胃癌靶向量子點(diǎn)及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬納米生物材料領(lǐng)域，涉及胃癌靶向量子點(diǎn)及其制備方法和在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用，本發(fā)明采用CdTe近紅外量子點(diǎn)為顯像材料，與胃癌單克隆抗體CC49結(jié)合，制成能夠特異性結(jié)合胃癌細(xì)胞并熒光成像的免疫熒光探針。本發(fā)明利用量子點(diǎn)在生物體內(nèi)具有良好的生物相容性，能夠隨循環(huán)系統(tǒng)運(yùn)行，制得靶向量子點(diǎn)對(duì)胃癌細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光成像，并將進(jìn)一步檢測(cè)在胃癌動(dòng)物模型的腫瘤轉(zhuǎn)移部位與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，激發(fā)后發(fā)射熒光，使腫瘤細(xì)胞顯像，從而達(dá)到腫瘤檢測(cè)的目的。本發(fā)明的靶向量子點(diǎn)基于其生物體毒性較小，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】胃癌靶向量子點(diǎn)及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于納米生物材料領(lǐng)域，涉及胃癌靶向量子點(diǎn)及其制備方法和在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用，尤其涉及一種胃癌免疫熒光探針及其制備方法和在胃癌細(xì)胞熒光成像中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)報(bào)道，近50年來(lái)全世界胃癌的發(fā)病率有了一定程度的下降，但其仍然是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病。在各種癌癥中，胃癌發(fā)病率高居第四位，在日本、韓國(guó)、朝鮮、中國(guó)等亞洲國(guó)家甚至高達(dá)0.080% ;其死亡率則居第二位，僅次于肺癌，達(dá)85 %。目前，外科手術(shù)治療是臨床治療胃癌的重要手段。但是臨床實(shí)踐胃癌手術(shù)中的腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的清掃均是“盲目”進(jìn)行的，其中，不論是西方學(xué)者主張的Dl淋巴清掃手術(shù)(即手術(shù)中切除原發(fā)病灶及周?chē)銐蚍秶恼Ｎ副?，并清掃第一站淋巴結(jié))，還是日本學(xué)者主張的D2淋巴清掃手術(shù)(即術(shù)中結(jié)扎血管后將相應(yīng)區(qū)域的淋巴結(jié)徹底清除)，或者D3淋巴結(jié)清掃術(shù)(清除包括肝十二指腸韌帶、腸系膜上動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈旁、甚至膈肌及縱膈淋巴結(jié))都只是對(duì)規(guī)定區(qū)域的淋巴結(jié)進(jìn)行清掃，并不能根據(jù)病人的個(gè)體化差異，明確地對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)進(jìn)行清除，由此，淋巴結(jié)的過(guò)度清掃或殘留時(shí)有發(fā)生。因而腫瘤細(xì)胞的追蹤顯像成為了胃癌手術(shù)中淋巴結(jié)清掃術(shù)的關(guān)鍵。鑒于上述臨床實(shí)踐中存在的問(wèn)題，對(duì)探索一種能夠在人體內(nèi)追蹤標(biāo)記胃癌細(xì)胞的標(biāo)記探針提出了迫切的需求。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)對(duì)胃癌細(xì)胞的顯像研究中使用較多的顯像材料有傳統(tǒng)的有機(jī)染料和放射性同位素等，但是傳統(tǒng)的生物活體染料(如2%專(zhuān)利藍(lán)染料、1%異硫藍(lán)染料等)或放射性同位素(如99m锝標(biāo)記的錫膠體或硫膠體等)在活體腫瘤顯像應(yīng)用中都存在著很大的缺陷，如在標(biāo)記活體淋巴結(jié)時(shí)顏色很難辨別、一旦染料外滲則很難看清染色的淋巴結(jié)、有較高的假陰性率等；而放射性同位素因其存在穿透效應(yīng)(shine-through effect),可導(dǎo)致發(fā)光淋巴結(jié)與同位素注射處組織互相混淆，且同位素對(duì)醫(yī)生和病人均存在放射性損害。
