專利名稱：一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物物質(zhì)檢測領(lǐng)域中的一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
磷霉素(Fosfomycin)系1967年由美國默克公司和西班牙CEPA公司從西班牙土壤中的鏈絲菌中發(fā)現(xiàn)的一種廣譜抗生素，其分子量很小，是一個(gè)不同于其他任何一種抗生素結(jié)構(gòu)的全新抗生素。目前磷霉素已經(jīng)在中國、歐洲和日本等國家和地區(qū)廣泛應(yīng)用，其應(yīng)用于臨床的品種主要有3個(gè)，分別是磷霉素鈉、磷霉素鈣和磷霉素氨丁三醇，其中，中國應(yīng)用較廣泛的品種為磷霉素鈉。磷霉素鈉抗菌譜廣、不良反應(yīng)小，易進(jìn)入感染組織內(nèi)，是治療輕、中度感染的一線用藥之一，是治療重度感染、耐藥菌感染聯(lián)合使用的理想藥物。安全、低毒、無需試敏的特點(diǎn)給臨床應(yīng)用帶來便利，與其他抗生素相比有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。但是，目前磷霉素鈉的法定檢測方法中均未收載其有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，為保證藥品的質(zhì)量及其安全性，亟 需建立檢測方法對其進(jìn)行控制。因此，研制開發(fā)一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法一直是亟待解決的新課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種重現(xiàn)性好、靈敏度高、檢測精確、專屬性強(qiáng)、操作方法簡便、檢測設(shè)備和儀器應(yīng)用廣泛的采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，所述方法包括如下步驟(I)色譜條件色譜柱為氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱，檢測器為示差折光檢測器，流動相為正磷酸鹽水溶液；( 2 )對照品溶液的制備取憐霉素納標(biāo)準(zhǔn)品用流動相配制成憐霉素納的對照品溶液；(3)參照溶液一的制備(a)用水濕潤的磷霉素鈉原料，在烘箱中進(jìn)行加熱，得到磷霉素鈉殘?jiān)?，殘?jiān)泻s質(zhì)A，用適量流動相溶解所述殘?jiān)?，得到殘?jiān)芤海?b)取磷霉素鈉原料溶于適量所述殘?jiān)芤褐械玫絽⒄杖芤阂唬?4)供試品溶液的制備取磷霉素鈉原料用流動相配制成供試品溶液；(5)參照溶液二的制備將供試品溶液用流動相進(jìn)行稀釋，得到參照溶液二 ；(6)測定方法取參照溶液一注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰與雜質(zhì)A峰的分離度應(yīng)大于或等于I. 5 ;取對照品溶液，平行進(jìn)樣，注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于或等于O. 85% ;取供試品溶液、參照溶液二分別注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積；在步驟(I)中，所述的氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱為Zorbax-NH2柱；所述檢測器的溫度為30-40°C，優(yōu)選溫度為35°C ;所述正磷酸鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀中的一種或幾種，優(yōu)選磷酸二氫鉀；所述正磷酸鹽水溶液的濃度為O. 05-0. 12mol/l，優(yōu)選O. 08mol/l ;在步驟(2)中，所述對照品溶液中磷霉素鈉的濃度為O. 06-0. 24g/ml，優(yōu)選O. 12g/ml ;在步驟(3)中的步驟 (a)中，所述烘箱加熱的溫度為50-70°C，優(yōu)選溫度60°C ;所述加熱的時(shí)間為16-30小時(shí)，優(yōu)選時(shí)間為24小時(shí)；所述殘?jiān)芤簽槊縄OOml含有將l_2g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘?jiān)臍堅(jiān)芤?，?yōu)選每IOOml含有將I. 5g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘?jiān)臍堅(jiān)芤?；在步驟(3)中的步驟(b)中，所述參照溶液一為每IOml含有溶于所述殘?jiān)芤褐械牧酌顾剽c原料O. 6-2. 4g，優(yōu)選每IOml含有溶于所述殘潘溶液中的憐霉素納原料I. 2g ;在步驟(4)中，所述供試品溶液中憐霉素納的濃度為O. 06-0. 24g/ml，優(yōu)選磷霉素鈉的濃度為O. 12g/ml ;在步驟(5)中，每200ml所述參照溶液二含有O. 5-1. 5ml所述供試品溶液，優(yōu)選每200ml所述參照溶液二含有Iml所述供試品溶液；在步驟(6)中，所述參照溶液一、對照品溶液、供試品溶液、參照溶液二的進(jìn)樣體積為3-20 μ 1，優(yōu)選進(jìn)樣體積為10 μ I ;所述雜質(zhì)為雜質(zhì)Α、非特定雜質(zhì)及總雜質(zhì)；所述的正磷酸鹽水溶液的配制方法為將適量所述正磷酸鹽置于水中溶解，過濾，超聲；所述的雜質(zhì)A為(1，2-二羥基丙基)膦酸。