專利名稱：胖大海藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及胖大海藥材的高效液相色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定。
背景技術(shù)：
胖大海是梧桐科蘋婆屬植物燈籽蘋婆Sterculia lychnophor a Hance的干燥成熟種子。其主產(chǎn)地位于泰國、越南、印度和馬來西亞等熱帶地區(qū)。我國使用的胖大海大部分從這些國家進(jìn)口。胖大海的主要藥理作用為抗炎、抗病毒、抗菌等(杜力軍，等.中藥材，1995，18(8) =409-410 ;曲本欽，等.中華醫(yī)學(xué)雜志，1954，(5) :337-340 ；Feng, DR, et al. J ChinMed, 1942，61A :9-11)。目前報(bào)道的胖大海中的化學(xué)成分主要包括糖類、黃酮類、生物堿類和脂肪酸類(陳建民，等.中藥材，1995，18(11) :567-569 ;陳建民，等.中國中藥雜志，1996，21(1) :39-41 ；ffang RF, et al. Phytochemistry, 2003,63 (4) :475-478)。胖大海中的糖類由單糖、寡糖和多糖組成，例如鼠李糖、阿拉伯糖、蔗糖、半乳糖、半乳糖乙酸、半乳糖醛酸、正丁基甘露糖苷、水溶性多糖P 1、？11、？ 111、堿溶性多糖？11、西黃芪粘膠素等。黃酮類主要有槲皮素、槲皮素-3-0-蕓香糖苷、山柰酚-3-0-葡萄糖苷、山柰酚-3-0-蕓香糖苷、異鼠李素-3-0-蕓香糖苷等。生物堿類僅有蘋婆堿I和蘋婆堿II報(bào)道。另外還包含有機(jī)酸類如咖啡酸和2，4-二羥基苯甲酸等。但是，迄今為止還沒有關(guān)于胖大海的指紋圖譜的報(bào)道。指紋圖譜可以從整體上反映中藥所含化學(xué)成分的種類及含量多少，目前已經(jīng)成為公認(rèn)的評價(jià)中藥質(zhì)量和鑒別中藥品種的有效手段之一。因此，構(gòu)建胖大海的指紋圖譜并確定其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，對胖大海的質(zhì)量評價(jià)和真?zhèn)舞b別具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種構(gòu)建胖大海藥材指紋圖譜的方法，以及通過該方法得到的胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。其特征為用20倍量(重量體積)的70%乙醇在25°C超聲提取胖大海藥材粉末50min，將提取液過濾后進(jìn)行高效液相色譜分析。分析的色譜條件為Kromasil-C18(250mmX4. 6mm, 5 μ m)色譜柱，帶預(yù)柱；流動相為乙腈-O. 5 %醋酸水溶液；流速為O. 74mL/min ;檢測波長為220nm ;柱溫30°C ;梯度洗脫程序?yàn)?min(5%乙月青)一30min (21 % 乙臆)—33min (33 % 乙臆)—36min (5 % 乙臆)—41min (5 % 乙臆)。在上述條件下測定購自中國各地的10批胖大海藥材，得到其指紋圖譜。通過分析這些胖大海藥材的指紋圖譜，確定了其中20個(gè)色譜峰為共有的特征峰(其中包括2，4- 二羥基苯甲酸和尿嘧啶的色譜峰)，得到胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(圖I)。20個(gè)共有特征峰保留時(shí)間分別為 3. 928min、8. 030min、14. 079min、15. 610min、17. 025min、18. 783min、20. 383min、22.672min、23.088min、25.828min、27.838min、29. 154min、30.610min、32.066min、32. 421min、32. 962min、33. 673min、35. 409min、35. 978min、36. 885min。


圖I胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。參見圖1，通過對10批胖大海藥材的指紋圖譜進(jìn)行分析得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜包括20個(gè)共有特征峰，其中7號峰為2，4-二羥基苯甲酸，19號峰為尿嘧啶。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例I.提取溶劑考察