[0004]納米晶體熒光標(biāo)記材料量子點(diǎn)又稱(chēng)半導(dǎo)體量子點(diǎn)或半導(dǎo)體納米微晶體，其具有獨(dú)特的光學(xué)特性。斯托克位移(Stoke' s shift)為激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)峰值的差值，斯托克位移較大可以避免發(fā)射譜與激發(fā)譜的重疊，從而提高在免疫熒光檢測(cè)的靈敏度。有機(jī)熒光染料斯托克位移較小，檢測(cè)時(shí)發(fā)射光易與激發(fā)光光譜范圍發(fā)生重疊，導(dǎo)致檢測(cè)假陽(yáng)性率增高，而近紅外量子點(diǎn)光譜范圍窄(約為有機(jī)染料光譜1/3)，增加了其斯托克位移(約為200-300nm)，提高了在應(yīng)用過(guò)程中的靈敏度。有機(jī)染料發(fā)射光譜通常位于450-550之間，在此范圍內(nèi)，生物醫(yī)學(xué)標(biāo)本如膠原蛋白、P卜啉、黃素等通常有很強(qiáng)的自發(fā)熒光背景，所以標(biāo)記熒光通常被強(qiáng)的組織自發(fā)熒光所淹沒(méi)，在生物熒光成像的應(yīng)用中有很多限制。有研究開(kāi)始關(guān)注近紅外量子點(diǎn)在動(dòng)物體內(nèi)的分布，將單純的量子點(diǎn)注射后觀察其動(dòng)物體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)中的移行和各器官中的分布，但迄今尚未見(jiàn)有關(guān)近紅外量子點(diǎn)修飾后其對(duì)腫瘤細(xì)胞的追蹤和顯像的報(bào)道，尤其未涉及胃癌領(lǐng)域。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種胃癌靶向量子點(diǎn)及其制備方法，具體涉及一種能夠與胃腺癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合的靶向量子點(diǎn)及其制備方法。尤其涉及一種胃癌免疫熒光探針及其制備方法。
[0006]本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供所述的胃癌靶向量子點(diǎn)在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用，尤其是用于胃癌動(dòng)物模型中腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的顯像。
[0007]本發(fā)明提供了能夠與胃癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合并對(duì)其進(jìn)行免疫熒光成像的靶向量子點(diǎn)，對(duì)胃癌細(xì)胞在體外成像的能力進(jìn)行了描述，結(jié)果顯示其對(duì)胃癌細(xì)胞免疫熒光顯像的效果良好，具有在胃癌動(dòng)物模型中進(jìn)行胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)顯像的前景。
[0008]本發(fā)明利用量子點(diǎn)在生物體內(nèi)具有良好的生物相容性，能夠隨循環(huán)系統(tǒng)運(yùn)行的特點(diǎn)，采用近紅外納米量子點(diǎn)為載體，結(jié)合胃癌腫瘤細(xì)胞單克隆抗體CC49，制成胃癌腫瘤細(xì)胞靶向量子點(diǎn)探針，在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記，確定該探針可以與胃癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合。
[0009]更具體的，本發(fā)明采用CdTe近紅外量子點(diǎn)為顯像材料，與胃癌單克隆抗體CC49結(jié)合，制成能夠特異性結(jié)合胃癌細(xì)胞并熒光成像的免疫熒光探針。
[0010]本發(fā)明中，胃癌細(xì)胞單克隆抗體CC49和CdTe近紅外量子點(diǎn)按4 ；1的比例接合。
[0011]本發(fā)明中，所述的CC49抗體是能夠特異性識(shí)別胃癌細(xì)胞表面抗原TAG-72的單克隆抗體；胃癌細(xì)胞表面抗原TAG-72是一種高分子糖蛋白，分子量介于220KD和400KD之間，表達(dá)于多種惡性腫瘤細(xì)胞表面或胞內(nèi)，如卵巢癌，肺癌，結(jié)腸癌，乳腺癌，在胃癌人群中的表達(dá)率高達(dá)75%。
