專利名稱：一種全量程c反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膠體金增強(qiáng)的免疫比濁檢測試劑盒；更具體來說，涉及一種全量程C反應(yīng)蛋白免疫比濁檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein)是人體中的肝臟細(xì)胞所產(chǎn)生的特殊蛋白，為發(fā)炎反應(yīng)的指標(biāo)；C-反應(yīng)蛋白的分子量為115KD，由含有五個相同的末端糖基化的多肽亞單位組成，每個亞單位含有187個氨基酸，這些亞單位間通過非共價鍵連結(jié)成環(huán)狀的五聚體，并有一個鏈間二硫鍵。C-反應(yīng)蛋白最早是Tillett及Francis等人于1930年時在急性大葉性肺炎患者的血清中發(fā)現(xiàn)的，他們發(fā)現(xiàn)存在一種能在Ca2+存在時與肺炎球菌細(xì)胞壁中的C-多糖發(fā)生特 異性沉淀反應(yīng)的物質(zhì)。1941年,Avery等測知它是一種蛋白質(zhì),故稱為C反應(yīng)蛋白(C-反應(yīng)蛋白)。1944年,Jones將其作為臨床風(fēng)濕熱診斷標(biāo)準(zhǔn)的次要指標(biāo)之一。后來，人們在非感染性疾病和感染性疾病患者的急性期血清中都測到了 C-反應(yīng)蛋白，于是人們認(rèn)為，C-反應(yīng)蛋白是組織損傷的一種非特異性反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，病毒或細(xì)菌感染、梗塞、免疫復(fù)合物沉積等因素都可導(dǎo)致組織損傷。在組織損傷的急性期，肝臟合成的一些血漿蛋白顯著增力口，這些蛋白質(zhì)通稱為急性時相蛋白，其中C-反應(yīng)蛋白是急性時相蛋白中變化最顯著的一種。C-反應(yīng)蛋白在正常人血清中只含有微量，一般在lmg/L以下，它的濃度保持長期穩(wěn)定，半衰期長(約18-20小時)，且不受性別及食物的影響；在組織受到損傷、炎癥、感染或腫瘤破壞時C-反應(yīng)蛋白可以在數(shù)小時內(nèi)急劇上升，可增高數(shù)倍或數(shù)百倍，2-3天達(dá)峰值，急性炎癥時濃度可達(dá)1000mg/L，待病情改善時逐漸下降，恢復(fù)正常。C-反應(yīng)蛋白被廣泛應(yīng)用于臨床疾病的早期診斷及鑒別診斷，其升高可見于1、組織損傷、感染、腫瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎癥性疾病，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性血管炎、多肌痛風(fēng)濕??；2、術(shù)后感染及并發(fā)癥的指標(biāo)手術(shù)后病人C-反應(yīng)蛋白升高，術(shù)后7-10天C-反應(yīng)蛋白水平應(yīng)下降，如C-反應(yīng)蛋白不降低或再次升高，提示可能并發(fā)感染或血栓栓塞；3、可作為細(xì)菌性感染和病毒性感染的鑒別診斷大多數(shù)細(xì)菌性感染會引起患者血清C-反應(yīng)蛋白升高，而病毒性感染則多數(shù)不升高。超敏C 反應(yīng)蛋白(High sensitivity C-reactive protein,以下簡稱 hs_C_ 反應(yīng)蛋白)與C-反應(yīng)蛋白并不是兩種蛋白，只是從靈敏度上加以區(qū)分，超敏C反應(yīng)蛋白(hs-C-反應(yīng)蛋白)最低檢測限達(dá)0. lmg/1 ;原先認(rèn)為C-反應(yīng)蛋白是正常的血清卻發(fā)現(xiàn)同未來發(fā)生心血管疾病密切相關(guān)，大量研究資料表明，動脈粥樣化的血栓形成除了是脂肪堆積的過程外也是一個慢性炎癥過程；hs C-反應(yīng)蛋白輕度升高與冠狀動脈事件、中風(fēng)及周圍血管病相關(guān)，是一項獨立的危險因素；hs-C-反應(yīng)蛋白已被證實是由慢性炎癥引發(fā)心血管疾病的獨立危險因素，檢測其濃度對心血管疾病的干預(yù)及預(yù)后起重要作用而被臨床重視。流行病學(xué)調(diào)查也顯示，hs-C-反應(yīng)蛋白水平升高者發(fā)生急性腦卒中的幾率是正常健康人的2倍，發(fā)生心肌梗死的幾率是正常者的3倍。2003年歐洲高血壓防治指南(ESH/ESC)正式推薦，高血壓患者需檢測hs-C-反應(yīng)蛋白水平。