專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，涉及ー種醫(yī)用檢測(cè)耗材，具體涉及ー種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條。
背景技術(shù)：
腸道病毒71型IgM屬于腸道病毒屬A型，腸道病毒一般是以數(shù)字命名的，排列順序代表著其發(fā)現(xiàn)的先后次序。按順序，這種病毒被命名為腸道病毒71型(Humanenterovirus 71),簡(jiǎn)稱(chēng) EV71,是引起嬰幼兒手足 ロ 病(hand-foot and mouth disease ；HFMD)主要病原體之一。人類(lèi)腸病毒71型于1969年首次從加利福尼亞患有中樞神經(jīng)系統(tǒng) 疾病的嬰兒糞便標(biāo)本中分離出來(lái)的。EV71主要引起手足ロ病，還可引起無(wú)菌性腦膜炎、腦干腦炎和脊髄灰質(zhì)炎樣的麻痹等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病。手足ロ病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染是EV71感染而引起的兩大常見(jiàn)臨床癥狀。病毒從咽部或腸道侵入，在局部黏膜或淋巴組織中繁殖，并由局部排出，此時(shí)可引起局部癥狀。繼而病毒又侵入局部淋巴結(jié)，并由此進(jìn)入血液循環(huán)導(dǎo)致第一次病毒血癥。病毒經(jīng)血循環(huán)侵入網(wǎng)狀內(nèi)皮組織、深層淋巴結(jié)、肝、脾、骨髓等處大量繁殖并由此進(jìn)入血液循環(huán)，引起第二次病毒血癥。病毒可隨血流進(jìn)入全身各器官，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚黏膜、心臟等處，進(jìn)一歩繁殖并引起病變。易感者感染EV71后，出現(xiàn)血管變態(tài)反應(yīng)和組織炎癥病變。當(dāng)病毒累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)時(shí)，組織炎癥較神經(jīng)毒性作用更加強(qiáng)烈，中樞神經(jīng)系統(tǒng)小血管內(nèi)皮最易受到損害。細(xì)胞融合、血管炎性變、血栓形成可導(dǎo)致缺血和梗死。在脊髄索、腦干、間腦、大腦和小腦的局部組織中，除嗜神經(jīng)性作用外，還存在廣泛的血管周?chē)蛯?shí)質(zhì)細(xì)胞炎癥。腸道病毒71型IgM危害極大，目前急需簡(jiǎn)便快捷準(zhǔn)確的儀器是實(shí)現(xiàn)對(duì)其的檢測(cè)。免疫膠體金技術(shù)(Immunogold labelling techique)是上世紀(jì)80年代繼突光素、放射性同位素和酶三大標(biāo)記技術(shù)后發(fā)展起來(lái)的固相標(biāo)記免疫測(cè)定技木。該技術(shù)主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，形成肉眼可見(jiàn)的紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)方法中。快速診斷試紙條是20世紀(jì)90年代以來(lái)在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新型層析材料基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的ー項(xiàng)新型體外診斷技木，近年來(lái)發(fā)展迅速，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在硝酸纖維膜上，膠體金標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測(cè)樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體區(qū)域時(shí)，待測(cè)物金標(biāo)試劑復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，膠體金標(biāo)記聚集在檢測(cè)帶上，可通過(guò)目測(cè)得到直觀的顯色結(jié)果。而游離的標(biāo)記物則越過(guò)檢測(cè)帶，從而達(dá)到與檢測(cè)物自動(dòng)分離的目的?？贵w捕獲法(亦稱(chēng)反向間接法)ELISA，主要用于血清中某種抗體亞型成分的測(cè)定。其原理是將抗原固化在基質(zhì)上，加入含抗體的雜交瘤培養(yǎng)上清，洗去未結(jié)合的抗體，結(jié)合于抗原上的抗體可由標(biāo)記有熒光素、放射性核素或一些酶的兔抗小鼠免疫球蛋白抗體識(shí)別。