[0012]本發(fā)明中的胃癌靶向量子點(diǎn)可通過(guò)抗原抗體反應(yīng)，與胃癌細(xì)胞發(fā)生結(jié)合，通過(guò)量子點(diǎn)的激發(fā)熒光達(dá)到胃癌細(xì)胞免疫熒光成像的目的。
[0013]更具體的，本發(fā)明提供了一種胃癌免疫熒光探針，其通過(guò)下述方法和步驟制備，
[0014]I)制備近紅外CdTe量子點(diǎn)
[0015]首先制備N(xiāo)aHTe溶液:將NaBH4溶于去離子水中，冰浴狀態(tài)下通平穩(wěn)氮?dú)饬?0min，除去溶液中的氧氣，然后加入碲粉(Te)，繼續(xù)通入氮?dú)猓瞥傻仙玁aHTe溶液；
[0016]其次制備CdC12-MPA溶液:2mmol CdC12加入去離子水中，加入3.6mmol MPA，用2mol/L NaOH調(diào)溶液pH值至9 ；
[0017]最后制備CdTe量子點(diǎn)=NaHTe溶液與CdC12_MPA溶液混合后攪拌，將此前軀體溶液加入到反應(yīng)釜中，放入185 V烘箱中反應(yīng)，粗產(chǎn)物用乙醇沉淀洗滌后，40 °C真空烘干備用；
[0018](2)制備胃癌腫瘤細(xì)胞靶向量子點(diǎn)
[0019]在CdTe量子點(diǎn)水溶液中加入EDC(l-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)的水溶液，室溫反應(yīng)，反應(yīng)液中CdTe: EDC: NHS =I: 100: 100 ;半小時(shí)后加入抗體IgG，反應(yīng)液中CdTe:抗體=I: 4，繼續(xù)反應(yīng)后停止，用超濾管(look)離心分離，產(chǎn)物分散在PBS (pH = 7.4)溶液中，冰箱保存；
[0020]本發(fā)明進(jìn)行了量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的電鏡下成像及光譜分析，
[0021]將制得的量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)去離子水稀釋后滴于銅網(wǎng)支持的碳膜上，待溶劑揮發(fā)后，電鏡調(diào)至工作電壓200kV工作模式stem mode進(jìn)行觀察，獲得量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的電鏡下圖像。
[0022]量子點(diǎn)和祀向量子點(diǎn)的稀釋產(chǎn)物用spectrofluorimeter在激發(fā)波長(zhǎng)450nm的激發(fā)光下，以Inm為最小間隔記錄550nm到800nm的發(fā)射光光強(qiáng)度制作光譜曲線。
[0023]本發(fā)明的進(jìn)一步提供所述的胃癌靶向量子點(diǎn)在腫瘤檢測(cè)中的應(yīng)用，本發(fā)明的實(shí)施例中用于胃癌細(xì)胞免疫熒光成像，
[0024]MGC80-3胃癌腫瘤細(xì)胞細(xì)胞傳代于4塊孔底帶有玻片的六孔板中，標(biāo)記為1，2，3，4號(hào)，I號(hào)為空白組，作為陰性對(duì)照，2號(hào)為靶向量子點(diǎn)組，3號(hào)為純量子點(diǎn)組，4號(hào)為熒光二抗標(biāo)記組，作為陽(yáng)性對(duì)照組。四組均用4%的多聚甲醛固定，后用10%的小牛血清封閉30min。后I號(hào)加入ImlPBS作為對(duì)照,2號(hào)加入祀向量子點(diǎn)Iml, 3號(hào)加入相同濃度量子點(diǎn)Iml, 4號(hào)加入一抗lml。4組均置于37。C溫箱中孵育2h，后1，2，3組加入DAPI對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，熒光顯微鏡下對(duì)I，2，3組進(jìn)行觀察。4組PBS清洗后，加入顯示熒光二抗lml，PBS I: 500稀釋?zhuān)?7。C溫箱中孵育lh，后DAPI染色，熒光顯微鏡下觀察，獲得四組免疫熒光圖片，其結(jié)果顯示:場(chǎng)發(fā)射掃描透射電鏡觀察顯示量子點(diǎn)直徑為2.241-4.914nm，平均為3.468nm，靶向單個(gè)量子點(diǎn)直徑為3.304-5.652nm，平均為3.716nm，二者直徑差值為0.248nm。靶向量子點(diǎn)制作后會(huì)出現(xiàn)多個(gè)靶向量子點(diǎn)發(fā)生聚集，形成大小不一的量子點(diǎn)簇的現(xiàn)象，直徑約為