C反應(yīng)蛋白的常用檢測有免疫比濁法和酶聯(lián)免疫吸附法等。由于酶聯(lián)免疫吸附法檢測耗時且操作復(fù)雜，已經(jīng)不能滿足大型醫(yī)院快速定量檢測的要求，而免疫比濁法隨著全自動生化儀的普及，已經(jīng)發(fā)展出來多種快速免疫比濁檢測技術(shù)。1977年Sternberg創(chuàng)立了速率散射免疫比濁法，其基本原理是抗原抗體在緩沖液中快速形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)一定波長的光沿著水平軸照射時，碰到小顆粒的免疫復(fù)合物可導(dǎo)致光散射，散射強(qiáng)度與免疫復(fù)合物的含量成正比。但免疫比濁法由于檢測靈敏度仍然不能達(dá)到臨床要求，于是出現(xiàn)了乳膠增強(qiáng)免疫比濁法。乳膠增強(qiáng)免疫透射比濁法的基本原理是首先將抗體吸附在一種膠乳顆粒上，當(dāng)遇到相應(yīng)的抗原時，抗原抗體結(jié)合而出現(xiàn)乳膠凝集。單個乳膠顆粒的大小在入射波長之內(nèi)，光線可透過，當(dāng)兩個以上的乳膠顆粒凝集時，可阻礙光線透過，使得透射光減少，其減少程度與抗原的量成正比。此法提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，得到了廣泛的應(yīng)用。目前國內(nèi)用于全自動生化儀的乳膠增強(qiáng)免疫透射比濁法C-反應(yīng)蛋白檢測試劑出現(xiàn)了兩種(普通C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒和超敏C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒)，普通C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒有較高的線性但靈敏度不好，超敏C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒有較高的靈敏度但線性 較低，這樣就出現(xiàn)了一種試劑兩種名稱，用途也有所區(qū)別。近幾年來，隨著檢驗技術(shù)的發(fā)展，市場上開始出現(xiàn)了一種全量程C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒，但這種全量程C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒的靈敏度依然不高，只能達(dá)到0. 5mg/L，達(dá)不到臨床對超敏C反應(yīng)蛋白的檢測要求；而檢測上限也只有300mg/L，也滿足不了部分急性炎癥病人高濃度C反應(yīng)蛋白的診斷需求。而且乳膠增強(qiáng)免疫比濁法反應(yīng)后會產(chǎn)生沉淀，不利于生化儀的清洗，而且乳膠制造成本較高，導(dǎo)致乳膠增強(qiáng)免疫比濁試劑盒價格偏高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高靈敏全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，該試劑盒不僅線性范圍寬、靈敏度高，而且制造成本低廉，反應(yīng)后不產(chǎn)生沉淀方便生化儀清洗。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，包括試劑Rl和試劑R2 ;所述試劑Rl的組分包括10 20mmol/L的緩沖液、0. 5% 2%w/v的促凝劑、0. 5% 2%w/v的BSA、0. 07% 0. l%w/v的防腐劑；所述試劑R2的組分包括0. 1% 0. 5%w/v標(biāo)記有抗人C-反應(yīng)蛋白抗體的膠體金顆粒、0. 2% 2%w/v的穩(wěn)定劑、10 20mmol/L的緩沖液、0. 07% 0. l%w/v的防腐劑；所述膠體金顆粒直徑為35nm 60nm。由于抗體的活性容易受到蛋白酶的分解、高溫變性、滲透壓等影響，所以必須加入穩(wěn)定劑來穩(wěn)定抗體的結(jié)構(gòu)和活性。所述穩(wěn)定劑為蛋白質(zhì)、PEG、糖和無機(jī)鹽中的一種或多種；所述蛋白質(zhì)為BSA或明膠；所述糖為蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露糖和葡萄糖中的一種或多種；所述無機(jī)鹽為氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣中的一種或多種。所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、tris緩沖液和HEPES緩沖液中的一種或多種；所述緩沖液pH值為6 8. 5。所述緩沖液可以為其他具有相似特征的緩沖液。
