專利名稱:大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種用于圈養(yǎng)動物適時人工授精的判斷依據,特別是涉及一種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法。
背景技術:
大熊貓是我國特有的珍稀瀕危野生動物,其自身繁殖能力偏低,雌性大熊貓一年只有一次發(fā)情期,而一次發(fā)情期中只有I 3天接受自然交配,其排卵時間可能只有一天,并且圈養(yǎng)大熊貓自然交配比例偏低,目前只有50%左右的大熊貓能夠自然交配,有一半左右的大熊貓需要通過人工授精完成繁殖,所以,確定大熊貓適時適時配種時機是大熊貓繁育的關鍵技術。在上世紀90年代中期以前,對大熊貓適時配種時機的判斷主要根據大熊貓發(fā)情行為定性觀察,憑經驗確定大熊貓適時配種時機,導致對大熊貓適時人工授精時間把握不清,缺乏量化指標,這也是導致大熊貓繁殖效率低下的重要原因。上世紀90年代中期以后,通過監(jiān)測大熊貓發(fā)情期尿液雌激素變化規(guī)律,利用雌激素指標作為大熊貓適時配種的指標逐漸開始應用于大熊貓人工授精中,但是對采用雌激素指標作為大熊貓適時人工授精的指標存在很大的爭議,尚無統(tǒng)ー觀點。目前所提出的大熊貓適時人工授精觀點全部基于雌激素峰值出現時間來提出,由于大熊貓發(fā)情期雌激素變化曲線本身為波動性曲線,會出現多個峰值,并且大熊貓排卵還涉及孕激素、發(fā)情行為等其他多個因素,對于如何確切判斷雌激素峰值是否為真實峰值尚無任何相關報道。
發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是ー種為大熊貓進行適時人工授精提供判斷標準的大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法。為解決上述技術問題,本發(fā)明ー種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,包括以下步驟(I)春季繁育期間,按時間要求對雌性大熊貓進行尿樣收集,同時觀察大熊貓發(fā)情行為,在尿樣上標記后進行冷凍或冷藏保存,然后對尿樣采用酶聯免疫吸附試驗檢測雌ニ醇值和孕酮值;所述記錄在尿樣上的標記主要包括雌性大熊貓呼名、排尿時間等;所述的雌ニ醇值和孕酮值是指雌ニ醇和孕酮在尿樣中的濃度值大小;所述雌ニ醇為尿樣中主要的一種雌激素,所述孕酮為尿樣中主要的一種孕激素;(2)在以大熊貓排尿時間作為橫坐標、以雌ニ醇值和孕酮值作為縱坐標的平面坐標上,分別標出排尿時間及其對應的雌ニ醇值和孕酮值所確定的兩組坐標點,將兩組坐標點分別依次連接起來,繪制出雌ニ醇值變化曲線圖和孕酮值變化曲線圖,找出雌ニ醇最大峰值及其對應的孕酮值;所述的雌ニ醇最大峰值亦是雌ニ醇的最高值;(3)根據雌ニ醇最大峰值出現時間前的孕酮值計算出發(fā)情雌性大熊貓孕酮基礎、值,并計算出雌ニ醇最大峰值或其后的雌ニ醇峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值;(4)依據雌ニ醇值變化曲線圖和孕酮值變化曲線圖,將雌ニ醇最大峰值或其后的雌ニ醇峰值在下降幅 度達到50%以上所用的時間、雌ニ醇從最大峰值或其后的峰值在下降的過程中孕酮值是否呈上升趨勢和大熊貓是否出現典型發(fā)情高峰行為、雌ニ醇最大峰值或其后的雌ニ醇峰值所對應的的孕酮值與孕酮基礎值的比值等情況同時結合起來,共同判斷出大熊貓雌ニ醇真實峰值;所述出現大熊貓雌ニ醇真實峰值的時刻為對應的大熊貓排尿時間。所述的ー種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,若雌ニ醇最大峰值在10小吋 20小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌ニ醇連續(xù)下降到基礎值、雌ニ醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于2,同時在雌ニ醇從最大峰值下降的過程中雌ニ醇最大峰值對應的孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定此雌ニ醇最大峰值為熊貓雌ニ醇真實峰值。