7.692-55.769nm,平均 23.763nm。
[0025]光譜分析中，以光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，發(fā)射光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)將光譜分析數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并分別作出了量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的光譜曲線，結(jié)果顯示量子點(diǎn)發(fā)射光波長(zhǎng)位于620-780nm之間，波峰在680nm左右，而靶向量子點(diǎn)發(fā)射光波長(zhǎng)位于600_800nm之間，波峰在71 Onm左右。
[0026]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明制得的靶向量子點(diǎn)能夠與胃癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下可以看到清晰的細(xì)胞熒光圖像，而單純的近紅外量子點(diǎn)并不能與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，在熒光顯微鏡下不能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光成像。
[0027]本發(fā)明的的胃癌細(xì)胞免疫熒光探針可用于制備胃癌細(xì)胞免疫熒光成像制劑?；蜻M(jìn)一步制備檢測(cè)腫瘤的試劑盒，尤其是檢測(cè)胃癌的試劑盒。
[0028]本發(fā)明的胃癌腫瘤細(xì)胞靶向量子點(diǎn)探針毒性小，具有良好的生物相容性，可以與胃癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，并進(jìn)行免疫熒光顯像。本發(fā)明可以用于胃癌腫瘤細(xì)胞的免疫熒光成像，對(duì)通過(guò)淋巴循環(huán)對(duì)活體動(dòng)物模型中的轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞進(jìn)行定位從而為標(biāo)記腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)提供了理論依據(jù)。
[0029]本發(fā)明具備的優(yōu)點(diǎn)有，
[0030]1，本發(fā)明中的近紅外量子點(diǎn)發(fā)射光波長(zhǎng)位于近紅外區(qū)^50_900nm)，不僅克服了有機(jī)熒光染料的缺點(diǎn)，而且在該光譜范圍內(nèi)，水和紅細(xì)胞的吸光度最小，動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境對(duì)發(fā)射光的吸收、減弱程度最小，量子點(diǎn)發(fā)射光的光強(qiáng)度大，熒光成像更加清晰。
[0031]2，本發(fā)明采用水相合成法制作的量子點(diǎn)具有很好的水溶性，而且用于動(dòng)物體內(nèi)不會(huì)發(fā)生排斥反應(yīng)，有利于其在腫瘤應(yīng)該標(biāo)記中的進(jìn)一步應(yīng)用。
[0032]3，本發(fā)明的靶向量子點(diǎn)光強(qiáng)度強(qiáng)(比有機(jī)染料強(qiáng)1000倍)，散射少，在免疫熒光的應(yīng)用中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】:[0033]圖1為場(chǎng)發(fā)射掃描透射電鏡下的量子點(diǎn)及靶向量子點(diǎn)圖片，其中A為量子點(diǎn)圖片，B、C為靶向量子點(diǎn)圖片。
[0034]圖2為量子點(diǎn)及靶向量子點(diǎn)的光譜分析曲線，藍(lán)色為量子點(diǎn)光譜曲線，紅色為靶向量子點(diǎn)光譜曲線。
[0035]圖3為量子點(diǎn)及靶向量子點(diǎn)熒光成像圖，橫行中，I為空白對(duì)照組，2為靶向量子點(diǎn)組，3為陰性對(duì)照組，4為陽(yáng)性對(duì)照組，縱列中A為光學(xué)顯微鏡下成像，B為熒光顯微鏡下成像，C為細(xì)胞核成像，D為B、C的合成圖片。
【具體實(shí)施方式】:
[0036]實(shí)施例1
[0037]制備近紅外CdTe量子點(diǎn)
