一種糖敏靈制劑中8種化學(xué)成分的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種糖敏靈制劑中化學(xué)成分的檢測(cè)方法，該方法包括，將被檢測(cè)的糖敏靈制劑樣品用甲醇提取，然后用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為采用C18色譜柱，流動(dòng)相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器。本發(fā)明具有很好的線性、重復(fù)性、重現(xiàn)性和回收率，有助于更加全面控制糖敏靈的質(zhì)量。
【專利說(shuō)明】一種糖敏靈制劑中8種化學(xué)成分的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于現(xiàn)代中藥應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及一種對(duì)糖敏靈制劑中8種化學(xué)成分同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]糖敏靈丸是在臨床驗(yàn)證的有效方開郁清胃顆?；A(chǔ)上加減變化與劑型改革而成。糖敏靈丸由黃連、大黃、黃芩、白芍、柴胡、枳實(shí)、山楂、烏梅、半夏、天花粉共十味常用中藥組成，具有開郁清胃、滋陰降火、通腑瀉濁之功效。臨床觀察證實(shí)其對(duì)II型糖尿病的血糖有明顯的改善作用，尤其是對(duì)體型偏胖的早中期II型糖尿病患者效果更加顯著。同時(shí)，藥理實(shí)驗(yàn)揭示糖敏靈能顯著增強(qiáng)高熱量飼料誘導(dǎo)的胰島素抵抗模型糖尿病大鼠和自發(fā)性II型糖尿病大鼠的胰島素敏感性。
[0003]為使糖敏靈藥物生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化，達(dá)到療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定的目的，需要準(zhǔn)確檢測(cè)糖敏靈制劑的化學(xué)成分。糖敏靈丸所含的藥物成分中，可以確定的藥物活性物質(zhì)包括:肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。這些物質(zhì)均屬于已知物質(zhì)。為更加全面控制糖敏靈制劑的質(zhì)量，建立滿足中藥現(xiàn)代化的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，需要一種可以同時(shí)檢測(cè)糖敏靈制劑中多種化學(xué)成分的分析方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為使糖敏靈藥物生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化，達(dá)到療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定的目的。本發(fā)明提供了一種檢測(cè)本發(fā)明制劑中8種藥物活性物質(zhì)的方法，該方法采用HPLC法對(duì)其中的藥物活性物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定。該方法精密度、靈敏度、穩(wěn)定性均好，確保產(chǎn)品質(zhì)量的“安全、均一、穩(wěn)定、有效、可控”。
[0005]本發(fā)明提供了一種糖敏靈制劑中化學(xué)成分的測(cè)定方法，技術(shù)解決方案如下:
[0006]檢測(cè)樣品用甲醇提取，然后用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為采用C18色譜柱，流動(dòng)相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器。
[0007]根據(jù)本發(fā)明實(shí)施方式之一，檢測(cè)樣品采用甲醇超聲提取。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方式之一，流動(dòng)相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為0.01%-0.1%磷酸水溶液。
[0009]優(yōu)選地，采用梯度洗脫，采用梯度洗脫，洗脫梯度為:
[0010]O ?IOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相；
[0011]10 ?35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相；
[0012]35 ?40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相；
[0013]40 ?50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
[0014]分別考察了甲醇-0.05%磷酸水、乙腈-0.05%磷酸水和乙腈-甲醇-0.05%磷酸水三種流動(dòng)相系統(tǒng)。在甲醇-0.05%磷酸水系統(tǒng)中，蒽醌類成分可以實(shí)現(xiàn)分離，但色譜峰較寬，峰高和峰面積值都較小，由于制劑中此類成分含量較少，因此難以定量分析；在乙腈-0.05%磷酸水系統(tǒng)中，各指標(biāo)成分色譜峰峰形銳，響應(yīng)強(qiáng)度明顯增加，但同時(shí)干擾成分也多于甲醇-0.05%磷酸水系統(tǒng)，部分指標(biāo)成分無(wú)法到達(dá)理想的分離效果。綜合上述兩種溶劑系統(tǒng)的特點(diǎn)，選擇乙腈-甲醇-0.05%磷酸水為流動(dòng)相系統(tǒng)，通過優(yōu)化流動(dòng)相比例，獲得分離度好、響應(yīng)強(qiáng)度高的色譜條件。
[0015]實(shí)驗(yàn)表明，流動(dòng)相初始比例對(duì)各成分色譜行為影響較大，當(dāng)初始時(shí)甲醇比例大于50%,乙腈比例小于10%時(shí)，色譜行為與甲醇-0.05%磷酸水系統(tǒng)相似，通過降低甲醇比例、增加乙腈比例進(jìn)行改善，當(dāng)初始時(shí)甲醇比例小于25%，乙腈比例大于25%時(shí)，各成分分離度好，峰形銳且峰強(qiáng)度較大，基線平穩(wěn)，進(jìn)一步考察確定最佳流動(dòng)相洗脫梯度。
[0016]根據(jù)本發(fā)明的另一實(shí)施方式,色譜流動(dòng)相流速為0.8-1.2mL/min。
[0017]根據(jù)本發(fā)明的再一實(shí)施方式，色譜柱溫為25_35°C。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的再一實(shí)施方式，檢測(cè)器波長(zhǎng)為210_300nm。
[0019]優(yōu)選地，檢測(cè)器波長(zhǎng)為0~25min，288nm ;25~33min，224nm ;33~38min，254nm ；38~50min，224nm。
