專利名稱：一種齒瓣石斛的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及借助于測定材料的化學或物理性質(zhì)來測試或分析材料，具體涉及采用柱色譜法鑒定中藥材齒瓣石斛。
背景技術(shù)：
石斛屬(Dendrobium)是蘭科植物中的第二大屬，我國有76種(74個種,2個變種)，主要分布于華南及西南地區(qū)，有近40種可作藥用。石斛為名貴中藥材，在我國使用歷史悠久，藥用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，“味甘，平。主傷中，除痹，下氣，補五臟，虛勞羸弱，強陰。久服厚腸胃，輕身延年”。具有益胃生津，滋陰清熱的功效，主治熱病傷津，胃痛干嘔，肺燥干咳，腰膝軟弱等癥(國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草，第八冊[M].上海上?？茖W技術(shù)出版社，1999. 711.)?，F(xiàn)代藥理實驗證明，它們具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗血小板聚集、擴張血管、降低血糖等多種活性([I]郁美娟，孟慶華，黃德音，等.石斛屬植物有效成分及藥理作用研究[J].中成藥，2003，25 (11 ):918-921. [2]林萍，畢志明，徐紅，等.石斛屬植物藥理活性研究進展[J].中草藥，2003，34 (11):附19-22.)。齒瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxt.)為近年開發(fā)應用的藥用石斛佳品,俗稱紫皮石斛、紫皮蘭、小黃草等，主要分布于我國云南、廣西、貴州等省，緬甸、越南、老撾、泰國也有較多分布。齒瓣石斛主要用其當年生的幼嫩莖加工生產(chǎn)紫皮楓斗、紫皮芽。由于鐵皮石斛資源的枯竭，齒瓣石斛作為鐵皮石斛(Dendrobium officinale Kimuraet Migo)的替代資源開始在市場上大量流通，其價格和質(zhì)量僅次于鐵皮石斛(明興加，張明，陶文靜.名貴中藥齒瓣石斛的開發(fā)前景.重慶中草藥研究，2006，(2) :51-54.)。由于齒瓣石斛的資源比鐵皮石斛豐富，栽培較鐵皮石斛容易，產(chǎn)量較高，因此近年來齒瓣石斛的種植發(fā)展較快。齒瓣石斛的質(zhì)重、富光澤、黏性強等優(yōu)良的品質(zhì)，被人們視為替代鐵皮楓斗的藥材珍品，銷往國內(nèi)外，由齒瓣石斛加工成的紫皮楓斗、紫皮芽的產(chǎn)量遠遠超過鐵皮楓斗，已成為品質(zhì)佳的石斛主流產(chǎn)品([I]李滿飛，徐國鈞，徐珞珊，等.商品石斛的調(diào)查及鑒定(II ).中草藥，1991，22 (4) :173-176,180. [2]包雪聲，順慶生，葉愈青，等.石斛類藥材楓斗的歷史及現(xiàn)狀.中藥材，1999,22(10) :540-542.)。據(jù)調(diào)查市場上由齒瓣石斛加工而成的紫皮楓斗的價格和質(zhì)量僅次于鐵皮石斛(明興加，張明，陶文靜.名貴中藥齒瓣石斛的開發(fā)前景.重慶中草藥研究，2006，(2) :51-54.)，但由于市場上鐵皮楓斗價格昂貴，數(shù)量稀少，因此市場有以紫皮楓斗代之的現(xiàn)象；由于從外觀性狀不易區(qū)分齒瓣石斛和鐵皮石斛，因此在相當程度上造成了市場的混亂與不規(guī)范。齒瓣石斛與鐵皮石斛的生藥學性狀與顯微特征，雖有一定的區(qū)別[肖玉燕，翁金月，樊建霜.鐵皮石斛及齒瓣石斛的生藥學鑒別[J].海峽藥學，2011，23 (4):52-53.]，但依靠經(jīng)典的鑒別方法仍難以準確地進行種間鑒別。采用rDNA ITS序列數(shù)據(jù)庫可完成鐵皮石斛、齒瓣石斛、兜唇石斛等多種鮮品(無花、無葉狀態(tài)下)的鑒別[丁小余，王崢濤，徐紅，等.楓斗類石斛rDNA ITS區(qū)的全序列數(shù)據(jù)庫及其序列分析鑒別[J].藥學學報，2002，37
(7):567-573.]，采用PCR技術(shù)能鑒別紫皮楓斗[丁小余，徐珞珊，王崢濤，等.齒瓣石斛的位點特異性PCR鑒別[J].藥學學報，2002，37 (11) =897-901.]，但絕大多數(shù)藥檢部門尚不具備DNA、PCR測序條件，依靠DNA序列、PCR技術(shù)分析鑒別石斛種類的實用性受到很大限制。鑒于指紋圖譜在藥材質(zhì)量控制上的優(yōu)勢，白音博士采用以甲醇(A) -/JC(B)為流動相，采用HPLC法結(jié)合聚類分析的方法對42種石斛進行了鑒別[白音.藥用石斛鑒定方法的系統(tǒng)研究[D].北京中醫(yī)藥大學博士學位論文，2007年]，結(jié)果顯示，白音博士的方法能夠鑒別翹梗石斛等40種石斛，但仍然沒有將杯鞘石斛與齒瓣石斛分開。綜上所述，尋求一種齒瓣石斛的鑒定方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種齒瓣石斛的鑒定方法，該方法所得到的圖譜不僅基線穩(wěn)定，色譜峰分離度好，而且不需要復雜的聚類分析。