市場(chǎng)上檢測(cè)腸道病毒71型(IgM)多采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，但試劑盒檢測(cè)雖然檢出限較低(O. 15mg/L)，但是檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，不適合現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定，申請(qǐng)?zhí)枮?01010171862. 2的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)，提出一種腸道病毒71型抗體(IgM)診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，該試劑盒檢測(cè)檢測(cè)腸道病毒71型抗體(IgM)前、后都需要做必要的儀器清洗及保養(yǎng)工作，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，并且要求本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員來(lái)操作。目前，將抗體捕獲法和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合，同間保證檢測(cè)的靈敏度和特異性，并且使用方便，操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確快速，用于檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條鮮有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述領(lǐng)域的需求和空白，本發(fā)明g在提供一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，本發(fā)明試紙條采用抗體捕獲法和免疫膠體金技術(shù)相結(jié)合快速檢測(cè) 人血清、血漿或全血中的腸道病毒71型IgM，用于手足ロ疾病患者的檢測(cè)；本發(fā)明試紙條操作簡(jiǎn)單，拿來(lái)即用，不需要本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員，能夠滿(mǎn)足不同層次人員的需要，容易普及到基層社區(qū)醫(yī)院以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，并且具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、特異的特點(diǎn)。一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，在高度方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，所述反應(yīng)試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上；所述反應(yīng)試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設(shè)有樣品纖維墊，金標(biāo)纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊；在所述樣品纖維墊、金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對(duì)照線C、檢測(cè)線T，所述對(duì)照線C和檢測(cè)線T相互平行且與所述膠體金試紙條長(zhǎng)度方向相垂直，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體；所述對(duì)照線C包被有抗鼠IgG多抗，所述檢測(cè)線T包被有抗μ鏈單抗，所述樣品纖維墊包被有EV71重組抗原。所述金標(biāo)纖維墊上包被的膠體金標(biāo)記的EV71抗體為EV71單抗。所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，在樣品纖維墊上對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測(cè)線T平行的可視的MAX標(biāo)志線。所述吸水材料層的材料是粗纖維吸水紙，所述金標(biāo)纖維墊的材料是吸附金標(biāo)蛋白的玻璃纖維棉。所述保護(hù)膜層為膠帯。所述基板支撐層為不吸水的塑料基板。還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應(yīng)試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡(jiǎn)易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應(yīng)試劑載體吸附層，所述外殼上表面對(duì)應(yīng)于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設(shè)有加樣窗和視窗。一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的試劑盒，其特征在于包括上述任ー膠體金試紙條和樣品稀釋用具。技術(shù)效果根據(jù)膠體金檢測(cè)的原理，將本發(fā)明的膠體金試紙條的粘液端浸入待測(cè)液(待測(cè)液為取10 μ I樣本液，按照1:200倍用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲贫?中，或者在粘液端的樣品纖維層滴加待測(cè)液，待測(cè)液中的靶標(biāo)物質(zhì)在纖維層材料的毛細(xì)作用下沿著試紙條從沾液端向手持端移動(dòng)，待測(cè)液中的EV71 IgM抗體經(jīng)過(guò)樣品墊時(shí)與樣品墊中含有EV71重組抗原，以及經(jīng)過(guò)金標(biāo)纖維層時(shí)與膠體金標(biāo)記EV71單抗粘附在一起井向吸水紙墊方向移動(dòng)，待測(cè)液中的EV71IgM抗體經(jīng)過(guò)檢測(cè)線時(shí)，與檢測(cè)線上包被的抗μ鏈單抗由于特異性結(jié)合導(dǎo)致膠體金在檢測(cè)線上聚集，使檢測(cè)線顯色。