所述促凝劑為PEG20000。促凝劑主要作用是可以增加抗原抗體反應(yīng)速率。本發(fā)明所述的促凝劑優(yōu)選0. 05% 2%w/v的PEG20000。為了防止試劑受到微生物污染，本發(fā)明試劑Rl和試劑R2中還加入了防腐劑，本發(fā)明所述的防腐劑為疊氮化鈉、硫柳汞、苯酚中的一種或多種。優(yōu)選的，本發(fā)明防腐劑為0. 07% 0. l%w/v的疊氮化鈉。所述抗人C-反應(yīng)蛋白抗體為多克隆抗體或多克隆抗體與單克隆抗體的混合物。所述試劑R2的制備方法為制備膠體金溶液，將用緩沖液稀釋后的抗人C-反應(yīng)蛋白抗體溶液加入到所述膠體金溶液中，制備得到含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液，離心去掉上清液,用溶液A溶解膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物，恢復(fù)至所述含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液體積的1/50 1/10，制得試劑R2 ;所述溶液A的組分包括緩沖液、穩(wěn)定劑、和防腐劑。本發(fā)明所述的一種全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，用于測定人血清或血漿中的C-反應(yīng)蛋白含量。本發(fā)明的試劑盒的制備方法(I)試劑Rl制備緩沖液中加入PEG20000、疊氮化鈉等，混勻制得Rl試劑；(2)試劑R2制備制備膠體金溶液，將用緩沖液稀釋后的抗人C-反應(yīng)蛋白抗體溶液加入到所述膠體金溶液中，制備得到含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液，離心去掉上清液得到含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的沉淀，用溶液A溶解所述含有膠體金-抗 人CRP抗體復(fù)合物的沉淀，恢復(fù)至所述含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液體積的1/50 1/10。本發(fā)明的原理本發(fā)明利用抗原抗體專一性特異性反應(yīng)原理和金顆粒聚集導(dǎo)致顏色改變的原理，將抗人C-反應(yīng)蛋白抗體標(biāo)記上膠體金顆粒，待測樣品中的人C-反應(yīng)蛋白與多個抗體發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生抗原抗體復(fù)合物，使得膠體金顆粒聚集成大顆粒，從而導(dǎo)致溶液顏色發(fā)生明顯改變，光吸收發(fā)生改變，光吸收的變化量與抗原抗體復(fù)合物的量成正比，從而與C-反應(yīng)蛋白抗原量成正比。配套全自動生化儀則可實現(xiàn)自動定量檢測。綜上所述，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(I)、本發(fā)明試劑盒具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好的特點，可用于檢測血清或血漿中C-反應(yīng)蛋白含量，適用于臨床全自動生化分析儀。本發(fā)明試劑盒檢測C-反應(yīng)蛋白的靈敏度可以達(dá)到0. 01mg/L,檢測上限達(dá)到500mg/L。(2)、本發(fā)明試劑盒反應(yīng)后不產(chǎn)生沉淀，便于生化儀的清洗，延長了生化儀的使用壽命。(3)、本發(fā)明的試劑盒采用膠體金標(biāo)記抗體，降低了 C-反應(yīng)蛋白免疫比濁檢測試劑盒的制造成本，具有較大的市場競爭力。
具體實施例方式下面的實施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例一試劑盒制備I :