[0038]首先制備N(xiāo)aHTe溶液:IOOmg NaBH4溶于20ml去離子水中，冰浴狀態(tài)下通平穩(wěn)氮?dú)饬?0min，以除去溶液中的氧氣，然后迅速加入127mg碲粉，繼續(xù)通入氮?dú)猓瞥傻仙玁aHTe溶液。其次制作CdC12_MPA溶液:366.6mg (2mmol) CdC12加入IOOml去離子水中，然后加入382.1mg (3.6mmol)MPA，用2mol/L NaOH將溶液pH值調(diào)至9。最后一步為制作CdTe量子點(diǎn):1ml NaHTe溶液與20ml CdC12_MPA溶液混合后迅速攪拌，然后將此前軀體溶液9mL加入到反應(yīng)釜中，放入185°C烘箱中反應(yīng)一段時(shí)間，粗產(chǎn)物用乙醇沉淀洗滌3次，放入40°C真空烘箱中烘干備用。
[0039]制備胃癌細(xì)胞靶向量子點(diǎn)
[0040]13.5 ill EDC、13.5u I NHS和50 yl實(shí)施方式I中制作的量子點(diǎn)溶液混合，室溫下?lián)u床上搖動(dòng)30min,加入594 ii I CC49胃癌單克隆抗體，反應(yīng)液中CdTe: antibody =I: 4,常溫下反應(yīng)2h,用IOOk超濾管離心分離三次后,將產(chǎn)物重新分散在PBS (pH = 7.4)溶液中。放入冰箱保存。
[0041]量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的場(chǎng)發(fā)射透射電鏡下成像及光譜分析
[0042]電鏡成像:將制作的量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)去離子水稀釋后滴于銅網(wǎng)支持的碳膜上，待溶劑完全揮發(fā)后，電鏡調(diào)至工作電壓200kV工作模式stem mode進(jìn)行觀察，獲得量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的電鏡下圖像。光譜分析:量子點(diǎn)和靶向量子點(diǎn)的稀釋產(chǎn)物用spectrofluorimeter在激發(fā)波長(zhǎng)450nm的激發(fā)光下激發(fā)，窄縫寬度為1mm，以Inm為最小間隔記錄550nm到800nm的發(fā)射光光強(qiáng)度制作光譜曲線。
[0043]胃癌細(xì)胞免疫熒光成像
[0044]MGC80-3胃癌腫瘤細(xì)胞細(xì)胞傳代于4塊孔底帶有玻片的六孔板中，標(biāo)記為1，2，3，4號(hào)，I號(hào)為空白組，作為陰性對(duì)照，2號(hào)為靶向量子點(diǎn)組，3號(hào)為純量子點(diǎn)組，4號(hào)為熒光二抗標(biāo)記組，作為陽(yáng)性對(duì)照組，四組均在_培養(yǎng)箱中孵育，細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后，吸除培養(yǎng)基，PBS清洗兩次，4%的多聚甲醒固定15min, PBS清洗三次,每次5min, 10%的小牛血清封閉30min,PBS清洗三次，每次5min。后I號(hào)每孔加入lmlPBS，2號(hào)加入靶向量子點(diǎn)1ml，3號(hào)加入相同濃度量子點(diǎn)lml，4號(hào)加入一抗lml，PBS I: 500稀釋。4組均置于37。C溫箱中孵育2h，后1，2，3組加入DAPI對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色5min，后PBS清洗3次，每次，5min，熒光顯微鏡下對(duì)1，2，3組進(jìn)行觀察。4組PBS清洗3次，每次3分鐘，加入熒光二抗lml，PBS I: 500稀釋?zhuān)?7。C溫箱中孵育lh，后DAPI染色，PBS清洗三次，每次三分鐘，熒光顯微鏡下觀察。共獲得四組免疫熒光圖片(A為光鏡下成像，B為熒光顯微鏡下成像，C為細(xì)胞核熒光染色圖像，D為B、C的合成圖像)。
[0045]本發(fā)明分別在光鏡下和熒光顯微鏡下對(duì)空白組(I號(hào))，靶向量子點(diǎn)組(2號(hào))，量子點(diǎn)組(3號(hào))和熒光二抗組(4號(hào))進(jìn)行了觀察?？瞻捉M光鏡下細(xì)胞染色非常淺，幾乎不可辨，熒光顯微鏡下無(wú)細(xì)胞影像，DAPI染色后在紫外波長(zhǎng)激發(fā)光激發(fā)下可見(jiàn)染色的細(xì)胞核。靶向量子點(diǎn)組光鏡下即可見(jiàn)深染的細(xì)胞圖像，熒光顯微鏡下也可以看到高亮度的細(xì)胞熒光顯像，DAPI染色可以看見(jiàn)細(xì)胞核熒光顯像，兩張圖片合成后可見(jiàn)細(xì)胞核位置和高亮度的細(xì)胞位置重合。未嫁接抗體的單純量子點(diǎn)組光鏡下很難辨別細(xì)胞，熒光顯微鏡下細(xì)胞影像略微可見(jiàn)，DAPI染色可清楚分辯細(xì)胞核的位置，合成后可見(jiàn)細(xì)胞核影像與模糊的細(xì)胞影像重
