干后，真空包裝后于_20°C保存； (2)待測樣液的制備稱取2.5 5.0 g樣品，置100 mL棕色具塞圓底燒瓶中，加入·12. 5^25. 0 mL 50%的甲醇-PBS溶液，振搖15 20 min,過濾，棄去1/4初濾液，收集試樣濾液，此即樣品提取液；取質(zhì)量濃度為109^20%甲醇-PBS溶液稀釋后作為待測樣液用于ELISA檢測； (3)測試過程取步驟(I)制備的酶標板，恢復至室溫后備用；按照常規(guī)ELISA方法加A 50 ML的標準溶液或處理好的待測樣液到各自的微孔中，每孔加50 ML第一抗體溶液，置于37°C溫育I小時，洗滌液洗3次，再于每孔內(nèi)加入100 ML酶標二抗溶液，37°C溫育0. 5小時，用洗滌液洗5次，每孔各加入50 ML顯色液a和50 ML顯色液b，37°C溫育15分鐘，最后于每孔內(nèi)加入50 ML終止液終止反應，并在450 nm處測其吸光度值，從標準曲線計算樣品中的麥角生物堿含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于檢測麥角生物堿的酶聯(lián)免疫測試盒及其檢測方法，主要適用于用該試劑盒快速批量測定原糧及其制品中多種麥角生物堿的含量，屬于食品分析檢測領(lǐng)域。以幾種麥角生物堿的共有結(jié)構(gòu)麥角酸偶聯(lián)載體蛋白制成免疫抗原并獲得高效價抗體為基礎(chǔ)，以麥角酸偶聯(lián)另一載體蛋白制成的包被抗原包被酶標板，經(jīng)封閉后，加入所述高效價抗體與試驗樣品液進行競爭性結(jié)合反應，然后加入酶標二抗進行顯色反應，最后加入終止液終止反應，通過定量檢測吸光度值可以確定麥角生物堿的含量。本發(fā)明還提供了一種依據(jù)該方法制備的操作簡便易行的酶聯(lián)免疫測試盒。本發(fā)明的優(yōu)點是能用于原糧及其制品中多種麥角生物堿的快速檢測，樣品的前處理過程簡單，耗時少，靈敏度高，能同時檢測批量的樣品，樣品檢測成本遠低于傳統(tǒng)的檢測方法。
文檔編號G01N33/543GK102707046SQ20121016296
公開日2012年10月3日 申請日期2012年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月13日
發(fā)明者匡群, 周鳴鏑, 張東升, 張海濤, 楊婷婷, 鄭惠華, 陸廷瑾, 陳剛, 龔燕 申請人:南通市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所, 江蘇省蘇微微生物研究有限公司