(I)試劑Rl的制備按如下步驟向20mmol/L Tris緩沖液(pH7. 5)中加入終濃度為0. 5% (w/v)的BSA，加入終濃度為2% (w/v)的PEG20000，加入終濃度為0. 09% (w/v)的NaN3。由此制得試劑Rl。(2)膠體金的制備按如下步驟a)玻璃容器的清潔用自來水流水沖洗干凈,然后用1% 2%鹽酸浸泡過夜,取出用大量自來水沖洗，然后用洗潔劑洗滌并用流水沖洗干凈，再用蒸餾水浸泡過夜，然后進(jìn)行膠體金潤洗。b)準(zhǔn)備1%氯金酸和1%檸檬酸鈉溶液，0. 2um濾膜過濾。c)取IOOOml圓底燒瓶I個，放入轉(zhuǎn)子，加入500ml超純水。d)加入5ml 1%氯金酸,600rpm,熱約至溶液沸騰,立即吸取1%朽1檬酸鈉溶液5ml 快速加入到燒瓶中。繼續(xù)加熱攪拌約lOmin，溶液先變黑色，然后逐漸變紫紅色。 e)冷卻關(guān)閉加熱開關(guān)并繼續(xù)攪拌lOmin，然后停止攪拌冷卻至室溫，用超純水恢復(fù)到原體積。f )電鏡掃描制得的膠體金顆粒直徑為40nm，制得的膠體金備用。(3)試劑R2的制備按如下步驟a)將抗人C-反應(yīng)蛋白抗體用磷酸鹽緩沖液(pH7. 2)稀釋成0. lmg/ml ；b)用K2CO3調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH到8. O ；c)將抗體溶液加入到膠體金中，并攪拌反應(yīng)30分鐘，其中抗體溶液與膠體金溶液的體積比為I 10 ；d)將終濃度為2% (w/v)的BSA加入到上述膠體金溶液中，并攪拌反應(yīng)30分鐘；e)10000rpm離心30分鐘，然后用溶液A復(fù)溶至原體積的1/10，制得試劑R2 ;制備得到的試劑R2標(biāo)記有抗人C-反應(yīng)蛋白抗體的膠體金顆粒的濃度為0. l%w/v。所述溶液A的成分包括20mmol/L Tris 緩沖液 pH8. 0、0. 2% (w/v)的穩(wěn)定劑、0. 1% (w/v)的 NaN3。所述0. 2% (w/v)的穩(wěn)定劑是指IOOml溶液A中穩(wěn)定劑的質(zhì)量為0. 2g。所述穩(wěn)定劑的組成成分包括0. 7%NaCl、2%BSA和0. 5%蔗糖。所述0. 7%NaCl是指NaCl的質(zhì)量占穩(wěn)定劑總質(zhì)量的
0.7%。實施例二試劑盒制備2 (I)試劑Rl的制備向10mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH6. 5)中加入終濃度為2% (w/v)的BSA，加入終濃度為0. 5% (w/v)的PEG20000，加入終濃度為0. 09% (w/v)的NaN3。由此制得Rl試劑。(2)膠體金的制備a)玻璃容器的清潔用自來水流水沖洗干凈,然后用1% 2%鹽酸浸泡過夜,取出用大量自來水沖洗，然后用洗潔劑洗滌并用流水沖洗干凈，再用蒸餾水浸泡過夜，然后進(jìn)行膠體金潤洗。b)準(zhǔn)備1%氯金酸和1%檸檬酸鈉溶液，0. 2um濾膜過濾。c)取IOOOml圓底燒瓶I個，放入轉(zhuǎn)子，加入500ml超純水。d)加入5ml 1%氯金酸,600rpm,熱約至溶液沸騰,立即吸取1%朽1檬酸鈉溶液4ml快速加入到燒瓶中。繼續(xù)加熱攪拌約lOmin，溶液先變黑色，然后逐漸變紫紅色。
e)冷卻關(guān)閉加熱開關(guān)并繼續(xù)攪拌lOmin，然后停止攪拌冷卻至室溫，用超純水恢復(fù)到原體積。f)電鏡掃描制得的膠體金顆粒直徑為50nm，制得的膠體金備用。(3)試劑R2的制備a)將抗人C-反應(yīng)蛋白抗體用磷酸鹽緩沖液(pH7. 2)稀釋成0. lmg/ml ；b)用K2C03調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH到8. Oc)將抗體溶液加入到膠體金中，并攪拌反應(yīng)30分鐘，其中抗體溶液與膠體金溶液的體積比為I 10 ；d)將終濃度為0. 1% (w/v)的PEG20000加入到上述膠體金溶液中，并攪拌反應(yīng)30分鐘； e) IOOOOrpm離心30分鐘，然后用溶液A復(fù)溶至原體積的1/25，制得試劑R2。試劑R2標(biāo)記有抗人C-反應(yīng)蛋白抗體的膠體金顆粒的濃度為0. 25%w/v。所述溶液A包括lOmmol/LTris緩沖液pH8. 0、2% (w/v)的穩(wěn)定劑、0. 07% (w/v)的硫柳萊。所述穩(wěn)定劑包括