其余膠體金標(biāo)記蛋白繼續(xù)遷移，到對(duì)照線吋，由于采用的膠體金標(biāo)記EV71單抗與對(duì)照線上包被的抗鼠IgG多抗能特異結(jié)合，因此，膠體金在對(duì)照線上聚集使對(duì)照線顯色。即檢測(cè)線和對(duì)照線都顯色，表明待測(cè)液為陽(yáng)性；如果，待測(cè)液中不存在EV711 gM抗體，那么，待測(cè)液遷移至檢測(cè)線時(shí)，待測(cè)液中沒(méi)有與檢測(cè)線上包被的抗μ鏈單抗能夠結(jié)合的成分，從而導(dǎo)致膠體金不會(huì)聚集于檢測(cè)線，因此，檢測(cè)線不會(huì)顯色，但是對(duì)照線處仍然顯色。即僅僅有對(duì)照線顯色，表明待測(cè)液為陰性。本發(fā)明的膠體金試紙條不同于現(xiàn)有的試紙條之處在于所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對(duì)照線C、檢測(cè)線Τ，所述對(duì)照線C和檢測(cè)線T相互平行且與所述膠體金試紙條長(zhǎng)度方向相垂直，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體；所述對(duì)照線C包被有抗鼠IgG多抗，所述檢測(cè)線T包被有抗μ鏈單抗，所述樣品纖維墊·包被有EV71重組抗原。本發(fā)明試紙條采用抗體捕獲法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測(cè)血清/血漿/全血樣本中的腸道病毒71型IgM，用于手足ロ疾病患者的檢測(cè)。本發(fā)明試紙條通過(guò)選定金標(biāo)纖維墊、T線、C線和樣品纖維墊上的相應(yīng)的生物包被試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腸道病毒71型IgM快速檢測(cè)，同時(shí)本發(fā)明試紙條兼顧檢測(cè)的靈敏度和特異性。本發(fā)明,優(yōu)選地,所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體為EV71單抗，樣品纖維墊上包被有EV71重組抗原與對(duì)照線T上包被的抗μ鏈單抗進(jìn)行特異性結(jié)合。本發(fā)明，優(yōu)選在樣品纖維墊上對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測(cè)線T平行的可視的MAX標(biāo)志線。用于提醒操作人員，操作時(shí)待測(cè)液不要超過(guò)標(biāo)志線，以免引起假陽(yáng)性。本發(fā)明，優(yōu)選所述樣品纖維墊的材料是玻璃纖維棉，所述吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述纖維素藥膜的材料是硝酸纖維素膜，所述金標(biāo)纖維墊的材料是吸附金標(biāo)蛋白的玻璃纖維棉。這些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保證本發(fā)明檢測(cè)試紙條的檢測(cè)速度和準(zhǔn)確性。本發(fā)明，優(yōu)選保護(hù)膜層為膠帯，使試紙條免受污染，成本低且效果好。本發(fā)明，優(yōu)選基板支撐層為不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撐材料吸收待測(cè)液從而影響水平方向的遷移。本發(fā)明，優(yōu)選還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應(yīng)試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡(jiǎn)易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應(yīng)試劑載體吸附層，所述外殼上表面對(duì)應(yīng)于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設(shè)有加樣窗和視窗。便于攜帶和保存。本發(fā)明試紙條采用抗體捕獲法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測(cè)血清/血漿/全血樣本中的腸道病毒71型IgM，用于手足ロ疾病患者的檢測(cè)；本發(fā)明試紙條操作簡(jiǎn)單，拿來(lái)即用，方便快捷，不需要本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員，能夠滿(mǎn)足不同層次人員的需要，并且保證檢測(cè)的靈敏性、準(zhǔn)確性和高效率。


圖I本發(fā)明試紙條的俯視圖；其中1-手持端，2-對(duì)照線C線，3-檢測(cè)線T線，4MAX標(biāo)志線，5_沾液端，6_纖維素藥膜，7-樣品纖維墊，8-手持端吸水材料墊，9-金標(biāo)纖維墊13-膠帶邊緣線。圖2本發(fā)明試紙條 的縱向剖面圖其中6-纖維素藥膜，7-樣品纖維墊，8-手持端吸水材料墊，9-金標(biāo)纖維墊，10-手持端膠帶，11-箭頭膠帶，12-基板支撐層。
