專利名稱：免疫學(xué)測(cè)定方法和芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用抗原抗體反應(yīng)測(cè)定樣品溶液中的特定成分的量的免疫學(xué)測(cè)定方法，特別涉及適于在芯片上實(shí)施的免疫學(xué)測(cè)定方法。而且，本發(fā)明涉及適于實(shí)施該免疫學(xué)測(cè)定方法的芯片。
背景技術(shù)：
作為高精度地對(duì)活體樣品(例如血液)中含有的過(guò)敏反應(yīng)的起因物質(zhì)、病毒和細(xì)菌等蛋白質(zhì)進(jìn)行識(shí)別和定量分析的方法，免疫學(xué)測(cè)定方法正受到注目。免疫學(xué)測(cè)定方法大致分為免疫比濁法和免疫標(biāo)記法。免疫比濁法，是對(duì)抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的抗原抗體復(fù)合物引起的樣品溶液的濁度變化進(jìn)行測(cè)定的方法。免疫標(biāo)記法，是使用被標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的抗體，對(duì)抗原抗體反應(yīng)后的標(biāo)記物質(zhì)量的變化進(jìn)行測(cè)定的方法。免疫標(biāo)記法按照標(biāo)記物質(zhì)的種類被細(xì)分。例如能夠列舉使用放射性同位素作為標(biāo)記物質(zhì)的放射免疫測(cè)定法，使用酶的酶免疫測(cè)定法(EIA enzyme immunoassay),使用突光體的熒光免疫測(cè)定法等。EIA與其他免疫標(biāo)記法相比，標(biāo)記物質(zhì)的安全性較高，能夠簡(jiǎn)便的操作，測(cè)定精度也高，因此被廣泛使用。作為代表性的EIA,例如是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)量法(Enzyme-linked ImmunosorbentAssay :ELISA)。參照?qǐng)DI說(shuō)明ELISA的ー個(gè)例子。(エ序I-A:固相抗原的形成)將含有捕獲抗原的溶液導(dǎo)入反應(yīng)腔室7內(nèi)，其中，該捕獲抗原具有與測(cè)定對(duì)象抗原的抗原表位(印itope)相同的抗原表位，并且在規(guī)定溫度下保持規(guī)定時(shí)間，使該捕獲抗原吸附于反應(yīng)腔室7的表面。之后，以不參與之后的抗原抗體反應(yīng)和酶反應(yīng)的蛋白質(zhì)覆蓋(屏蔽)吸附的捕獲抗原。由此，在反應(yīng)腔室7的內(nèi)部形成固相抗原6。固相抗原6固定在反應(yīng)腔室7的表面，不會(huì)被后述的洗滌從反應(yīng)腔室7除去。(エ序I-B:測(cè)定對(duì)象抗原與抗體、以及固相抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng))在樣品溶液9中添加與測(cè)定對(duì)象抗原2特異性結(jié)合的抗體3?？贵w3處于被標(biāo)記物質(zhì)(例如酶)4標(biāo)記的狀態(tài)。之后，將含有該抗體3的樣品溶液9導(dǎo)入反應(yīng)腔室7。由此，在反應(yīng)腔室7中，固相抗原6與抗體3之間、以及測(cè)定對(duì)象抗原2與抗體3之間進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。序I-C :未反應(yīng)的抗體和抗原抗體復(fù)合物的除去)使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液10，對(duì)反應(yīng)腔室7的內(nèi)部進(jìn)行洗滌。由此，從反應(yīng)腔室7中除去抗原抗體復(fù)合物和未與固相抗體6結(jié)合的抗體3，其中，該抗原抗體復(fù)合物是抗體3與測(cè)定對(duì)象抗原2結(jié)合而形成的，固相抗原6和抗體3的結(jié)合物殘留于反應(yīng)腔室7內(nèi)。
接著，對(duì)反應(yīng)腔室7內(nèi)殘留的、固相抗原6和抗體3的結(jié)合物所具有的標(biāo)記物質(zhì)4的量進(jìn)行測(cè)定。該測(cè)定例如以下述方式進(jìn)行。首先，調(diào)制含有與標(biāo)記物質(zhì)4反應(yīng)的測(cè)定用試劑(例如酶的基質(zhì))的溶液。接著，通過(guò)將該溶液導(dǎo)入反應(yīng)腔室7，在反應(yīng)腔室7內(nèi)得到含有固相抗原6與抗體3的結(jié)合物和測(cè)定用試劑的測(cè)定溶液。在測(cè)定溶液中，使測(cè)定用試劑和標(biāo)記物質(zhì)4進(jìn)行反應(yīng)后，對(duì)反映反應(yīng)生成物的量的信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)。樣品溶液9中的測(cè)定對(duì)象抗原2的量，根據(jù)該測(cè)定的結(jié)果、固相抗原6的量、和在工序I-B中導(dǎo)入反應(yīng)腔室7內(nèi)的樣品溶液9的量而被算出。從使用微量的樣品溶液，在短時(shí)間內(nèi)測(cè)定樣品溶液中的測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的量的觀點(diǎn)出發(fā)，芯片型的生物傳感器受到注目。例如，日本特開(kāi)平2-062952號(hào)公報(bào)中公開(kāi)了一種芯片型的生物傳感器，該生物傳感器設(shè)置有絕緣性基板，配置在基板上的電極系統(tǒng)，配置在電極系統(tǒng)上的酶反應(yīng)層，以及以露出電極系統(tǒng)和酶反應(yīng)層的方式配置在基板上的具有切口部的絕緣層。酶反應(yīng)層含有由氧化還原酶和電子介質(zhì)(electron mediator)等代表的、用 于誘導(dǎo)酶循環(huán)反應(yīng)的測(cè)定用試劑。作為氧化還原酶，使用以測(cè)定對(duì)象物質(zhì)為基質(zhì)的酶。例如，在測(cè)定葡萄糖量的情況下使用葡萄糖氧化酶，此外，例如，在測(cè)定膽固醇量的情況下，使用膽固醇氧化酶。該生物傳感器，通過(guò)在切口部滴下樣品溶液，使測(cè)定用試劑溶解在樣品溶液中，通過(guò)電子介質(zhì)進(jìn)行測(cè)定對(duì)象物質(zhì)和酶的反應(yīng)(酶循環(huán)反應(yīng))。樣品溶液中的測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的量根據(jù)氧化電流值被計(jì)算出，該氧化電流值是通過(guò)使經(jīng)酶反應(yīng)而還原的電子介質(zhì)電化學(xué)氧化而得到的。