本發(fā)明實現(xiàn)上述目的技術(shù)方案如下所述一種齒瓣石斛的鑒定方法，該方法由以下步驟組成( I)取待測藥材細粉，加入10 30倍(質(zhì)量體積倍)量體積濃度為80%的甲醇溶液，超聲提取I 3次,每次30 50min,濾過,合并濾液,減壓蒸干,殘洛用沸點為60 90°C的石油醚浸泡兩次，每次2 5ml，每次浸泡2min，傾去石油醚液，殘渣加體積濃度為80%的甲醇溶液溶解，并使得每Iml藥液中含相當于O. 5 2. Og齒瓣石斛細粉，搖勻，取上清液用O. 45 μ m微孔濾膜過濾得供試品溶液；(2)然后，將供試品溶液按以下方法進行高效液相色譜檢測按進樣量為5 20 μ I對以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的規(guī)格是柱長為25cm、內(nèi)徑為4. 6mm和粒徑為5 μ m的色譜柱進樣，控制柱溫20 40°C，接著用由A相和B相組成的流動相以O(shè). 8 I. 2ml/min的流速并按下表I的程序進行梯度洗脫，同時采用檢測波長為340nm的紫外光檢測洗脫液，獲得所測藥材的高效液相圖譜，該高效液相圖譜具有以下特征峰I號峰，保留時間RT為56. 01 ±0. 97min，相對峰面積為10. 45%±2. 52% ；2號峰，保留時間RT為62. 91 ± I. 20min，相對峰面積為15. 41%±3· 62% ；3號峰，保留時間RT為64. 54±1· 23min，相對峰面積為10. 44%±2. 60% ；4號峰，保留時間RT為65. 78±1· 17min，相對峰面積為12. 33±1· 92% ；5號峰，保留時間RT為71. 17±0· 84min，相對峰面積為14. 78%±3. 25% ；6號峰，保留時間RT為73. 60±0· 67min，相對峰面積為12. 15%±4. 10% ；7號峰，保留時間RT為74. 44±0· 69min，相對峰面積為24. 44%±6. 52% ；表I洗脫程序表
權(quán)利要求
1.一種齒瓣石斛的鑒定方法，該方法由以下步驟組成 (1)取待測藥材細粉，加入10 30倍量體積濃度為80%的甲醇溶液，超聲提取I 3次，每次30 50min，濾過，合并濾液，減壓蒸干，殘渣用沸點為60 90°C的石油醚浸泡兩次，每次2 5ml，每次浸泡2min，傾去石油醚液，殘渣加體積濃度為80%的甲醇溶液溶解，并使得每Iml藥液中含相當于O. 5 2. Og齒瓣石斛細粉，搖勻，取上清液用O. 45 μ m微孔濾膜過濾得供試品溶液； (2)然后，將供試品溶液按以下方法進行高效液相色譜檢測 按進樣量為5 20 μ I對以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的規(guī)格是柱長為25cm、內(nèi)徑為4. 6mm和粒徑為5 μ m的色譜柱進樣，控制柱溫20 40°C，接著用由A相和B相組成的流動相以O(shè). 8 I. 2ml/min的流速并按下表I的程序進行梯度洗脫，同時采用檢測波長為340nm的紫外光檢測洗脫液，獲得所測藥材的高效液相圖譜，該高效液相圖譜具有以下特征峰 I號峰，保留時間RT為56. 01 ±0. 97min，相對峰面積為10. 45%±2. 52% ； 2號峰，保留時間RT為62. 91 ± I. 20min，相對峰面積為15. 41%±3· 62% ； 3號峰，保留時間RT為64. 54±1· 23min，相對峰面積為10. 44%±2. 60% ； 4號峰，保留時間RT為65. 78±1· 17min，相對峰面積為12. 33±1· 92% ； 5號峰，保留時間RT為71. 17±0· 84min，相對峰面積為14. 78%±3. 25% ； 6號峰，保留時間RT為73. 60±0· 67min，相對峰面積為12. 15%±4. 10% ； 7號峰，保留時間RT為74. 44±0· 69min，相對峰面積為24. 44%±6. 52% ； 表I
全文摘要
本發(fā)明提供了一種齒瓣石斛的鑒定方法，該方法由以下步驟組成首先取待測藥材細粉加入80%的甲醇溶液進行提取，所得提取物進行脫脂純化后加入80%的甲醇溶液溶解作為供試品溶液，然后按以下方法進行高效液相色譜檢測按進樣量為5～20μl對以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱進樣，控制柱溫20～40℃，接著用由A相和B相組成的流動相以0.8～1.2ml/min的流速并按表1的程序進行梯度洗脫，同時采用檢測波長為340nm的紫外光檢測洗脫液，獲得所測藥材的高效液相圖譜，該高效液相圖譜具有表2所示的特征峰。本發(fā)明方法不但具有樣品制備方法簡便、穩(wěn)定、重復性好等優(yōu)點，而且還解決了現(xiàn)有技術(shù)不能將杯鞘石斛與齒瓣石斛分開的技術(shù)難題。
文檔編號G01N30/02GK102937630SQ20121043962
公開日2013年2月20日 申請日期2012年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月6日
發(fā)明者黃月純, 魏剛, 楊麗娥, 劉東輝 申請人:廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院