0.9%NaCl、0. 1%PEG20000 和 1% 海藻糖。實施例三試劑盒制備3(I)試劑Rl的制備向10mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH6. 5)中加入終濃度為1% (w/v)的BSA，加入終濃度為1% (w/v)的PEG20000，加入終濃度為0. 09% (w/v)的NaN3。由此制得Rl試劑。(2)膠體金的制備a)玻璃容器的清潔用自來水流水沖洗干凈,然后用1% 2%鹽酸浸泡過夜,取出用大量自來水沖洗，然后用洗潔劑洗滌并用流水沖洗干凈，再用蒸餾水浸泡過夜，然后進(jìn)行膠體金潤洗。b)準(zhǔn)備1%氯金酸和1%檸檬酸鈉溶液，0. 2um濾膜過濾。c)取1000ml圓底燒瓶I個，放入轉(zhuǎn)子，加入500ml超純水。d)加入5ml 1%氯金酸，600rpm,熱約至溶液沸騰，立即吸取1%檸檬酸鈉溶液3ml快速加入到燒瓶中。繼續(xù)加熱攪拌約lOmin，溶液先變黑色，然后逐漸變紫紅色。e)冷卻關(guān)閉加熱開關(guān)并繼續(xù)攪拌lOmin，然后停止攪拌冷卻至室溫，用超純水恢復(fù)到原體積。f )電鏡掃描制得的膠體金顆粒直徑為60nm，制得的膠體金備用。(3)試劑R2的制備a)將抗人C-反應(yīng)蛋白抗體用磷酸鹽緩沖液(pH7. 2)稀釋成0. lmg/ml ；b)用K2C03調(diào)節(jié)膠體金溶液的pH到8. 0c)將抗體溶液加入到膠體金中，并攪拌反應(yīng)30分鐘，其中抗體溶液與膠體金溶液的體積比為I 10 ；d)終濃度為1% (w/v)BSA和終濃度為0. 05%的PEG20000加入到上述膠體金溶液中，并攪拌反應(yīng)30分鐘；e)IOOOOrpm離心30分鐘，然后用溶液A復(fù)溶至原體積的1/20，制得試劑R2 ;試劑R2標(biāo)記有抗人C-反應(yīng)蛋白抗體的膠體金顆粒的濃度為0. 2%w/vo所述溶液A包括15mmol/LTris緩沖液pH8. 0、1% (w/v)的穩(wěn)定劑、1% (w/v)的苯酚。所述穩(wěn)定劑包括0. 9%NaCl、1%BSA、0. 05%PEG20000 和 0. 2% 明膠。實施例四全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒的臨床使用(I)本發(fā)明試劑盒的一些測試條件及參數(shù)如下a)分析方法2點終點法；波長660nm ;樣品量3ul ；R1 200ul ；R2 50ul ;校準(zhǔn)方式樣條函數(shù)Spline ;反應(yīng)方式上升；測定溫度37°C。b)測定步驟先加入試劑Rl 200ul，然后加入樣本3ul，孵育37°C 5分鐘后，加入50ul試劑R2，立即讀取第一點，反應(yīng)5分鐘后讀取另一點，得到吸光度值的差值。c)計算方法6點定標(biāo)，以樣條函數(shù)為計算模式。根據(jù)吸光度與參考血清的值做劑量/響應(yīng)曲線，樣品含量可根據(jù)其吸光度值在劑量/響應(yīng)曲線上算出。 (2)檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線通過本發(fā)明的方法，采用日立7020型自動分析儀得到了 6種不同含量的C-反應(yīng)蛋白參考血清的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個點代表I種含量的參考血清。其中X軸表示C-反應(yīng)蛋白的含量，Y軸表示吸光度值。實施例五檢測試劑盒性能試驗( I)靈敏度試驗測定5種不同C-反應(yīng)蛋白含量的樣品，每個樣品重復(fù)測定10次，計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，結(jié)果見表1，從表I可知，本發(fā)明試劑盒的靈敏度為0. 0lmg/L 表I
~CRP (mg/L)均值SDM±2SD
~00. 0001— 0. 0028 -0.0055 0.0057
~0. 005— 0. 0006— 0. 0056 -0. 0086 0. 0098
~0. 01— 0. 0102— 0. 0016 0. 0070 0. 0134
~0. 02— 0. 0198— 0. 0019 0. 0160 0. 0236
~0.030.0307 0.0027 0.0253 0.0361(2)高值線性測定測定I種不同CRP含量的樣品，每種樣品測3次，結(jié)果見表2，經(jīng)線性回歸分析，回歸方程為y=0. 9707x+3. 5991，R2=0. 9991，本發(fā)明試劑盒的最高檢測范圍達(dá)到500mg/L。
CRP (mg/L) 均值—
0~0.001 50~50.4
100~100. I
200~201. I