在圖I所示的現(xiàn)有的免疫學(xué)測(cè)定方法中，如上所述，使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液進(jìn)行工序Ι-c。因此，為了在芯片上實(shí)施該免疫學(xué)測(cè)定方法，需要從芯片的外部供給洗滌液，或者將洗滌液預(yù)先保持在芯片上。但是，在從外部供給洗滌液的情況下，為了該供給而多余地花費(fèi)勞力和時(shí)間。在將洗滌液保持在芯片上的情況下，優(yōu)選以密封狀態(tài)并且在洗滌時(shí)能夠容易地導(dǎo)入芯片的狀態(tài)將該液體保持在芯片上。但是，在芯片上形成這樣的保持狀態(tài)并不容易。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種適用于在芯片上實(shí)施的免疫學(xué)測(cè)定方法，該免疫學(xué)測(cè)定方法不需要將以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液從芯片的外部進(jìn)行供給并預(yù)先保持在芯片上。而且，本發(fā)明的目的是提供一種適于實(shí)施該免疫學(xué)測(cè)定方法的芯片。此外，本發(fā)明的目的是提供一種使用該芯片的測(cè)定方法。在現(xiàn)有的免疫學(xué)測(cè)定方法中，對(duì)于反應(yīng)腔室的洗滌，認(rèn)為使用不含有蛋白質(zhì)等測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液很重要。但是，本發(fā)明者意外地發(fā)現(xiàn)了以下情況取代以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液，使用含有蛋白質(zhì)等測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的活體試劑來(lái)洗滌反應(yīng)腔室，由此，也能夠以與使用洗滌液的情況相當(dāng)?shù)膬?yōu)良的精度檢測(cè)出反應(yīng)測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的量的信號(hào)。本發(fā)明提供一種方法，其為使用芯片測(cè)量樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量的方法，上述芯片具有反應(yīng)腔室、洗滌液保持腔室、廢液腔室、和注入上述樣品溶液的注入孔，上述注入孔和上述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第一流路連接，上述注入孔和上述洗滌液保持腔室之間通過(guò)第二流路連接，上述洗滌液保持腔室和上述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第三流路連接，上述反應(yīng)腔室和上述廢液腔室之間通過(guò)第四流路連接，上述方法包括從上述注入孔注入上述樣品溶液，將上述樣品溶液通過(guò)上述第一流路分配給上述反應(yīng)腔室，并通過(guò)上述第二流路分配給上述洗滌液保持腔室的エ序；在上述反應(yīng)腔室內(nèi)，使上述樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原、與抗體結(jié)合，得到抗原抗體復(fù)合物的エ序，其中，該抗體為與上述測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合的抗體；通過(guò)上述第三流路向上述反應(yīng)腔室注入保持在上述洗滌液保持腔室中的上述樣品溶液，并對(duì)具有上述抗原抗體復(fù)合物的上述反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌，由此，將從i)上述抗原抗體復(fù)合物、和ii)未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體中選擇的一方殘留在上述反應(yīng)腔室內(nèi)，并將另一方移動(dòng)至上述廢液腔室，將上述抗原抗體復(fù)合物和未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體分離的エ序；對(duì)上述抗原抗體復(fù)合物或未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體的量進(jìn)行測(cè)定的エ序；和根據(jù)測(cè)量的上述抗原抗體復(fù)合物或未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體的量，計(jì)算出上述樣品溶液中含有的上述測(cè)定對(duì)象抗原的量的エ序。本發(fā)明從另一方面提供ー種方法，其為測(cè)量樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量的方法，該方法包括在反應(yīng)腔室內(nèi)，使上述測(cè)定對(duì)象抗原與抗體結(jié)合，得到抗原抗體復(fù)合 物的結(jié)合エ序，其中，該抗體為與上述測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合的抗體；通過(guò)利用上述樣品溶液對(duì)上述反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌，將上述抗原抗體復(fù)合物和未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體分離的洗滌分離エ序；對(duì)上述抗原抗體復(fù)合物或未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體的量進(jìn)行測(cè)定的測(cè)定エ序；和根據(jù)測(cè)得的上述抗原抗體復(fù)合物或未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體的量，計(jì)算出上述樣品溶液中含有的上述測(cè)定對(duì)象抗原的量的エ序。