口 o
[0046]本發(fā)明中采用的陽(yáng)性對(duì)照組是發(fā)射光波長(zhǎng)位于FITC區(qū)間的熒光二抗進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記，光鏡下可以看到模糊的細(xì)胞影像，熒光顯微鏡FITC模式下可以看到高亮度的清晰的細(xì)胞影像，DAPI染色可以看見(jiàn)清晰的細(xì)胞核染色圖，圖片合成后可以看到細(xì)胞熒光成像和細(xì)胞核成像位置重合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明制得的靶向量子點(diǎn)能夠與胃癌細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，在熒光顯微鏡下可以看到清晰的細(xì)胞熒光圖像，而單純的近紅外量子點(diǎn)并不能與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，在熒光顯微鏡下不能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光成像。
【權(quán)利要求】
1.一種胃癌細(xì)胞免疫熒光探針，其特征在于，由CdTe近紅外量子點(diǎn)為顯像材料，與胃癌單克隆抗體CC49接合，制成免疫熒光探針。
2.按權(quán)利要求1所述的胃癌細(xì)胞免疫熒光探針，其特征在于，所述的胃癌細(xì)胞單克隆抗體CC49與CdTe近紅外量子點(diǎn)按4: I的比例接合。
3.按權(quán)利要求1所述的胃癌細(xì)胞免疫熒光探針制備方法，其特征是，通過(guò)下述方法和步驟: 1)制備近紅外CdTe量子點(diǎn) 首先制備N(xiāo)aHTe溶液:將NaBH4溶于去離子水中，冰浴狀態(tài)下通平穩(wěn)氮?dú)饬?0min，除去溶液中的氧氣，然后加入碲粉(Te)，繼續(xù)通入氮?dú)?，制成淡紫色NaHTe溶液； 其次制備CdC12-MPA溶液:2mmol CdC12加入去離子水中，加入3.6mmol MPA，用2mol/L NaOH調(diào)溶液pH值至9 ; 最后制備CdTe量子點(diǎn)=NaHTe溶液與CdCl2-MPA溶液混合后攪拌，將此前軀體溶液加入到反應(yīng)釜中，放入185°C烘箱中反應(yīng)，粗產(chǎn)物用乙醇沉淀洗滌后，40°C真空烘干備用； 2)制備胃癌腫瘤細(xì)胞靶向量子點(diǎn) 在CdTe量子點(diǎn)水溶液中加入EDC(l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)、NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)的水溶液，室溫反應(yīng)，反應(yīng)液中CdTe: EDC: NHS =I: 100: 100 ;半小時(shí)后加入抗體IgG，反應(yīng)液中CdTe:抗體=I: 4，繼續(xù)反應(yīng)后停止，用超濾管(look)離心分離，產(chǎn)物分散在PBS，pH = 7.4的溶液中，冰箱保存。
4.權(quán)利要求1的胃癌細(xì)胞免疫熒光探針在制備胃癌細(xì)胞免疫熒光成像制劑中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1的胃癌細(xì)胞免疫熒光探針在制備檢測(cè)腫瘤試劑盒中的用途。
6.按權(quán)利要求5所述的用途，所述的腫瘤是胃癌。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK103513025SQ201210210733
【公開(kāi)日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年6月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月21日
【發(fā)明者】孫鵬, 張?jiān)迄i, 楊武利, 張旭瑞 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院, 復(fù)旦大學(xué)