具體實(shí)施例方式提供下述實(shí)施例是為了更好地進(jìn)ー步理解本發(fā)明，并不局限于所述最佳實(shí)施方式，不對(duì)本發(fā)明的內(nèi)容和保護(hù)范圍構(gòu)成限制，任何人在本發(fā)明的啟示下或是將本發(fā)明與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本發(fā)明相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明g在提供一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，本發(fā)明試紙條采用抗體捕獲法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測(cè)血清/血漿/全血樣本中的腸道病毒71型IgM，用于手足ロ疾病患者的檢測(cè)；本發(fā)明試紙條操作簡(jiǎn)單，使用方便，拿來(lái)即用，不需要本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員，能夠滿(mǎn)足不同層次人員的需要，容易普及到基層社區(qū)醫(yī)院，以符號(hào)顯示結(jié)果，擺脫了對(duì)設(shè)備、儀器、人員及貯存和運(yùn)輸環(huán)境的特殊要求，可廣泛用于腸道病毒71型IgM的定性檢測(cè)，并且具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、特異的特點(diǎn)。根據(jù)膠體金檢測(cè)的原理，將本發(fā)明的膠體金試紙條的粘液端浸入待測(cè)液(待測(cè)液為取10 μ I樣本液，按照1:200倍用樣本稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲贫?中，或者在粘液端的樣品纖維層滴加待測(cè)液，待測(cè)液中的靶標(biāo)物質(zhì)在纖維層材料的毛細(xì)作用下沿著試紙條從沾液端向手持端移動(dòng)，待測(cè)液中的EV71 IgM抗體經(jīng)過(guò)樣品墊時(shí)與樣品墊中含有EV71重組抗原，以及經(jīng)過(guò)金標(biāo)纖維層時(shí)與膠體金標(biāo)記EV71單抗粘附在一起井向吸水紙墊方向移動(dòng)，待測(cè)液中的EV71IgM抗體經(jīng)過(guò)檢測(cè)線時(shí)，與檢測(cè)線上包被的抗μ鏈單抗由于特異性結(jié)合導(dǎo)致膠體金在檢測(cè)線上聚集，使檢測(cè)線顯色。其余膠體金標(biāo)記蛋白繼續(xù)遷移，到對(duì)照線吋，由于采用的膠體金標(biāo)記EV71單抗與對(duì)照線上包被的抗鼠IgG多抗能特異結(jié)合，因此，膠體金在對(duì)照線上聚集使對(duì)照線顯色。即檢測(cè)線和對(duì)照線都顯色，表明待測(cè)液為陽(yáng)性；如果，待測(cè)液中不存在EV711 gM抗體，那么，待測(cè)液遷移至檢測(cè)線時(shí)，待測(cè)液中沒(méi)有與檢測(cè)線上包被的抗μ鏈單抗能夠結(jié)合的成分，從而導(dǎo)致膠體金不會(huì)聚集于檢測(cè)線，因此，檢測(cè)線不會(huì)顯色，但是對(duì)照線處仍然顯色。即僅僅有對(duì)照線顯色，表明待測(cè)液為陰性。本發(fā)明試紙條，在高度方向上包括基板支撐層12、反應(yīng)試劑載體吸附層，所述反應(yīng)試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層12上；所述反應(yīng)試劑載體吸附層從沾液端5到手持端I依次設(shè)有樣品纖維墊7，金標(biāo)纖維墊9，纖維素藥膜6，手持端吸水材料墊8 ;在所述樣品纖維墊7、金標(biāo)纖維墊9和手持端吸水材料墊8上覆蓋有保護(hù)膜層。本發(fā)明的膠體金試紙條不同于現(xiàn)有的試紙條之處在于所述纖維素藥膜上6從手持端I到沾液端5依次設(shè)有對(duì)照線C-2、檢測(cè)線Τ-3，所述對(duì)照線C-2和檢測(cè)線Τ-3相互平行且與所述膠體金試紙條長(zhǎng)度方向相垂直，其特征在干，所述金標(biāo)纖維墊9上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體；所述對(duì)照線C-2包被有抗鼠IgG多抗，所述檢測(cè)線Τ-3包被有抗μ鏈單抗，所述樣品纖維墊7包被有EV71重組抗原。本發(fā)明，優(yōu)選地,所述金標(biāo)纖維墊9上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體為EV71單抗，所述樣品纖維墊7上包被有EV71重組抗原，與對(duì)照線T-3上包被的抗μ鏈單抗進(jìn)行特異性結(jié)合。本發(fā)明，優(yōu)選在樣品纖維墊7上對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測(cè)線T 3平行的可視的MAX標(biāo)志線4。用于提醒操作人員，操作時(shí)待測(cè)液不要超過(guò)標(biāo)志線4，以免引起假陽(yáng)性。本發(fā)明，優(yōu)選所述樣品纖維墊7的材料是玻璃纖維棉，所述吸水材料墊8的材料是粗纖維吸水紙，所述纖維素藥膜6的材料是硝酸纖維素膜，所述金標(biāo)纖維墊9的材料是吸附金標(biāo)蛋白的玻璃纖維棉。這些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保證本發(fā)明檢測(cè)試紙條在檢測(cè)速度和準(zhǔn)確性。