本發(fā)明從又一方面提供一種芯片，其為用于測(cè)定樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量的芯片，該芯片具有反應(yīng)腔室、洗滌液保持腔室、廢液腔室、和注入上述樣品溶液的注入孔，上述注入孔和上述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第一流路連接，上述注入孔和上述洗滌液保持腔室之間通過(guò)第二流路連接，上述洗滌液保持腔室和上述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第三流路連接，上述反應(yīng)腔室和上述廢液腔室之間通過(guò)第四流路連接，從上述注入孔注入的上述樣品溶液，通過(guò)上述第一流路流向上述反應(yīng)腔室、并通過(guò)上述第二流路流向上述洗滌液保持腔室，在上述反應(yīng)腔室內(nèi)，使上述測(cè)定對(duì)象抗原與抗體結(jié)合，得到抗原抗體復(fù)合物，其中，該抗體為與上述測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合的抗體，通過(guò)上述第三流路向上述反應(yīng)腔室注入保持在上述洗滌液保持腔室中的上述樣品溶液，并對(duì)具有上述抗原抗體復(fù)合物的上述反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌，由此，將從i)上述抗原抗體復(fù)合物、和ii)未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體中選擇的一方殘留在上述反應(yīng)腔室內(nèi)，并將另一方移動(dòng)至上述廢液腔室，將上述抗原抗體復(fù)合物和未與上述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的上述抗體分離。根據(jù)本發(fā)明，在實(shí)施免疫學(xué)測(cè)定方法時(shí)，不使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液，能夠通過(guò)洗滌反應(yīng)腔室，檢測(cè)出反映測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的量的信號(hào)。


圖I是用于對(duì)現(xiàn)有的免疫學(xué)測(cè)定方法的一例進(jìn)行說(shuō)明的エ序圖。圖2是用于對(duì)本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的一例進(jìn)行說(shuō)明的エ序圖。圖3是用于對(duì)使用非標(biāo)記的一次抗體和被標(biāo)記的二次抗體，實(shí)施本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的情況的一例進(jìn)行說(shuō)明的圖。
圖4是用于對(duì)本發(fā)明的芯片的一例進(jìn)行說(shuō)明的圖。圖5是用于對(duì)通過(guò)夾心法(sandwich method)實(shí)施抗體和測(cè)定對(duì)象抗原的抗原抗體反應(yīng)的情況的一例進(jìn)行說(shuō)明的工序圖。圖6是表示吸光度的測(cè)定結(jié)果的圖表。
具體實(shí)施例方式使用圖2的工序圖對(duì)本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的一例進(jìn)行說(shuō)明。(工序2-A:固相抗原的形成)將具有與樣品溶液中含有的特定的蛋白質(zhì)(測(cè)定對(duì)象抗原2)的抗原表位相同的抗原表位的捕獲抗原，以規(guī)定量固定于反應(yīng)腔室7的表面，由此形成固相抗原6。捕獲抗原的固定，例如與現(xiàn)有型的ELISA中的工程I-A同樣地進(jìn)行即可。 反應(yīng)腔室7的材料，例如為聚苯乙烯、聚對(duì)苯二甲酸乙二酯(PET)、聚碳酸酯和聚二甲基硅氧烷等樹(shù)脂、玻璃、磁性體等。反應(yīng)腔室7優(yōu)選為管型、以微板為代表的井(well)型等具有能夠保持液體的形狀。(工序2-B:結(jié)合工序)注入規(guī)定量的樣品溶液的一部分I。樣品溶液例如為血液、尿、唾液、汗、淚等液態(tài)活體樣品。向樣品溶液的一部分I中添加由標(biāo)記物質(zhì)4標(biāo)記的抗體3?？贵w3是與測(cè)定對(duì)象抗原2特異性結(jié)合的一次抗體。樣品溶液的另一部分8以不添加抗體3的狀態(tài)保存?？贵w3可以是市售的抗體，也可以是利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獨(dú)自制作的抗體?？贵w3雖然也可以是多克隆(polyclonal)抗體,但從提高抗原抗體反應(yīng)的特異性和靈敏度等觀點(diǎn)出發(fā),優(yōu)選單克隆抗體。測(cè)定對(duì)象抗原2例如為C反應(yīng)性蛋白(CRP)、血清淀粉樣蛋白A、肌鈣蛋白T、肌酸激酶MB、視黃醇結(jié)合蛋白等臨床注目度高的蛋白質(zhì)。標(biāo)記物質(zhì)4優(yōu)選酶，也可以是熒光色素和放射性同位素。將添加被標(biāo)記的抗體3后的狀態(tài)下的樣品溶液的一部分I導(dǎo)入固定有固相抗原6的反應(yīng)腔室7。通過(guò)該操作，樣品溶液的一部分I被導(dǎo)入反應(yīng)腔室7。將導(dǎo)入后的樣品溶液的一部分I以規(guī)定溫度和規(guī)定時(shí)間保持在反應(yīng)腔室7內(nèi)。由此,在固相抗原6與抗體3之間、以及測(cè)定對(duì)象抗原2與抗體3之間競(jìng)爭(zhēng)地進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，在反應(yīng)腔室7中，形成作為測(cè)定對(duì)象抗原2和抗體3的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物，以及固相抗原6和抗體3的結(jié)合物。固相抗原6和抗體3的結(jié)合物，因?yàn)槲磁c測(cè)定對(duì)象抗原2結(jié)合，所以在本說(shuō)明書(shū)中，與抗體3同樣用作“未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體”。這樣，關(guān)于本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法，在反應(yīng)腔室中固定有固相抗原，在結(jié)合工序中，可以得到抗原抗體復(fù)合物、和抗體與固相抗原結(jié)合的狀態(tài)下的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體。反應(yīng)腔室7中的抗原抗體反應(yīng)也可以是非競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。關(guān)于非競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，將添加有被標(biāo)記的抗體3的樣品溶液的一部分I導(dǎo)入反應(yīng)腔室7之前，在規(guī)定溫度下保持規(guī)定時(shí)間，在測(cè)定對(duì)象抗原2和被標(biāo)記的抗體3的反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后，將該樣品溶液的一部分I導(dǎo)入反應(yīng)腔室7，使未與測(cè)定對(duì)象抗原2結(jié)合的抗體3、和固相抗原6反應(yīng)，由此進(jìn)行該非競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)即可。用于進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的溫度和時(shí)間，按照抗原和抗體的種類適當(dāng)設(shè)定即可。在以下的抗原抗體反應(yīng)中也相同。(工序2-C:洗滌分離工序)
