專利名稱：顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及的是運動終板染色技術，具體地說是ー種顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法。
背景技術：
流行病學研究發(fā)現(xiàn)15%的成年人存在慢性盆腔疼痛，其中80%的慢性盆腔疼痛患者的疼痛癥狀由肛提肌痙攣引起。在動物實驗和臨床研究中均發(fā)現(xiàn)將肉毒桿菌毒素注射于肌肉內運動終板所在區(qū)域，可提高由運動神經元功能異常引起的肌肉痙攣和肌張カ失常的治療效果。因此，明確肛提肌內運動終板的分布方式有助于指導臨床運用肉毒桿菌毒素直接注射于肛提肌內運動終板分布區(qū)，達到松弛肌肉痙攣、有效治療慢性盆腔疼痛、減少副反應的目的。
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目前，文獻中尚無針對肛提肌內運動終板分布研究的報道。原因包括I.肛提肌的組成復雜；2.肛提肌的位置特殊；3.肛提肌與尿道、陰道、直腸和肛管等內臟器官關系密切，多數(shù)婦產科、泌尿外科和肛腸外科的臨床學者誤把肛提肌當做內臟肌肉，而不是全是骨骼肌組成的一部分；4.相關專業(yè)的臨床學者欠缺解剖學和組織病理學關于運動終板染色方法方面的專業(yè)知識，而經典基礎解剖學研究中針對肛提肌及運動終板的研究較少。雖然膽堿酯酶染色方法是ー種比較經典的研究骨骼肌內部運動終板分布的方法，但至今未有采用膽堿酯酶染色方法針對肛提肌內運動終板分布研究的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，該方法能在不破壞標本完整性的情況下，準確地獲得肛提肌內運動終板分布圖像。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法是采用膽堿酯酶整體染色方法對肛提肌標本內運動終板進行染色；制作空心的透光硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成運動終板染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內運動終板分布的立體形態(tài)影像；將標本放在解剖顯微鏡下進行顯微解剖并采集圖像。本發(fā)明提供的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法可以使肛提肌內運動終板著色，進而在背景光源的映射下，達到完整顯示肛提肌內運動終板分布狀態(tài)的目的，為明確肛提肌內運動終板的走行分布規(guī)律提供有效的研究圖像。本發(fā)明提供的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法具有以下積極效果
I、為解剖、生理和臨床醫(yī)學等相關研究準確描述肛提肌內運動終板分布規(guī)律提供了理論依據(jù)。2、明確肛提肌內的運動終板分布規(guī)律，對于提高肉毒桿菌毒素局部注射治療由于肛提肌痙攣引起的慢性盆腔疼痛疾病的臨床治療效果，提供了重要的指導；對緩解由于肛提肌痙攣引起的慢性盆腔疼痛、提高患者生活質量具有重要的意義。
具體實施例方式以下通過一具體實施例進ー步說明本發(fā)明。本發(fā)明提供的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法一實施例如下
I、收集死亡24小時內的尸體，完整解剖出肛提肌標本。2、將標本固定在含有磷酸氫ニ鈉及磷酸ニ氫鈉的中性甲醛溶液中2小時，中性甲醛溶液為甲醛溶液中加入磷酸氫ニ鈉及磷酸ニ氫鈉將其PH值調整為7的溶液。3、將固定后的標本依次放入pH值分別為7. 4和6. 0的以磷酸氫ニ鈉及酸ニ氫鈉為溶質的緩沖液中沖洗，所采用的緩沖液的濃度均為0. lmol/1，沖洗的時間均為15min。
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4、將標本放入37°C、pH值為6. 0的stock溶液中孵育2小時，每IOOmlstock溶液由硫酸銅150mg、氨基こ酸190mg、氯化鎂500mg、順丁烯ニ酸900mg、4%氫氧化鈉15ml、40%無水硫酸鈉85ml及碘化こ酰硫代膽堿IOOmg混合組成。5、將孵育后的標本依次放入濃度為40%的無水硫酸鈉溶液和蒸餾水中沖洗；標本在無水硫酸鈉溶液和蒸餾水中沖洗的時間均為15min。6、將標本置于濃度為20%的鐵氰化鉀溶液中浸泡染色，標本在鐵氰化鉀溶液中浸泡染色的時間為15min。7、將標本在蒸餾水中沖洗I小時后，用濃度為50%的甘油保存。完成上述步驟后，即可進行以下標本的影像采集工作