本發(fā)明的要點(diǎn)在于采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法。其原理是利用磷霉素鈉與雜質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的不同，通過高效液相色譜法，采用氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱作為色譜柱，正磷酸鹽水溶液作為流動相，使得磷霉素鈉和雜質(zhì)得到良好的分離，再通過示差折光檢測器進(jìn)行檢測，并進(jìn)行計(jì)算從而得到磷霉素鈉原料中有關(guān)物質(zhì)的含量。一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有對于磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)檢測的重現(xiàn)性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、檢測精確、操作簡便、檢測條件溫和、檢測設(shè)備和儀器應(yīng)用廣泛、流動相正磷酸鹽水溶液原料來源廣、配制簡單等優(yōu)點(diǎn)，將廣泛地應(yīng)用于化合物物質(zhì)檢測領(lǐng)域中。下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。圖I是實(shí)施例一中參照溶液一 HPLC圖譜的示意圖。圖2是實(shí)施例一中對照品溶液HPLC圖譜的示意圖。圖3是實(shí)施例一中供試品溶液HPLC圖譜的示意圖。圖4是實(shí)施例一中參照溶液二 HPLC圖譜的示意圖。圖5是本發(fā)明中雜質(zhì)A的結(jié)構(gòu)式圖。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例將有助于對本發(fā)明的了解，但這些實(shí)施例僅為了對本發(fā)明加以說明，本發(fā)明并不限于這些內(nèi)容。以下實(shí)施例中“供試品”和“磷霉素鈉標(biāo)準(zhǔn)品”的含義如下供試品為待測定有關(guān)物質(zhì)的磷霉素鈉原料。
憐霉素納標(biāo)準(zhǔn)品為憐霉素納原料經(jīng)純化去除雜質(zhì)后的憐霉素納純品。實(shí)施例一(I)色譜條件色譜柱Zorbax-NH2(4. 6 X 250mm，5 μ m)檢測器RID (示差折光檢測器)檢測器溫度35°C其中，色譜柱Zorbax-NH2為安捷倫公司的氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱。 流動相的配制精密稱取10. 89g磷酸二氫鉀，置于IOOOml純化水中溶解，過濾，超聲，得到O. 08mol/l的磷酸二氫鉀溶液。( 2 )對照品溶液的制備用流動相溶解O. 6g磷霉素鈉標(biāo)準(zhǔn)品，并用流動相稀釋至5. Oml,得到每Iml含O. 12g憐霉素納標(biāo)準(zhǔn)品的對照品溶液。(3)參照溶液一的制備(a)用60 μ I水潤濕O. 3g供試品，在60°C烘箱中加熱24小時(shí)。用流動相溶解殘?jiān)⒂昧鲃酉嘞♂屩?0. Oml得到殘?jiān)芤?，得到每IOOml含有將I. 5g磷霉素鈉加熱所得殘?jiān)臍堅(jiān)芤?，此溶液中含有雜質(zhì)A ; (b)溶解O. 6g供試品于殘?jiān)芤褐?，并用殘?jiān)芤合♂屩?. 0ml，得到每IOml含有I. 2g供試品的參照溶液一，此溶液中含有雜質(zhì)A。(4)供試品溶液的制備用流動相溶解O. 6g供試品，并用流動相稀釋至5. Oml,得到每Iml含O. 12g供試品的供試品溶液。(5)參照溶液二的制備精密吸取供試品溶液I. Oml加入至IOOml容量瓶中，并用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密吸取5. Oml上述液，用流動相稀釋至10. 0ml，得到每200ml含有Iml供試品溶液的參照溶液二。(6)測定方法取參照溶液一，待儀器穩(wěn)定后進(jìn)樣，進(jìn)樣量10. O μ 1，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰I與雜質(zhì)A峰2的分離度(R)應(yīng)大于等于1.5。本實(shí)施例，參照溶液一中磷霉素峰I與雜質(zhì)A峰2的分離度(R)為2. 9，參照溶液一的HPLC圖譜見圖I。取對照品溶液，待儀器穩(wěn)定后進(jìn)樣，平行進(jìn)樣6針，進(jìn)樣量10 μ 1，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)應(yīng)小于等于O. 85%。本實(shí)施例，對照品溶液平行進(jìn)樣6針的峰面積、峰面積的平均值及RSD情況見下表I 表I對照品溶液平行進(jìn)樣6針的峰面積情況表
權(quán)利要求