300~301.6
400~396. 7
500480.0(3)精密度試驗使用兩份不同C-反應(yīng)蛋白含量的人血清樣品，用本發(fā)明試劑盒進(jìn)行測試。批內(nèi)精密度(Intra-Assay)和批間精密度(Inter-Assay)。結(jié)果見表3,本發(fā)明試劑盒的批內(nèi)和批間CV%均小于10。表 3

權(quán)利要求
1.一種全量程c-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于包括試劑Rl和試劑R2 ;所述試劑Rl的組分包括10 20mmol/L的緩沖液、0. 5% 2%w/v的促凝劑、0. 5% 2%w/v的BSA,0. 07% 0. l%w/v的防腐劑；所述試劑R2的組分包括:0. 1% 0. 5%w/V標(biāo)記有抗人C-反應(yīng)蛋白抗體的膠體金顆粒、0. 2% 2%w/v的穩(wěn)定劑、10 20mmol/L的緩沖液、0. 07% 0. l%w/V的防腐劑；所述膠體金顆粒直徑為35nm-60nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為蛋白質(zhì)、PEG、糖和無機(jī)鹽中的一種或多種；所述蛋白質(zhì)為BSA或明I父；所述糖為蔗糖、海藻糖、葡聚糖、甘露糖和葡萄糖中的一種或多種；所述無機(jī)鹽為氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、甘氨酸緩沖液、檸檬酸-磷酸鹽緩沖液、tris緩沖液和HEPES緩沖液中的一種或多種；所述緩沖液pH值為6 8. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述促凝劑為PEG20000。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述的防腐劑為疊氮化鈉、硫柳汞和苯酚中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述抗人C-反應(yīng)蛋白抗體為多克隆抗體或多克隆抗體與單克隆抗體的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于所述試劑R2的制備方法為制備膠體金溶液，將用緩沖液稀釋后的抗人C-反應(yīng)蛋白抗體溶液加入到所述膠體金溶液中，制備得到含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液，離心去掉上清液，用溶液A溶解膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物，恢復(fù)至所述含有膠體金-抗人CRP抗體復(fù)合物的溶液體積的1/50 1/10，制得試劑R2 ;所述溶液A的組分包括緩沖液、穩(wěn)定劑和防腐劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的全量程C-反應(yīng)蛋白膠體金免疫比濁檢測試劑盒，其特征在于用于測定人血清或血漿中的C-反應(yīng)蛋白含量。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種全量程CRP膠體金免疫比濁檢測試劑盒，通過膠體金來增強(qiáng)濁度，達(dá)到定量檢測的目的。本發(fā)明方法解決了乳膠增強(qiáng)免疫比濁法反應(yīng)后產(chǎn)生沉淀不利于生化儀清洗的問題。本發(fā)明所述的試劑盒包括試劑R1和試劑R2，其中試劑R1為適當(dāng)?shù)木彌_液，其中試劑R2為結(jié)合有抗人CRP抗體的膠體金的緩沖液。本發(fā)明試劑盒具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，穩(wěn)定性好的特點，可用于檢測血清或血漿中C-反應(yīng)蛋白含量，適用于臨床全自動生化分析儀。本發(fā)明試劑盒檢測C-反應(yīng)蛋白的靈敏度可以達(dá)到0.01mg/L，檢測上限達(dá)到500mg/L。
文檔編號G01N33/68GK102749454SQ201210196390
公開日2012年10月24日 申請日期2012年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月11日
發(fā)明者劉獻(xiàn)文, 葉佳穎, 孫火明, 徐彩霞 申請人:寧波鼎鑫生物科技有限公司