[0020]實(shí)驗(yàn)表明，肉桂酸、柚皮素和橙皮素的最大吸收波長(zhǎng)是288nm，蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的最大吸收波長(zhǎng)是224nm，柴胡皂苷1^的最大吸收波長(zhǎng)是254nm。為提高各成分的檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度，分別在25min，33min，38min時(shí)，將檢測(cè)波長(zhǎng)由288nm轉(zhuǎn)換至224nm，254nm，224nm，各成分均以最大吸收波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。盡量選擇色譜峰較少的保留時(shí)間進(jìn)行波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換，以避免基線波動(dòng)。
[0021]根據(jù)本發(fā)明，檢測(cè)到的糖敏靈制劑中的化學(xué)成分為:肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡 皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。它們的含量分別為 0.1145-0.1727mg.g'0.1090-0.3207mg.g'0.1099-0.2528mg.g'1.714X 10_2-5.108X 10_2mg.g'0.1855-0.5537mg.g'3.026X 10_2_6.120X 10_2mg.g—1、
3.882X10_2-5.092X 10_2mg.g'l.506 X IO^2-L 935X10_2mg.g—1。
[0022]本發(fā)明利用HPLC測(cè)定了糖敏靈中8種化學(xué)成分的含量，具有很好的線性、重復(fù)性、重現(xiàn)性和回收率，有助于更加全面控制糖敏靈的質(zhì)量。
[0023]本發(fā)明所述糖敏靈制劑包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉針劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、滴劑、貼劑、滴丸。因?yàn)樗幬锘钚猿煞窒嗤?，所以本發(fā)明提供的方法可以用于多種不同制劑的檢測(cè)。
[0024]本發(fā)明所述糖敏靈丸由下列重量份的原料制成:
[0025]天花粉10~30份，柴胡10~30份，枳實(shí)3~15份，大黃I~6份，半夏I~12份，黃芩3~15份，黃連f 12份，白芍3~15份，烏梅5~20份，山楂3~15份。
[0026]制備方法如下:所述的黃芩加水提取兩次，每次I小時(shí)，提取液加濃鹽酸調(diào)pH值至
1.5~2.0，80°C保溫I小時(shí)，抽濾，濾餅干燥，得黃芩提取物；所述的黃連加75%乙醇提取2次每次2小時(shí)，提取液減壓回收乙醇，加入濃鹽酸調(diào)pH值至1.0~2.0，抽濾，濾餅干燥，得黃連提取物；其余8味藥用水回流提取2次，每次I小時(shí)，提取液減壓濃縮至1:1，加入95%乙醇至含醇量70%，濾過，濾液減壓濃縮至稠膏加入黃連提取物與黃芩提取物，即得糖敏靈制劑的藥物活性成分。藥物活性成分與微晶纖維素按適當(dāng)比例混合，按照常規(guī)方法制備成濃縮丸。
[0027]本發(fā)明附加的方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1對(duì)照品色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、5-柴胡皂苷bl、6-大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0029]圖2糖敏靈丸色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、5-柴胡皂苷bl、6-大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0030]圖3大黃陰性對(duì)照色譜圖。2-柚皮素、3-橙皮素、5-柴胡皂苷bl。
[0031]圖4積實(shí)陰性對(duì)照色譜圖。1-肉桂酸、4-蘆薈大黃素、5-柴胡阜苷bl、6_大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0032]圖5柴胡陰性對(duì)照色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、6_大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
【具體實(shí)施方式】:
[0033]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0034]試驗(yàn)例方法學(xué)考察與樣品測(cè)定
[0035]對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備
[0036]( I)對(duì)照品溶液的制備
[0037]取肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷Id1 (SS匕)、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品各適量，精密稱定，分別制成濃度為7.161mg.ml/1, 5.502mg.ml/1,5.252mg.mL \ 0.760mg.mL \ 2.08 Img.mL \ 0.772mg.mL S 0.956mg.mL S 0.624mg.mL 1的對(duì)照品溶液。
[0038]分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.5,0.6,0.6，1.0, 3.0, 1.0, 1.2，1.0mL置于同一IOmL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，制成濃度為肉桂酸358.0yg-mL—1，柚皮素330.1 μ g.mL—1，橙皮素315.1 μ g.mL'蘆薈大黃素76.00 μ g.ml/1,柴胡阜苷b1624.3 μ g.ml/1,大黃素77.20 μ g.ηι?Λ大黃酌.114.7 μ g.ηι?Λ大黃素甲醚62.40 μ g.mL-1的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。
[0039](2)供試品溶液的制備取糖敏靈丸2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱重，超聲(180W，35±5%kHz)處理30min，放冷至室溫，甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心(3000r ^mirT1) lOmin，取上清液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試溶液。