使用在結(jié)合エ序(エ序2-B)中保存的樣品溶液的另一部分8洗滌反應(yīng)腔室7。該洗滌例如以下述方式進(jìn)行即可。首先，使用移液管，除去反應(yīng)腔室7的內(nèi)部的樣品溶液的一部分I。接著，使用移液管將樣品溶液的另一部分8滴下至反應(yīng)腔室7的內(nèi)部，進(jìn)行多次移液。之后，將樣品溶液的另一部分8從反應(yīng)腔室7除去。由此，抗原抗體復(fù)合物從反應(yīng)腔 室7被除去，而未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體殘留在反應(yīng)腔室7內(nèi)，于是，在結(jié)合エ序(エ序2-B)中得到的抗原抗體復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體被分離。這樣，不使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液，而使用樣品溶液洗滌反應(yīng)腔室。如上所述，歷來(lái)，認(rèn)為在反應(yīng)腔室的洗滌中使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液很重要。這是為了將抗原抗體復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體不帶夾雜物地分離?？墒牵词惯@樣使用樣品溶液洗滌反應(yīng)腔室，也能夠高精度的分離抗原抗體復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體。如后述的實(shí)施例所示，能夠以與使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液洗滌反應(yīng)腔室的情況相當(dāng)?shù)木龋瑱z測(cè)出反映測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的量的信號(hào)。(測(cè)定エ序)對(duì)反應(yīng)腔室7中殘留的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中的標(biāo)記物質(zhì)4的量進(jìn)行測(cè)定。該測(cè)定例如也可以下述方式實(shí)施。首先，調(diào)制含有測(cè)定用試劑的溶液。測(cè)定用試劑按照標(biāo)記物質(zhì)4的種類選擇即可。例如，如果標(biāo)記物質(zhì)4是酶，則使用該酶的基質(zhì)即可。接著，將該溶液導(dǎo)入反應(yīng)腔室7，在反應(yīng)腔室7中得到含有未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體和測(cè)定用試劑的測(cè)定溶液。在測(cè)定溶液中，使未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中的標(biāo)記物質(zhì)4和測(cè)定用試劑進(jìn)行反應(yīng)后，使用公知的光學(xué)測(cè)定方法和電化學(xué)測(cè)定方法等，檢測(cè)出反映反應(yīng)生成物的量的信號(hào)量。(計(jì)算エ序)根據(jù)測(cè)定エ序中得到的測(cè)定結(jié)果，算出測(cè)定對(duì)象抗原的量。更具體而言，根據(jù)該測(cè)定結(jié)果、固定在反應(yīng)腔室7中的固相抗原6的量、和在結(jié)合エ序(エ序2-B)中導(dǎo)入反應(yīng)腔室的樣品溶液的一部分I的量，計(jì)算出測(cè)定對(duì)象抗原2的量。所謂測(cè)定對(duì)象抗原的量，是與該量相關(guān)的物理量，例如可以是濃度。這樣，根據(jù)測(cè)定エ序中測(cè)得的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體的量，或者根據(jù)如后所述的抗原抗體復(fù)合物的量，計(jì)算出樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量。使用圖5的エ序圖，對(duì)本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的另一例進(jìn)行說(shuō)明。該例中，通過(guò)夾心法進(jìn)行抗體和測(cè)定對(duì)象抗原的抗原抗體反應(yīng)。(エ序5-A:固相抗體的形成)通過(guò)將樣品溶液中含有的與測(cè)定對(duì)象抗原2結(jié)合的捕獲抗體以規(guī)定量固定在反應(yīng)腔室7的表面上，形成固相抗體19。捕獲抗體的固定，例如與圖2所示的免疫學(xué)測(cè)定方法中的エ序2-A相同地進(jìn)行即可。(エ序5-B D:結(jié)合エ序)分別注入規(guī)定量的樣品溶液。由此制備樣品溶液的一部分I和樣品溶液的另一部分8。將樣品溶液的一部分I導(dǎo)入固定有固相抗體19的反應(yīng)腔室7 (エ序5-B)。通過(guò)該操作，樣品溶液的一部分I被導(dǎo)入反應(yīng)腔室7中。將導(dǎo)入的樣品溶液的一部分I在反應(yīng)腔室7中以規(guī)定溫度保持規(guī)定時(shí)間。由此，在固相抗體19與測(cè)定對(duì)象抗原2之間進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，在反應(yīng)腔室7中，形成測(cè)定對(duì)象抗原2和固相抗體19的結(jié)合物。接著，使用樣品溶液的另一部分8洗滌反應(yīng)腔室7 (工序5-C)。此時(shí)，不使用所有樣品溶液的另一部分8，為了在后述的洗滌分離工序(工序5-E)中使用而殘留。該洗滌(工序5-C)與圖2所示的免疫學(xué)測(cè)定法中的工序2-C同樣地實(shí)施即可。