所述的ー種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,若雌ニ醇最大峰值在20小吋 31小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌ニ醇連續(xù)下降到基礎值、雌ニ醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于I. 8,同時在雌ニ醇從最大峰值下降的過程中孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定此雌ニ醇最大峰值為大熊貓雌ニ醇真實峰值。所述的ー種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,若雌ニ醇從最大峰值下降50%的時間在20小時以上、雌ニ醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值小于I. 8,同時雌ニ醇最大峰值之后出現ー個或多個峰值、且雌ニ醇從最大峰值下降的過程中雌ニ醇最大峰值對應的孕酮值未呈上升趨勢和大熊貓未出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定雌ニ醇最大峰值為假峰值;此時,大熊貓雌ニ醇真實峰值為雌ニ醇最大峰值之后的某一峰值,并且該峰值必須同時具備在10小吋 20小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌ニ醇連續(xù)下降到基礎值、該峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于2、在雌ニ醇從該峰值下降的過程中該峰值對應的孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為等情況。所述的10小吋 20小時范圍是指大熊貓雌ニ醇從真實峰值下降50%所用時間的主要判斷標準,它是通過78例大熊貓發(fā)情期雌ニ醇變化規(guī)律的統(tǒng)計中總結出的,78例的數據量遠遠超過了以往的任何報道量,是迄今為止世界上最大的數據量,78例中有80%的大熊貓個體均在這ー范圍內,因此,10小吋 20小時范圍的判斷標準具有非常高的可靠性。所述的大熊貓典型發(fā)情高峰行為包括明顯的壓尾反射(在發(fā)情高峰期大熊貓出現特殊的發(fā)情行為,即用竹竿刺激大熊貓后軀,大熊貓出現靜立、翹尾反應)和待配行為(大熊貓自主出現靜立、翹尾、軀干下沉現象)。所述的ー種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,其發(fā)情雌性大熊貓孕酮基礎值的計算按以下步驟進行①選取大熊貓雌ニ醇最大峰值前的所有孕酮值,找出所選孕酮值中的最大值A,計算出所選孕酮值的算數平均值B、標準差C,然后得出B+2C = D ;②如果A-D為負,此時的算數平均值B即為孕酮基礎值;③如果A-D為正,則從選取的孕酮值中找出大于D的所有孕酮值,按①步驟的方式從剩余孕酮值中找出最大值A1,計算出剰余孕酮值的算數平均值B1、標準差C1,然后得出B-C1 = D1 ;④如果A1-D1仍然為正,則重復①步驟的方式,直到An-Dn為負,此時的算數平均值Bn即為孕酮基礎值,其中η代表自然數。所述的任何一種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,其按時間要求對雌性大熊貓進行尿樣收集的過程如下(I)觀察雌性大熊貓外陰部,若外陰部出現紅腫后,則每天收集I份雌性大熊貓晨尿;
