專利名稱：滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法
滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多組分同時(shí)測定的方法，尤其涉及一種滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法。
背景技術(shù)：
滿山白是杜醇科植物毛果杜胃$ (Rhododendron senniavinii Maxim.)的干燥嫩枝和葉，具有祛痰止咳功效，是福建省地方藥材；滿山白止咳糖漿系列產(chǎn)品是以滿山白藥材作為主要原料的臨床應(yīng)用中成藥。滿山白止咳糖漿系列產(chǎn)品中的金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素等黃酮類化合物是其藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素三者的含量水平直接影響到藥材原料的質(zhì)量，并最終影響成藥的質(zhì)量。開發(fā)并應(yīng)用滿山白糖漿中黃酮類化合
物的快速定量測定方法，是滿山白糖漿質(zhì)量科學(xué)監(jiān)控的必要手段。目前滿山白糖漿中金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素的相關(guān)檢測方法的主要文獻(xiàn)報(bào)道為《滿山白糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》。所報(bào)道的方法是應(yīng)用高效液相色譜方法分別對(duì)金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素進(jìn)行單獨(dú)的定量測定，使得測定滿山白糖漿中多種黃酮類化合物的含量所需耗費(fèi)的時(shí)間較長。因此，從業(yè)人員有待研究一種能夠同時(shí)對(duì)滿山白糖漿中的多種黃銅類化合物的含量進(jìn)行測定的方法。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的一種滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法，所述三種黃酮類化合物分別為金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素；該方法操作如下(I)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備以2 I I的質(zhì)量比分別稱取適量純度為98%的金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得標(biāo)準(zhǔn)溶液的母液，該母液的總濃度為4. 000mg/mL，然后將母液稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；(2)提取液的制備取適量糖漿并加入水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，且糖漿和水飽和正丁醇的體積比為3 1-1 2，共萃取1-5次，合并萃取液，并將合并后的萃取液減壓濃縮至干得，之后加入甲醇溶解并轉(zhuǎn)入25mL容量瓶定容，然后采用45nm孔徑濾膜過濾即得滿山白糖漿黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測液；(3)高效液相色譜檢測在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下檢測儀器高效液相色譜儀色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；
柱溫25°C;檢測波長360nm;進(jìn)樣量20iiL;流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 40 ；(4)測定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測液，并采用上述色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度。進(jìn)一步地，所述提取液的制備操作中超聲提取結(jié)束后將溶液采用濾紙進(jìn)行過濾。本發(fā)明滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法的有益效果在于能夠?qū)M山白糖漿中三種黃酮類化合物即金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量進(jìn)行同時(shí)測定，從而減少了測定的步驟、降低了測定所需耗費(fèi)的時(shí)間。

下面參照附圖結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。圖I是本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖。圖2是本發(fā)明實(shí)施例一中待測液高效液相色譜圖。圖3是本發(fā)明實(shí)施例二中待測液高效液相色譜圖。圖4是本發(fā)明實(shí)施例三中待測液高效液相色譜圖。
具體實(shí)施方式結(jié)合如下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明滿山白糖漿中三種黃酮類化合物(即金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素)含量同時(shí)測定的方法進(jìn)行進(jìn)一步說明。實(shí)施例一I.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別稱取20mg金絲桃苷、IOmg槲皮苷、IOmg槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得總濃度為4. 000mg/mL的母液，然后將母液分別稀釋成6個(gè)濃度梯度，濃度梯度分別為母液濃度的0. 01、0. 1、0. 2、0. 5、0. 8和I. 0倍；其中金絲桃苷、槲皮苷、及槲皮素對(duì)照品的純度均為98%。2.待測液的制備取ISmL糖漿并加入6mL水飽和正丁醇進(jìn)行萃取(即糖漿和水飽和正丁醇的體積比為3 1)，共萃取3次，合并萃取液，并將合并后的萃取液減壓濃縮至干，之后加入甲醇溶解并轉(zhuǎn)入25mL容量瓶定容(，然后采用45nm孔徑濾膜過濾即得滿山白糖漿黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測液；3.高效液相色譜檢測在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下檢測儀器Agilent 1200型高效液相色譜儀色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；柱溫25°C；
檢測波長360nm；進(jìn)樣量20iiL;流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 :40。4.測定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測液注入上述色譜條件的高效液相色譜儀中進(jìn)行分析測定，得到三種對(duì)照品的線性回歸方程及樣品的高效液相色譜圖，具體地，三種對(duì)照品的線性回歸方程如下表I所示，標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖如圖I所示，待測液的高效液相色譜圖如圖2所示，且經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度分別為0. 0349mg/mL、0. 0206mg/mL和0. 0102mg/mL。。表I三種對(duì)照品線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍
權(quán)利要求
1.一種滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法，其特征在于所述三種黃酮類化合物分別為金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素；該方法操作如下 (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備以2 I I的質(zhì)量比分別稱取適量純度為98%的金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得標(biāo)準(zhǔn)溶液的母液，該母液的總濃度為4. OOOmg/mL，然后將母液稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2)提取液的制備取適量糖漿并加入水飽和正丁醇進(jìn)行萃取，且糖漿和水飽和正丁醇的體積比為3 1-1 2，共萃取1-5次，合并萃取液，并將合并后的萃取液減壓濃縮至干，之后加入甲醇溶解并轉(zhuǎn)入25mL容量瓶定容，然后采用45nm孔徑濾膜過濾即得滿山白糖漿黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測液； (3)高效液相色譜檢測在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下 檢測儀器高效液相色譜儀； 色譜柱C18色譜柱； 流動(dòng)相乙腈-水； 柱溫25°C ； 檢測波長360nm ； 進(jìn)樣量20iiL ; 流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 40 ； (4)測定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測液，并采用上述色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖，經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法，其特征在于所述提取液的制備操作中超聲提取結(jié)束后將溶液采用濾紙進(jìn)行過濾。
全文摘要
本發(fā)明提供一種滿山白糖漿中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測定的方法，先配制標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測液，然后將標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測液進(jìn)行高效液相色譜檢測，其中，色譜條件為色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；柱溫25℃；檢測波長360nm；進(jìn)樣量20μL；流動(dòng)相變化過程0min～25min內(nèi)，乙腈水的體積比為7030；25min～26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由7030等度梯度轉(zhuǎn)變至6040；26min～55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為6040。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能夠?qū)M山白糖漿中三種黃酮類化合物含量進(jìn)行同時(shí)測定，從而減少了測定的步驟、降低了測定所需耗費(fèi)的時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102788853SQ20121027641
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日
發(fā)明者林峰, 趙云青, 陳菁瑛, 黃穎楨 申請(qǐng)人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所