但是，樣品溶液的該另一部分8，因?yàn)楹袦y(cè)定對(duì)象抗原2，所以優(yōu)選在該測(cè)定對(duì)象抗原2和固相抗體19之間還沒(méi)有進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)時(shí)，迅速將其從反應(yīng)腔室7中除去。通過(guò)該洗滌(工序5-C)，在工序5-B中未與固相抗體19結(jié)合的測(cè)定對(duì)象抗原2被從反應(yīng)腔室7除去，測(cè)定對(duì)象抗原2和固相抗體19的結(jié)合物殘留在反應(yīng)腔室7內(nèi)。之后，將溶液30導(dǎo)入反應(yīng)腔室7。溶液30是通過(guò)將由標(biāo)記物質(zhì)4標(biāo)記的抗體3添加規(guī)定量至溶劑中調(diào)制而成，其中，該溶劑不含有具有與測(cè)定對(duì)象抗原2的抗原表位相同的抗原表位的蛋白質(zhì)?？贵w3使用能夠與測(cè)定對(duì)象抗原2結(jié)合的一次抗體，其中，該測(cè)定對(duì)象抗原2處于與固相抗體19結(jié)合的狀態(tài)。溶液30的溶劑例如為Tris-HCL緩沖液。在反 應(yīng)腔室7中將導(dǎo)入的溶液30以規(guī)定溫度保持規(guī)定時(shí)間(工序5-D)。由此，處于與固相抗體19結(jié)合的狀態(tài)的測(cè)定對(duì)象抗原2、和被標(biāo)記的抗體3之間進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。通過(guò)該抗原抗體反應(yīng)，在反應(yīng)腔室7中得到作為固相抗體19、測(cè)定對(duì)象抗原2和抗體3的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物，以及作為被標(biāo)記的抗體3的殘留部21的、未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體?？贵w3的殘留部21為從反應(yīng)腔室7的表面游離的狀態(tài)，存在于溶液30中。這樣，本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法也可以為如下方法在反應(yīng)腔室中配置有固相抗體，在結(jié)合工序中，使固相抗體和測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合，進(jìn)一步，使抗體的一部分與處于與固相抗體結(jié)合的狀態(tài)的測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合，由此，能夠得到作為固相抗體、測(cè)定對(duì)象抗原和抗體的上述一部分的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物，以及作為抗體的殘留部的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體。(工序5-E:洗滌分離工序)使用工序5-C中預(yù)先殘留的樣品溶液的另一部分8洗滌反應(yīng)腔室7。該洗滌與圖2所示的免疫學(xué)測(cè)定法中的工序2-C同樣地實(shí)施即可。由此，將未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體從反應(yīng)腔室7中除去，抗原抗體復(fù)合物被殘留于反應(yīng)腔室7。這樣，通過(guò)使用樣品溶液洗滌反應(yīng)腔室，不使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液，對(duì)在工序5-D中得到的抗原抗體復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體進(jìn)行分離。認(rèn)為該分離的精度也優(yōu)良到與使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液洗滌反應(yīng)腔室的情況相當(dāng)?shù)某潭取?測(cè)定工序)測(cè)定殘留在反應(yīng)腔室7中的抗原抗體復(fù)合物中的標(biāo)記物質(zhì)4的量。該測(cè)定與圖2所示的免疫學(xué)測(cè)定方法中的測(cè)定工序同樣地實(shí)施即可。(計(jì)算工序)根據(jù)測(cè)定工序中得到的測(cè)定結(jié)果，計(jì)算出測(cè)定對(duì)象抗原的濃度。更具體而言，根據(jù)該測(cè)定結(jié)果、固定在反應(yīng)腔室7中的固相抗原19的量、和在結(jié)合工序(工序5-B)中導(dǎo)入反應(yīng)腔室7的樣品溶液的一部分I的量，計(jì)算出測(cè)定對(duì)象抗原2的量。所謂測(cè)定對(duì)象抗原的量，是與該量相關(guān)的物理量，例如可以是濃度。本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法，只要能夠與使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液的情況相當(dāng)?shù)某潭鹊貦z測(cè)出反映測(cè)定對(duì)象物質(zhì)的濃度的信號(hào)，也可以適當(dāng)?shù)淖兏僮骱褪褂玫墓ぞ?。例如，在圖2和5所示的免疫學(xué)測(cè)定方法中，對(duì)以標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記一次抗體的情況進(jìn)行了說(shuō)明，其中，該一次抗體為用于得到抗原抗體復(fù)合物或未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體的一次抗體，但也可以代替這種情況，如圖3的概念圖所示，用于得到抗原抗體復(fù)合物或未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體的一次抗體22為非標(biāo)記，以標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記與該非標(biāo)記的ー次抗體22結(jié)合的二次抗體18。此外，在圖2和5所示的免疫學(xué)測(cè)定方法中，對(duì)以從洗滌分離エ序后在反應(yīng)腔室7中殘留的抗原抗體復(fù)合物和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中選擇的一方作為對(duì)象實(shí)施測(cè)定エ序的情況進(jìn)行了說(shuō)明，但也可以代替這種情況，以從通過(guò)洗滌分離エ序從反應(yīng)腔室7中除去的抗原抗體復(fù)合物和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中選擇的另一方為對(duì)象實(shí)施測(cè)定エ序。