專利名稱：面粉中過氧化鈣的檢測試劑盒及過氧化鈣檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檢測用試劑盒及其應(yīng)用，尤其是涉及一種快速測定面粉中過氧化鈣的試劑盒及對面粉中人為摻加過氧化鈣定性和半定量的測定方法。
背景技術(shù)：
過氧化鈣是淡黃色結(jié)晶粉末，分子量72. 08，廣泛用于食品、化工、紡織等行業(yè)。常用于改善小麥粉的后熟、面粉增白、麥粉增筋劑、面粉脫色劑、面包改良劑食用油漂白等領(lǐng)域。為了增加小麥粉的筋道和口感，面粉行業(yè)普遍加入過氧化苯甲酰、過氧化鈣作為小麥粉增筋劑、增白劑。我國自2011年5月I日起，禁止在面粉生產(chǎn)中添加過氧化苯甲酰、過氧化鈣[衛(wèi)生部等七部(局)發(fā)布《關(guān)于撤銷食品添加劑過氧化苯甲酰、過氧化鈣的公告》(2011年第4號)]。
將過氧化鈣添加到面粉中，長期食用可能會致癌，對人體健康會產(chǎn)生很大的危害。而有些面粉生產(chǎn)廠家為了面粉脫色、加快面粉的熟化，可能違規(guī)濫加過氧化苯甲?；蜻^氧化鈣。現(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和公開文獻(xiàn)中，還沒有檢測面粉中過氧化鈣的方法以及快速測定試劑盒。因此，建立一個快速、準(zhǔn)確的面粉中過氧化鈣定性及半定量測定方法有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種對面粉中過氧化鈣快速檢測的試劑盒，以及應(yīng)用該試劑盒對面粉中過氧化鈣進(jìn)行定性和半定量的測定方法。為此，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案面粉中過氧化鈣快速測定試劑盒，其特征在于(I)塑料樣品勺，裝滿一平勺面粉質(zhì)量約2g ；(2)帶有刻度的一次性塑料滴管3mL ；(3) 50mL具塞玻璃比色管；(4) 5OmL玻璃或塑料量筒；(5)試管架，孔的直徑適合50mL具塞玻璃比色管；(6)標(biāo)準(zhǔn)比色卡，標(biāo)準(zhǔn)比色卡為淡紅色至深紅色呈梯度變化的系列色卡，每條下面均對應(yīng)其代表的過氧化鈣的含量；(7)過氧化物酶顯色試劑；(8)廣泛 pH 試紙(1-14)和精密 pH 試紙(6. 4-8. O)；(9)反應(yīng)試劑三個塑料瓶裝的試劑，每瓶體積500_1000mL，分別為I %稀硫酸、20%稀氫氧化鈉、O. I %氫氧化鈉；(10)500mL 塑料洗瓶。面粉中過氧化鈣快速檢測試劑盒的應(yīng)用，其具體步驟是(I)取一勺試樣，加入1%稀硫酸20mL，渦旋混合均勻，充分反應(yīng)IOmin ；(2)加入20%氫氧化鈉溶液用廣泛pH試紙調(diào)節(jié)pH到5-6之間,然后用O. 1%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)溶液PH值到7. O。(3)加入過氧化物酶顯色試劑溶液2mL,定容到50mL,室溫下顯色5-10min后,觀察顏色。(4)將所得顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照。步驟(3)過氧化物酶試劑混合溶液由組合試劑構(gòu)成，現(xiàn)用現(xiàn)配。A號瓶含辣根過氧化物酶2000U (活力單位)；B號瓶含4-氨基安替比林O. 00154mol/L的O. 2mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH = 7.6)200mL;C號瓶含0.022mol/L苯酚溶液200mL。使用時，先將B和C溶液充分混合，然后將A中的酶溶解在混合液中，輕輕搖動，使酶完全溶解，即為過氧化物酶試劑溶液，酶活力IOU(活力單位)/mL。結(jié)果判定，樣品溶液若不變色，則沒有摻加過氧化鈣，屬于合格的面粉；溶液若有 顏色變化，則為摻有過氧化鈣。過氧化苯甲酰雖然也是面粉加工常用的增白劑，屬于強(qiáng)氧化齊U，但在該方法的條件下，在含過氧化苯甲酰1000mg/kg及以下含量條件下不影響檢測結(jié)
果O面粉中過氧過鈣檢測標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制作方法(I)精確稱取IOg不含過氧化鈣的面粉作為空白基質(zhì)，加入準(zhǔn)確稱量的過氧化鈣標(biāo)準(zhǔn)品，配制成過氧化鈣的系列加標(biāo)含量，分別加入50mL質(zhì)量濃度為I %稀硫酸，渦旋混勻，充分反應(yīng)lOmin。(2)用20%和O. I %的氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值到7. O。(3)加入過氧化物酶組合試劑溶液，在37°C水浴鍋中恒溫顯色20min，冷卻至室溫，定容至50mL。(4)將顯色的標(biāo)準(zhǔn)溶液采集照片，將梯度變化的一組彩色照片而制成標(biāo)準(zhǔn)比色卡。根據(jù)顏色的深淺來定性和半定量。制作方法(I)中所配制的空白基質(zhì)加標(biāo)含量梯度范圍優(yōu)選在20mg/kg-1000mg/kg之間，如 20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg。有益效果I)試劑盒法快速定性和半定量檢測面粉中過氧化鈣的方法，方法簡單、快速、靈敏度高、結(jié)果鮮明。2)利用本發(fā)明的面粉中過氧化鈣的檢測試劑盒，便于目測定性和現(xiàn)場快速篩選測定。3)本發(fā)明面粉中過氧化鈣的檢測試劑盒及其檢測方法，不需要其他附件儀器，易于操作，實用性強(qiáng)。


圖I面粉中過氧化鈣標(biāo)準(zhǔn)比色卡