(2)從雌ニ醇連續(xù)上升后的第4天開始,每天間隔8小時左右收集3份尿樣;(3)雌性大熊貓發(fā)情高峰行為前后,每天間隔5小時左右收集5份尿樣;(4) 一旦監(jiān)測到雌ニ醇值有下降趨勢,將尿樣收集間隔時間縮短為3小時左右。所述的任何一種大熊貓雌ニ醇真實峰值的判斷方法,其每一次大熊貓尿樣收集包括以下步驟(I)清潔并晾干獸舍硬化地面;(2)將需收集尿樣的大熊貓放入獸舍,工作人員守候,一旦大熊貓排出小便,立即將大熊貓放到其它獸舍;(3)用清潔注射器采集地面新鮮尿樣,裝入冷凍管,做好標記,然后立即放入冷凍或冷藏裝置?,F有資料無任何關于如何判斷大熊貓雌激素真實峰值的報道以及相關技術與判斷標準,本發(fā)明將解決如何判斷大熊貓雌ニ醇的真實峰值,同時確定判斷標準,并將雌ニ醇真實峰值對應的大熊貓排尿時間確定為雌ニ醇真實峰值的出現時間。大熊貓尿樣采集間隔時間會直接影響到對峰值的判斷,間隔時間過長會漏掉真實的峰值,間隔時間過短一方面會増加工作量以及對動物的干擾,另一方面會降低采樣的可行性?,F有資料報道的大熊貓尿樣采集時間不確定且不統(tǒng)一,有的采集時間間隔長達I天, 會導致對峰值時間的判斷誤差范圍較大;而本發(fā)明采用的采樣時間間隔方案在發(fā)情高峰期間隔時間為3小時左右,使對大熊貓雌ニ醇峰值時間的判斷誤差范圍縮小到I. 5小時左右,大大縮小了對大熊貓雌ニ醇峰值時間的判斷誤差。現有公開報道對大熊貓雌激素峰值的判斷時間均單純檢測尿液雌激素水平,而沒有檢測發(fā)情高峰期孕激素水平與行為學綜合判斷。判斷雌激素是否出現真實峰值的關鍵是判斷雌激素是否出現真實的下降,一旦監(jiān)測出現雌激素下降,尚不能判斷究竟是雌激素波動還是真實的下降。為了解決該問題本發(fā)明一方面在監(jiān)測尿液雌ニ醇的同時監(jiān)測尿液孕酮水平,同時確定量化雌ニ醇真實下降的標準,采用行為學輔助手段綜合判斷大熊貓尿液雌ニ醇是否為真實下降。判斷雌ニ醇是否出現真實峰值的關鍵是判斷雌ニ醇是否出現真實的下降,本發(fā)明將通過統(tǒng)計分析盡可能多的大熊貓發(fā)情期雌ニ醇數據,確定大熊貓雌ニ醇峰值的下降速度參考值范圍來量化確定大熊貓雌ニ醇是否出現真實下降。一旦監(jiān)測到大熊貓出現可疑峰值,通過加大采樣密度將采樣間隔時間縮短到3小時左右連續(xù)采樣,監(jiān)測雌ニ醇下降的速度來確定雌ニ醇是否為真實下降。成都大熊貓繁育研究基地多年來對共計78例大熊貓雌ニ醇變化規(guī)律進行了統(tǒng)計分析,分析雌ニ醇從真實峰值下降50%以上所需的最短時間分布,繪制出如圖I所示的發(fā)情期雌性大熊貓雌ニ醇從真實峰值下降50%所用時間分布頻率,采用百分位數法確定大熊貓尿雌ニ醇峰值下降50%所用時間參考值范圍,結果見表I :表I.雌ニ醇真實峰值下降50%所需時間(h)
權利要求
1.一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,包括以下步驟 (1)春季繁育期間,按時間要求對雌性大熊貓進行尿樣收集,同時觀察大熊貓發(fā)情行為,在尿樣上標記后進行冷凍或冷藏保存,然后對尿樣采用酶聯免疫吸附試驗檢測雌二醇值和孕酮值; (2)在以大熊貓排尿時間作為橫坐標、以雌二醇值和孕酮值作為縱坐標的平面坐標上,分別標出排尿時間及其對應的雌二醇值和孕酮值所確定的兩組坐標點,將兩組坐標點分別依次連接起來,繪制出雌二醇值變化曲線圖和孕酮值變化曲線圖,找出雌二醇最大峰值出現時間及其對應的孕酮值; (3)根據雌二醇最大峰值出現時間前的孕酮值計算出發(fā)情雌性大熊貓孕酮基礎值,并計算出雌二醇最大峰值或其后的雌二醇峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值; (4)依據雌二醇值變化曲線圖和孕酮值變化曲線圖,將雌二醇最大峰值或其后的雌二醇峰值在下降幅度達到50%以上所用的時間、雌二醇從最大峰值或其后的峰值在下降的過程中孕酮值是否呈上升趨勢和大熊貓是否出現典型發(fā)情高峰行為、雌二醇最大峰值或其后的雌二醇峰值所對應的的孕酮值與孕酮基礎值的比值等情況同時結合起來,共同判斷出大熊貓雌二醇真實峰值。
2.根據權利要求I所述的一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其特征在于若雌二醇最大峰值在10小時 20小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌二醇連續(xù)下降到基礎值、雌二醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于2,同時在雌二醇從最大峰值下降的過程中孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定此雌二醇最大峰值為大熊貓雌二醇真實峰值。