此外，如上所述，本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法，從容易在芯片上實(shí)施的觀點(diǎn)出發(fā)，作為反應(yīng)腔室，優(yōu)選使用以微板為代表的具有能夠保持液體的形狀的基體，但也不排除代替上述基體，使用以樹(shù)脂珠(beads)和磁性珠等珠體為代表的具有不容易保持液體的形狀的基體。此外，在圖2和5所示的免疫學(xué)測(cè)定方法中，對(duì)分別注入樣品溶液，制備用于在反應(yīng)腔室中誘導(dǎo)抗原抗體反應(yīng)的溶液，和用于洗滌反應(yīng)腔室的溶液的情況進(jìn)行了說(shuō)明，但也可代替這種情況，通過(guò)重新采取樣品溶液，準(zhǔn)備用于洗滌的溶液。圖4是用于對(duì)適于實(shí)施本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的芯片的一例進(jìn)行說(shuō)明的圖。 芯片100具有芯片基板11、形成在該基板11上的反應(yīng)腔室12、洗滌液保持腔室
14、廢液腔室15和樣品溶液注入孔17。作為芯片基板11的材料，例如為以PET為代表的用于在本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法中使用的反應(yīng)腔室7的材料。注入孔17和反應(yīng)腔室12通過(guò)形成在芯片基板11上的流路16a連接。而且，注入孔17和洗滌液保持腔室14通過(guò)形成在芯片基板11上的流路16b連接。流路16a和流路16b是互不聯(lián)通的狀態(tài)。因此，如果將樣品溶液注入注入孔17，則該樣品溶液分別通過(guò)流路16a被分配至反應(yīng)腔室12，通過(guò)流路16b被分配至洗滌液保持腔室14。這樣，樣品溶液的一部分被送至反應(yīng)腔室12，并且，樣品溶液的另一部分被送至洗滌液保持腔室14而保持在該腔室14中。反應(yīng)腔室12中優(yōu)選固定有從(I)固相抗原和(2)固相抗體中選擇的任意一方。在樣品溶液的上述一部分被導(dǎo)入至反應(yīng)腔室12的路徑上或者在反應(yīng)腔室12的內(nèi)部，優(yōu)選以能夠溶解于該樣品溶液中的狀態(tài)配置與樣品溶液中的測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合的一次抗體。一次抗體優(yōu)選處于由標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的狀態(tài)。如果樣品溶液的上述一部分被導(dǎo)入反應(yīng)腔室12，則(I)在反應(yīng)腔室12中固定有固相抗原的情況下，得到作為測(cè)定對(duì)象抗原和抗體的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物、和作為固相抗原和抗體的結(jié)合物的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體，(2)在反應(yīng)腔室12中固定有固相抗體的情況下，得到作為固相抗體、測(cè)定對(duì)象抗原和抗體的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物，和作為抗體的殘留部的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體。反應(yīng)腔室12和廢液腔室15通過(guò)形成在芯片基板11上的流路16d連接。而且，洗滌液保持腔室14和反應(yīng)腔室12通過(guò)形成在芯片基板11上的流路16c連接。洗滌液保持腔室14中保持的樣品溶液(上述另一部分)在反應(yīng)腔室12中的抗原抗體反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后，通過(guò)流路16c被注入反應(yīng)腔室12，進(jìn)ー步通過(guò)流路16d從反應(yīng)腔室12被送至廢液腔室
15。由此，在反應(yīng)腔室12中配置有固相抗原的情況下，作為固相抗原和抗體的結(jié)合物的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體殘留在反應(yīng)腔室12中，此外，在反應(yīng)腔室12中配置有固相抗體的情況下，作為固相抗體、測(cè)定對(duì)象抗原和抗體的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物殘留在反應(yīng)腔室12中。這樣，通過(guò)利用樣品溶液洗滌反應(yīng)腔室12，能夠?qū)⒖乖贵w復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體分離。這樣，本發(fā)明的芯片也可以為以下方式，在反應(yīng)腔室中固定有固相抗原，未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體處于與固相抗原相結(jié)合的狀態(tài)，通過(guò)上述洗滌，未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體殘留在反應(yīng)腔室中，抗原抗體復(fù)合物移動(dòng)至廢液腔室。而且，如上所述，本發(fā)明的芯片也可以為如下方式，在反應(yīng)腔室中固定有固相抗體，抗原抗體復(fù)合物是固相抗體、測(cè)定對(duì)象抗原和抗體的結(jié)合物，通過(guò)上述洗滌，抗原抗體復(fù)合物殘留在反應(yīng)腔室內(nèi)，未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體移動(dòng)至廢液腔室。通過(guò)各個(gè)流路傳送液體的方法可以采用以下公知的方法利用電滲流的方法(例如，Barker 等、Anal. Chem. ； (Article) ；2000 ；72(24) ;5925_5929)，利用泵的噴射力或吸引力的方法(例如，Hisamoto 等、Anal. Chem. ； (Article) ；2001 ；73 (22) ;5551_5556),利用離心力的方法(例如，Duffy 等，Anal. Chem. ； (Article) ；1999 ；71 (24) ;4669_4678)等。如上所述，利用本發(fā)明的芯片，即使不使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液， 也能夠分離抗原抗體復(fù)合物、和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體。