1、制作空心透光硅膠模型，模型的外表面為曲面，如球面或拋物面，模型為半球形或近似于半球形，在硅膠模型內部放置背景光源，背景光源采用白熾燈，將完成運動終板染色的肛提肌標本貼放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內運動終板分布的立體形態(tài)影像，照相機采用單反數(shù)碼照相機；
2、將標本放在解剖顯微鏡下進行顯微解剖并采集圖像。完成以上工作后，即可了解肛提肌內運動終板的分布和走行的整體特點，繪制出肛提肌內的運動終板分布圖，并應用于臨床以及解剖和生理等基礎研究中。
權利要求
1.顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于包括以下步驟采用膽堿酯酶整體染色方法對肛提肌標本內運動終板進行染色；制作空心的透光硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成運動終板染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內運動終板分布的立體形態(tài)影像；將標本放在解剖顯微鏡下進行顯微解剖并采集圖像。
2.根據(jù)權利要求I所述的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于對肛提肌標本內運動終板進行染色包括以下步驟 (1)、完整解剖出肛提肌標本，將標本放置在含有磷酸氫ニ鈉及磷酸ニ氫鈉的中性甲醛溶液中固定2小時； (2)、將固定后的標本依次放入pH值分別為7.4和6. O的以磷酸氫ニ鈉及磷酸ニ氫鈉為溶質的緩沖液中沖洗； (3)、將沖洗后的標本放入37°C、pH值為6. O的stock溶液中孵育2小吋； (4)、將孵育后的標本依次放入濃度為40%的無水硫酸鈉溶液和蒸餾水中沖洗； (5)、將標本置于濃度為20%的鐵氰化鉀溶液中浸泡染色； (6)、將染色后的標本放置于濃度為50%的甘油中保存。
3.根據(jù)權利要求2所述的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(I)中，中性甲醛溶液為甲醛溶液中加入磷酸氫ニ鈉及磷酸ニ氫鈉將其PH值調整為7的溶液。
4.根據(jù)權利要求2所述的顯示肛提肌內運動終板分布的方法，其特征在于在所述步驟(2)中，所采用的緩沖液的濃度均為0. lmol/1，沖洗的時間均為15min。
5.根據(jù)權利要求2所述的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(3)中，姆IOOmlstock溶液由硫酸銅150mg、氨基こ酸190mg、氯化鎂500mg、順丁烯ニ酸900mg、4%氫氧化鈉15ml、40%無水硫酸鈉85ml及碘化こ酰硫代膽堿IOOmg混合組成。
6.根據(jù)權利要求2所述的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(4)中，標本在無水硫酸鈉溶液和蒸餾水中沖洗的時間均為15min。
7.根據(jù)權利要求2所述的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(5)中，標本在鐵氰化鉀溶液中浸泡染色的時間為15min。
全文摘要
顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法，包括以下步驟采用膽堿酯酶整體染色方法對肛提肌標本內運動終板進行染色；制作空心的透光硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成運動終板染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內運動終板分布的立體形態(tài)影像；將標本放在解剖顯微鏡下進行顯微解剖并采集圖像。本發(fā)明提供的顯示及采集肛提肌內運動終板分布圖像的方法可以使肛提肌內運動終板著色，進而在背景光源的映射下，達到完整顯示肛提肌內運動終板分布狀態(tài)的目的，為明確肛提肌內運動終板的走行分布規(guī)律提供有效的研究圖像。
文檔編號G01N21/84GK102788797SQ20121030736
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月27日 優(yōu)先權日2012年8月27日
發(fā)明者周曉, 朱蘭, 王文艷 申請人:王文艷