本發(fā)明，優(yōu)選保護(hù)膜層為膠帯，使試紙條免受污染，成本低且效果好。本發(fā)明，優(yōu)選基板支撐層12為不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撐材料吸收待測(cè)液從而影響水平方向的遷移。本發(fā)明，優(yōu)選還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應(yīng)試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡(jiǎn)易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應(yīng)試劑載體吸附層，所述外殼上表面對(duì)應(yīng)于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設(shè)有加樣窗和視窗。便于攜帶和保存。實(shí)驗(yàn)例I.本發(fā)明試紙條的制備方法試劑EV71單抗、EV71重組抗原的來(lái)源寧波市疾病預(yù)防控制中心抗鼠IgG多抗和抗P鏈單抗的來(lái)源加拿大Artron BioResearch Inc.進(jìn)ロ。試紙條的制備程序如下步驟I.纖維素藥膜的包被I、將抗鼠IgG多抗作為對(duì)照線C，抗μ鏈單抗作為檢測(cè)線Τ，兩個(gè)試劑分別按照所需的濃度(范圍I. 5-2mg/ml)，用20mM的PBS進(jìn)行稀釋。2、將配制好的上述試劑，按照C、T線位置分別包被到硝酸纖維素膜上，然后干燥6小時(shí)，溫度為30°C，濕度< 35%，從而制得纖維素藥膜。步驟2.金標(biāo)纖維層的標(biāo)記I、取40nm的膠體金溶液，按終濃度8-12 μ I/ml加入O. 2M K2CO3,加入一定濃度的EV71單抗，放置室溫反應(yīng)15-30分鐘，然后按照濃度20 μ Ι/ml加入20%BSA的溶液，用于飽和游離的膠體金。最后lOOOOrpm，離心30分鐘，去除上清液中未結(jié)合的蛋白質(zhì)。用等體積的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)復(fù)溶沉淀的膠體金標(biāo)記原液。2、將上述膠體金標(biāo)記原液按照10-20%濃度，用O. 5m硼酸溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)瑥亩渲瞥蓸?biāo)記后的膠體金工作液。然后再將該工作液鋪于30*30cm玻璃纖維墊上,干燥6小時(shí),溫度為30°C，濕度彡35%，從而制得金標(biāo)墊。步驟3.樣品纖維墊的制備I、用20mMPBS將EV71重組抗原按照一定濃度進(jìn)行稀釋?zhuān)苽涑蓸悠防w維墊處理液。2、用樣品墊處理液鋪于30*30cm玻璃纖維墊上，干燥6小時(shí)，溫度為30°C，濕度(35%，從而制得樣品纖維墊。步驟4.試紙條的組裝I、將塑料板平放在操作臺(tái)上，貼上雙面膠帶。2、撕掉雙面膠帶襯紙，在距塑料板上端30mm處貼上已包被有抗μ鏈單抗和抗鼠IgG多克隆抗體的硝酸纖維素膜。3、將粗纖維吸水紙壓硝酸纖維素膜上端2mm貼上，上端與塑料板上端取齊。 4、將金標(biāo)墊壓于硝酸纖維素藥膜下端2mm。5、將樣品纖維墊壓于金標(biāo)墊上約一半,下端與塑料板下端取齊貼上。6、將箭頭膠帶壓硝酸纖維素膜I. 5-2mm貼上。7、將手持端膠帶壓粗纖維吸水紙貼上。實(shí)施例2.使用方法及方法學(xué)對(duì)比實(shí)驗(yàn)本產(chǎn)品使用方法待測(cè)血清/血漿/全血，稀釋200倍，滴加到水平試紙條的樣品纖維層上，或?qū)⒃嚰垪l的粘液端MAX線以下部分浸入稀釋樣品中3 5分鐘，取出水平放置等待顯色。對(duì)比I :產(chǎn)品對(duì)比本發(fā)明產(chǎn)品與現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)腸道病毒71型IgM的產(chǎn)品相比具有快速，準(zhǔn)確，特異，便捷的特點(diǎn)，并且在檢測(cè)腸道病毒71型IgM前、后都不需要做必要的儀器清洗及保養(yǎng)工作，并且不要求本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員來(lái)操作。例如試劑盒等其他產(chǎn)品對(duì)照產(chǎn)品I :申請(qǐng)?zhí)枮?01110151009. 9的發(fā)明專(zhuān)利公開(kāi)的ー種腸道病毒71型(EV71) IgM抗體檢測(cè)試紙條。使用方法將全血、血漿或血清標(biāo)本100-150 μ I直接滴加檢測(cè)，10-15分鐘判讀結(jié)果。對(duì)照產(chǎn)品2 :北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司《腸道病毒71型IgM抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)》國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2010第3400526號(hào)使用方法I配液將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋。2編號(hào)將樣品對(duì)應(yīng)微孔板按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照3孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔和空白對(duì)照I孔。(用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，可不設(shè)空白對(duì)照孔)。3加稀釋液每孔加入樣品稀釋液100 μ 1，空白孔除外。4加樣分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)樣品或明、陽(yáng)性對(duì)照10μ 1，輕輕振蕩混均。5溫育用封板膜封板后,置37°C溫育30分鐘。6洗板小心接掉封板膜，用洗板機(jī)洗滌5遍，最后一次盡量扣干。7加抗原每孔加入抗原試劑50 μ 1，空白孔除外。8加酶每孔加入抗原試劑50 μ 1，空白除外，輕輕振蕩混均。9溫育操作同5.10洗板操作同6.