如本發(fā)明的免疫學(xué)測(cè)定方法的說(shuō)明中所述，該分離的精度較高。因此，利用本發(fā)明的芯片，能夠以與使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液的情況相當(dāng)?shù)某潭?，檢測(cè)出反映測(cè)定對(duì)象物質(zhì)濃度的信號(hào)。關(guān)于信號(hào)的檢測(cè)，既可以將從反應(yīng)腔室12中殘留的抗原抗體復(fù)合物和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中選擇的一方作為對(duì)象進(jìn)行該信號(hào)的檢測(cè)，也可以將移動(dòng)至廢液腔室15的另一方對(duì)象進(jìn)行該信號(hào)的檢測(cè)。這樣，廢液腔室除儲(chǔ)藏廢液以外，也能夠用于實(shí)施酶反應(yīng)，術(shù)語(yǔ)“廢液”并不限定其用途。本發(fā)明的芯片，只要能夠以與使用以Tris-HCL緩沖液為代表的洗滌液的情況相當(dāng)?shù)某潭冗M(jìn)行良好的測(cè)定，還可以適當(dāng)?shù)母淖兤湓O(shè)計(jì)。例如，也可以另外形成用于將被標(biāo)記的抗體導(dǎo)入反應(yīng)腔室的流路，使得能夠通過(guò)夾心法實(shí)施抗原抗體反應(yīng)。以下，通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的說(shuō)明。(參考例)首先，對(duì)通過(guò)使用緩沖液(Tris-HCL緩沖液)，洗滌抗原抗體反應(yīng)后的反應(yīng)腔室的參照例進(jìn)行說(shuō)明。(樣品溶液的調(diào)制)將42. 3 μ M的CRP溶液與人體正常血清混合，調(diào)制具有ΟηΜ、10ηΜ、20ηΜ、50ηΜ和IOOnM的CRP濃度的樣品溶液。(反應(yīng)芯片的制作)在厚度Imm的PET板上形成有多個(gè)Φ 5mm的孔。以覆蓋該孔的一個(gè)端部的方式，使用公知的光固化型粘結(jié)劑(Luxtrak : 9 'V ^ )將另一 ΡΕΤ板粘貼在該ΡΕΤ板的一個(gè)面上。(CRP的固定化)使用50mM的Tri s-HCL緩沖液(pH7. 5 )調(diào)制42. 3nM的CRP溶液。將該CRP溶液向各個(gè)反應(yīng)腔室各導(dǎo)入10yL。接著以樹(shù)脂片(96孔用片)密封各個(gè)反應(yīng)腔室，通過(guò)在35°C下保持I小時(shí)，在反應(yīng)腔室中吸附CRP。之后，使用50mM的Tris-HCL緩沖液(pH7. 5)洗滌反應(yīng)腔室。接著，向各個(gè)反應(yīng)腔室各加入10 μ L的阻滯劑(生化學(xué)工業(yè)社(SEIKAGAKUCORPORATION)制 Appl ieDuo，CatNo. 200140)，在 35°C 下保持 I 小時(shí)。這樣，阻滯吸附的 CRP，在反應(yīng)腔室中形成固相抗原。之后，再次使用50mM的Tris-HCL緩沖液(pH7. 5)洗滌反應(yīng)腔室。(抗原抗體反應(yīng))向反應(yīng)腔室導(dǎo)入被堿性磷酸酶(ALP alkaline phosphatase)標(biāo)記的880nM的抗CRP單克隆抗體I μ L、樣品溶液I μ L和人體正常血清8 μ L，在35°C溫度下保持15分鐘。這樣，使固相抗原與抗體、以及CRP與抗體之間進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。而且，各個(gè)反應(yīng)腔室中的抗體的最終濃度均為88nM，最終CRP濃度各自約為OnM、10nM、20nM、50nM和ΙΟΟηΜ。(洗滌分離)將洗滌液20 μ L導(dǎo)入反應(yīng)腔室后將其排除。洗滌液使用50mM的Tris-HCL緩沖液(pH7. 5)。這樣洗滌反應(yīng)腔室。由此，將作為CRP和抗體的結(jié)合物的抗原抗體復(fù)合物、與作為固相抗原和抗體的結(jié)合物的未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體分離。更具體而言，從反應(yīng)腔室除去抗原抗體復(fù)合物，并將未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體殘留在反應(yīng)腔室內(nèi)。(測(cè)定)在各個(gè)反應(yīng)腔室中導(dǎo)入10 μ L的對(duì)硝基苯磷酸溶液(Cygnus社制PNPP LiquidSubstrat, CatNo. F008-1000 ;pNPP)。由此，使未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體中的ALP和PNPP之間進(jìn)行酶反應(yīng)。從各個(gè)反應(yīng)腔室測(cè)定該酶反應(yīng)的生成物對(duì)硝基苯(pNP)的吸光度。(實(shí)施例)除了通過(guò)代替洗滌液，使用20 μ L的樣品溶液對(duì)抗原抗體反應(yīng)后的反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌以外，與參考例相同地實(shí)施免疫學(xué)測(cè)定。通過(guò)分別注入用于誘導(dǎo)抗原抗體反應(yīng)的樣品溶液，制備用于該洗漆的樣品溶液。(比較例)除了在抗原抗體反應(yīng)后未洗滌反應(yīng)腔室以外，與參考例相同地進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定。更具體而言，在不除去導(dǎo)入的洗滌液的狀態(tài)下，進(jìn)ー步將PNP導(dǎo)入反應(yīng)腔室，并測(cè)定吸光度。圖6是表示由各例得到的吸光度的測(cè)定結(jié)果的圖表。吸光度，表示為以從參考例中的最終CRP濃度為約OnM的反應(yīng)腔室得到的吸光度為I時(shí)的相對(duì)值。表I是根據(jù)圖6的圖表,對(duì)各自的吸光度的背景(background)和偏差的好壞進(jìn)行評(píng)價(jià)后的結(jié)果。吸光度的背景的評(píng)價(jià)中，以平均值的絕對(duì)值通過(guò)洗滌變得最低時(shí)為“◎”，其次為“〇”，保持原樣地受到背景的影響時(shí)為“ X ”。吸光度的偏差評(píng)價(jià)中，以標(biāo)準(zhǔn)偏差最小的為“ ◎”，比其略大的為“〇”，明顯更大的為“ X ”。[表 I]
權(quán)利要求