1.一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于所述方法包括如下步驟 (1)色譜條件 色譜柱為氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱，檢測器為示差折光檢測器，流動相為正磷酸鹽水溶液； (2)對照品溶液的制備 取磷霉素鈉標(biāo)準(zhǔn)品用流動相配制成磷霉素鈉的對照品溶液； (3)參照溶液一的制備 (a)用水濕潤的磷霉素鈉原料，在烘箱中進(jìn)行加熱，得到磷霉素鈉殘?jiān)?，殘?jiān)泻s質(zhì) A，用適量流動相溶解所述殘?jiān)?，得到殘?jiān)芤海?b)取磷霉素鈉原料溶于適量所述殘?jiān)芤褐械玫絽⒄杖芤阂唬? (4)供試品溶液的制備 取磷霉素鈉原料用流動相配制成供試品溶液； (5)參照溶液ニ的制備 將供試品溶液用流動相進(jìn)行稀釋，得到參照溶液ニ ； (6)測定方法 取參照溶液一注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰與雜質(zhì)A峰的分離度應(yīng)大于或等于I. 5 ;取對照品溶液，平行進(jìn)樣，注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于或等于O. 85% ;取供試品溶液、參照溶液二分別注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(I)中，所述的氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱為ZorbaX-NH2柱；所述檢測器的溫度為30-40°C，優(yōu)選溫度為35°C ;所述正磷酸鹽選自磷酸氫ニ鈉、磷酸氫ニ鉀、磷酸ニ氫鈉、磷酸ニ氫鉀中的ー種或幾種，優(yōu)選磷酸ニ氫鉀；所述正磷酸鹽水溶液的濃度為O.05-0. 12mol/l，優(yōu)選 O. 08mol/l。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(2)中，所述對照品溶液中磷霉素鈉的濃度為O. 06-0. 24g/ml，優(yōu)選O.12g/mlο
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(3)中的步驟(a)中，所述烘箱加熱的溫度為50-70°C，優(yōu)選溫度60°C;所述加熱的時(shí)間為16-30小時(shí)，優(yōu)選時(shí)間為24小時(shí)；所述殘?jiān)芤簽槊縄OOml含有將l_2g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘?jiān)臍堅(jiān)芤?，?yōu)選每IOOml含有將I. 5g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘?jiān)臍堅(jiān)芤?；在步驟(3)中的步驟(b)中，所述參照溶液ー為每IOml含有溶于所述殘?jiān)芤褐械牧酌顾剽c原料O. 6-2. 4g，優(yōu)選每IOml含有溶于所述殘?jiān)芤褐械牧酌顾剽c原料I. 2g。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(4)中，所述供試品溶液中憐霉素納的濃度為O. 06-0. 24g/ml,優(yōu)選憐霉素鈉的濃度為O. 12g/mL·
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(5)中，每200ml所述參照溶液ニ含有O. 5-1. 5ml所述供試品溶液，優(yōu)選姆200ml所述參照溶液ニ含有Iml所述供試品溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于在步驟(6)中，所述參照溶液一、對照品溶液、供試品溶液、參照溶液ニ的進(jìn)樣體積為3-20 μ 1，優(yōu)選進(jìn)樣體積為10 μ I ;所述雜質(zhì)為雜質(zhì)Α、非特定雜質(zhì)及總雜質(zhì)。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于所述的正磷酸鹽水溶液的配制方法為將適量所述正磷酸鹽置于水中溶解，過濾，超聲。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，其特征在于所述的雜質(zhì)A為(1，2- ニ羥基丙基)膦酸。
全文摘要
一種應(yīng)用于化合物物質(zhì)檢測領(lǐng)域中的采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)的方法，取參照溶液一注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰與雜質(zhì)A峰的分離度應(yīng)大于或等于1.5；取對照品溶液，平行進(jìn)樣，注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算磷霉素峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于或等于0.85%；取供試品溶液、參照溶液二分別注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計(jì)算供試品溶液中雜質(zhì)的峰面積。該發(fā)明對于磷霉素鈉中有關(guān)物質(zhì)檢測的重現(xiàn)性好、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、檢測精確、操作簡便、檢測條件溫和、檢測設(shè)備和儀器應(yīng)用廣泛、流動相正磷酸鹽水溶液原料來源廣、配制簡單。
文檔編號G01N30/02GK102841155SQ20121036134
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月25日
發(fā)明者馮文宇, 崔瑩, 周巖, 吳濤, 謝丹, 尤楠, 唐奎山, 尹宏, 婁玉濤, 周秀峰, 孟濤, 劉志清 申請人:東北制藥集團(tuán)股份有限公司