精密稱取胖大海粉末4份，每份I. OOOg,置具塞錐形瓶中。加入20倍量(重量體積)的純水、40%乙醇、70%乙醇、100%乙醇，稱重。在25°C超聲提取50min。放冷，稱重并補(bǔ)足減失的重量。過濾，取續(xù)濾液以0.45 μ m微孔濾膜濾過，進(jìn)樣液相色譜儀。經(jīng)過綜合比較色譜峰數(shù)目和峰面積，確定70%乙醇為最佳提取溶劑。2.色譜條件考察對不同的色譜柱、流動相、流速和檢測波長進(jìn)行了考察，最終確定色譜條件為Kromasil-C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m)色譜柱，帶預(yù)柱；流動相為乙腈-O. 5 %醋酸水溶液；流速為O. 74mL· min—1 ;檢測波長為220nm;柱溫30°C ;梯度洗脫程序?yàn)?min(5%乙月青)一30min (21 % 乙臆)—33min (33% 乙臆)—36min (5% 乙臆)—41min (5% 乙臆)。3.標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立通過對10批胖大海藥材的指紋圖譜進(jìn)行共有峰分析，確定了 27個(gè)色譜峰中的20個(gè)為共有特征峰，得到如圖I所示的胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。20個(gè)共有特征峰保留時(shí)間分別為 3. 928min、8. 030min、14. 079min、15. 610min、17. 025min、18. 783min、20. 383min、22.672min、23. 088min、25. 828min、27. 838min、29. 154min、30.610min、32. 066min、32. 421min、32. 962min、33. 673min、35. 409min、35. 978min、36. 885min。
權(quán)利要求
1.一種胖大海藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括以下步驟用70%乙醇超聲提取胖大海藥材粉末，將提取液過濾后進(jìn)行高效液相色譜分析，得到胖大海藥材的指紋圖譜及由此歸納出的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述構(gòu)建方法，包括以下步驟用20倍量的70%乙醇在25°C超聲提取胖大海藥材粉末50min，將提取液過濾后進(jìn)行高效液相色譜分析，分析的色譜條件為Kromasil-C18(250mmX4. 6mm, 5 μ m)色譜柱，帶預(yù)柱；流動相為乙腈-O. 5 %醋酸水溶液；流速為O. 74mL/min ;檢測波長為220nm ;柱溫30°C ;梯度洗脫程序?yàn)?min(5%乙月青)一30min (21 % 乙臆)—33min (33% 乙臆)—36min (5% 乙臆)—41min (5% 乙臆)。
3.胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，包括20個(gè)共有的特征峰，其中包括2，4_二羥基苯甲酸和尿嘧啶的色譜峰。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，20個(gè)共有的特征峰的保留時(shí)間分別為 3. 928min、8. 030min、14. 079min、15. 610min、17. 025min、18. 783min、20. 383min、22.672min、23.088min、25.828min、27.838min、29. 154min、30.610min、32.066min、32. 421min、32. 962min、33. 673min、35. 409min、35. 978min、36. 885min。
5.胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在胖大海藥材的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評價(jià)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種胖大海藥材的高效液相色譜指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的確定。該方法包括用20倍量(重量體積)的70％乙醇在25℃超聲提取胖大海藥材粉末50min，將提取液過濾后進(jìn)行高效液相色譜分析。分析的色譜條件為Kromasil-C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，帶預(yù)柱；流動相為乙腈-0.5％醋酸水溶液；流速為0.74mL/min；檢測波長為220nm；柱溫30℃；梯度洗脫程序?yàn)?min(5％乙腈)→30min(21％乙腈)→33min(33％乙腈)→36min(5％乙腈)→41min(5％乙腈)。在上述條件下得到胖大海藥材的紋圖譜，通過對10批胖大海藥材的指紋圖譜進(jìn)行比較，確定其中20個(gè)色譜峰為共有的特征峰(其中包括2，4-二羥基苯甲酸和尿嘧啶的色譜峰)，得到胖大海藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜可用于胖大海藥材的真?zhèn)舞b別和質(zhì)量評價(jià)。
文檔編號G01N30/02GK102830186SQ20121033737
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月13日
發(fā)明者王如峰, 安燕南, 袁銘, 吳秀穩(wěn) 申請人:北京中醫(yī)藥大學(xué)