[0040](3)陰性對(duì)照溶液的制備按糖敏靈丸處方與制備工藝，分別制備不含大黃、柴胡和枳實(shí)的陰性對(duì)照缺味制劑，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法操作，制備陰性對(duì)照溶液。
[0041]色譜條件
[0042]色譜柱:PhenomenexSynergi C18 (250mmX 4.6mm, 4 μ m)；
[0043]流動(dòng)相:甲醇(A)-乙腈(B) -0.05%磷酸水溶液(C)，按如下梯度進(jìn)行梯度洗脫:
[0044]O ~lOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相；
[0045]10 ~35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相；
[0046]35 ~40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相；[0047]40 ~50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
[0048]流速:1.0mT,.mirT1 ；
[0049]檢測(cè)波長(zhǎng):(T25min，288nm;25~33min，224nm ;33~38min，254nm ;38~50min，224nm ；
[0050]柱溫:30°C；
[0051]進(jìn)樣量:10μ L。
[0052]在上述色譜條件下，分別取對(duì)照品、樣品及陰性對(duì)照溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果表明，各成分之間分離效果良好，陰性無(wú)干擾。
[0053]系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
[0054]取供試溶液10 μ L進(jìn)樣，記錄色譜圖，肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷匕、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚色譜峰的保留時(shí)間分別為13.7，14.6，16.2,27.1，34.0,39.6，45.5，48.8min。供試、對(duì)照與陰性對(duì)照色譜圖見圖1_圖5。
[0055]標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0056]精密量取混合對(duì)照儲(chǔ)備液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL,分別置于IOmL量瓶
中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。分別精密吸取各混合對(duì)照品溶液IOyL,注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)(y)，以對(duì)照品溶液的濃度(μ g.mL-1)為橫坐標(biāo)(X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，回歸方程和濃度范圍如表1所示，各待測(cè)成分在濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
[0057]表1標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢測(cè)限(n=6).[0058]
【權(quán)利要求】
1.一種糖敏靈制劑中化學(xué)成分的檢測(cè)方法，其特征在于，檢測(cè)樣品采用甲醇提取，然后采用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件為采用C18色譜柱，流動(dòng)相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，檢測(cè)樣品采用甲醇超聲提取。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜流動(dòng)相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為0.01%-0.1%磷酸水溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用梯度洗脫，洗脫梯度為: O ~IOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相； 10 ~35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相； 35 ~40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相； 40 ~50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜流動(dòng)相流速為0.8-1.2mL/min。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于色譜柱溫為25-35°C。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于檢測(cè)器波長(zhǎng)為210-300nm。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于檢測(cè)器波長(zhǎng)為(T25min，288nm；25^33min,224nm ;33~38min，254nm ;38~50min，224nm。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測(cè)糖敏靈制劑中的肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，糖敏靈制劑中肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷K、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量分別為0.1145-0.1727mg`0.1090-0.3207mg.g'0.1099-0.2528mg.g'l.714X 10-2-5.108X l(T2mg.g'`0.1855-0.5537mg.g'3.026X 10_2_6.120X 10_2mg.g'3.882X 10_2_5.092X 10_2mg.g—1、`1.506X10_2-L 935X10_2mg.g—1。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103575823SQ201210281597
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月8日
【發(fā)明者】佟玲, 朱永宏, 周水平, 馬曉慧, 張瀛, 靳元鵬 申請(qǐng)人:天士力制藥集團(tuán)股份有限公司