1.一種免疫學(xué)測(cè)定方法，其為使用芯片測(cè)定樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量的方法，該方法的特征在于 所述芯片具有反應(yīng)腔室、洗滌液保持腔室、廢液腔室、和注入所述樣品溶液的注入孔， 所述注入孔和所述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第一流路連接， 所述注入孔和所述洗滌液保持腔室之間通過(guò)第二流路連接， 所述洗滌液保持腔室和所述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第三流路連接， 所述反應(yīng)腔室和所述廢液腔室之間通過(guò)第四流路連接， 所述方法包括 從所述注入孔注入所述樣品溶液，將所述樣品溶液通過(guò)所述第一流路分配給所述反應(yīng)腔室，并通過(guò)所述第二流路分配給所述洗滌液保持腔室的工序； 在所述反應(yīng)腔室內(nèi)，使所述樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原與抗體結(jié)合，得到抗原抗體復(fù)合物的結(jié)合工序，其中，該抗體為與所述測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合的抗體； 通過(guò)所述第三流路向所述反應(yīng)腔室注入保持在所述洗滌液保持腔室中的所述樣品溶液，并對(duì)具有所述抗原抗體復(fù)合物的所述反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌，由此，將選自 i)所述抗原抗體復(fù)合物、和 ii)未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體 中的一方殘留在所述反應(yīng)腔室內(nèi)，并將另一方移動(dòng)至所述廢液腔室，將所述抗原抗體復(fù)合物和未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體分離的工序； 對(duì)所述抗原抗體復(fù)合物或未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體的量進(jìn)行測(cè)定的工序；和 根據(jù)測(cè)得的所述抗原抗體復(fù)合物或未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體的量，計(jì)算出所述樣品溶液中含有的所述測(cè)定對(duì)象抗原的量的工序， 在所述反應(yīng)腔室內(nèi)固定有固相抗體，在所述結(jié)合工序中，使所述固相抗體與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合，進(jìn)一步，使所述抗體的一部分與處于與所述固相抗體結(jié)合的狀態(tài)的所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合，所述抗原抗體復(fù)合物是所述固相抗體、所述測(cè)定對(duì)象抗原和所述抗體的結(jié)合物，在進(jìn)行所述分離的工序中，將所述抗原抗體復(fù)合物殘留在所述反應(yīng)腔室內(nèi)，并將未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體移至所述廢液腔室。
2.一種芯片，其為用于測(cè)定樣品溶液中含有的測(cè)定對(duì)象抗原的量的芯片，該芯片的特征在于 具有反應(yīng)腔室、洗滌液保持腔室、廢液腔室、和注入所述樣品溶液的注入孔， 所述注入孔和所述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第一流路連接， 所述注入孔和所述洗滌液保持腔室之間通過(guò)第二流路連接， 所述洗滌液保持腔室和所述反應(yīng)腔室之間通過(guò)第三流路連接， 所述反應(yīng)腔室和所述廢液腔室之間通過(guò)第四流路連接， 從所述注入孔注入的所述樣品溶液，通過(guò)所述第一流路流向所述反應(yīng)腔室，并通過(guò)所述第二流路流向所述洗滌液保持腔室， 在所述反應(yīng)腔室內(nèi)固定有固相抗體，使所述固相抗體和所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合，進(jìn)一步，使抗體的一部分與處于與所述固相抗體結(jié)合的狀態(tài)的所述測(cè)定對(duì)象抗原特異性結(jié)合，得到抗原抗體復(fù)合物，其中，所述抗原抗體復(fù)合物是所述固相抗體、所述測(cè)定對(duì)象抗原和所述抗體的結(jié)合物， 通過(guò)所述第三流路向所述反應(yīng)腔室注入保持在所述洗滌液保持腔室中的所述樣品溶液，并對(duì)具有所述抗原 抗體復(fù)合物的所述反應(yīng)腔室進(jìn)行洗滌，由此，將所述抗原抗體復(fù)合物殘留在所述反應(yīng)腔室內(nèi)，并將未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體移至所述廢液腔室，將所述抗原抗體復(fù)合物和未與所述測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的所述抗體分離。
全文摘要
本發(fā)明提供一種免疫學(xué)測(cè)定方法和芯片，該免疫學(xué)測(cè)定方法適于在芯片上實(shí)施。免疫學(xué)測(cè)定方法為以下方法，在反應(yīng)腔室(7)中得到測(cè)定對(duì)象抗原(2)與抗體(3)已結(jié)合的狀態(tài)下的抗原抗體復(fù)合物后，通過(guò)使用樣品溶液(8)洗滌反應(yīng)腔室(7)，將抗原抗體復(fù)合物和未與測(cè)定對(duì)象抗原結(jié)合的抗體分離。根據(jù)本發(fā)明，不使用處于不含有蛋白質(zhì)等測(cè)定對(duì)象抗原的狀態(tài)下的以Tris-HCl緩沖液為代表的洗滌液，就能夠洗滌反應(yīng)腔室，并能夠以與使用洗滌液的情況相當(dāng)?shù)木葯z測(cè)出反應(yīng)測(cè)定對(duì)象抗原的量的信號(hào)。由此，不需要將洗滌液從芯片的外部供給或?qū)⑾礈煲侯A(yù)先保持在芯片上，就能夠容易地在芯片上實(shí)施免疫學(xué)測(cè)定方法。
文檔編號(hào)G01N33/543GK102818887SQ201210269598
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2007年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月25日
發(fā)明者畠岡由香利 申請(qǐng)人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社