3.根據權利要求I所述的一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其特征在于若雌二醇最大峰值在20小時 31小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌二醇連續(xù)下降到基礎值、雌二醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于I. 8,同時在雌二醇從最大峰值下降的過程中孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定此雌二醇最大峰值為大熊貓雌二醇真實峰值。
4.根據權利要求I所述的一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其特征在于若雌二醇從最大峰值下降50%的時間在20小時以上、雌二醇最大峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值小于I. 8,同時雌二醇最大峰值之后出現一個或多個峰值、且雌二醇從最大峰值下降的過程中孕酮值未呈上升趨勢和大熊貓未出現典型發(fā)情高峰行為,則可以確定此雌二醇最大峰值為假峰值;此時,大熊貓雌二醇真實峰值為雌二醇最大峰值之后的某一峰值,并且該峰值必須同時具備在10小時 20小時范圍內下降幅度達到50%以上、之后雌二醇連續(xù)下降到基礎值、該峰值對應的孕酮值與孕酮基礎值的比值大于2、在雌二醇從該峰值下降的過程中該峰值對應的孕酮值呈上升趨勢和大熊貓出現典型發(fā)情高峰行為等情況。
5.根據權利要求I 4所述的任何一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其按時間要求對雌性大熊貓進行尿樣收集的過程如下 (1)觀察雌性大熊貓外陰部,若外陰部出現紅腫后,則每天收集I份雌性大熊貓晨尿; (2)從雌二醇連續(xù)上升后的第4天開始,每天間隔8小時左右收集3份尿樣; (3)雌性大熊貓發(fā)情高峰行為前后,每天間隔5小時左右收集5份尿樣; (4)一旦監(jiān)測到雌二醇值有下降趨勢,將尿樣收集間隔時間縮短為3小時左右。
6.根據權利要求5所述的一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其每一次大熊貓尿樣收集包括以下步驟 (1)清潔并晾干獸舍硬化地面; (2)將需收集尿樣的大熊貓放入獸舍,工作人員守候,一旦大熊貓排出小便,立即將大熊貓放到其它獸舍; (3)用清潔注射器采集地面新鮮尿樣,裝入冷凍管,做好標記,然后立即冷凍或冷藏保存。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大熊貓雌二醇真實峰值的判斷方法,其通過收集和化驗分析春季繁育期間雌性大熊貓尿樣,將雌二醇最大峰值或其后的雌二醇峰值在下降幅度達到50%以上所用的時間、雌二醇從最大峰值或其后的峰值在下降的過程中孕酮值是否呈上升趨勢和大熊貓是否出現典型發(fā)情高峰行為、雌二醇最大峰值或其后的雌二醇峰值所對應的的孕酮值與孕酮基礎值的比值等情況同時結合起來,共同判斷出大熊貓雌二醇真實峰值;由于本發(fā)明是從目前最大數據量的78例發(fā)情期大熊貓雌二醇變化規(guī)律統(tǒng)計分析中總結出的,因此具有非常高的可靠性,不僅填補了大熊貓研究領域的空白,還為提高圈養(yǎng)大熊貓人工授精受孕率提供了科學依據。
文檔編號G01N33/74GK102735852SQ20121019176
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月12日 優(yōu)先權日2012年6月12日
發(fā)明者侯蓉, 蘭景超, 張志和, 王成東, 羅娌, 黃河, 黃祥明 申請人:成都大熊貓繁育研究基地