11顯色每孔加入顯色劑A、B液各50 μ 1，輕輕振蕩混均，37°C避光顯色15分鐘。12測(cè)定每孔加終止液50 μ 1，輕輕振蕩混均，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450nm/630nm檢測(cè))，用空白孔調(diào)零點(diǎn)后測(cè)定各孔A值。對(duì)比數(shù)據(jù)列表如表I :
權(quán)利要求
1.一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，在高度方向上包括基板支撐層、反應(yīng)試劑載體吸附層，所述反應(yīng)試劑載體吸附層固定在所述基板支撐層上； 所述反應(yīng)試劑載體吸附層從沾液端到手持端依次設(shè)有樣品纖維墊，金標(biāo)纖維墊，纖維素藥膜，手持端吸水材料墊； 在所述樣品纖維墊、金標(biāo)纖維墊和手持端吸水材料墊上覆蓋有保護(hù)膜層，所述纖維素藥膜墊上從手持端到沾液端依次設(shè)有對(duì)照線C、檢測(cè)線T，所述對(duì)照線C和檢測(cè)線T相互平行且與所述膠體金試紙條長(zhǎng)度方向相垂直，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體；所述對(duì)照線C包被有抗鼠IgG多抗，所述檢測(cè)線T包被有抗μ鏈單抗，所述樣品纖維墊包被有EV71重組抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體為EV71單抗。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，在樣品纖維墊上對(duì)應(yīng)的保護(hù)膜層上表面標(biāo)有與所述檢測(cè)線T平行的可視的MAX標(biāo)志線。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣品纖維墊的材料是玻璃纖維棉，所述吸水材料墊的材料是粗纖維吸水紙，所述金標(biāo)纖維墊的材料是吸附金標(biāo)蛋白的玻璃纖維棉。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，所述保護(hù)膜層為膠帯。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，所述基板支撐層為不吸水的塑料基板。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，其特征在于，還包括外殼，所述外殼具有中空位，所述中空位與所述反應(yīng)試劑載體吸附層及所述基板支撐層形成的簡(jiǎn)易膠體金試紙條的形狀大小相匹配，用于裝載所述反應(yīng)試劑載體吸附層，所述外殼上表面對(duì)應(yīng)于樣品纖維墊及纖維素藥膜的位置分別設(shè)有加樣窗和視窗。
8.一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的試劑盒，其特征在于包括上述任一膠體金試紙條和樣品稀釋用具。
全文摘要
本發(fā)明一種用于快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM的膠體金試紙條，屬醫(yī)用檢測(cè)耗材，其特征在于，所述金標(biāo)纖維墊上包被有膠體金標(biāo)記的EV71抗體；所述對(duì)照線C包被有抗鼠IgG多抗，所述檢測(cè)線T包被有抗μ鏈單抗，所述樣品纖維墊包被有EV71重組抗原，本發(fā)明試紙條采用抗體捕獲法原理以及膠體金技術(shù)快速檢測(cè)血清/血漿/全血樣本中的腸道病毒71型IgM，本發(fā)明試紙條簡(jiǎn)捷靈敏準(zhǔn)確；可快速檢測(cè)腸道病毒71型IgM，用于手足口疾病患者的檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N33/577GK102680694SQ20121016445
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月24日
發(fā)明者倪紅霞, 孫茜, 張瑩 申請(qǐng)人:寧波市疾病預(yù)防控制中心, 藍(lán)十字生物藥業(yè)(北京)有限公司