具體實施例方式下面對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。實施例I :標(biāo)準(zhǔn)比色卡的制備
分析步驟精確稱量不含過氧化鈣增白劑的小麥面粉試樣10g(精確至O. Olg于IOOmL比色管中，然后再分別稱取高純試劑過氧化I丐0mg、0. 20mg、0. 50mg、l. 00mg、2. OOmg>
5.OOmgUO. OOmg加入到比色管中，并依次加入I %稀硫酸50mL，渦旋混勻，在室溫下反應(yīng)IOmin0用20%和O. I %的氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值到7. 0，加入3mL酶試劑溶液，用二次水定容到IOOmL,在帶水平搖床的37°C水浴鍋中恒溫lOmin，冷卻至室溫，即得系列空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別對應(yīng)每公斤面粉含過氧化I丐0mg、20mg、50mg、100mg、200mg、500mg、lOOOmg。給顯色的溶液照相，采集顏色制作成標(biāo)準(zhǔn)比色卡(見圖I)。實施例2 過氧化鈣快速測定試劑盒試劑盒裝有塑料樣品勺，2個，裝滿一平勺面粉質(zhì)量約2g ；3mL帶有刻度的一次 性塑料滴管，100個；50mL具塞玻璃比色管，30個；50mL塑料量筒，I個；試管架，I個，20個孔，孔的直徑適合50mL具塞玻璃比色管；標(biāo)準(zhǔn)比色卡，I個，為含有空白和淡紅色至深紅色6個呈梯度變化的系列色條，每條下面標(biāo)注其代表的過氧化鈣的含量；廣泛PH試紙(1-14)，2盒；精密pH試紙(6. 4-8. 0)，2盒；反應(yīng)試劑三種塑料瓶裝的試劑，分別標(biāo)為I %稀硫酸、20%稀氫氧化鈉、0. I %氫氧化鈉，每瓶裝500mL。500mL塑料洗瓶，內(nèi)裝蒸餾水，I個。實施例3:分析步驟取某品牌餃子粉一勺于50mL比色管中，加入I %稀硫酸20mL，在室溫下反應(yīng)lOmin，冷卻至室溫后，用20%和0. I %氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值到7.0，加入21^酶試劑溶液，用二次水定容至刻度，搖勻。室溫下顯色5min后，觀察顏色。試樣為粉紅色的渾濁溶液，說明該試樣中含有過氧化鈣。經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照，試液顏色與100mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)色條顏色接近，說明該樣品中過氧化鈣有檢出，含量約為100mg/kg。上述實施例僅供說明本發(fā)明之用，而并非是對本發(fā)明專利的限制；應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；因此，凡跟本發(fā)明權(quán)利要求范圍所做的均等變化與修飾，均應(yīng)屬于本發(fā)明權(quán)利要求的覆蓋范圍。
權(quán)利要求
1.面粉中過氧化鈣快速測定試劑盒，其特征在于，裝有由塑料樣品勺、塑料滴管、試管、量筒、試管架、標(biāo)準(zhǔn)比色卡、過氧化物酶顯色試劑、PH試紙、反應(yīng)試劑組成的盒；其中反應(yīng)試劑為I %稀硫酸、20%稀氫氧化鈉、O. I %氫氧化鈉,標(biāo)準(zhǔn)比色卡為淡紅色至深紅色呈梯度變化的系列色卡。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)比色卡的粉紅色為由淺至深分為6-8個檔次，并對不同顏色對應(yīng)標(biāo)注所代表的過氧化I丐濃度為20mg/kg至1000mg/kg,如20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg、1000mg/kg。
3.面粉中過氧化鈣快速測定試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，取一平勺試樣，加入1%稀硫酸20mL，渦旋混合均勻，充分反應(yīng)IOmin ;用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值到7. O ;加入過氧化物酶顯色試劑2mL，定容，室溫下顯色5-10min，將所得顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照，確定面粉中過氧化鈣的含量范圍。
全文摘要
本發(fā)明的面粉中過氧化鈣檢測試劑盒是由塑料樣品勺、塑料滴管、試管、量筒、試管架、標(biāo)準(zhǔn)比色卡、顯色試劑、pH試紙、反應(yīng)試劑、洗瓶組成。對試樣開展測試，觀察顯示的顏色深淺和標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照進(jìn)行定性和半定量檢測。面粉中過氧化鈣檢測方法將面粉中加入稀酸反應(yīng)，然后用堿性溶液調(diào)節(jié)混合液pH值到中性，加入含過氧化物酶試劑的混合溶液，顯色，與標(biāo)準(zhǔn)比色卡對照，得到定性和半定量結(jié)果。本發(fā)明的試劑盒和檢測方法具有使用方便、顯色速度快、測定條件相對寬松、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適于現(xiàn)場快速篩選測定。
文檔編號G01N21/78GK102944550SQ20121038883
公開日2013年2月27日 申請日期2012年10月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月15日
發(fā)明者宋薇 申請人:上海譜尼測試技術(shù)有限公司